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Genome-Wide Identification of the GST Gene Family in Loquat (Eriobotrya japonica Lindl.) and Their Expression under Cold Stress with ALA Pretreatment
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作者 Guanpeng Huang Ti Wu +4 位作者 Yinjie Zheng Qiyun Gu Qiaobin Chen Shoukai Lin Jincheng Wu 《Phyton-International Journal of Experimental Botany》 SCIE 2024年第11期2715-2735,共21页
Loquat(Eriobotrya japonica Lindl.),a rare fruit native to China,has a long history of cultivation in China.Low temperature is the key factor restricting loquat growth and severely affects yield.Low temperature induces... Loquat(Eriobotrya japonica Lindl.),a rare fruit native to China,has a long history of cultivation in China.Low temperature is the key factor restricting loquat growth and severely affects yield.Low temperature induces the regeneration and metabolism of reduced glutathione(GSH)to alleviate stress damage via the participation of glu-tathione S-transferases(GSTs)in plants.In this study,16 GSTs were identified from the loquat genome according to their protein sequence similarity with Arabidopsis GSTs.On the basis of domain characteristics and phyloge-netic analysis of AtGSTs,these EjGSTs can be divided into 4 subclasses:Phi,Theta,Tau and Zeta.The basic prop-erties,subcellular localization,structures,motifs,chromosomal distribution and collinearity of the EjGST proteins or genes were further analyzed.Tandem and segmental gene duplications play pivotal roles in EjGST expansion.Cis-elements that respond to various hormones and stresses,especially those associated with low-temperature responsiveness,were predicted to be present in the promoters of EjGSTs.Moreover,analysis of gene expression profiles revealed that 9 of 16 EjGSTs may be involved in the low-temperature responsiveness of loquat leaves.In agriculture,5-aminolevulinic acid(ALA),a potential multifunctional plant growth regulator,can improve the stress response of plants.Among the 9 low-temperature-responsive EjGSTs,the expression of EjGSTU1 and EjGSTF1 significantly differed under cold stress in response to exogenous 5-aminolevulinic acid(ALA)pretreat-ment.The remarkable increase in GST activity and GSH/GSSG ratio reflected the increase in the cold response ability of loquat plants caused by exogenous ALA,thereby alleviating H2O2 accumulation and membrane lipid preoxidation.Overall,this study provides an initial exploration of the cold tolerance function of GSTs in loquat,offering a theoretical foundation for the development of cold-resistant loquat cultivars and new antifreeze agents. 展开更多
关键词 LOQUAT GST gene family identification gene expression cold stress ALA
