MFG-E8抑制青光眼大鼠视网膜神经节细胞凋亡的机制研究

目的 探讨乳脂肪球表皮生长因子8 (MFG-E8)在青光眼大鼠视神经保护中的作用与机制。方法 构建青光眼大鼠模型,将MFG-E8或D89E注射至大鼠玻璃体腔内。检测大鼠的眼压变化。通过HE染色、TUNEL染色、免疫荧光染色分别检测大鼠视网膜组织病理损伤、节细胞凋亡和小胶质细胞激活水平;通过Western blotting检测视网膜组织中cleaved caspase-3、caspase-3、cleaved caspase-9、caspase-9和BAX蛋白表达;通过ELISA和实时定量PCR检测视网膜组织中IL-10、TGF-β和NGF的表达水平。结果 与对照组相比,青光眼大鼠的眼压显著增加,视网膜神经节细胞复合体(GCC)层变薄,凋亡节细胞增加,cleaved-caspase 3/caspase-3、cleaved caspase-9/caspase-9和BAX水平升高,IBA1阳性细胞数增加,且IL-10、TGF-β、NGF水平增高;经MFG-E8治疗后,青光眼大鼠视网膜GCC层厚度增加,cleaved caspase-3/caspase-3、cleaved caspase-9/caspase-9、BAX水平降低,IBA1阳性细胞数和IL-10、TGF-β、NGF水平均增加;而MFG-E8失活异构体D89E处理后,大鼠青光眼进展进一步加重。结论 MFG-E8能够介导小胶质细胞激活,抑制神经节细胞凋亡,减缓大鼠青光眼的进展。

Visfatin与炎症及胰岛素抵抗研究新进展

内脏脂肪素(visfatin)是新近发现的主要由内脏脂肪组织表达的一种脂肪细胞因子,与内脏脂肪量呈正相关,在内脏脂肪组织丰度极高,在肥胖的发展过程中表达亦升高。而肥胖是一种非感染性、慢性、全身性炎症病理过程,对于visfatin与炎症的关系研究较少。其可能是机体自身平衡而分泌的一个对抗多种致炎(炎症前)细胞因子,如肿瘤坏死因子α、白细胞介素6的细胞因子,其对糖代谢和visfatinmRNA的表达机制研究提供新思路。

运动对2型糖尿病绝经妇女血清脂联素与胰岛素抵抗的影响

目的:研究24周规律运动对2型糖尿病绝经后妇女血清脂联素水平的影响,及其与体成分变化和胰岛素抵抗状态改善的关系。方法:将21名受试者(53.67±3.57岁,BMI 26.22±2.89)随机分成运动组及对照组,进行24周运动试验(每周3次,每次70 min)。试验前后测量身体形态指标、空腹血糖、血脂、胰岛素、血清脂联素,并计算体重指数(BMI)、腰臀比(WHR)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果:运动组体重、BMI、体脂含量、空腹血糖、胰岛素和HOMA-IR水平显著下降,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著性升高,血清脂联素升高37.57%(P=0.03);与对照组相比,体重、BMI、体脂含量、空腹血糖、胰岛素、甘油三酯、HDL-C、HOMA-IR及脂联素水平的变化率有显著的组间差异。运动引起的HOMA-IR水平改善与脂联素水平升高呈显著负相关(r=-0.553,P=0.01)。结论:24周每周3次规律运动显著降低了2型糖尿病绝经后妇女空腹血糖和胰岛素水平,改善了胰岛素抵抗状态,并使血清脂联素水平升高。运动改善胰岛素抵抗状态与脂联素的升高密切相关。

