cAMP依赖的蛋白激酶PKAR_(Iα)亚基在胃癌细胞中的表达及8-溴-环核苷酸对其表达及细胞增殖的影响

目的 观察经位点选择性 8-溴 -环核苷酸 (8- Br- c AMP)诱导前后 ,两株胃癌细胞 SGC790 1 和 MGC80 3 PKA RIα亚基m RNA的表达状况及癌细胞增殖动力学的变化。 方法 应用分子杂交技术测定 8- Br- c AMP诱导前后两株胃癌细胞 PKARIα亚基不同的表达状态 ;用 MTT法和流式细胞仪 FCM观察 8- Br- c AMP诱导前后 ,细胞增殖动力学的变化。 结果 两株胃癌细胞均有 PKA RIα亚基的高表达状态 ,而且经 8- Br- c AMP诱导后 ,PKA RIα的表达水平明显减弱 ;此外 ,8- Br- c AMP对两株胃癌细胞系 SGC790 1 和 MGC80 3 细胞有明显的抗增殖作用 ,其 IC50 值分别为 40μmol/ L和 15μmol/ L ;流式细胞仪分析结果显示 ,经 8- Br- c AMP诱导后 ,在正常的细胞倍体峰前出现一群凋亡的细胞峰型 ,可能和诱导后肿瘤细胞发生凋亡有关。 结论 胃癌细胞株存在 PKA RIα亚基的过表达状态 ,通过 8- Br- c AMP作用 ,可抑制 RIα亚基的过表达并可抑制癌细胞的恶性增殖。

GLP—1受体基因表达cAMP-PKA途径调控的研究

本文利用蛋白激酶A(PKA)的激活剂Forsolin对大白鼠胰岛素瘤细胞(RINm5F)上GLP一1受体的基因表达进行了研究。在forskolin的作用下,使类胰高血糖素肽I(GLP—1)受体的转水平明显下降,即GLP一1受体mRNA的量明显减少,出现了GLP一1受体基因表达的负调控,但forskoln可以使GLP—1受体的mRNA的稳定性增加结果表明,GLP—1受体的转录是通过cAMP—蛋白激酶A途径进行调控的,因此,影响此途径的物质对类胰高血糖素肽—1的生理功能以及在临床应用方面起着重要作用。

EAC细胞在3＇5＇－cAMP诱导下PKA－RⅡ移位入核与癌基因表达的动力学变化

Ｅｈｒｌｉｃｈ细胞在ｃＡＭＰ加茶碱的诱导下，于接种后５－７天，伴随着胞质内ｃＡＭＰ蛋白结合率上升的同时，依赖于ｃＡＭＰ的蛋白激酶Ⅱ型酶调节亚基（ＰＫＡ－ＲⅡ）从胞质向核移位，其表达强度在胞质和核内持续升高，此时癌基ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｆｏｓ，ｃ－Ｈ－ｒａｓ，ｃ－ｓｉｓ表达抑制。ｃＡＭＰ蛋白结合率与ＰＫＡ－ＲⅡ的移位入核呈显著的正相关，二者与癌基因表达抑制是显著的负相关，它们均从第７天最为显著。在癌龄晚期（按种后９－１１天），当胞质内ｃＡＭＰ蛋白结合率下降（与对照组比较）时，ＰＫＡ－ＲⅡ则停止移位入核，癌基因又重新表达，如果用ｃＡＭＰ抑制剂人为阻断接种后第７天的癌细胞内ＰＫＡ信号通路时，ＰＫＡ－ＲＨ则停止移位入核，而癌基因仍呈强烈表达。对上述各结果之间的关系进行了分析与讨论。

孕酮通过ABHD2受体介导的cAMP-PKA信号通路调控精子受精功能的研究

目的研究ABHD2在不育症患者精子膜表面的表达差异,探究孕酮是否通过ABHD2调控cAMP-PKA进而影响精子的功能活性。方法收集男性正常生育组精子、少弱精子组和顶体异常组精子样本(各30例),通过RT-PCR、蛋白Western-Blot印迹等方法分析转录水平及蛋白表达的差异,且采用体外添加孕酮、ABHD2抗体、PKA拟制剂H-89,选择观测正常生育组(对照组)与少弱精子组(实验组)男性精子ABHD2的蛋白表达水平,以及cAMP、PKA浓度等变化。结果少弱精子组和顶体异常组中ABHD2 m RNA转录水平以及ABHD2蛋白表达水平显著减少,具有统计学意义(F:90.84,P<0.01);在正常生育组中加入孕酮处理后,ABHD2蛋白水平表达明显增加;而少弱精子组中加入孕酮处理后,与未加孕酮相比,ABHD2蛋白水平表达增加不明显。进一步研究,在正常生育组中加入孕酮(P4)处理后,cAMP、PKA浓度极显著增加(P<0.01),继续加入ABHD2抗体或PKA拟制剂H89后,cAMP、PKA浓度均显著减少(P<0.01)。结论临床不育与正常生育男性精子之间ABHD2的转录和表达存在差异,孕酮通过ABHD2受体介导的cAMP-PKA信号通路调控精子受精功能。

GLP-1受体基因表达cAMP-PKA途径调控的研究

利用蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）的激活剂毛喉素（ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ）对大白鼠胰岛素瘤细胞（ＲＩＮｍ５Ｆ）上胰升血糖素样肽＿１（ＧＬＰ＿１）受体的基因表达进行了研究。在毛喉素的作用下，ＧＬＰ＿１受体ｍＲＮＡ的量明显减少，出现了ＧＬＰ＿１受体基因表达的负调控，但毛喉素可以使ＧＬＰ＿１受体的ｍＲＮＡ的稳定性增加。结果表明，ＧＬＰ＿１受体的转录是通过ｃＡＭＰ＿蛋白激酶Ａ途径进行调控的。

电针“足三里”对脾气虚大鼠空肠组织胃生长激素释放激素/环磷酸腺苷/蛋白激酶A表达的影响

目的:观察电针"足三里"穴对脾气虚大鼠空肠组织胃生长激素释放激素(Ghrelin)/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)信号通路的影响,探讨电针"足三里"穴改善脾气虚大鼠能量代谢的作用机制。方法:雄性SD大鼠随机分为空白组、脾气虚组、电针组和非经非穴组,每组10只。采用劳倦过度及饮食不节的复合因素复制大鼠脾气虚证候模型。电针组电针双侧"足三里"穴,非经非穴组电针双侧非经非穴点(髂嵴连线上方15mm,后正中线左右旁开20mm处),每日1次,每次20min,共治疗6d。HE染色法观察各组大鼠空肠组织病理形态学改变;ELISA法测定各组大鼠空肠组织中Ghrelin、三磷酸腺苷(ATP)、cAMP含量;Western blot法检测空肠组织PKA蛋白表达。结果:脾气虚组大鼠肠绒毛肿胀、缩短、增粗,顶端部分破损或断裂,经电针穴位治疗后其结构基本恢复正常。脾气虚组大鼠空肠组织中的Ghrelin、ATP、cAMP含量及PKA蛋白表达较空白组显著降低(P<0.05),而电针组显著高于脾气虚组(P<0.05),其中cAMP含量及PKA蛋白表达电针组显著高于非经非穴组(P<0.05)。结论:电针"足三里"穴可通过改善脾气虚大鼠空肠组织病理形态学变化,增加脾气虚大鼠空肠组织中Ghrelin、ATP、cAMP含量,上调PKA表达,从而增强大鼠能量代谢,发挥其补益脾气的作用。