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Genome-Wide Discovery and Expression Profiling of the SWEET Sugar Transporter Gene Family in Woodland Strawberry (Fragaria vesca) under Developmental and Stress Conditions: Structural and Evolutionary Analysis
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作者 Shoukai Lin Yifan Xiong +3 位作者 Shichang Xu Manegdebwaoaga Arthur Fabrice Kabore Fan Lin Fuxiang Qiu 《Phyton-International Journal of Experimental Botany》 SCIE 2024年第7期1485-1502,共18页
The SWEET(sugar will eventually be exported transporter)family proteins are a recently identified class of sugar transporters that are essential for various physiological processes.Although the functions of the SWEET p... The SWEET(sugar will eventually be exported transporter)family proteins are a recently identified class of sugar transporters that are essential for various physiological processes.Although the functions of the SWEET proteins have been identified in a number of species,to date,there have been no reports of the functions of the SWEET genes in woodland strawberries(Fragaria vesca).In this study,we identified 15 genes that were highly homolo-gous to the A.thaliana AtSWEET genes and designated them as FvSWEET1–FvSWEET15.We then conducted a structural and evolutionary analysis of these 15 FvSWEET genes.The phylogenetic analysis enabled us to categor-ize the predicted 15 SWEET proteins into four distinct groups.We observed slight variations in the exon‒intron structures of these genes,while the motifs and domain structures remained highly conserved.Additionally,the developmental and biological stress expression profiles of the 15 FvSWEET genes were extracted and analyzed.Finally,WGCNA coexpression network analysis was run to search for possible interacting genes of FvSWEET genes.The results showed that the FvSWEET10 genes interacted with 20 other genes,playing roles in response to bacterial and fungal infections.The outcomes of this study provide insights into the further study of FvSWEET genes and may also aid in the functional characterization of the FvSWEET genes in woodland strawberries. 展开更多
关键词 Woodland strawberry SWEET gene sugar transporter genome-wide identification characterization expression
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Dynamic Expression of Hyperpolarization-activated Cyclic Nucleotide-gated Cation Channel 4 Involved in Microwave Induced Pacemaker Cell Injuries 被引量:3
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作者 LIU Yan Qing ZHAO Li +6 位作者 GAO Ya Bing DONG Ji WANG Hui YAO Bin Wei ZHOU Hong Mei WANG Shui Ming PENG Rui Yun 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2015年第11期823-828,共6页