年轻骨髓间充质干细胞可通过细胞融合改善年老骨髓间充质干细胞功能

目的:诱导年轻与年老小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)融合,探讨融合后年轻BMSCs对年老BM-SCs功能的影响。方法:年轻(2-3月龄)及年老(18-24月龄)C57BL/6小鼠BMSCs在红色荧光染料PKH26标记后分别与年轻及年老绿色荧光蛋白转基因C57BL/6小鼠BMSCs通过聚乙烯二醇(PEG1500)诱导,建立细胞融合模型。通过流式细胞仪鉴定细胞融合率和细胞表面特异性抗原的表达。免疫荧光显微镜观察融合细胞形态及细胞核特性。通过细胞计数比较5组细胞(年轻组Y,年老组O,年轻融合组Y-Y,年轻年老融合组Y-O,年老融合组O-O)在2d、4d、6d、8d的细胞增殖能力。诱导细胞向成骨细胞及脂肪细胞分化,比较5组细胞的分化能力。结果:通过PEG诱导,可获得30.45%±4.13%的融合细胞,3组不同年龄融合组的细胞融合率无显著差异。融和细胞表达间充质干细胞表面特异性抗原CD44、Sca-1,而不表达造血干细胞表面特异性抗原CD34、CD117、CD31、CD45。在2d、4d、6d、8d,Y-O组细胞数量增加百分率比O-O组均显著增高。代表成骨细胞分化能力强弱的茜素红染色阳性率和代表脂肪细胞分化能力强弱的油红O染色阳性率,Y-O组比O-O组均显著增高,具体数值分别为:(25.46%±1.52%)vs(13.85%±1.69%),P<0.01;(12.99%±2.61%)vs(6.03%±1.71%),P<0.05。结论:年轻BMSCs可通过细胞融合改善年老BMSCs增殖及分化功能。

炎症因子对胰岛素抵抗动物模型血管内皮细胞功能影响的研究

目的探讨炎症因子在胰岛素抵抗状态下血管内皮细胞功能异常中的作用及可能的机理。方法 SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、肥胖组(OB组)和肥胖+阿司匹林干预组(OB-AS组)。NC组给予普通饲料喂养;OB组给予高脂饲料喂养;OB-AS组在给予高脂饲料喂养4周后,在高脂饲养的基础上每天给予200 mg/kg体质量的阿司匹林灌胃4周。应用正常葡萄糖高胰岛素钳夹试验评价外周胰岛素敏感程度;测定不同浓度乙酰胆碱(Ach)及硝普钠作用下股动脉血流速度的改变以评价血管内皮细胞依赖性舒张功能及非内皮细胞依赖性血管舒张功能;测定循环中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和C-反应蛋白(CRP)的水平;检测血管组织中核转录因子κB抑制蛋白激酶β-核因子-κB(IKKβ-NF-κB)分子通路的激活情况。结果 OB组血中TNF-α和CRP的水平较NC组升高(P<0.05),Ach刺激的血管舒张反应降低(P<0.05);血管舒张时血中一氧化氮(NO)水平低下(P<0.05)。血管组织NF-κBp65和IKKβ的染色强度明显增强,血管组织NF-κBp65的表达是NC组的1.7倍(P<0.05)。与OB组比较,OB-AS组其炎症因子水平下降(P<0.05),给予Ach后血中NO水平增加(P<0.05),血管舒张强度增加(P<0.05)。OB-AS组血管组织NF-κBp65和IKKβ的染色强度、内皮细胞NF-κBp65的表达水平较OB组下降(P<0.05)。结论胰岛素抵抗状态下循环中增多的炎症因子通过激活经典的IKKβ-NF-κB分子通路导致内皮源性NO产生减少,可能是胰岛素抵抗状态下血管内皮细胞功能异常的分子机理之一。

脂肪细胞因子及炎性反应与代谢综合征患者胰岛素抵抗的相关性研究

目的通过观察代谢综合征(MS)患者血清脂联素(APN)、内脂素(Visfatin)、高敏C反应蛋白(hsCRP)水平及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)值的变化与相关性,探讨脂肪细胞因子及炎性反应与MS的IR相关性。方法检测117例MS患者和50例对照组的血清APN、Visfatin、hs-CRP水平及HOMA-IR值,进行统计学分析。结果 MS患者除HDL-C略低于对照组(P>0.05)外,其他指标均高于对照组(P>0.01)。MS患者血清Visfatin及hs-CRP水平与HOMA-IR值呈显著正相关(r=0.727、0.801,P<0.01),血清APN水平与HOMA-IR值呈显著负相关(r=-0.690,P<0.01),血清APN水平与Visfatin水平呈显著负相关(r=-0.853,P<0.01),其相关性良好。结论 MS患者体内存在血糖和血脂的代谢紊乱、脂肪细胞因子水平异常表达、炎性反应及IR,且脂肪细胞因子及炎性反应与IR具有相关性。

