MAPK通路抑制剂对低氧高二氧化碳性肺动脉收缩的影响

目的:观察肺主动脉环、二级肺动脉环在急性低氧高二氧化碳介质中张力的变化;探讨MAPK信号通路抑制剂U0126、SB203580对低氧高二氧化碳性肺血管收缩的影响。方法:制备离体SD大鼠肺主动脉环、二级肺动脉环。分别观察肺主动脉环、二级肺动脉环在常氧及急性低氧高二氧化碳介质中的张力变化;在急性低氧高二氧化碳条件下分别用U0126、SB203580孵育二级肺动脉,观察各自对低氧高二氧化碳性肺动脉收缩的影响。结果:在常氧条件下,肺主动脉、二级肺动脉张力均无明显变化。急性低氧高二氧化碳条件下二级肺动脉发生双向性收缩反应,肺主动脉只在低氧高二氧化碳早期出现较明显的收缩峰,后期则变化不明显。二级肺动脉分别经ERK1/2上游激酶抑制剂U0126、p38MAPK通路抑制剂SB203580孵育后,Ⅱ期持续收缩幅度明显下降(P<0.05),Ⅰ期快速收缩峰、Ⅰ期舒张均没有明显变化。结论:在离体条件下,急性低氧高二氧化碳(PO2=30-35mmHg,PCO2=55-60mmHg)可使肺主动脉出现早期快速收缩,并可使二级肺动脉环发生双向性收缩反应;急性低氧高二氧化碳条件下,U0126、SB203580均能减弱二级肺动脉环的Ⅱ期持续收缩反应。这为临床治疗缺氧和高碳酸血症引起的肺血管收缩及肺动脉高压提供了理论依据。

JMJD2B通过ERK-MAPK途径影响人结直肠癌细胞的恶性表型

目的 :探讨组蛋白去甲基化酶JMJD2B影响人结直肠癌细胞恶性表型所介导的信号通路。方法 :以RNA干扰技术靶向沉默人结直肠癌细胞HCT116和SW480中JMJD2B的表达,采用蛋白质印迹法检测人结直肠癌细胞ERK-MAPK信号通路的变化,并分别采用CCK-8、流式细胞分析检测细胞增殖和细胞周期分布、凋亡情况。结果:转染JMJD2B si RNA能特异性抑制JMJD2B的表达并导致ERK2表达下调,其磷酸化水平也降低,肿瘤细胞发生G2/M或G0/G1期阻滞,细胞凋亡比例增加,增殖显著受抑(P<0.05)。结论:抑制JMJD2B可通过阻断ERK-MAPK信号转导而抑制人结直肠癌细胞的恶性表型。

MAPK在葡萄糖及AngⅡ致血管平滑肌细胞增殖反应中的作用

目的:研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径在葡萄糖(GS)和/或血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导大鼠动脉平滑肌细胞促增殖中的作用及其可能的调控机制.方法:实验以平滑肌细胞蛋白合成速率和蛋白含量为平滑肌细胞增殖的指标,以平滑肌细胞3H-亮氨酸掺入率表示细胞蛋白质合成速率,通过3H-胸苷(3H-TdR)反映平滑肌细胞DNA的代谢及细胞增殖情况;并通过给予PD098059及高浓度葡萄糖(HG)预处理,观察它们对细胞蛋白合成、DNA代谢及细胞增殖的影响.结果:①AngⅡ(10-7mol/L)处理平滑肌细胞,3H-胸苷掺入率明显增高;HG(25×10-3mol/L)处理平滑肌细胞,3H-胸苷掺入率明显增高;AngⅡ+HG处理平滑肌细胞3H-胸苷掺入率显著增高.②AngⅡ增加3H-胸苷掺入的作用可明显被PD098059所抑制;AngⅡ+HG增高3H-胸苷掺入的作用也可被PD098059所抑制.③AngⅡ(10-7mol/L)处理平滑肌细胞,3H-亮氨酸掺入率明显增高;HG(25×10-3mol/L)处理平滑肌细胞,3H-亮氨酸掺入率增加;AngⅡ+HG处理平滑肌细胞3H-亮氨酸掺入率显著增加.④AngⅡ增加3H-亮氨酸掺入的作用可部分被PD098059所抑制;AngⅡ+HG增加3H-亮氨酸掺入的作用可显著被PD098059所抑制.结论:应用MAPK的特异性抑制剂PD098059抑制血管平滑肌细胞的增殖,证明MAPK激活在GS和/或AngⅡ导致平滑肌细胞增殖反应中有重要作用.

