阳离子交换FPLC二步法制备级纯化单克隆抗体

作者在快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立的二步法制各级纯化单克隆抗体的方法．是将ＭｃＡｂ腹水用ｐＨ６．０，１０ｍｍｏｌ／ＬＰＢ透析或稀释８倍后，直接上ＳＰ－４０ＨＲＦＰＬＣ进行一次纯化，纯化的ＩｇＧ组分再用４０％饱和硫酸铵盐析进行二次纯化和浓缩，即得到ＭｃＡｂ纯品。每次上作量８０～８５ｍｌ腹水，可得到纯化抗体６００～６５０ｍｇ，得率约为７．３ｍｇ／ｍｌ腹水，回收率为７３％，一次色谱纯化周期仅需５０ｍｉｎ．用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法凝胶过滤色谱法和ＤＥＡＥ阴离子交换色谱法检测抗体纯度，一次纯化的ＭｃＡｂ大于９２％，二次纯化的ＭｃＡｂ大于９７％。用免疫组织化学ＡＢＣ测定抗体活性，一次纯化的ＭｃＡｂ为１：８００００（７．８×１０－１１ｍｏｌ／Ｌ），二次纯化的ＭｃＡｂ为１：１０００００（６．２５×１０－１１ｍｏｌ／Ｌ）．纯化ＭｃＡｂ的热稳定性好，３７℃保温１４４ｈ后抗体活性无明显变化（Ｐ＞０．０５）；特异性高，与正常组和其它癌组织几乎无交叉反应。该法操作简单，既具有常压色谱的制备量，又具有ＨＰＬＣ法的纯化速度及分辨率，同时又解决了色谱纯化ＭｃＡｂ的浓缩问题，是获得高纯度、高活性ＩｇＧ类单克隆抗体的实用方法．用本方法提纯?

可激活人γδT细胞的结核杆菌耐热多肽抗原的初步纯化与活性鉴定

目的 对结核杆菌耐热多肽抗原（Mtb-Ag）的蛋白组成进行定性分析,并观察Mtb-Ag及其纯化组分刺激人外周血rδT细胞和αβT细胞增殖反应的量效关系。方法 用快速蛋白液相色谱仪（FPLC）定性分析Mtb-Ag的蛋白组成,并用不同剂量的Mtb-Ag及其纯化组分体外刺激健康人外周血PBMC,培养9d后经流式细胞仪检测细胞表型。结果 Mtb-Ag经FPLC MonoQ离子交换柱分析存在20种蛋白成分。Mtb-Ag在合适刺激剂量时对人rδT细胞发挥优势扩增;当剂量过大则对αβT细胞发挥优势扩增;其分离纯化的含大分子蛋白的蛋白峰I随着刺激剂量增加而对αβT细胞的扩增表现显著增强趋势;而其分离的含低分子多肽的蛋白峰Ⅱ随着刺激剂量增加则对rδT细胞扩增表现显著增强趋势,并且其活性明显高于蛋白峰I,同时其对αβT细胞的扩增效应并不明显,并显著低于Mtb-Ag和蛋白峰I。结论 Mtb-Ag刺激rδT细胞扩增时应选择合适的刺激剂量,其所含的低分子多肽抗原能特异性激活rδT细胞,而其所含的大分子蛋白抗原则特异性激活αβT细胞。

牦牛乳中主要过敏原的分离纯化

为研究牦牛乳蛋白质的过敏性,用化学方法分离牦牛乳中主要的过敏原蛋白质,采用快速蛋白纯化系统(FPLC)结合凝胶层析技术对分离出的蛋白质进行纯化.在牦牛脱脂乳中添加10%醋酸至酪蛋白的等电点pH4.6,使酪蛋白和乳清蛋白分离.根据酪蛋白在尿素溶液中的溶解度和对钙的敏感性不同,对酪蛋白进行粗分级,得到αs-酪蛋白和β-酪蛋白.应用离子交换色谱和葡聚凝胶sephadex G100进一步纯化粗分级得到的酪蛋白,得到αs-casein和β-酪蛋白.以柠檬酸钠为螯合剂、在低pH并有盐存在的条件下从酸乳清中分离出β-乳球蛋白,FPLC纯化后用RP-HPLC检测其纯度,得到αs-casein和β-酪蛋白纯度分别为87.13%和88.58%,β-乳球蛋白的纯度为80.00%.

唐菖蒲球茎中抗真菌物质的部分性质研究

本文报道唐菖蒲球茎中抗真菌活性物质的成分及其分子量测定方法和结果。用沸水提取，经过超滤、透析、柱层析，纯化到一种有抗真菌活性的物质。排除了它是蛋白质、核酸、脂类及小分子物质的可能性，确定这是一种多糖，定名为唐菖蒲抗真菌多糖（Gladiolus hntifungal Polysaccharide，简称GAFS）。真空旋转蒸发干燥后，用苯酚-硫酸法测得干燥后的样品糖含量为44．08％，用FPLC（快速蛋白质液相层析仪）测其分子量为15750。

水稻白叶枯病菌解毒素蛋白提纯和作用机制研究

采用 (NH4) 2 SO4分步沉淀法 ,从水稻白叶枯病菌培养滤液中提取对水稻白叶枯病菌有机酸毒素具解毒作用的解毒蛋白粗提物 (crudedetoxificationprotein ,CDP) ,经滚动式等电聚焦电泳 (RPIE)和离子交换层析 (FPLC)分离 ,生物测定结果表明 ,第Ⅱ吸收峰具有生物活性 ;再经SDS PAGE电泳和考马斯亮蓝染色 ,第Ⅱ吸收峰收集物有明显的一条带 ,相对分子质量为 4 7 9× 10 3 。野生菌产生的CDP解毒活性明显低于其毒性基因突变体。CDP对热和蛋白酶K均不稳定 ,对毒素的解毒主要是通过脱羧起作用。用CDP处理水稻后 ,水稻体内与抗病性相关的酶活性显著提高 ;接种水稻白叶枯病菌 。