组织工程膀胱细胞外基质生物相容性的实验研究

目的制备兔膀胱细胞外基质材料,检测其生物相容性,探讨其作为组织工程泌尿道修复重建支架材料的可行性。方法联合应用渗透溶液法-酶消化法-去垢剂洗涤法制备兔膀胱细胞外基质,将体外培养的兔膀胱移行上皮细胞与其复合培养,观察细胞在材料表面的黏附、生长、增殖情况;MTT法检测材料浸提液对膀胱移行上皮细胞的细胞毒性;将材料植入兔背部皮下检测其组织相容性。结果兔膀胱细胞外基质冻干后呈白色半透明薄膜状,扫描电镜观察材料一面呈纤维网状结构,另一面呈平坦致密结构,两面均无细胞残留。膀胱移行上皮细胞能够在材料表面正常黏附、生长、增殖,细胞形态良好。MTT法检测材料细胞毒性分级为0级或1级。皮下植入实验中动物无异常反应,材料能在体内逐渐降解并引导新生组织长入。结论本研究制备的兔膀胱细胞外基质已完全除去组织中的细胞成份,同时保留了细胞外基质的纤维网状结构,具有良好的细胞相容性和组织相容性,可以作为组织工程泌尿道修复重建的支架材料。

糖尿病肾病发病机制的研究进展

糖尿病是引起晚期肾病的主要原因,糖尿病肾病是不会在缺少高血糖的情况下发生的,甚至在有遗传倾向时没有高血糖也不会导致糖尿病肾病。基因多态性在糖尿病肾病的发生、发展中也有重要作用。近年来,一些学者提出了其有很多因子介入的发病机制。目前治疗糖尿病的主要方法为控制血糖、降血压、控制血脂并禁止吸烟。控制血糖是治疗的关键点,胰腺移植是降低肾损伤的最好方法。

ERK通路抑制剂对PDGF-BB诱导的大鼠系膜细胞细胞外基质合成的影响

目的:探讨ERK通路在血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质(ECM)合成中的作用。方法:将体外培养大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)分为7组:对照组;PDGF-BB刺激组(终浓度分别为10、25和50ng/ml);PDGF-BB和ERK通路抑制剂UO126共刺激组(PDGF-BB25ng/ml+UO1265μmol/ml,PDGF-BB25ng/ml+UO12610μmol/ml);UO12610μmol/ml刺激组。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)和纤连蛋白(FN)mRNA的相对表达量。结果:PDGF-BB能剂量依赖性的上调PAI-1和FNmRNA的表达(P<0.05),同时下调MMP-2mRNA的表达(P<0.05)。U0126则呈剂量依赖性地抑制PDGF-BB诱导的肾小球系膜细胞PAI-1和FNmRNA的表达(P<0.05),促进MMP-2mRNA的表达(P<0.05)。结论:PDGF-BB可能通过ERK通路作用于大鼠肾小球系膜细胞,抑制细胞外基质的降解,促进其FN的合成,从而参与肾小球硬化的过程。

去细胞猪主动脉瓣膜基质支架材料体外降解的初步观察

目的观察去细胞猪主动脉瓣膜基质支架材料的体外降解方式和过程。方法将制备好的去细胞猪主动脉瓣膜基质支架材料90片随机分为3组,胶原酶组、弹性蛋白酶组和水解对照组,每组30片,分别用0.05m g/m l胶原酶I、0.05m g/m l弹性蛋白酶和磷酸盐缓冲液(PBS)作为降解液在体外处理去细胞猪主动脉瓣膜。于处理后第3、6、9、12、15和30d从每组取出5个平行样本观察瓣膜组织形态学改变,测定降解失重率、降解液中蛋白含量、羟脯氨酸含量等指标。结果胶原酶组和弹性蛋白酶组去细胞瓣膜基质支架材料均随降解时间延长逐渐变得菲薄、韧性差、组织疏松、纤维网孔变大、断裂,降解液外观变浑浊,瓣膜失重率增加,降解液蛋白含量和羟脯氨酸含量增加(P<0.01);胶原酶组较弹性蛋白酶组对去细胞猪主动脉瓣膜基质支架材料的降解作用强。结论胶原酶和弹性蛋白酶对去细胞猪主动脉瓣膜基质支架材料均有降解作用,且前者的降解作用强于后者。

