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大熊猫和小熊猫粪便DNA提取的简易方法 被引量:41
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作者 张保卫 魏辅文 +1 位作者 李明 吕晓平 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第3期452-458,共7页
采集了大熊猫和小熊猫的新鲜粪便样品 ,使用 1 0 0 %乙醇保存。通过重复离心富集研究动物的肠道脱落细胞 ,并使用乙醇和双蒸水洗涤以除去抑制物。用 1 %的SDS快速裂解细胞 ,离心除去残渣后 ,向裂解液中加入蛋白酶进行消化。消化结束后... 采集了大熊猫和小熊猫的新鲜粪便样品 ,使用 1 0 0 %乙醇保存。通过重复离心富集研究动物的肠道脱落细胞 ,并使用乙醇和双蒸水洗涤以除去抑制物。用 1 %的SDS快速裂解细胞 ,离心除去残渣后 ,向裂解液中加入蛋白酶进行消化。消化结束后使用等体积的酚 /氯仿抽提 ,乙醇沉淀DNA。用双蒸水溶解粪便DNA后 ,使用PCR产物纯化试剂盒对粪便DNA进行纯化。电泳检测结果显示 ,从乙醇保存的大、小熊猫粪便样品中抽提到高质量的粪便DNA。对线粒体控制区、细胞色素b基因、 1 2SrRNA基因的PCR扩增反应以及测序结果也证实了样品保存方法和DNA抽提方法可靠而高效。此方法使用实验室内常用的分子生物学试剂 ,不仅克服了分子粪便学研究中常见的抑制物粪便DNA微量降解严重等障碍 ,与商业化的粪便抽提试剂盒 (QIAampDNAStoolMiniKit,Qiagen)相比还是一种经济的试验方法 (抽提反应成本为试剂盒的 1 / 5 )。文中还对粪便DNA内细菌基因组等背景DNA可能对分子粪便学试验结果的影响进行了探讨。在基于PCR技术的遗传学研究中 ,对于植食性动物而言 ,粪便内的背景DNA对目标动物DNA片断的扩增和序列测定未见影响 ;但对于肉食性动物 ,则必须考虑被捕食者基因组对试验可能产生的影响 。 展开更多
关键词 大熊猫 小熊猫 粪便 dna PCR技术 抽提方法
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一种从大熊猫粪便中提取DNA的改进方法 被引量:41
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作者 钟华 赖旭龙 +1 位作者 魏荣平 刘中来 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第5期670-674,共5页
本研究描述一个改进的方法 ,使从大熊猫粪便中提取DNA用于PCR扩增变得更加容易。在粪便DNA的提取过程中采用一个新的预处理方法 ,将粪便用预冷的丙酮洗 2~ 3次 ,除去粪便中含有的大量PCR抑制物 ,然后用蛋白酶K裂解、酚 -氯仿抽提 ,能... 本研究描述一个改进的方法 ,使从大熊猫粪便中提取DNA用于PCR扩增变得更加容易。在粪便DNA的提取过程中采用一个新的预处理方法 ,将粪便用预冷的丙酮洗 2~ 3次 ,除去粪便中含有的大量PCR抑制物 ,然后用蛋白酶K裂解、酚 -氯仿抽提 ,能提取到纯度很高的DNA供PCR扩增。本实验PCR扩增了大熊猫脑源性神经营养因子 (BDNF)基因和线粒体细胞色素b基因片段 ,并进行测序分析 ,证实了提取的可靠性。对比本方法和未经丙酮预处理的方法提取的DNA进行PCR扩增 。 展开更多
关键词 大熊猫 粪便dna 丙酮 dna抽提 非损伤性取样
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黑麂粪便DNA提取及其PCR检测 被引量:14
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作者 程宏毅 鲍毅新 +2 位作者 郑荣泉 陈良 葛宝明 《生态科学》 CSCD 2006年第2期158-161,共4页
采集了黑麂(Muntiacuscrinifrons)的新鲜粪便以及在野外自然条件下保存较长时间的粪便样品,晾干后带回实验室,提取其DNA;同时提取黑麂肌肉、皮张样品的DNA,用以对比粪便样品的提取效果。电泳检测结果显示,此方法使用实验室中常用的分子... 采集了黑麂(Muntiacuscrinifrons)的新鲜粪便以及在野外自然条件下保存较长时间的粪便样品,晾干后带回实验室,提取其DNA;同时提取黑麂肌肉、皮张样品的DNA,用以对比粪便样品的提取效果。电泳检测结果显示,此方法使用实验室中常用的分子生物学试剂,可以从黑麂粪便样品中抽提到高质量的粪便DNA并克服分子粪便学研究中常见的PCR反应抑制物的影响。为其它濒危鹿科动物的非损伤性取样提供了的新途径,为其遗传结构、遗传多样性现状等研究提供了更加广阔的取材空间。 展开更多
关键词 黑麂 粪便dna dna抽提 PCR检测 非损伤性取样
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短尾猴陈旧粪便中DNA的提取 被引量:19
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作者 赵健元 李进华 +1 位作者 柳杨 尹华宝 《兽类学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期410-413,共4页