To investigate the mechanisms of microwave induced pacemaker cell injuries, Wistar rats and the primary pacemaker cells of newborn Wistar rats were exposed to microwave at average power density of 50 mW/cm2. Slower sp... To investigate the mechanisms of microwave induced pacemaker cell injuries, Wistar rats and the primary pacemaker cells of newborn Wistar rats were exposed to microwave at average power density of 50 mW/cm2. Slower spontaneous beating rate, intercellular Ca2+ aggregation and cell membrane perforation were detected immediately after the exposure. Moreover, hyperpolarizationactivated cyclic nucleotide-gated cation channel 4 (HCN4) was down-regulated immediately after the exposure and up-regulated at 12 h after the exposure. In the sinoatrial node (SAN) of the rats, 展开更多
关键词 HCN In node Dynamic expression of Hyperpolarization-activated Cyclic Nucleotide-gated cation Channel 4 Involved in Microwave Induced Pacemaker Cell Injuries SAN ISH Figure ACH AR
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Construction of plasmid containing human blood- clotting factor Ⅷ and observation its expression in Cos-7 cells
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作者 Jian Lu, Zhi-Long Jiang, Shi-Shu Chen Department of Biochemistry and Laboratory of Molecular Biology , Center of Human Gene Therapy, Shanghai Second Medical University, Shanghai 200025 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1997年第3期325-325,共1页
Factor Ⅷ deficiency or hemophilia A is X-linkedgenetic disorder in human. General treatment of severehemophilia A consists of adiministration of plasma-derived or recombinant clotting factor concentrates. Ithas cause... Factor Ⅷ deficiency or hemophilia A is X-linkedgenetic disorder in human. General treatment of severehemophilia A consists of adiministration of plasma-derived or recombinant clotting factor concentrates. Ithas caused a series of problems, i. e. viral infection andcost too much to use rF Ⅷ. Nowadays, people havedeveloped the retroviral vector and the adcnoviral 展开更多
关键词 PLASMID ADENOVIRUS EUKARYOTIC transferring expressING liposomes cationIC Nature
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四维细胞核体调控基因表达的数学理论
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作者 王子豪 张圳泉 张家军 《中山大学学报(自然科学版)(中英文)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期254-264,共11页
多尺度三维基因组结构驱动基因表达和细胞命运决定.尽管在一维线性基因组层面上的研究取得了显著进展,但三维空间基因组动态结构如何在功能上影响时空基因表达的变化仍不清楚.近年来,测序技术和影像技术的发展,使得四维核体基因组学的... 多尺度三维基因组结构驱动基因表达和细胞命运决定.尽管在一维线性基因组层面上的研究取得了显著进展,但三维空间基因组动态结构如何在功能上影响时空基因表达的变化仍不清楚.近年来,测序技术和影像技术的发展,使得四维核体基因组学的研究取得一系列进展.在本文中,讨论了三维基因组结构的多尺度性、其对基因表达的复杂调控以及时空动力学.接着对这一复杂的染色质结构动力学、表观修饰动力学和基因表达动力学进行理论建模,提出了可预测的多尺度耦合系统的建模框架.最后,讨论了未来关于四维核体动力学的研究方向. 展开更多
关键词 三维基因组 基因表达 染色质构象 表观修饰 基因调控
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重组人分泌型endostatin的纯化及其抑癌活性探讨 被引量:5
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作者 王晓燕 孙汶生 +6 位作者 马春红 张利宁 李欣 曹英林 刘素侠 宋静 韩丽辉 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期136-139,共4页