与胰岛素抵抗相关脂肪细胞分泌因子的研究进展

胰岛素抵抗是2型糖尿病及其并发的肥胖、冠心病、高脂血症、高血压、脑卒中等疾病共同的病理生理基础。目前肥胖是已知胰岛素抵抗的重要相关因素,脂肪具有内分泌功能,已知一些脂肪细胞分泌因子与胰岛素抵抗具有密切关系,本文从脂肪细胞分泌因子与胰岛素抵抗的关系进行综述,以期为进一步研究胰岛素抵抗提供依据。

TNF琢对体外培养的人脂肪细胞葡萄糖摄取和IRS-1酪氨酸磷酸化的影响

【目的】探讨肿瘤坏死因子琢(TNF琢)对体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取和胰岛素受体底物1(IRS-1)酪氨酸磷酸化的影响,为多囊卵巢综合征(PCOS)的胰岛素抵抗(IR)病因学研究提供新的实验依据。【方法】脂肪细胞葡萄糖摄取的测定采用3H标脱氧右旋葡萄糖(2-[3H]DG)吸收法,IRS-1酪氨酸磷酸化的检测采用免疫沉淀、Western印迹和增强化学发光蛋白免疫印迹法及图像分析。【结果】①胰岛素(100nmol/L)作用下,TNF琢刺激浓度分别为0、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL时,脂肪细胞2-[3H]DG的摄取分别为(652±203)U,(609±172)U,(511±135)U和(404±168)U,当TNF琢刺激浓度达20ng/mL时,脂肪细胞对葡萄糖摄取的降低有显著性差异(P<0.05)。②胰岛素(100nmol/L)刺激下IRS-1的酪氨酸磷酸化在TNF琢(5ng/mL)作用时(74.50%±16.86%)较无TNF琢作用(94.00%±14.70%)有所降低,但无显著性差异;当TNF琢刺激浓度分别为10ng/mL(31.16%±10.44%)和20ng/mL(27.33%±9.63%)时,胰岛素(100nmol/L)刺激后IRS-1的酪氨酸磷酸化明显降低(P<0.001)。【结论】①TNF琢刺激浓度的升高可抑制体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取。②TNF琢可抑制体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的IRS-1的酪氨酸磷酸化,并存在一定的量效关系。

四氯化碳肝纤维化大鼠储脂细胞表皮生长因子受体的变化

目的：研究四氯化碳（ＣＣｌ_４）所致实验性肝纤维化大鼠肝脏储脂细胞（ＦＳＣ）表皮生长因子受体（ＥＧＦ－Ｒ）的变化，探讨ＥＧＦ－Ｒ在ＦＳＣ激活中的作用。方法：^（１２５）Ｉ标记ＥＧＦ，放射配体结合分析测定正常和ＣＣｌ４肝纤维化大鼠肝脏原代ＦＳＣ的ＥＧＦ－Ｒ 结果：ＣＣｌ４肝纤维化大鼠肝脏ＦＳＣ数量（６．７１× １０~±５．３２ × １０~７）较正常大鼠（２．６３×１０~７±１．０４×１０~７）显著增多（Ｐ＜０．０５）；正常与 ＣＣｌ_４肝纤维化大鼠ＦＳＣ的ＥＧＦ－Ｒ最大结合位点数（ＲＴ）、解离常数（ｋＤ）分别为：２．２２ ×１０~３ｓｉｔｅｓ／ｃｅｌｌ，４．０９ × １０~(－１０）Ｍ和９．２７× １０~３ｓｉｔｅｓ／ｃｅｌｌ，３．２６× １０~(－１０）Ｍ。肝纤维化时ＥＧＦ－Ｒ明显增高（Ｐ＜０．０５）。结论：ＣＣｌ_４引起肝纤维化时ＦＳＣ增殖，同时ＥＧＦ－Ｒ的表达增加。