槟榔在口腔黏膜下纤维性变发病机制中的作用

口腔黏膜下纤维性变(O ra l Subm ucous F ibrosis,O SF)是一种以炎症和渐进性黏膜改变导致进行性张口困难为特征的口腔黏膜慢性病症.近年来相当多的流行病学研究资料指出槟榔是O SF的主要病源因子,在O SF的发病上,不论是嚼食槟榔的频率还是持续的时间都呈现了剂量依赖性.在嚼食槟榔时粗糙纤维对口腔黏膜产生的强烈机械刺激作用、槟榔中的生物碱与单宁对细胞外基质分子的影响以及槟榔中的铜在纤维化疾病中的作用等方面对槟榔在O SF发病原因与发病机制中的作用加以综述,旨在分析迄今为止国内外学者对槟榔在O SF上所做的研究,以期让基础科研人员、公共卫生工作者以及广大槟榔嗜好者对槟榔在人类O SF中的作用有更深入的了解.

丹酚酸A对慢性肾衰竭大鼠BMP-7/Smads/TGF-β1信号通路的调控作用

目的:观察丹酚酸A对5/6肾切除(Platt法)大鼠肾组织骨形态发生蛋白-7(BMP-7)、转化生长因子β_1(TGF-β_1)/Smads信号通路的调节作用。方法:将40只大鼠随机分为:假手术组、模型组、丹酚酸A组、科素亚组,采用Platt法复制慢性肾衰竭大鼠模型,术后8周分别观察大鼠肾组织BMP-7、Smad6、TGF-β_1蛋白及基因的表达,p-Smad2/3、p-Smad1/5/8的蛋白表达。结果:各治疗组大鼠肾组织BMP-7、Smad6、p-Smad1/5/8的表达较模型组升高(P<0.01 or P<0.05),TGF-β_1、p-Smad2/3的表达较模型组明显减弱(P<0.01 or P<0.05)。结论:丹酚酸A可能是通过诱导BMP-7、Smad6、p-Smad1/5/8蛋白表达,抑制p-Smad2/3蛋白表达,调节BMP-7/Smads/TGF-β_1信号通路,抑制了TGF-β_1信号向细胞核内转导的通路,从而抑制细胞外基质增生,起到延缓肾纤维化的作用。

细胞外基质对体外培养兔关节软骨细胞增殖及基质代谢的影响

目的:观察软骨组织的主要细胞外基质成分:Ⅱ型胶原、蛋白多糖、透明质酸对体外单层培养的兔关节软骨细胞的增殖及基质合成的影响。方法:原代分离、培养兔关节软骨细胞,分别向其中添加Ⅱ型胶原、蛋白多糖和透明质酸,采用改良MTT法检测细胞的增殖情况,A lc ian B lue法检测基质蛋白多糖含量及羟脯氨酸法测定软骨细胞胶原产量。结果:单独添加Ⅱ型胶原(50μg/mL)组、蛋白多糖(50μg/mL)组和透明质酸(100μg/mL)组及三者联合添加实验组与对照组相比,对关节软骨细胞的增殖及胶原、蛋白多糖的合成未见明显统计学差异(P>0.05)。结论:正常软骨组织的主要基质成分对体外培养的兔关节软骨细胞增殖、蛋白多糖和胶原的合成无明显影响。

角膜新生血管与微环境研究进展

在多种病理状态下毛细血管由角膜缘向角膜中央生长形成角膜新生血管（CNV），CNV破坏角膜正常微环境，降低角膜透明性，严重影响视力，而且导致角膜移植术后角膜免疫排斥反应的发生。角膜新生血管的微环境包括炎性介质、细胞、细胞因子和细胞外基质（ECM）。近年来研究显示CNV处于周围复杂的微环境之中，角膜微环境变化与CNV具有密切关系。CNV形成过程中，角膜微环境发生一系列变化。本文就CNV与微环境变化作一综述。

组织型转谷氨酰胺酶抑制剂对TGF-β_2诱导人LECs表达纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原的影响

