人参皂甙Rb1对转化生长因子-β1诱导的肾小管上皮细胞p47phox的表达及细胞外基质的影响

目的探讨人参皂甙Rb1(G-Rb1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞(NRK52E)氧化应激的作用及对细胞外基质(ECM)的影响。方法将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白对照组,10ng/mL TGF-β1刺激组,不同剂量的G-Rb1干预组(在10ng/mL TGF-β1基础上分别加入10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL G-Rb1),40ng/mL G-Rb1组,100nmol/L NADPH氧化酶抑制剂DPI组。采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平;应用免疫组化技术、Western blot检测NADPH氧化酶亚单位p47phox的表达;实时荧光定量PCR(RT-PCR)、酶联免疫吸附法观察细胞外基质主要成分胶原Ⅰ(Col-Ⅰ)和纤维粘连蛋白(FN)的变化。结果与正常对照组相比,TGF-β1可显著增强NRK52E细胞内ROS水平和p47phox的表达,Col-Ⅰ和FN的含量也显著增加(P<0.05)。G-Rb1和DPI明显抑制了TGF-β1诱导的细胞内ROS的产生和p47phox的表达,同时降低了Col-Ⅰ和FN的水平(P<0.05)。结论TGF-β1可以诱导NRK52E细胞ROS和p47phox水平的升高,刺激细胞外基质成分Col-Ⅰ和FN的形成。G-Rb1呈剂量依赖性地抑制了TGF-β1刺激的NRK52E细胞内的ROS水平的升高和细胞外基质的增加。其作用机制可能与降低p47phox的表达有关。

人参皂苷Rg_1对转化生长因子-β_1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1(Rg1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞转分化(TEMT)的作用及对细胞外基质(ECM)的影响。方法:将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白对照组,10 mg.L-1TGF-β1刺激组及不同剂量的Rg1干预组(10,20,40 mg.L-1)。应用形态学、免疫组化技术、酶联免疫吸附法、荧光定量PCR,Western蛋白印迹等观察Rg1对TGF-β1诱导的NRK52E细胞转分化的作用及对ECM主要成分胶原Ⅰ(Col-Ⅰ)和纤维粘连蛋白(FN)的影响。结果:与空白对照组相比,NRK52E培养3 d后,TGF-β1刺激组细胞形态学发生明显改变。免疫组织化学和Western蛋白印迹结果显示α-SMA的表达显著增加而E-cadherin的表达明显减少(P<0.05);RT-PCR结果示α-SMA,Col-Ⅰ和FN的mRNA表达明显增高(P<0.05);细胞培养上清液Col-Ⅰ和FN的含量也显著增加(P<0.05);与TGF-β1刺激组相比,各Rg1干预组均不同程度的改善了TGF-β1刺激的细胞形态学改变;有效抑制了α-SMA的表达,部分恢复了E-cadherin的下调(P<0.05);Col-Ⅰ和FN的含量亦明显减少(P<0.05)。结论:TGF-β1可以诱导大鼠TEMT,刺激ECM成分Col-Ⅰ和FN的升高。Rg1呈剂量依赖性地明显地抑制TGF-β1刺激的NRK52E细胞的转分化和ECM的增加。

TGF-β_1和ECM与糖尿病肾病关系的实验研究

目的 观察高糖条件下大鼠肾小球系膜细胞 (GMC)分泌细胞外基质 (ECM)成分中纤粘连蛋白 (FN)、层粘连蛋白 (L AM)、 及 型胶原和转化生长因子 β(TGF- β1 )的变化 ,探讨细胞因子和细胞外基质在糖尿病肾病发病中的作用。方法 采用体外大鼠肾小球系膜细胞培养 ,用 EL ISA方法测定培养上清液中的 ECM和 TGF-β1 。结果 1高糖条件下 ,GMC合成和分泌 TGF-β1 增加。 2高糖对体外培养的系膜细胞分泌 ECM的影响具有选择性 ,仅增加功能相关蛋白的合成 ,而对其它类型的间质胶原没有影响。结论 体外高糖可增加 TGF-β1 和 ECM的合成。由此可以推断 ,在体内肾小球系膜细胞对高血糖的反应是增加 TGF- β1 和 ECM的合成 ,导致糖尿病肾小球硬化。