血脂康胶囊对LPS诱导大鼠肝脏Kupffer细胞NF-κB表达的影响

目的探讨血脂康胶囊对脂多糖(LPS)诱导大鼠肝脏Kupffer细胞NF-κB表达的影响。方法将分离的Kupffer细胞按1×105个/ml接种于24孔板内培养48 h后,对照组:常规培养;LPS组:给予终浓度为100 ng/ml的LPS培养8 h;血脂康胶囊组:血脂康胶囊用生理盐水溶解,90 mg·kg-1·d-1,其余处理同LPS组。ELISA法检测上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平。Western blotting检测胞浆IκBα、p-IκBα及胞核NF-κB p65蛋白表达水平。结果 LPS组细胞上清TNF-α、IL-1β和IL-6表达高于对照组(P<0.05)。血脂康胶囊组细胞上清TNF-α、IL-1β和IL-6低于LPS组(P<0.05),但高于对照组(P<0.05)。对照组胞浆蛋白IκBα表达显著高于LPS组和血脂康胶囊组(P<0.05),但LPS组明显低于血脂康胶囊组(P<0.05)。LPS组胞核NF-κB p65和p-IκBα表达高于对照组和血脂康胶囊组(P<0.05),但血脂康胶囊组表达低于LPS组(P<0.05)。结论血脂康胶囊对LPS诱导的Kupffer细胞炎症因子分泌有一定的抑制作用。

脂肪乳对Sysmex XE-2100血液细胞分析仪网织红细胞检测的影响

目的探讨脂肪乳对Sysmex XE-2100血液细胞分析仪中网织红细胞检测的影响。方法在体外将健康志愿者血液样本与一定比例的脂肪乳混合,配制系列浓度的血液/脂肪乳混合液,于血液细胞分析仪上进行测试,观察不同浓度脂肪乳对网织红细胞(Ret)参数的影响。结果随着脂肪乳浓度的增高,血液/脂肪乳混合液的Ret参数中的MFR、IFR以及PLT-O趋向升高。结论脂肪乳会对血液细胞分析仪中网织红细胞测定产生影响。

碱性成纤维细胞生长因子影响脂肪干细胞的血管内皮迁移

背景:良好血运机制的建立是工程化组织成功植入的关键。目的:观察外源性碱性成纤维细胞生长因子对植入小鼠皮下的人脂肪来源干细胞-透明质酸钠复合物中人脂肪来源干细胞向血管内皮迁移情况的影响。方法:由吸脂术所得的脂肪组织中分离提取人脂肪来源干细胞进行培养传代,取第3代人脂肪来源干细胞进行cm-dil荧光标记后制成5×109 L-1的细胞悬液,碱性成纤维细胞生长因子配成2 mg/L的工作液。将由0.25 mL透明质酸钠凝胶、0.2 mL细胞悬液和0.05 mL工作液/DMEM混合制成的碱性成纤维细胞生长因子组/对照组移植物分别植入小鼠背部左右两侧皮下作自身对照,6周后取材,行苏木精-伊红染色和免疫荧光标记血管内皮细胞进行观察分析。结果与结论:植入处未出现结节、坏死及液化,取材时无凝胶残留。苏木精-伊红染色见标本性质多为脂肪组织及疏松结缔组织。荧光显微镜下仍可见标记人脂肪来源干细胞的cm-dil荧光,其与标记小鼠血管内皮的FITC荧光重合数碱性成纤维细胞生长因子组多于对照组(P<0.05)。提示碱性成纤维细胞生长因子促进透明质酸钠支架中的人脂肪来源干细胞向血管内皮迁移、分化。