目的观察组织型转谷氨酰胺酶(tTG)特异性抑制剂(MDC)对TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞(LECs)表达纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的影响。方法将含10%胎牛血清的DMEM培养基中培养的LECs株HLE-B3传代后分为5组:无血清培养基培养的HLE-B3为正常对照组;加入10μg/L TGF-β2处理的HLE-B3为TGF-β2组;10μg/L TGF-β2与100、200、400μmol/L MDC共同处理的HLE-B3为不同浓度MDC组。用半定量RT-PCR检测tTG、FN、Col-Ⅳ在HLE-B3中的表达,计算A(tTG/β-actin)、A(FN/β-actin)、A(Col-Ⅳ/β-actin)值。结果正常体外培养的HLE-B3中可表达一定量的tTG、FN及Col-Ⅳ。与正常对照组相比,10μg/L TGF-β2组中tTG、FN、Col-Ⅳ的表达明显增加(t=33.95,P<0.01;t=38.24,P<0.01;t=13.48,P<0.01);与TGF-β2组相比,100、200、400μmol/L MDC组中FN和Col-Ⅳ的表达明显减少(P<0.01)。100、200、400μmol/L MDC组各组间FN和Col-Ⅳ的表达差异均有统计学意义(P<0.01)。结论MDC可剂量依赖性地抑制TGF-β2诱导的LECs中FN、Col-Ⅳ表达的增加。tTG可促进人LECs表达FN、Col-Ⅳ,并参与后囊膜混浊(PCO)的形成。

白介素18对肾小管上皮细胞分泌FN、Ⅰ型胶原的影响

目的检测RTECs在IL-18刺激下分泌细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)纤维连接蛋白(fibronection,FN)、Ⅰ型胶原的量,为揭示肾间质纤维化机制提供新的途径。方法用分别含0、1、10和100ng/mL浓度的IL-18培养液于24孔板中体外培养细胞株HK-2,24、48和72h分别收集一次每一浓度上清液6孔,利用ELISA法分别检测上清液中FN、Ⅰ型胶原的含量。结果酶联免疫吸附法(ELISA)检测结果显示,RTECs上清液中FN、Ⅰ型胶原的含量存在IL-18浓度依赖关系,在分别作用24、48和72h时,不同浓度之间差异有显著性(P<0.0001)。结论IL-18通过刺激RTECs分泌ECM,可能在肾间质纤维化发挥着重要作用。

TIMP-1在肝纤维化形成发展过程中的影响研究

肝纤维化是对慢性肝损伤的一种修复反应,其实质是Ⅰ、Ⅲ型胶原为主的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成与降解失衡,在肝内过度沉积而形成的病理性疾病。而基质金属蛋白酶(matrix metallo proteinas-es,MMPs)及其抑制因子(tissue inhibitor ofmetallo proteinases,TIMPs)是调节ECM降解的主要酶系。TIMP-1是肝脏中仅有的两种基质金属蛋白酶组织抑制因子之一,被认为是肝纤维化发生过程中的重要因素。

前列宁胶囊调控MMP-2影响细胞外基质对良性前列腺增生治疗的影响

目的:观察前列宁胶囊(QC)对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)介导的细胞外基质(ECM)的影响,探讨QC对BPH的治疗机制。方法:SD大鼠随机分为空白组,BPH模型组,QC低、中、高观察组,建立BPH模型,QC干预,ELISA法检测大鼠血清MMP-2、FN、Collagen IV、LN; BPH-1细胞培养,分别加入MMP-2和未加MMP-2刺激因子,QC干预,MTT法观察细胞活性,Q-PCR及Western-Blot分别检测MMP-2、FN、Collagen IV、LN基因及蛋白表达(未加MMP-2),加入MMP-2组检测FN、Collagen IV、LN。结果:QC各剂量组大鼠血清中的FN、LN、Collagen IV含量降低,MMP-2升高(P <0. 05 or P <0. 01);BPH-1细胞培养QC干预,加入及未加入MMP-2刺激因子细胞活力均有下降,以48 h后最明显;加入MMP-2刺激因子FN、Collagen IV、LN基因及蛋白表达明显低于未加MMP-2刺激因子,差异有统计学意义。结论:QC对BPH具有治疗作用,QC调控MMP-2介导细胞外基质FN、Collagen IV、LN基因和蛋白表达可能是其治疗BPH机制之一。

基质金属蛋白酶-9与冠心病

基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在细胞外基质的降解及重构过程中具有重要作用。它影响斑块的稳定性,与多种心血管疾病的发生、发展特别是冠心病密切相关。针对MMP-9的调节可能是治疗冠心病的一种方法。现就细胞外基质金属蛋白酶-9在冠心病方面的作用作一综述。