目的:纯化毕赤酵母菌GS115株表达的分泌型人endostatin蛋白,并对其抑癌活性进行研究。方法:利用SepharoseG-25及Heparin亲和层析柱纯化重组蛋白,并以MTT法测定重组endostatin对人脐静脉血管内皮细胞(ECV~304)增殖的抑制活性;另以HepG2.... 目的:纯化毕赤酵母菌GS115株表达的分泌型人endostatin蛋白,并对其抑癌活性进行研究。方法:利用SepharoseG-25及Heparin亲和层析柱纯化重组蛋白,并以MTT法测定重组endostatin对人脐静脉血管内皮细胞(ECV~304)增殖的抑制活性;另以HepG2.2.15细胞注射裸鼠成瘤后,体内验证重组蛋白的抑瘤活性。结果:MTT结果显示纯化后的endostatin在体外可特异性抑制人脐静脉内皮细胞的增殖,最高抑制率为86.0%;动物实验证明其可明显抑制荷瘤动物肿瘤的生长。结论:经纯化后的重组endostatin具有较强抑癌活性,将为临床抗血管生成治疗实体瘤研究奠定基础。 展开更多
关键词 肿瘤 内皮抑素 毕赤酵母菌 分泌型人内皮抑素蛋白 抑癌活性 人脐静脉血管内皮细胞
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不同浓度赖氨酸对猪肠黏膜上皮细胞碱性氨基酸转运载体mRNA表达的影响 被引量:6
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作者 职爱民 左建军 +6 位作者 周响艳 邹仕庚 黄志毅 王小兰 叶慧 代发文 冯定远 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第21期6-11,共6页
研究通过建立猪肠黏膜上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IEC)原代培养的方法,研究了赖氨酸对体外培养的猪小肠黏膜上皮细胞碱性氨基酸转运载体mRNA表达的影响。用机械刮取初生仔猪小肠黏膜加胶原酶Ⅱ消化的方法,成功地在体外培养... 研究通过建立猪肠黏膜上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IEC)原代培养的方法,研究了赖氨酸对体外培养的猪小肠黏膜上皮细胞碱性氨基酸转运载体mRNA表达的影响。用机械刮取初生仔猪小肠黏膜加胶原酶Ⅱ消化的方法,成功地在体外培养了新生仔猪IEC;分别用浓度为0、2、8mmol/L赖氨酸处理细胞96h,提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR方法,检测了碱性氨基酸转运载体在不同处理细胞中的表达丰度。结果表明:高浓度的赖氨酸对CAT-1 mRNA的表达有上调作用,差异极显著(P<0.01),并且呈剂量依赖效应;不同浓度的赖氨酸对CAT-2 mRNA的表达影响不大,8mmol/L和2mmol/L赖氨酸组CAT-2 mRNA的表达丰度均有低于0mmol/L的趋势,但二者之间差异不显著(P>0.05);不同浓度的赖氨酸对y+LAT1 mRNA表达影响差异不显著(P>0.05);高浓度的赖氨酸可提高4F2hc mRNA的表达;0mmol/L和2mmol/L赖氨酸组4F2hc mRNA的表达丰度均低于8mmol/L,且差异显著(P<0.05);0mmol/L和2mmol/L赖氨酸组之间差异不显著(P>0.05)。 展开更多
关键词 碱性氨基酸转运载体 MRNA表达 赖氨酸
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大豆耐盐相关基因GmNcl1的序列单倍型及表达分析 被引量:5
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作者 赫卫 刘林 +1 位作者 关荣霞 邱丽娟 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期411-421,共11页
【目的】鉴定大豆基因GmNcl1的序列多态性,探求逆境下该基因的表达模式。【方法】通过BLASTP比对GmNCl1的氨基酸序列,寻找同源基因。测定50个大豆品种中GmNcl1的启动子和基因的DNA序列差异以及这些品种的耐盐性差异,利用MAGE软件进行单... 【目的】鉴定大豆基因GmNcl1的序列多态性,探求逆境下该基因的表达模式。【方法】通过BLASTP比对GmNCl1的氨基酸序列,寻找同源基因。测定50个大豆品种中GmNcl1的启动子和基因的DNA序列差异以及这些品种的耐盐性差异,利用MAGE软件进行单倍型聚类分析和进化树分析,寻找品种耐盐性和序列间的相关性。以耐盐品种铁丰8号和盐敏感品种85-140的幼苗根为材料,利用实时荧光定量PCR分析GmNcl1在多种处理下的表达模式,处理条件包括蛋白抑制剂阿米洛利(Na+/H+逆转运蛋白抑制剂)和钒酸钠(Ca2+-ATPase抑制剂)、pH4.0和pH5.7、ABA处理及多浓度盐、碱、旱逆境胁迫。【结果】GmNcl1与拟南芥的Na+(K+)/H+交换蛋白CHX同源。GmNcl1序列有单核苷酸序列多态性位点16个和插入缺失位点2个,其中,包括一个位于外显子3的G/A(敏/耐)碱基改变,引起丙氨酸到苏氨酸的非同义突变。18个变异位点共组成14个单倍型,其中,耐盐品种有3种单倍型,盐敏感品种有11种单倍型。由6个位点组成的单倍型GAGATATTC(耐)/TTT----CT(敏)能高效区分耐盐和盐敏感品种。大豆幼苗根中的GmNcl1在阿米洛利处理下表达量增加,在钒酸钠处理下表达量不变。GmNcl1在碱性pH处理下表达量增加,在酸性pH处理下呈现上调和下调波动。GmNcl1受ABA诱导上调表达。在碱和旱胁迫下表达强度增大,在盐胁迫下上调表达最为明显,3种逆境胁迫强度越大,GmNcl1表达量上调幅度越大。耐盐品种铁丰8和盐敏感品种85-140的GmNcl1在盐处理下有近似的上调表达趋势,但85-140中GmNcl1的上调幅度大于铁丰8。【结论】GmNcl1与Na+(K+)/H+交换蛋白高度相似,该基因的序列多态性与耐盐相关,GmNcl1参与调节pH平衡,受ABA强烈诱导,响应盐、碱、旱胁迫。 展开更多
关键词 大豆 离子交换蛋白 耐逆 表达分析
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不同品种肉鸡肠道rBAT和y^+LAT2 mRNA表达的发育性变化 被引量:2