ERK/MAPK信号转导通路与消化系肿瘤

细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路是经典的细胞信号转导途径,具有调节细胞增殖、分化、凋亡等多重功能,与肿瘤的发生、发展、转移、预后等密切相关,在临床诊治中具有重要的参考意义。本文重点探讨ERK/MAPK信号通路与消化系肿瘤发病、演进的关系及其潜在的分子机制,并对近期相关的临床应用作一详细介绍。

ERK1／2MAPK通路在甲羟戊酸促进人类肾小球系膜细胞增殖中的作用

目的探讨甲羟戊酸（MVA）促进人类肾小球系膜细胞（HMC）增殖中，细胞外信号调控蛋白激酶1／2（ERK1／2）丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）通路的作用及机制。方法将体外培养的HMC根据不同的处理因素分为正常对照组、MVA组（100nmol／L）、MVA（100nmol／L）加PD98059（50μmol／L）组即MVA加PD组，以不含干预因素正常培养细胞为对照组，分别于干预后12、24h收集各组细胞，应用Western blot法检测P-ERK1／2、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果①p-ERK1／2蛋白的表达：MVA组在各个时间点的表达均明显上调，且随时间延长，蛋白表达增加（P〈0．05）；而MVA加PD组在各个时间点的表达均无明显变化（P〉0．05）。②Bcl-2与Bax蛋白的表达：MVA组与MVA加PD组在各个时间点Bcl-2蛋白表达均明显上调，且随时间延长表达增加（P〈0．05）；而各个时间点Bax蛋白的表达均明显下调（P〈0．05）；但随时间延长，MVA组表达下降（P〈0．05），而MVA加PD组表达下降不明显（P〉0．05）；③Bcl-2／Bax：MVA组与MVA加PD组在各个时间点均升高，且随时间延长Bcl-2／Bax升高（P〈0．05）；而在各个时间点，MVA加PD组较MVA组Bcl-2／Bax明显下降（P〈0．05）。结论MVA可通过Ⅱ水1／2信号转导通路促进HMC增殖；ERK1／2信号转导通路促进HMC增殖可通过上调Bcl-2及下调Bax的表达，并最终通过上调Bcl-2／Bax而实现。

分泌型卷曲相关蛋白1通过MAPK/ERK信号通路抑制结直肠癌细胞的迁移侵袭

目的探讨分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)对结直肠癌细胞迁移和侵袭的影响机制。方法本研究起止时间2018年11月至2019年6月。运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常结肠上皮细胞HCoEpiC、人结直肠癌细胞HCT8、SW480、RKO中SFRP1的mRNA表达;将pcDNA 3.1组(转染pcDNA 3.1)、pcDNA 3.1-SFRP1组(转染pcDNA 3.1-SFRP1)、pcDNA 3.1-SFRP1+DMSO组[转染pcDNA 3.1-SFRP1,再用二甲基亚砜(DMSO)处理]、pcDNA 3.1-SFRP1+IGF组[转染pcDNA 3.1-SFRP1,再用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路激活剂(IGF1)处理],均用脂质体法转染至HCT8细胞。蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中SFRP1、波形蛋白(Vimentin)、纤维黏连蛋白(FN)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、MAPK/ERK信号通路关键基因(Ras)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、细胞外信号调节激酶(ERK)的蛋白表达;迁徙实验(Transwell)检测细胞的迁移侵袭。结果与正常结肠上皮细胞HCoEpiC相比,人结直肠癌细胞HCT8、SW480、RKO中SFRP1的表达显著降低[mRNA(1.00±0.06)比(0.36±0.03)、(0.62±0.05)、(0.59±0.05);蛋白(1.00±0.04)比(0.24±0.02)、(0.48±0.04)、(0.47±0.04),均P<0.05]。过表达SFRP1可抑制HCT8细胞的迁移(120±11)比(65±6)和侵袭(98±8)比(47±4),并下调Vimentin(0.96±0.05)比(0.23±0.02)、FN(1.00±0.07)比(0.51±0.04)、MMP-9(0.98±0.08)比(0.35±0.03)、N-cadherin(1.01±0.09)比(0.43±0.04),上调E-cadherin(0.99±0.06)比(3.71±0.27),抑制MAPK/ERK信号通路关键蛋白Ras(0.97±0.07)比(0.34±0.03)、mTOR(1.03±0.07)比(0.42±0.04)、p-ERK1/2(0.98±0.08)比(0.29±0.03)和ERK(1.01±0.06)比(0.31±0.03)的表达。激活MAPK/ERK信号通路可逆转过表达SFRP1对结直肠癌细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论SFRP1可抑制结直肠癌细胞的迁移和侵袭,其机制可能与失活MAPK/ERK信号通路相关,将可为SFRP1用于结直肠癌的治疗提供依据。