Extracting DNA from faecal sample is a newly developed technology of recent years. Although several methods to extract DNA from faeces have been developed home and abroad, they addressed fresh samples and it is still ... Extracting DNA from faecal sample is a newly developed technology of recent years. Although several methods to extract DNA from faeces have been developed home and abroad, they addressed fresh samples and it is still blank in extracting DNA from old faeces yet. Extracting old faeces’ DNA can make the full use of transfers out or the death animal’s genetic information and expanding the application scope of Molecular Scatology. In this experiment two groups of faeces were launched into DNA extracting. One group had been preserved by absolute ethanol for 3 years and the other group had been preserved by absolute ethanol for half past 4 years. Aiming at the old faecal’s characteristic of small number of cells and high degrading of DNA, several repetitions(4 tubes) were carried out at the same time in this experiment. Then 4 different DNA extracting methods (Preprocess-phenol/chloroform extraction method, Guanidine thiocyanate method, CTAB method, QIAamp DNA Stool Mini Kit, Qiagen) were followed. From these parallel methods and their corresponding results, we could get the best method while the possibility of extracting DNA from old faecal was studied. After DNA was dissolved in TE we got the original DNA. Finally we collected the original DNA from the 4 repetitions then purified and concentrated it by using DNA purification kit. In the end, the results of PCR amplification shows that only Preprocess-phenol/chloroform extraction method can extract enough DNA for PCR from two groups of faeces. In our study, we extracted DNA from old faeces successfully and got some genetic information from mtDNA. This result confirms the possibility of putting old faecal into molecular scatology study. 展开更多
关键词 陈旧粪便 保存 dna提取 PCR扩增
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狗獾粪便DNA提取方法的初步探讨 被引量:4
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作者 刘宇庆 吕慎金 +3 位作者 殷宝法 范红梅 刘燕 魏万红 《生态科学》 CSCD 2008年第6期468-473,共6页
在京杭大运河扬州段堤坝上采集狗獾的新鲜粪便,采用预处理-酚/氯仿抽提法、NaCl改良法、异硫氰酸胍裂解法、淀粉吸附法及QIAamp试剂盒法5种方法对粪便样品中狗獾DNA进行提取,探讨狗獾粪便样品中DNA提取方法和优化条件。结果表明,在5种... 在京杭大运河扬州段堤坝上采集狗獾的新鲜粪便,采用预处理-酚/氯仿抽提法、NaCl改良法、异硫氰酸胍裂解法、淀粉吸附法及QIAamp试剂盒法5种方法对粪便样品中狗獾DNA进行提取,探讨狗獾粪便样品中DNA提取方法和优化条件。结果表明,在5种提取方法中,淀粉吸附法的效果明显优于其它4种方法。采用粪便裂解液快速裂解细胞后,加入淀粉去除其中的大量PCR抑制物,然后用蛋白酶K裂解、酚/氯仿/异戊醇抽提,最后使用UNIQ-10柱纯化粪便DNA,对线粒体控制区和微卫星位点的PCR扩增反应及测序结果证实该方法的可行性。以上结果表明,通过该方法获得的粪便DNA能够用于更深入的分子遗传学等学科的研究。 展开更多
关键词 狗獾 粪便dna 提取 PCR扩增
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粪便不同保存方法对动物基因组DNA提取效果的影响 被引量:14
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作者 李娜 李迪强 +1 位作者 王秀磊 刘毅 《国际遗传学杂志》 CAS 2006年第5期341-345,367,共6页
目的为了探索一种既能使野外采集的粪便样品DNA保存完好,又方便带回实验室用于分子水平研究的粪便保存方法。方法本研究通过将普氏原羚的粪便在野外分别采取60℃干燥后低温保存,75%乙醇保存,100%乙醇保存,直接低温(保温箱中加生物冰袋... 目的为了探索一种既能使野外采集的粪便样品DNA保存完好,又方便带回实验室用于分子水平研究的粪便保存方法。方法本研究通过将普氏原羚的粪便在野外分别采取60℃干燥后低温保存,75%乙醇保存,100%乙醇保存,直接低温(保温箱中加生物冰袋)保存,在1个月内、5个月后、8个月后对粪便DNA进行抽提,并将提取的DNA作为模板进行PCR扩增,基因克隆测序。结果短期内均可得到高质量的DNA,DNA大小在23kb左右,电泳带型整齐,无降解,线粒体的扩增结果也完全一致,而用100%乙醇保存粪便DNA的时间更为长久。结论不同的保存方法提取动物基因组效果不一样。 展开更多