取向性关节软骨细胞外基质源性支架对负载软骨细胞生物学行为的影响

目的:观察取向性关节软骨细胞外基质源性支架对负载软骨细胞的黏附、增殖、分布及排列的影响。方法:利用定向结晶及冷冻干燥技术制备猪关节软骨细胞外基质源性取向支架。分离、培养犬关节软骨细胞,接种在支架上体外培养,CCK-8试剂盒检测细胞在支架上的黏附和增殖,倒置显微镜、荧光显微镜、扫描电镜及H&E染色观察软骨细胞在支架上的形态、分布和排列情况,并以接种在非取向支架上的软骨细胞的生物学特性作为对照。结果:软骨细胞在两种支架上均能较好的黏附生长,大部分细胞呈圆球形;但在取向支架上增殖比在非取向支架上快(P<0.05);并且在取向性支架上软骨细胞能沿着支架孔道的取向性生长,在支架内部分布均匀,类似天然软骨组织的柱状结构;而在非取向性支架内软骨细胞呈无序排列,分布不均匀,支架内部细胞数量较少。结论:取向性软骨细胞外基质源性支架利于软骨细胞黏附、增殖,能引导软骨细胞分布排列呈类似于天然软骨细胞的柱状排列方式,是一种较理想的软骨组织工程支架。

基质金属蛋白酶1与肝纤维化的研究进展

肝纤维化是各种原因所致肝损伤的共同病理变化,是慢性肝病逐渐演变发展为肝硬化过程中的必经途径。肝纤维化时细胞外基质(ECM)合成增加,其中以I型胶原为主;积极降解和消除过多的ECM,有望逆转肝纤维化进程。而基质金属蛋白酶1(MMP-1)作为人类主要降解I型胶原的胶原酶,为肝纤维化治疗带来了广阔的前景。该文就MMP-1与肝纤维的关系予以系统阐述,以期为肝纤维化的治疗提供新的思路。

准分子激光术后大鼠角膜上皮下雾状混浊中Ⅰ型前胶原的测定

目的探讨准分子激光术后大鼠角膜中Ⅰ型前胶原的变化,比较角膜非手术区、手术野透明区与上皮下雾状混浊(haze)区的Ⅰ型前胶原含量的差异。方法 32只6月龄清洁级SD大鼠按照手术前后被处死的时间不同平均分为8组。28只大鼠的一侧眼被施行准分子激光角膜切削术(PRK)。术后每日裂隙灯显微镜下观察术眼角膜情况,角膜haze的分级参照Seiler标准。分别于手术前和术后1、3、7、15d及1、2、3个月处死动物,行苏木精-伊红染色,观察手术区角膜的形态变化,采用免疫组织化学法检测角膜Ⅰ型前胶原在术眼角膜组织中的表达,并以光密度(OD)值表示。对不同时间采集的角膜非手术区、手术野透明区与haze区中Ⅰ型前胶原含量进行定量分析。结果自术后3d起,术眼角膜上皮开始移行覆盖切削区并逐渐增厚,基质纤维细胞增生活跃;术后1个月时术眼角膜上皮基底膜开始形成,基质胶原纤维排列紊乱;术后3个月角膜基质胶原重塑过程基本完成,角膜结构趋于正常。大鼠角膜术后haze分级与Ⅰ型前胶原含量呈正相关(r=0.406,P<0.05);非手术区各时间段角膜平均OD值均无明显变化(t=5.719,P>0.05);手术区角膜中的Ⅰ型前胶原含量明显高于非手术区(P<0.05);haze区平均OD值明显高于非haze区(t=5.578,P<0.05)。免疫组织化学检测表明,角膜上皮中Ⅰ型前胶原的阳性表达在术后7d最多,并终止于术后1个月,而角膜细胞间质中Ⅰ型前胶原持续至整个修复过程。结论Ⅰ型前胶原含量的增加可能是haze形成的主要因素之一,为进一步研究准分子激光术后角膜前胶原的变化提供理论支持。

丝胶对糖尿病大鼠肾基质金属蛋白酶-9／基质金属蛋白酶组织抑制因子=1的调节作用

目的：通过观察丝胶对Ⅱ型糖尿病大鼠肾基质金属蛋白酶-9（MMP-9）／基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）的调节作用，探讨丝胶保护糖尿病。肾损伤的作用及机制。方法：链脲佐菌素腹腔注射建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型，丝胶治疗组大鼠给予丝胶灌胃、阳性对照组大鼠给予二甲双胍灌胃。ELISA法检测各组大鼠血清Ⅳ型胶原和层黏连蛋白的含量；免疫印迹和RT-PCR法检测各组大鼠肾MMP-9和TIMP-1蛋白和mRNA的表达。结果：丝胶治疗组较糖尿病模型组，血清Ⅳ型胶原和层黏连蛋白的含量明显降低，肾MMP-9的表达明显升高，TIMP-1的表达明显降低；丝胶治疗组较阳性对照组无明显差别。结论：丝胶可通过恢复糖尿病时肾MMP-9／TIMP-1的平衡改善肾细胞外基质代谢，从而减轻肾小球硬化和肾间质纤维化，延缓糖尿病肾损伤的发生发展。