榄香烯抑制Raf/MEK/ERK信号通路诱导人源胶质瘤U87细胞凋亡

目的探讨莪术提取物榄香烯体外诱导胶质瘤细胞凋亡的机制。方法采用流式细胞术、West-ern印迹等方法,分别检测不同浓度榄香烯对人源U87胶质瘤细胞的凋亡诱导及其对U87细胞Raf-1、ERK、癌基因Bcl-2蛋白质表达的影响。结果榄香烯对人源U87胶质瘤细胞具有明显的凋亡诱导作用,该增殖抑制效应呈时间依赖性。榄香烯可明显下调U87细胞的磷酸化Raf-1、ERK、Bcl-2表达。结论体外榄香烯对胶质瘤细胞具有明显的凋亡诱导作用(呈时间依赖性),抑制Raf/MEK/ERK信号通路,从而下调其下游信号癌基因Bcl-2的表达,最终启动凋亡程序可能是榄香烯诱导U87细胞凋亡的机制。

七氟烷后处理对大鼠缺血/再灌注损伤心功能和ERK1/2表达的影响

目的研究七氟烷后处理对细胞外信号调节激酶(ERK1/2)活性的影响,探讨其对大鼠离体心脏缺血/再灌注保护作用的机制。方法 (1)64只SD大鼠,随机分为8组(n=8):假手术组(Sham),缺血/再灌注组(Control),缺血后处理组(Post),七氟烷后处理组(Sevo),二甲基亚砜(PD98059溶剂)后处理组(DMSO),PD98059(ERK1/2抑制剂)后处理组(PD),缺血+PD98059后处理组(Post+PD),七氟烷+PD98059后处理组(Sevo+PD)。采用Langendorff离体心脏灌注模型,记录平衡灌注末,再灌注30、60、90 min心功能指标,灌注结束时,TTC法计算心肌梗死面积百分比。(2)48只SD大鼠,分组同上(n=6),复灌15 min,Westernblot法半定量测定心室胞质磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)及其下游靶点70 000核糖体S6蛋白激酶磷酸化(p-p70S6K)表达水平。结果平衡灌注末各组间心功能指标(基础值)差异无统计学意义(P>0.05)。Sevo组和Post组可改善缺血/再灌注心脏的各项心功能指标和减少心肌梗死面积(与Control组比较,P均<0.05)。复灌15 min时,Sevo组和Post组p-ERK1/2、p-p70S6K的表达高于Control组(P<0.05)。PD98059完全拮抗了七氟烷诱导的p-ERK1/2的表达同时抵消了其心肌保护效果。结论七氟烷后处理对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤有明显的保护作用,其保护强度与缺血后处理相当,机制可能与心肌细胞p-ERK1/2活性的增加有关。

依达拉奉对大鼠脑创伤后神经细胞凋亡信号通路的影响

目的探讨依达拉奉对脑创伤后神经细胞凋亡信号通路的影响。方法 135只雄性SD大鼠随机分为对照组(25只)、创伤组(60只)和依达拉奉组(50只)。Marmarous法建立SD大鼠弥漫性脑创伤模型;依达拉奉组大鼠伤后即刻经尾静脉注射依达拉奉10mg/kg,每天1次,共3d;分别于伤后1h、6h、24h、48h和72h采用硫代巴比妥酸法检测大脑皮质中丙二醛(MDA)含量;免疫组化法和WesternBlot法检测皮质区磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK1/2)及细胞色素C(CytC)的表达;原位缺口末端标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡。伤后24h、48h、72h对大鼠综合运动功能进行评定。结果与对照组比较,创伤组大鼠脑组织MDA水平(6h、24h、48h、72h)、磷酸化ERK1/2(1h、6h、24h、48h)和CytC(6h、24h、48h、72h)表达明显增高,细胞凋亡数(6h、24h、48h、72h)增多;综合运动能力评分下降(均P<0.05)。与创伤组比较,依达拉奉组大鼠脑组织MDA含量、磷酸化ERK1/2和CytC表达、神经细胞凋亡数下降;大鼠的运动功能评分回升(均P<0.05)。结论依达拉奉通过清除氧自由基、抑制ERK1/2信号途径活化、减少神经细胞凋亡而发挥对脑创伤的保护作用。