关键词 粪便保存方法 dna提取 普氏原羚
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一种从马鹿粪便中提取DNA的改进方法 被引量:13
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作者 日沙来提·吐尔地 艾斯卡尔·买买提 +2 位作者 日孜汗·阿布地艾尼 阿米拉·阿布来提 马合木提·哈力克 《安徽农业科学》 CAS 2012年第10期5739-5740,5754,共3页
[目的]介绍一种从马鹿粪便中提取DNA的改进方法。[方法]在传统的CTAB裂解法的基础下,根据马鹿粪便的特征进行改进所得的DNA提取方法。[结果]采用该方法从天山马鹿粪便中提取了高质量的粪便DNA并扩增出了天山马鹿线粒体细胞色素b基因片段... [目的]介绍一种从马鹿粪便中提取DNA的改进方法。[方法]在传统的CTAB裂解法的基础下,根据马鹿粪便的特征进行改进所得的DNA提取方法。[结果]采用该方法从天山马鹿粪便中提取了高质量的粪便DNA并扩增出了天山马鹿线粒体细胞色素b基因片段,通过测序检测,同时以提取的马鹿肌肉和皮毛样品DNA作为对照,进一步证实了提取的可靠性。[结论]该方法提取过程中无需使用蛋白酶K;所提取的DNA无需使用DNA纯化试剂盒纯化,可直接用于PCR扩增,因此,试验费用很低。 展开更多
关键词 马鹿 非损伤性取样 改进的dna提取方法 粪便dna
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基于DGGE分析的大鼠粪便及肠道细菌DNA提取方法研究 被引量:13
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作者 郑刚 陈己任 +2 位作者 胡博文 陈彦斌 赵国华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第17期215-218,共4页
为获得高质量肠道细菌总DNA用于研究膳食纤维对大鼠肠道菌群的影响,本实验以SD大鼠为实验动物,灌胃番茄皮膳食纤维,收集大鼠粪便及盲肠,-70℃冰箱保存。分别采用Tiangen细菌基因组试剂盒法、蛋白酶K-十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和溶... 为获得高质量肠道细菌总DNA用于研究膳食纤维对大鼠肠道菌群的影响,本实验以SD大鼠为实验动物,灌胃番茄皮膳食纤维,收集大鼠粪便及盲肠,-70℃冰箱保存。分别采用Tiangen细菌基因组试剂盒法、蛋白酶K-十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和溶菌酶法提取粪便和肠道中的细菌总DNA,通过琼脂糖凝胶电泳、细菌通用引物PCR扩增和变性梯度凝胶电泳(DGGE)对提取效果进行观察比较,发现将溶菌酶法进行改进后,可以获得满意效果。改进后的溶菌酶法与另外两种方法比较,具有成本低、时间短、DNA得率高和多样性好等特点;该方法获得的DNA样品适合于用DGGE技术分析大鼠粪便及肠道菌群。 展开更多
关键词 dna提取 大鼠 粪便 肠道菌群 DGGE电泳
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马鹿粪便样品保存方法对DNA提取质量的影响 被引量:12
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作者 刘艳华 张明海 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期67-69,共3页
采用冷冻法采集、保存马鹿粪便DNA样品,并将冷冻保存、乙醇浸泡保存和干燥后保存的样品进行DNA提取测试、比较分析。结果表明,采用冷冻保存法保存的马鹿粪便样品DNA提取的质量明显优于酒精浸泡和干燥保存方法,此方法采集和保存简单,试... 采用冷冻法采集、保存马鹿粪便DNA样品,并将冷冻保存、乙醇浸泡保存和干燥后保存的样品进行DNA提取测试、比较分析。结果表明,采用冷冻保存法保存的马鹿粪便样品DNA提取的质量明显优于酒精浸泡和干燥保存方法,此方法采集和保存简单,试验省时、经济,可应用于寒冷地区冬季各种动物的粪便取样。 展开更多
关键词 马鹿 粪便样品 保存方法 dna提取 影响
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普氏原羚粪便DNA提取方法的改进与比较 被引量:3
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作者 洪艳云 李迪强 +3 位作者 易图永 张于光 王秀磊 刘毅 《中国草食动物》 2009年第1期3-5,共3页
为提高普氏原羚粪便DNA提取效果,在总结传统提取粪便DNA方法的基础上,设计了新的提取方法。该方法以NaCl替代TE溶解粪便样品,增加溶菌酶用量以减少蛋白酶K用量。经琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增12SrRNA片段对改进方法与传统提取粪便DNA方法... 为提高普氏原羚粪便DNA提取效果,在总结传统提取粪便DNA方法的基础上,设计了新的提取方法。该方法以NaCl替代TE溶解粪便样品,增加溶菌酶用量以减少蛋白酶K用量。经琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增12SrRNA片段对改进方法与传统提取粪便DNA方法进行比较,发现用改进方法提取的DNA质和量均比传统方法好,且可满足一般分子生物学实验的需要。扩增的普氏原羚12SrRNA片段已经测序,并递交GenBank,登录号为EU247756。新方法不仅克服了传统提取法中DNA降解严重的问题,而且有效地解除了粪便DNA对Taq酶的抑制作用,为普氏原羚遗传多样性保护提供技术支持。 展开更多
关键词 普氏原羚 粪便分子生物学 粪便dna提取
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