乳脂肪球表皮生长因子8(MFG-E8)对脂多糖诱导小胶质细胞炎症反应的抑制作用及其机制

目的探讨乳脂肪球表皮生长因子8(MFG-E8)对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞(BV-2细胞)炎症反应的抑制作用,并探讨可能作用机制。方法CCK-8法检测0~200 mg·L^(-1) MFG-E8对细胞活力影响。建立LPS诱导BV-2细胞视网膜变性疾病体外模型,分为对照组、LPS组、LPS+MFG-E8组、LPS+LY294002组和LPS+PDTC组。倒置显微镜观察BV-2细胞的形态改变,ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达变化,Western blot检测TNF-α和白细胞介素-6(IL-6)的蛋白表达变化,及PI3K-Akt和NF-κB相关通路蛋白表达变化。结果0 mg·L^(-1)、10 mg·L^(-1)、50 mg·L^(-1)、100 mg·L^(-1)和200 mg·L^(-1)的MFG-E8对BV-2细胞的活性无明显影响,细胞活力差异无统计学意义(P>0.05);MFG-E8对LPS诱导的BV-2细胞形态变化具有一定的逆转作用;ELISA检测结果显示,LPS组BV-2细胞中TNF-α的含量较对照组明显升高(P<0.001),LPS+MFG-E8组BV-2细胞中TNF-α的含量较LPS组显著下降(P<0.001)。Western blot检测结果显示,LPS组BV-2细胞中TNF-α和IL-6蛋白相对表达量均显著高于对照组(均为P<0.05),LPS+MFG-E8组BV-2细胞中TNF-α和IL-6蛋白相对表达量均较LPS组明显降低(均为P<0.05)。LPS组BV-2细胞中NF-κB p-p65蛋白相对表达量明显高于对照组,p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量均明显低于对照组(均为P<0.001);LPS+MFG-E8组BV-2细胞中NF-κB p-p65蛋白相对表达量较LPS组明显降低,p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量均较LPS组明显升高(均为P<0.001)。结论MFG-E8可能是通过抑制NF-κB信号通路的激活,从而减轻LPS诱导的小胶质细胞炎症反应。

细胞因子和激素在脂骨沟通中的作用机制研究进展

体脂与骨密度的相关性已经得到大量实验室和临床试验的证实。除了软组织通过影响骨负荷导致骨密度变化以外,大量的细胞因子和激素在脂骨沟通中起到桥梁作用。目前重点关注的细胞因子包括脂肪因子、胰腺β细胞分泌的细胞因子以及胃肠道分泌的细胞因子。近年来随着研究的不断深入,这些细胞因子和激素在脂骨沟通中可能存在的新机制陆续被发现,为更加深入理解脂骨交流模式奠定基础。

辛酸钠对奶牛乳腺上皮细胞甘油三酯合成及乳脂合成转录调节因子表达的影响

为研究辛酸钠对细胞甘油三酯合成能力及对乳脂合成关键转录调节因子固醇调节元件结合蛋白1（SREBPl）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）表达的影响，以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型，采用CASY细胞分析仪检测细胞活力和增殖能力，甘油三酯定量试剂盒检测培养液中甘油三酯浓度，实时荧光定量PCR（qRT—PCR）检测SREBP1和PPARγ相对表达丰度，Westernblot检测SREBP1和PPARγ蛋白相对表达水平。结果显示，与不添加辛酸钠组相比，4．0、8．0、12．0mmol／L的辛酸钠能显著抑制细胞活力和增殖能力；0．5～2．0mmol／L的辛酸钠以浓度依赖方式显著降低培养液中甘油三酯的浓度，且能降低或显著降低SREBP1、PPARγ的表达。表明，辛酸钠能抑制奶牛乳腺上皮细胞甘油三酯合成，并对乳脂合成关键转录调节因子的表达具有抑制作用。