ERK在榄香烯抑制大鼠C6胶质瘤细胞增殖中的作用

目的:探讨莪术提取物榄香烯抑制神经胶质瘤细胞体外增殖的机制及其对神经胶质瘤细胞体内增殖的影响。方法:采用细胞计数、Western印迹等方法分别检测不同浓度和不同作用时间榄香烯对胶质瘤细胞的增殖影响和对ERK、Akt蛋白质表达的影响,并观察接种胶质瘤细胞裸鼠受榄香烯作用后肿瘤增殖的变化。结果:榄香烯对大鼠C6胶质瘤细胞具有明显的抑制增殖作用,该增殖抑制效应呈剂量、时间依赖性。榄香烯可明显下调磷酸化ERK表达,同样呈剂量、时间依赖性,而对Akt表达无明显影响。榄香烯可明显抑制C6胶质瘤细胞的体内增殖。结论:榄香烯能有效抑制胶质瘤细胞的体内和体外增殖,下调磷酸化ERK蛋白质表达可能是榄香烯抑制C6细胞增殖的机制。

榄香烯阻碍大鼠胶质瘤C6细胞ERK信号通路中Hsp90/Raf-1分子复合体的形成

目的探讨莪术提取物榄香烯抑制胶质瘤细胞体外增殖的机制。方法采用细胞计数、免疫共沉淀、Western印迹等方法,分别检测不同浓度、不同作用时间榄香烯对C6胶质瘤细胞的增殖影响、对C6细胞中与Raf-1结合形成分子复合体的Hsp90水平的影响、对C6细胞Hsp90、Raf-1、ERK蛋白质表达的影响。结果榄香烯对大鼠C6胶质瘤细胞具有明显的抑制增殖作用,该增殖抑制效应呈剂量、时间依赖性。榄香烯可明显下调C6细胞中与Raf-1结合的Hsp90水平及C6细胞的磷酸化Raf-1、ERK表达,但不影响总Hsp90的表达水平。结论榄香烯能有效抑制胶质瘤细胞的体外增殖,破坏Hsp90的分子伴侣功能,阻碍Hsp90/Raf-1复合体的形成,使Raf-1不能被活化,最终下调胶质瘤细胞赖以生存的Raf/MEK/ERK通路,这可能是榄香烯抑制C6细胞增殖的机制。

大鼠全肝缺血再灌注后肺损伤及褪黑素的保护作用

目的:探讨大鼠全肝缺血再灌注后肺损伤及其机制和褪黑素的肺保护作用。方法:本实验将分成两部分完成。第一部分,72只SD大鼠随机分成2组:缺血再灌注组(n=36)与假手术对照组(n=36),阻断肝门30 min后开放血流,建立大鼠全肝缺血再灌注模型。缺血再灌注组与假手术对照组分别于缺血前5 min和再灌注0、0.5、1、3、6 h各时点处死动物(每时点6只),留取肺脏组织标本。通过两组间比较,观察全肝缺血再灌注后肺组织的动态变化。第二部分,将12只SD大鼠随机分成2组:褪黑素治疗组(n=6)与基质对照组(n=6),依上述方法制备全肝缺血再灌注模型,分别于全肝缺血前15 min和再灌注前10 min静脉注射0.5%(质量分数)褪黑素溶液(10mg/kg)或相同剂量的溶剂,于再灌注1 h处死动物,留取肺脏组织标本。通过这两组比较,观察褪黑素的治疗效果。留取肺组织标本后,分别检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinases 1/2,ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达,细胞凋亡,增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达及肺组织病理学变化。结果:(1)全肝缺血再灌注可导致肺组织结构严重受损。与假手术对照组相比,缺血再灌注组再灌注后肺组织MDA含量与细胞凋亡指数显著增高;SOD活性显著降低;p-ERK/ERK比值与PCNA阳性指数分别于再灌注0 h与再灌注0.5 h显著降低,此后均逐渐增高。病理学方面,缺血再灌注组肺泡腔完整性破坏,间隔增厚,并可见中性粒细胞浸润。双变量相关分析结果显示,肺组织p-ERK/ERK比值与PCNA阳性指数及凋亡指数均成正相关,分别为r=0.56(P<0.05)、r=0.62(P<0.05)。(2)褪黑素治疗可明显减轻肺损伤。褪黑素治疗组与基质对照组比较,病理学改变减轻,MDA含量、细胞凋亡指数显著降低,SOD活性和p-ERK/ERK比值显著增加,但PCNA阳性指数无明显变化。结论:全肝缺血再灌注可引起肺损伤。脂质过氧化增强、内源性自由基清除能力减弱以及细胞凋亡加剧是导致全肝缺血再灌注肺损伤的重要因素。褪黑素可通过抗氧化与抑制凋亡对全肝缺血再灌注肺损伤产生一定保护作用,但褪黑素的肺保护作用与激活ERK1/2信号途径的关系仍有待研究。