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作者 冯定远 谭会泽 +5 位作者 邹仕庚 刘清神 左建军 董泽敏 叶慧 张常明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期52-58,共7页
选用遗传背景相同的1日龄父母代雄性Arbor Acre(AA)和父母代雄性岭南黄肉雏鸡各160羽,采用相对定量RT-PCR方法,以AA肉鸡和岭南黄肉鸡十二指肠、空肠和回肠样品为模板,研究不同品种肉鸡肠道碱性氨基酸转运载体rBAT和y+LAT2 mRNA表达的发... 选用遗传背景相同的1日龄父母代雄性Arbor Acre(AA)和父母代雄性岭南黄肉雏鸡各160羽,采用相对定量RT-PCR方法,以AA肉鸡和岭南黄肉鸡十二指肠、空肠和回肠样品为模板,研究不同品种肉鸡肠道碱性氨基酸转运载体rBAT和y+LAT2 mRNA表达的发育性变化。结果显示:十二指肠和空肠rBAT和y+LAT2 mR-NA表达的发育性变化与回肠有着较大的差异。不同品种肉鸡rBAT和y+LAT2 mRNA在十二指肠和空肠的表达具有相同的发育模式,从2~30 d不断升高,44 d下降,55 d回升;岭南黄肉鸡rBAT和y+LAT2 mRNA表达丰度的变化幅度小于AA肉鸡,AA肉鸡rBAT和y+LAT2 mRNA表达丰度在2~30 d时均高于岭南黄肉鸡。回肠rBAT和y+LAT2 mRNA表达的发育性变化在岭南黄肉鸡和AA肉鸡间有显著差别,岭南黄肉鸡回肠rBAT和y+LAT2 mRNA表达在后期(30~58 d)高于前期(2~16 d);而AA肉鸡回肠rBAT和y+LAT2 mRNA表达在58d显著高于其它时间点,在16 d时最低。以上结果说明:(1)十二指肠和空肠rBAT、y+LAT2 mRNA表达的发育性变化与回肠有着较大的差异,这表明肠道近端和远端在碱性氨基酸吸收的功能上可能有差异;(2)不同品种肉鸡十二指肠和空肠rBAT、y+LAT2 mRNA的表达具有相同的发育模式,但在时间点上有一定的差异,而与回肠的表达模式不同,表明rBAT和y+LAT2 mRNA的表达受到发育阶段、品种和肠段的影响;(3)回肠rBAT和y+LAT2mRNA表达的发育性变化在岭南黄肉鸡和AA肉鸡间有显著差别。 展开更多
关键词 肉鸡 肠道 碱性氨基酸转运载体 发育性表达
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阳离子脂质体介导NT-3基因转染豚鼠耳蜗的实验研究 被引量:4
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作者 邓志宏 王锦玲 +3 位作者 邱建华 刘顺利 王成济 杨安钢 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 2004年第3期182-184,203,T002,共5页
目的 探讨阳离子脂质体介导的NT - 3基因转染对豚鼠耳蜗形态及功能的影响。方法 克隆人NT- 3cDNA基因 ,构建携带绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因的重组质粒pIRES2 -EGFP -NT3。采用脂质体介导的方法 ,将重组质粒转染豚鼠耳蜗 ,分别于术... 目的 探讨阳离子脂质体介导的NT - 3基因转染对豚鼠耳蜗形态及功能的影响。方法 克隆人NT- 3cDNA基因 ,构建携带绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因的重组质粒pIRES2 -EGFP -NT3。采用脂质体介导的方法 ,将重组质粒转染豚鼠耳蜗 ,分别于术后 1天、2周、4周观察转染基因在耳蜗及脑干等部位的表达和分布情况。同时进行耳声发射及ABR测试 ,了解基因转染对豚鼠耳蜗听功能的影响。结果 成功克隆人NT - 3cDNA基因并构建重组质粒pIRES2 -EGFP -NT3。重组质粒转染豚鼠耳蜗后 ,荧光显微镜下观察发现耳蜗螺旋神经节、神经纤维、Corti器、血管纹等均可见绿色荧光 ,但 4周时荧光蛋白的表达强度较 1天时明显减弱。而CY3标记的NT - 3免疫荧光染色结果基本与EGFP的表达情况一致。此外 ,对侧耳蜗及第四脑室脉络膜处亦可见较强的绿色荧光。耳蜗基底膜铺片见内外毛细胞结构完整。转染前后豚鼠耳声发射及ABR阈值均无明显改变。结论 阳离子脂质体介导的NT - 3基因转染对豚鼠耳蜗形态及功能无明显影响 ;外源性NT - 展开更多
关键词 神经营养素-3 基因克隆 真核表达载体 脂质体 耳蜗
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瞬时受体电位阳离子通道蛋白6在肾脏的表达 被引量:3
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作者 范青锋 邢燕 +2 位作者 刘淑芳 张涵 丁洁 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第17期1293-1295,共3页
目的探讨瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)在正常人、小鼠和大鼠肾组织及小鼠足细胞系(MPC5)的表达和分布,为研究TRPC6在肾脏的功能及其与足细胞分子间的关系奠定基础。方法1.应用免疫组织化学方法观察TRPC6在正常人、小鼠和大鼠肾... 目的探讨瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)在正常人、小鼠和大鼠肾组织及小鼠足细胞系(MPC5)的表达和分布,为研究TRPC6在肾脏的功能及其与足细胞分子间的关系奠定基础。方法1.应用免疫组织化学方法观察TRPC6在正常人、小鼠和大鼠肾组织及MPC5分布。2.通过反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TRPC6在小鼠肾组织和MPC5表达。3.应用免疫蛋白印迹检测TRPC6在正常人、小鼠和MPC5表达。结果1.TRPC6在正常人肾小球呈弱表达,在肾小管和肾血管表达较强,在小鼠和大鼠主要沿肾小球毛细血管袢和系膜区分布,肾间质也有少许表达。TRPC6在MPC5的荧光染色为阳性,在分化态细胞主要分布于胞膜表面。2.在小鼠肾组织及MPC5均检测到特异性TRPC6的PCR产物条带。3.在正常人、小鼠肾组织及MPC5均检测到特异性的相对分子质量为106的TRPC6蛋白条带。结论TRPC6在正常人、小鼠和大鼠肾小球均有表达,在mRNA及蛋白水平均证实MPC5能表达TRPC6,为从离子通道的角度利用MPC5探讨蛋白尿发生的分子机制奠定基础。 展开更多