脑胶质瘤中纤维连接蛋白及其整合素β_1受体的表达

目的探讨脑胶质瘤中纤维连接蛋白(FN)及其整合素β1受体蛋白(β1integrin)表达的临床病理联系。方法用免疫组化SP法检测56例胶质瘤组织中FN和整合素β1的表达情况,并进行相关临床病理分析。结果(1)胶质瘤组织间质血管壁FN染色随级别增高而增厚(P<0.01),且血管厚度在复发病例组明显高于无复发组(P<0.05)。恶性程度高的Ⅲ级与Ⅳ级胶质瘤组织中还可见基质弥散阳性染色。(2)FN和整合素β1在胶质瘤中阳性表达率分别为30.36%(17/56)和39.29%(22/56),并均随肿瘤级别增加而增高(P<0.05,P<0.01),两者表达存在相关性(rs=0.312,P<0.05)。复发病例FN和整合素β1阳性表达率(68.42%,57.89%)均高于无复发组(10.81%,29.73%)(P<0.01,P<0.05)。结论FN及其整合素β1受体在胶质瘤组织中的高表达促进了胶质瘤的恶性进展,两者可能成为有价值的判断胶质瘤恶性程度及预后的指标。

细胞外基质相关分子在眼底新生血管形成中的作用

眼底新生血管形成是导致增生型糖尿病视网膜病变（PDR）、早产儿视网膜病变（ROP）及年龄相关性黄斑变性（AMD）患者视力丧失的主要原因之一。细胞外基质（ECM）固有成分中的胶原蛋白、弹性蛋白等经酶解后在体外研究及动物实验中已证实可促进脉络膜新生血管（CNV）、视网膜新生血管形成的发生。ECM黏附分子中的整合素α5β1与纤连蛋白在体外可促进内皮细胞黏附、增生，其抑制剂于体内则可抑制CNV、视网膜新生血管的发生，整合素αVβ3及αVβ5的抑制剂在体内也可发挥类似作用。黏附分子中的选择素及细胞间黏附分子则主要通过介导白细胞与内皮细胞间的相互作用促进新生血管形成。ECM降解相关的丝氨酸蛋白酶，尤其是尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）（通过促进纤溶酶的生成）、基质金属蛋白酶（MMPs）（主要是MMP-2及MMP-9），在体外及体内实验中已证明可促进CNV、视网膜新生血管的发生，而I型纤溶酶原激活剂抑制剂（PAI-1）及组织金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）则可抑制新生血管形成。对ECM相关分子在CNV、视网膜新生血管形成中作用的深入研究将为预防和治疗眼底新生血管形成提供新的思路和方法。

基质金属蛋白酶在涎腺良、恶性多形性腺瘤中的表达

目的:检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)、基质金属蛋白酶组织抑制剂2(TIMP-2)及细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN),在人正常涎腺组织和涎腺良、恶性多形性腺瘤中的表达,探讨其表达的生物学意义。方法:通过免疫组织化学技术SP法检测人66例正常涎腺组织、45例涎腺多形性腺瘤及42例涎腺恶性多形性腺瘤中,MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2及EMMPRIN的表达,采用χ2检验比较3种组织中MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2及EMMPRIN表达的差异。结果:MMP-2在人正常涎腺组织,涎腺良、恶性多形性腺瘤中的阳性表达率分别为9.09%、46.67%、85.71%;MT1-MMP在以上3种组织中的阳性表达率分别9.09%、53.33%、78.57%;TIMP-2在以上3种组织中的阳性表达率分别为10.61%、44.44%、59.52%;EMMPRIN在以上3种组织中的阳性表达率分别为13.64%、48.89%、83.33%。MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2及EMMPRIN在涎腺多形性腺瘤中的表达显著高于人正常涎腺组织,且MMP-2、MT1-MMP及EMMPRIN在涎腺良、恶性多形性腺瘤中表达的差异有统计学意义。结论:在涎腺多形性腺瘤中,MT1-MMP、TIMP-2及EMMPRIN的表达与MMP-2的活化有关,且MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2及EMMPRIN有可能作为判断多形性腺瘤侵袭性的有效指标。