血管紧张素Ⅱ对大鼠系膜细胞葡萄糖转运蛋白1表达的影响

目的 研究血管紧张素Ⅱ (ANGⅡ )、高糖及血管紧张素Ⅱ 1型受体拮抗剂 (AT1RA)对于大鼠系膜细胞 (MCs)上葡萄糖转运蛋白 1(GLUT1)表达及MCs所合成的系膜区细胞外基质 (ECM )的影响。方法 采用免疫组化法检测大鼠系膜细胞上GLUT1蛋白的合成 ,半定量聚合酶链式反应 (RT PCR)测定系膜细胞GLUTmR NA水平 ,ELISA法测定细胞培养上清液中纤连蛋白 (FN)的表达。结果 ANGⅡ作用后能显著增加大鼠MCs GLUT1的转录及蛋白合成 (P <0 .0 5 ) ,这种作用具有浓度及时间依赖性且能被AT1RA伊贝沙坦 (Irbesartan)所阻断。高糖 (2 7.8mm1/L)作用 4h后未能增加MCsGLUT1的转录及表达。ANGⅡ能使培养的MCs上清液中FN含量显著增加 (P <0 .0 0 1) ,Irbesartan能使增加的FN降低 5 0 .5 4%。结论 ANGⅡ能从转录水平刺激MCs上GLUT1的表达 ,增加ECM的合成 ,ANGⅡ的这种作用通过AT1受体介导并能被AT1RA阻断。ANGⅡ可通过上调GLUT1的表达参与糖尿病肾病 (DN)的发生及发展。

转化生长因子TGF-β在牙本质发育及修复中的研究进展

转化生长因子TGF-β是一种多能生长因子。目前研究发现在牙本质基质中存在大量的TGF-β,在牙髓损伤后出现反应性增加,可能参与了一些生理、病理调控。这为牙髓治疗尤其是盖髓治疗提供了广阔的应用前景。为此,本文综述了近几年TGF-β及其受体在牙齿发育、修复的调控作用及研究进展,并进行了相应讨论。

骨髓间充质干细胞移植对大鼠钙化主动脉结构及顺应性的影响

目的研究骨髓间充质干细胞对大鼠大血管钙化是否具有修复作用。方法选用8周龄健康Wister鼠复制维生素D+尼古丁钙化模型,采用左心室直接注射干细胞的方法进行干预移植,4周后检测有创血压、脉搏波传导速度,评价动脉顺应性;采用不同染色方法分析组织中弹性纤维、胶原纤维比例,动脉壁中Ⅰ、Ⅲ型胶原的水平和比例变化及动脉钙化程度;采用原子吸收光谱法测定钙化组织中钙含量。结果维生素D+尼古丁钙化大鼠接受骨髓间充质干细胞干预后弹力/胶原纤维比值发生改变,细胞移植组高于假移植组(1.5%±0.3%比0.9%±0.2%,P<0.01)。骨髓间充质干细胞移植组弹力纤维保持固有形状,与胶原纤维结合紧密;动脉组织局部钙含量较假移植组下降(13.80±1.28mg/g比29.90±1.85mg/g,P<0.01)。上述动脉结构的改变伴有动脉顺应性的改善。结论骨髓间充质干细胞移植能改善细胞外基质成分的构成比例,部分抑制钙在动脉壁中的沉积过程,这种动脉结构的恢复伴有动脉顺应性的改善。

生长抑素对体外培养的人晶体上皮细胞的增殖和胶原合成的抑制作用

目的研究生长抑素ｓｔｉｌａｍｉｎ（ＳＳ－１４肽）和ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ（ＳＳ－８肽）对人晶上皮细胞（ＨＬＥＣ）增殖及胶原合成的影响。方法采用ＭＴＴ比色法和３Ｈ－脯氨酸（３Ｈ－Ｐｒｏｌｉｎｅ）掺入法检测了ＳＳ－１４肽和ＳＳ－８肽对人晶体上皮细胞（ＨＬＥＣ）增殖及胶原合成的抑制作用。结果ＳＳ－８肽浓度为１０－１０ｍｏｌ／Ｌ、ＳＳ－１４肽浓度为１０－９ｍｏｌ／Ｌ时能明显抑制ＨＬＥＣ增殖和胶原合成，且呈剂量依赖关系，５０％抑制浓度（ＩＤ５０）ＳＳ－８肽为１０－８ｍｏｌ／Ｌ，ＳＳ－１４肽为１０－７ｍｏｌ／Ｌ。结论ＳＳ－１４肽和ＳＳ－８肽可以通过抑制ＨＬＥＣ的增殖及胶原的合成而抑制后囊混浊。