关键词 肾脏 足细胞 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6 表达 分布
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真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1的构建及其在HEK293T细胞中的表达 被引量:2
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作者 陈杰 高下 +3 位作者 朱敏生 张文程 麻晓峰 顾香芳 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第18期2211-2214,共4页
目的构建真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1,并验证其在HEK293T细胞中的表达。方法从人的全血标本中提取DNA模板,经PCR获得Hath1-cDNA,将Hath1-cDNA和pIRES2-DsRed2质粒用限制性内切酶XhoⅠ、EcoRⅠ双酶切,酶切产物琼脂糖凝胶电泳,割胶纯... 目的构建真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1,并验证其在HEK293T细胞中的表达。方法从人的全血标本中提取DNA模板,经PCR获得Hath1-cDNA,将Hath1-cDNA和pIRES2-DsRed2质粒用限制性内切酶XhoⅠ、EcoRⅠ双酶切,酶切产物琼脂糖凝胶电泳,割胶纯化,前者回收1065bp片断,后者回收大片断,再将回收的2个片断用T4DNA连接酶连接,转化感受态DH5α细胞,挑选单克隆,提取质粒,将所提取的质粒双酶切鉴定并测序。再将构建成功的pIRES2-DsRed2-Hath1质粒通过脂质体LipofectamineTM2000转染HEK293T细胞,观测其转染情况和目的基因的表达情况。结果成功地构建了真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1,该质粒能有效地转染HEK293T细胞,目的基因能有效表达。结论pIRES2-DsRed2-Hath1的构建为Hath1基因转染致聋小鼠的耳蜗的实验奠定了基础。 展开更多
关键词 Hath1 基因克隆 真核表达载体 脂质体
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不同基因型肉鸡肠道CAT1和CAT4 mRNA表达的发育性变化 被引量:2
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作者 邹仕庚 谭会泽 +4 位作者 王修启 左建军 冯定远 董泽敏 叶慧 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第2期55-61,共7页
选用遗传背景相同的1 d父母代雄性Arbor Acre(AA)和父母代雄性岭南黄肉雏鸡各160羽,采用相对定量RT-PCR方法,以AA肉鸡和岭南黄鸡十二指肠、空肠和回肠样品为模板,研究不同基因型肉鸡肠道CAT1和CAT4mRNA表达的发育性变化。结果显示:... 选用遗传背景相同的1 d父母代雄性Arbor Acre(AA)和父母代雄性岭南黄肉雏鸡各160羽,采用相对定量RT-PCR方法,以AA肉鸡和岭南黄鸡十二指肠、空肠和回肠样品为模板,研究不同基因型肉鸡肠道CAT1和CAT4mRNA表达的发育性变化。结果显示:十二指肠和空肠CAT1和CAT4mRNA表达的发育性变化与回肠有着较大的差异;岭南黄肉鸡十二指肠和空肠CAT1和CAT4 mRNA表达的发育性变化与AA肉鸡分别有显著差别;岭南黄肉鸡十二指肠和空肠CAT1 mRNA表达从2~58d逐渐降低,AA肉鸡除在44d有所降低,在其他时间点的表达丰度基本一致;岭南黄肉鸡十二指肠和空肠CAT4 mRNA从2~44d有降低的趋势,58d有所回升,AA肉鸡在58d的丰度最低,其他时间点的表达丰度基本一致;岭南黄肉鸡回肠CAT1 mRNA的表达丰度在2~44d呈逐渐降低的趋势,58和44d接近,而AA肉鸡则在58d达到最高,其他时间点接近;2~44d岭南黄肉鸡回肠中CAT4 mRNA表达的发育性变化与AA肉鸡一致,但58d出现差异,AA肉鸡降到最低而岭南黄肉鸡显著上升。以上结果说明:十二指肠与空肠中CAT1和CAT4 mRNA表达的发育性变化与回肠有着较大的差异,这表明肠道近端和远端在碱性氨基酸吸收的功能上可能有所差异;不同基因型肉鸡十二指肠、空肠和回肠CAT1和CAT4 mRNA表达的发育模式不同,表明CAT1和CAT4 mRNA表达受到发育阶段、品种和肠段的调控。 展开更多
关键词 肉鸡 肠道 碱性氨基酸转运载体 发育性表达
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人源LL-37杀菌多肽的改建及原核细胞中表达 被引量:4
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作者 葛晓冬 刘友生 +1 位作者 杨艳丽 邹佳 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期636-639,共4页