选择性COX-2抑制剂对非小细胞肺癌细胞株毒性及分子机制的研究

目的:探讨选择性环氧化酶-2(cyclooxy-genase-2,COX-2)抑制剂Celecoxib对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞株增殖与凋亡的作用以及相关分子机制。方法:对3种NSCLC细胞株A549(腺癌)、GLC82(腺癌)和SW1573(肺泡细胞癌)使用MTT法测定细胞生长抑制率;Hoechest33258荧光染色观察细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期分布;West-ern blot法检测COX-2、磷酸化AKT(p-AKT)、总丝苏氨酸激酶(serine/threonine kinase,AKT)、磷酸化ERK(p-ERK)及总细胞外信号调节激酶(ex-tracellular signal-regulated kinase,ERK)蛋白的表达。结果:Celecoxib抑制A549、GLC82和SW1573细胞增殖的IC50值分别为14·7、10·6和18·6μmol/L;Celecoxib对3种NSCLC细胞株都有较明显的凋亡诱导作用,Celecoxib作用12h凋亡率增加,24～48h更明显,Celecoxib10～40μmol/L作用可见凋亡率明显增加;Celecoxib作用于GLC82细胞后检测到胞内p-AKT及p-ERK蛋白表达下调。结论:COX-2抑制剂Celecoxib在体外能抑制细胞信号传导AKT及ERK通路的活化,诱导NSCLC细胞发生凋亡,抑制细胞增殖。

穿心莲内酯对活化巨噬细胞细胞外信号调节激酶1/2信号转导通路的抑制作用

目的：观察穿心莲内酯对脂多糖激活的小鼠腹腔巨噬细胞细胞外信号调节激酶1/2（extracellularsignal-regulated kinase1/2,ERK1/2）信号转导通路及肿瘤坏死因子α（tumor necrosisfactor-α,TNF-α）的影响。方法：以穿心莲内酯作用于脂多糖活化的小鼠腹腔巨噬细胞后,细胞计数试剂盒8测定穿心莲内酯对巨噬细胞的细胞毒作用,蛋白质印迹法检测巨噬细胞ERK1/2、p38和JNK蛋白磷酸化水平以及IκBα蛋白表达水平,逆转录聚合酶链反应法检测巨噬细胞TNF-αmRNA的表达水平,酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞培养上清液中TNF-α蛋白的表达水平。结果：1~100μg/mL穿心莲内酯对脂多糖活化的小鼠腹腔巨噬细胞无细胞毒作用;穿心莲内酯能抑制脂多糖活化小鼠腹腔巨噬细胞的ERK1/2磷酸化,随着穿心莲内酯浓度增加,抑制作用增强（P〈0.01）;1~25μg/mL穿心莲内酯不能抑制脂多糖活化小鼠腹腔巨噬细胞的p38和JNK磷酸化,对脂多糖引起的IκBα降解也无影响。12μg/mL穿心莲内酯和20μmol/LPD98059（ERK1/2信号转导通路抑制剂）能降低巨噬细胞TNF-αmRNA的表达和其上清液中TNF-α的分泌水平（P〈0.01）。结论：穿心莲内酯能阻断ERK1/2信号转导通路,并在抑制TNF-α的表达中可能起作用。