细胞外基质在大鼠胚胎心脏的时相性分布

采用酶免疫组织化学法检测 ECM及其受体 β1 在胎龄 11至 19天胚鼠心脏中的表达 ,结果显示 ECM中 FN、L MN、Vn及受体 β1 均于 ED11起在胚鼠心脏存在表达 ,但其表达高峰及在流出道、心内膜垫、心室肌及室间隔中表达持续时间各不相同 ,Co IV在胚胎各期均为阴性表达 ,提示不同的 ECM在胚胎心脏的不同部位有着不同的时相性表达规律 ,ECM(主要是 FN与 L MN)及其受体 β1

尾加压素Ⅱ促NRK-49F细胞增殖及ECM分泌作用

目的探讨尾加压素Ⅱ(UrotensinⅡ,UⅡ)促进大鼠肾脏成纤维细胞(NRK-49F)增殖及细胞外基质(extracel-lular matrix,ECM)作用。方法分别用含不同浓度UⅡ(10-7、10-8、10-9和10-10mol.L-1)的培养液培养NRK-49F,采用MTT法检测细胞增殖情况,ELISA法检测细胞培养上清中Ⅰ型胶原(collagenⅠ,colⅠ)、Ⅲ型胶原(collagenⅢ,colⅢ)及纤连蛋白(fibronectin,FN)含量;RT-PCR法评价UⅡ抗体、尼莫地平和EDTA对UⅡ诱导NRK-49F colⅠ、colⅢ和FNmRNA过表达的抑制作用。结果 UⅡ可明显促进NRK-49F的增殖,且随着UⅡ浓度的增加而增强;10-9和10-8mol.L-1UⅡ可明显刺激NRK-49F ECM分泌,与对照组比较,差异显著(P<0.01);培养液中加入UⅡ抗体、尼莫地平和ED-TA后,NRK-49F colⅠ、colⅢmRNA表达量明显降低,与UⅡ组比较,有统计学意义(P<0.01)。结论 UⅡ对体外培养的肾间质成纤维细胞有明显的促增殖作用,并且促进其ECM分泌,其机制可能与细胞外Ca2+内流增加有关。

基质金属蛋白酶与冠心病

冠心病的病理学基础是动脉粥样硬化,目前认为动脉粥样硬化的形成和斑块的破裂与细胞外基质的破坏和重构有密切关系,而基质金属蛋白酶(MMPs)是降解细胞外基质的重要酶类。对近年来关于MMPs的结构、功能、基因表达以及在冠心病中的作用的研究取得的成果进行了综述。

血清细胞外基质相关指标在慢性肾脏病早期诊断中的价值

目的观察慢性肾脏病不同分期的血清细胞外基质(HA、LN、PCⅢ、CⅣ、TIMP-1)的变化,并初步评价其在慢性肾脏病早期诊断中的价值。方法收集正常对照组以及慢性肾脏病不同分期患者血清标本,采用放射免疫及酶联免疫吸附法测定各组患者的血清HA、LN、PCⅢ、CⅣ、TIMP-1指标的变化,分析各组患者血清中HA、LN、PCⅢ、CⅣ、TIMP-1各指标与血清SCr、BUN、CCr、CystC、β2-MG的相关性,比较各组患者血清中HA、LN、PCⅢ、CⅣ、TIMP-1指标在慢性肾脏病Ⅰ期、Ⅱ期中的变化。结果慢性肾脏病Ⅰ期患者HA、LN、PCⅢ、CⅣ、TIMP-1与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。多元相关分析表明:HA、LN、PCⅢ、CⅣ、TIMP-1与β2-MG和CystC有相关性(P<0.05)。结论在慢性肾脏病早期(Ⅰ期、Ⅱ期),血清HA、LN、PCⅢ、CⅣ、TIMP-1水平逐渐升高,可以间接反映肾脏纤维化的程度,对慢性肾脏病的早期诊断具有重要价值。