人参皂苷Rh2对高脂膳食大鼠心肌缺血再灌注时内皮祖细胞的影响

目的观察人参皂苷Rh2对高脂膳食大鼠心肌缺血再灌注（IR）时内皮祖细胞数量的影响。方法健康成年雄性SD大鼠,体重180~240 g,高脂饲料喂养24周后,随机分为缺血再灌注组（GIR组）、人参皂苷Rh2组（Rh2组）、假手术组（GS组）,另设正常对照组（N组）,给予基础饲料喂养24周。每组6只,记录各组大鼠体重。在高脂饲养基础上,采用结扎冠状动脉左前降支30 min,再灌注120 min的方法建立心肌缺血再灌注模型,GS组只穿线不结扎。Rh2组大鼠于缺血再灌注前30 min腹腔注射人参皂苷Rh2 10 mg/kg,GS组、GIR组大鼠于术前30 min腹腔注射等体积生理盐水。于再灌注120 min后处死大鼠,测定血脂水平以及血清血管内皮生长因子（VEGF）水平,流式细胞仪计数大鼠外周血内皮祖细胞（Endothelial progenitor cells,EPCs）的数量。结果喂养24周后,与正常对照组比较,其余组大鼠体重与血脂水平均升高（P〈0.05）,假手术组大鼠外周血EPCs数量与血清VEGF水平较正常对照组稍有下降,差异有统计学意义（P〈0.05）;与假手术组比较,缺血再灌注组与人参皂苷Rh2组大鼠外周血内皮祖细胞数量及血清VEGF水平均有升高,且人参皂苷Rh2组升高更为显著（P〈0.05）。结论人参皂苷Rh2可增加高脂膳食大鼠心肌缺血再灌注后外周血内皮祖细胞数量,从而减轻心肌缺血再灌注损伤,可能与提高血清VEGF水平相关。

人血管内皮细胞生长因子基因转染大鼠骨髓间充质干细胞对脂肪颗粒移植存活率的影响

目的检测大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)经人血管内皮细胞生长因子(VEGF165)基因转染后,对脂肪颗粒移植存活率的影响。方法利用FuGENE HD介导VEGF165基因体外转染SD大鼠BMSCs,与取自SD大鼠的脂肪组织混合后移植于大鼠背部,类似方法设立未转染组及DMEM液空白对照组。检测脂肪组织存活率及再生血管密度。结果转染组存在外源性基因和蛋白的表达,脂肪组织存活率及再生血管密度高于未转染组,且两者均高于对照组。结论转染VEGF165基因的BMSCs具有更强的促血管再生作用,可提高游离移植脂肪的存活率。

胰岛素抵抗与脂肪细胞因子关系及其产生机制研究

胰岛素抵抗（Insulinresistance，IR）是指胰岛素的相关靶组织和器官（肝脏、骨骼肌、脂肪组织和下丘脑等）对于内源性或外源性的胰岛素利用效能降低，以致正常水平的胰岛素不能发挥相应的生物学效应，此时机体不得不代偿性分泌更多胰岛素，导致高胰岛素血症阻。

重组人酸性成纤维细胞生长因子预处理脂肪干细胞联合自体脂肪移植用于隆乳术的多中心、随机临床对照试验

目的:评价重组人酸性成纤维细胞生长因子(rh-aFGF)预处理脂肪干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)联合自体脂肪移植用于隆乳术的临床效果及安全性。方法:入选3个研究医院的接受自体脂肪移植的隆乳术114例患者,所有患者均自下腹或大腿部抽取脂肪组织并提取ADSCs5ml。治疗组62例将ADSCs与填充用脂肪组织均匀混合后给予rh-aFGF3-4支/次预处理后,多次处理后,注射于患者乳房内。对照组52例,除不加rh-aFGF外,同治疗组操作。术后测量患者乳房隆起值评估注射后并发症发生情况,并于2周、1个月、3个月、6个月进行随访,以术后2周隆起值评估患者隆起的维持效果。结果:治疗组术后1个月、术后3个月隆起增加值分别为(13.8±2.9)mm,(12.9±3.6)mm。对照组术后1个月、术后3个月隆起增加值分别为(12.4±1.7)mm,(11.2±1.4)mm。对照组脂肪隆起减少更明显。另外,治疗组术后1个月、术后3个月隆起维持率分别为86.7%、80.0%。对照组术后1个月、术后3个月隆起维持率分别为66.7%,59.5%。两组比较均具有统计学差异(P<0.05)。术后随访显示,治疗组脂肪液化发生率低于对照组(1.6%vs9.6%,P<0.05)。结论:rh-aFGF预处理脂肪干细胞联合自体脂肪移植用于隆乳术临床效果确切,术后并发症更少、维持效果更好。