细胞外信号调节激酶通路介导的自噬对七氟烷后处理大鼠心肌缺血再灌注的保护机制

目的研究七氟烷后处理(SP)对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用,探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)转导通路介导的自噬在其中的机制作用。方法成年雄性SD大鼠90只,建立急性大鼠心肌I/R损伤模型。随机分为6组:假手术组(Sham组)、I/R组、SP组、七氟烷正常对照组(Control组)、ERK1/2抑制剂PD98059组(PD组)、PD98059溶剂DMSO组(DMSO组),各15只。后5组缺血30min,再灌注4h。再灌注4h末提取心脏,用TTC法测定心肌梗死范围,用Western blot法检测Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ及P62蛋白表达水平。结果与I/R组比较,SP组心肌梗死范围减小[(35.7±10.1)%vs(56.4±12.3)%,P<0.05],LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1和P62蛋白表达下调(P<0.05);与SP组比较,PD组心肌梗死范围增加[(50.7±8.3)%vs(35.7±10.1)%,P<0.05],LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1和P62蛋白表达上调(P<0.05)。结论 SP减轻了大鼠心肌I/R损伤,其机制可能是通过激活ERK1/2信号转导通路,抑制再灌注期间自噬体清除的破坏,进而抑制再灌注期间细胞死亡。

δ阿片受体激活对过氧化氢损伤的心肌细胞的保护作用

目的研究δ阿片受体激活剂D-丙(2)-D-亮-(5)-脑啡肽(DADLE)对过氧化氢(H2O2)损伤的心肌细胞的保护作用及其机制。方法分离乳大鼠心肌细胞,培养48h后分为正常对照、H2O2(200μmol.L-1)、H2O2+DADLE(1μmol.L-1)、H2O2+DADLE+纳曲吲哚(10μmol.L-1)和H2O2+DADLE+U0126(10nmol.L-1)组,继续培养48h。用[3H]TdR掺入法检测心肌细胞增殖反应,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡百分率,乳酸脱氢酶(LDH)活性测定试剂盒测定培养上清LDH活性,硫代巴比妥酸显色法测定细胞内丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western蛋白印迹法检测细胞外信号调节激酶磷酸化(p-ERK)水平。结果①与正常对照组比较,H2O2组心肌细胞[3H]TdR掺入值明显降低,细胞凋亡率升高;培养上清LDH活性和MDA含量明显增加,SOD活性和Ap-ERK/AERK的比值降低。②与H2O2组比较,DADLE可使心肌细胞[3H]TdR掺入值升高,细胞凋亡率下降;培养上清LDH活性和MDA含量降低,SOD活性和Ap-ERK/AERK的比值升高。③分别加入δ阿片受体拮抗剂纳曲吲哚和ERK拮抗剂U0126,DADLE对上述指标的逆转作用被抑制。结论δ阿片受体激活对H2O2损伤的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与其增强心肌细胞的抗氧化功能及促进ERK磷酸化有关。

阿司匹林对人胃黏膜上皮细胞生长和occludin蛋白表达的影响及其机制研究

背景:研究显示ERK信号通路激活可促进细胞生长,上调紧密连接蛋白occludin表达,而阿司匹林可抑制ERK的磷酸化激活。目的:探讨阿司匹林对人胃黏膜上皮细胞生长和occludin蛋白表达的影响及其可能机制。方法:建立人胃黏膜上皮细胞株GES-1单层细胞模型,MTT法检测阿司匹林(5～20 mmol/L)和MEK抑制剂U0126(10～40μmol/L)对GES-1细胞的生长抑制作用。将GES-1细胞分为阿司匹林(8.78 mmol/L)组、U0126(14.91μmol/L)组、联合组(U0126+阿司匹林)和阴性对照组,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测p-ERK1/2、occludin蛋白表达。结果:阿司匹林和U0126均能剂量依赖性地抑制GES-1细胞生长,联合组细胞凋亡较两药单用更为显著,贴壁细胞数量减少更为明显,细胞变圆、悬浮。阿司匹林组、U0126组和联合组p-ERK1/2、occludin蛋白表达量均显著低于阴性对照组,U0126组和联合组降低更为明显。结论:阿司匹林可抑制人胃黏膜上皮细胞生长,下调occludin蛋白表达,其机制至少部分与抑制ERK信号通路激活有关。