目的改良人源杀菌肽LL-37的氨基酸序列,提高其杀菌力,并在原核细菌中表达。方法应用蛋白质分析软件(Anthepro5.0、SWISS-MODEL等),对人源杀菌肽LL-37的氨基酸序列进行二维、三维结构及理化特性分析,将其中部分氨基酸残基进行替换,提高... 目的改良人源杀菌肽LL-37的氨基酸序列,提高其杀菌力,并在原核细菌中表达。方法应用蛋白质分析软件(Anthepro5.0、SWISS-MODEL等),对人源杀菌肽LL-37的氨基酸序列进行二维、三维结构及理化特性分析,将其中部分氨基酸残基进行替换,提高其正电荷,并以人源杀菌肽LL-37的基因序列为模板,进行相应的DNA序列替换,转入表达载体pET-28a(+)于杆菌BL21(DE3)中表达、纯化,并初步研究其抗菌性。结果在维持LL-37空间构象不变的基础上,将Glu16、Asp26、Glu36分别替换为Gln16、Asn26、Gln36,其静电荷由pH7.4时的+5.8提高到+9.0,并且其多肽N端疏水、C端亲水的特性不变。通过Touch-Down PCR法,成功获得改良LL-37多肽的DNA序列,并将重组质粒pET-28a(+)-rLL-37在杆菌BL21(DE3)中表达,改良LL-37多肽成功由强离子交换柱芯Macro-Prep High S纯化,并对G+、G-菌具有一定的抗菌力。结论将杀菌肽LL-37多肽进行氨基酸残基替换并以原核细胞进行融合型表达是可行的,为改良LL-37的大量制备及杀菌活性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人源杀菌肽LL-37 蛋白质融合表达 强离子交换层析
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山羊y^+L碱性氨基酸转运系统转录水平表达的研究 被引量:4
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作者 周英昊 高晔 +4 位作者 刘林丽 曾洁 杨雨鑫 张恩平 陈玉林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1308-1316,共9页
旨在研究山羊y+L碱性氨基酸转运系统中4F2hc、y+LAT1和y+LAT2mRNA表达的组织特异性及其在不同年龄山羊小肠中的发育性表达规律。试验选取健康、体重相近的1日龄、6月龄、8月龄、10月龄、12月龄陕北白绒山羊各3只,共15只,屠宰后采集心、... 旨在研究山羊y+L碱性氨基酸转运系统中4F2hc、y+LAT1和y+LAT2mRNA表达的组织特异性及其在不同年龄山羊小肠中的发育性表达规律。试验选取健康、体重相近的1日龄、6月龄、8月龄、10月龄、12月龄陕北白绒山羊各3只,共15只,屠宰后采集心、肝、肾、大脑、背最长肌、体侧皮肤、瘤胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠组织,利用实时荧光定量PCR技术检测4F2hc、y+LAT1和y+LAT2mRNA在1日龄山羊上述组织和全部山羊十二指肠、空肠和回肠的表达情况。结果表明,(1)4F2hc、y+LAT1和y+LAT2mRNA在1日龄山羊多种组织中均有表达,且有一定的组织特异性。其中,4F2hc mRNA在皮肤表达量最高,y+LAT1 mRNA在回肠表达量最高,y+LAT2mRNA在大脑和回肠表达量最高。(2)4F2hc mRNA在山羊十二指肠、空肠和回肠表达量均以1日龄山羊为最高,其他月龄山羊相同肠段之间表达量无显著差异(P>0.05);y+LAT1mRNA在十二指肠、空肠和回肠表达量随山羊年龄的增加均呈现逐渐降低的趋势;y+LAT2mRNA在十二指肠、空肠和回肠表达量随山羊年龄的增加呈现先升高后降低的趋势,其在10月龄山羊表达量最高;y+LAT2mRNA在回肠表达量以1日龄山羊为最低,其他月龄山羊之间差异不显著(P>0.05)。结果说明,山羊y+L碱性氨基酸转运系统的主要转运部位为小肠;该系统中轻链y+LAT1和重链4F2hc构成的异二聚体转运蛋白可能发挥更为主要的转运作用;4F2hc和y+LAT2基因可能分别在山羊皮肤和大脑中发挥重要的生理功能;4F2hc、y+LAT1和y+LAT2基因在山羊小肠中受肠段和发育阶段的影响,具有不同的发育性表达规律。 展开更多
关键词 山羊 y+L碱性氨基酸转运系统 实时荧光定量PCR mRNA表达
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麻鸭磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶高效可溶性表达及其部分酶学性质 被引量:2
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作者 王晶晶 张新笑 +4 位作者 卞欢 耿志明 李鹏鹏 王道营 徐为民 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1120-1126,共7页
[目的]克隆麻鸭磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因(GPx4)并在大肠杆菌中表达,分析其酶学特性,为研究GPx4功能及其在羟基脂肪酸形成过程中的调节机制打下基础。[方法]采用RT-PCR克隆麻鸭GPx4(DGPx4)的编码基因,利用定点突变的方法构建半胱氨... [目的]克隆麻鸭磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因(GPx4)并在大肠杆菌中表达,分析其酶学特性,为研究GPx4功能及其在羟基脂肪酸形成过程中的调节机制打下基础。[方法]采用RT-PCR克隆麻鸭GPx4(DGPx4)的编码基因,利用定点突变的方法构建半胱氨酸突变体DGPx4表达载体pMBP-DGPx4(48Sec→ Cys),并在大肠杆菌中通过添加His标签进行可溶性表达,经Ni-NTA亲和层析和离子交换层析纯化得到融合蛋白DGPx4;采用总谷胱甘肽过氧化物酶活性检测试剂盒检测DGPx4活力以研究其酶学性质。[结果]克隆获得的DGPx4基因编码序列全长516 bp,编码172个氨基酸,编码蛋白分子量约20 kD,理论等电点(pI)为8.9。构建的突变体基因原核表达载体pMBP-DGPx4(48Sec→Cys)可在大肠杆菌中成功诱导表达获得融合蛋白DGPx4,经Ni-NTA亲和层析和离子交换层析即获得高纯度的DG-Px4。以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)为底物时,DGPx4的最适反应温度为32 ℃,最适pH为8.0,对NaCl浓度较敏感;Cu^2+和Ni^2+对DGPx4活力有较高的促进作用,Mg^2+和Mn^2+对DGPx4活力有一定的抑制作用,Ca^2+和Zn^2+对DG-Px4活力则无明显的促进或抑制作用。[结论]从鸭肝细胞中克隆获得的DGPx4基因序列经定点突变后可在原核细胞中高效表达,且纯化后的高纯度融合蛋白DGPx4具有GPx4活力,能在抗脂质氧化过程中发挥作用。 展开更多
关键词 麻鸭 磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(GPx4) 原核表达 纯化 酶学性质
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用于转基因的阳离子脂质体 被引量:3
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作者 王瓞 林其谁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1997年第6期486-491,共6页
通过直接导入外源基因来治疗人类疾病的方法需要一种有效、安全并且可重复进行的载体 ,阳离子脂质体是基本满足这些条件的有限几种载体中的一员 .目前已经有十几种阳离子脂质体 .这些脂质体通过外周的电荷与DNA相结合 ,静电吸引形成复... 通过直接导入外源基因来治疗人类疾病的方法需要一种有效、安全并且可重复进行的载体 ,阳离子脂质体是基本满足这些条件的有限几种载体中的一员 .目前已经有十几种阳离子脂质体 .这些脂质体通过外周的电荷与DNA相结合 ,静电吸引形成复合物在与细胞膜相互作用后 ,通过细胞的内吞或融合作用使复合物进入细胞内 ,从而将外源基因导入细胞 ,这种DNA传递技术的有效性和安全性已经确立 .二例利用阳离子脂质体的人体基因治疗临床试验也已开始实施 ,将来会有更多的临床试验得到开展 。 展开更多
关键词 阳离子脂质体 基因治疗 转染 基因传递
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一种SoC芯片中PCIe接口的FPGA平台验证 被引量:4
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作者 刘娟 田泽 +1 位作者 黎小玉 牛少平 《数字通信世界》 2020年第4期69-70,共2页
PCI Express(PCIe)作为第三代高性能IO总线标准,以其高速率、低功耗、双通道、传输可靠等多方面的优势,被广泛应用在嵌入式领域,作为高速系统I/O总线,其功能和性能必然成为影响整个嵌入式系统成败的关键,因此,在嵌入式系统的设计及验证... PCI Express(PCIe)作为第三代高性能IO总线标准,以其高速率、低功耗、双通道、传输可靠等多方面的优势,被广泛应用在嵌入式领域,作为高速系统I/O总线,其功能和性能必然成为影响整个嵌入式系统成败的关键,因此,在嵌入式系统的设计及验证中,如何对PCIe接口进行充分、完备并且有效的验证显得至关重要.文章结合一种SoC芯片中的PCIe接口FPGA验证,进行PCIe协议及功能分析,搭建了FPGA验证平台,策划验证项,完成对PCIe接口的FPGA平台验证,有效的提高了验证效率,加快了芯片的开发速度. 展开更多
关键词 PCIE 验证 FPGA
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鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因转染小鼠黑色素瘤B16F1细胞 被引量:2
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作者 刘金辉 Glenn Larsen 《江西医学院学报》 CAS 2002年第5期10-12,共3页
目的 :探讨基因转移载体脂质体介导转染的鼠粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)基因在B16F1细胞的表达动态及表达产物的生物活性。方法 :脂质体和质粒DNA复合后 ,转染 10 6B16F1细胞 ,连续 5d换细胞培养液 ,并检测其中的mGM CSF含... 目的 :探讨基因转移载体脂质体介导转染的鼠粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)基因在B16F1细胞的表达动态及表达产物的生物活性。方法 :脂质体和质粒DNA复合后 ,转染 10 6B16F1细胞 ,连续 5d换细胞培养液 ,并检测其中的mGM CSF含量。采用 [3 HTdR]渗入法 ,测定DA1G细胞和转染后第一天收获的以 1:10对倍稀释到 1:6 40的上清液及 [3 HTdR]混合培养后 ,渗入到DA1G细胞的 [3 HTdR]量 (cpm) ,以分析表达产物的生物活性。结果 :转染B16F1细胞的mGM CSF基因得到有效表达。但随着时间的推移 ,表达由第 1天的 135ng/ml下降到第 5天的 42 .2ng/ml。渗入到DA1G细胞的 [3 HTdR]量 (cpm)随上清液的稀释而逐步下降 ,由 1:10稀释度的9371下降到 1:6 40时的 32 5 1。和DMEM混合培养的DA1G细胞的 [3 HTdR]渗入量 (cpm)仅为 472。结论 :脂质体作为基因转移载体可有效地介导mGM CSF基因转染B16F1细胞 。 展开更多
关键词 黑色素瘤B16F1细胞 脂质体 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 基因转移 基因表达
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成都市轨道交通市域快线关键技术研究及应用 被引量:17
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作者 周旭 《现代城市轨道交通》 2020年第11期1-6,共6页
根据成都市轨道交通线网规划特征,以成都市轨道交通18号线(新机场线)为工程案例,以项目功能定位和运营需求为出发点,从速度目标值、运营模式、车辆选型、供电制式、隧道净空断面尺寸、轨道系统及弱电系统等多个方面进行分析论证,对成都... 根据成都市轨道交通线网规划特征,以成都市轨道交通18号线(新机场线)为工程案例,以项目功能定位和运营需求为出发点,从速度目标值、运营模式、车辆选型、供电制式、隧道净空断面尺寸、轨道系统及弱电系统等多个方面进行分析论证,对成都市轨道交通市域快线的主要技术标准和关键技术参数进行探索性的创新研究,以期为国内其他城市市域快线技术标准的选取提供参考和借鉴。 展开更多
关键词 市域快线 技术标准 关键参数
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