Rho激酶抑制剂对急性脑梗死患者血浆尾加压素Ⅱ的影响及疗效分析

目的观察Rho激酶抑制剂法舒地尔对急性脑梗死患者血浆尾加压素Ⅱ的影响,评估盐酸法舒地尔治疗急性脑梗死的临床疗效。方法选取2014年10月~2016年4月在上海交通大学附属第一人民医院松江分院神经内科收治的急性脑梗死患者120例,随机分为法舒地尔组60例,对照组60例。另选择我院同期健康体检人员60例作为健康体检组。采用竞争性酶联免疫吸附法测定血浆尾加压素Ⅱ水平,比较法舒地尔组与对照组治疗前和治疗14d美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分。结果法舒地尔组治疗后NIHSS评分较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。法舒地尔组和对照组治疗前血浆尾加压素Ⅱ水平明显高于健康体检组(P<0.01);对照组治疗后血浆尾加压素Ⅱ水平较健康体检组明显升高[(0.20±0.06)μg/L vs(0.14±0.04)μg/L,P<0.01]。法舒地尔组和对照组治疗后血浆尾加压素Ⅱ水平较治疗前明显降低[(0.15±0.03)μg/L vs(0.25±0.04)μg/L,(0.20±0.06)μg/L vs(0.25±0.05)μg/L,P<0.01]。结论 Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔可能通过抑制Rho激酶的活性影响急性脑梗死患者血浆尾加压素Ⅱ表达,并可改善急性脑梗死患者神经功能缺损。

机械应力下成骨细胞外信号调节激酶ERK1/2的早期变化

目的:观察体外培养的成骨样细胞在不同机械应力下细胞外信号调节激酶ERK1/2的表达变化.方法:采用四点弯曲细胞力学加载装置系统,对人成骨样细胞进行加力:频率0.5Hz,加力板变形量4000μstrain,按5,15,30min和1h不同时间段,使细胞发生单轴牵张和压缩应变.运用West-ernBlot检测不同方向、不同作用时间的应力应变下细胞外信号调节激酶ERK1/2所产生的变化.结果:在4000μstrain的周期性应力作用时,细胞外信号调节激酶ERK1/2在5min内被迅速激活,磷酸化程度大幅升高,牵张及压缩应力均有类似表现;1h左右恢复至基态水平.牵张应力所引发的ERK磷酸化较压缩应力更强,其差异有统计学意义(P<0.05).结论:较大的应力应变可以在早期激活成骨细胞内的MAPK/ERK信号转导通路,牵张应力所产生的效应较压缩应力更为明显,机械应力参与了细胞外信号调节激酶的活化.

依达拉奉对大鼠弥漫性脑创伤后ERK1/2通路及神经细胞凋亡的影响

目的探讨脑创伤后细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号调控神经细胞凋亡的分子机制及依达拉奉(Edaravone)的治疗作用。方法SD大鼠随机分为对照组、脑创伤组、U0126干预组、Edaravone治疗组。Marmarou法建立大鼠弥漫性脑创伤模型。U0126干预组于大鼠伤前30min经尾静脉注射U0126(0.1mg/kg),每24h注射1次,连续3d;Edaravone治疗组分高、中、低剂量组,于伤后10min经尾静脉注射Edaravone(3、6、10mg/kg),每24h注射1次,连续3d。对照组不致伤。光镜和电镜下观察伤后脑组织形态变化;Western blotting法检测伤后1、6、24、48、72h磷酸化ERK1/2和Bax的表达,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测上述时间点神经细胞的凋亡。伤后24、48、72h对大鼠的综合运动功能进行评定。结果致伤后,大鼠皮质区部分神经细胞出现变性坏死和凋亡改变;神经细胞凋亡数目和Bax表达显著增多,伴随磷酸化ERK1/2水平增加,神经运动功能评分下降。应用U0126和Edaravone干预后,神经细胞形态损伤程度减轻;神经细胞凋亡数目和Bax表达回降,磷酸化ERK1/2水平降低;神经运动功能评分升高,上述改变在U0126和高、中剂量Edaravone组中差异显著(P<0.05)。结论脑创伤后活化ERK1/2信号通过调控Bax在神经细胞凋亡过程中发挥重要作用;Edaravone通过抑制ERK1/2信号途径,减少神经细胞凋亡发挥保护作用。