茶树△12-脂肪酸去饱和酶基因FAD2和FAD6的克隆与表达分析

本研究在茶树转录组测序的基础上,以铁观音茶树的芽叶为材料,采用RT-PCR技术,克隆了茶树不饱和脂肪酸合成途径中的关键限速酶—△12-FAD(12-脂肪酸去饱和酶)基因的包含完整ORF的cDNA序列(CsFAD2和CsFAD6)。生物信息学分析结果表明,CsFAD2的全长为1 184 bp,其开放阅读框(ORF)长度1 149 bp,编码382个氨基酸,定位于内质网上,其氨基酸序列与油茶FAD2的同源性最高达97%;CsFAD6的全长为1 425 bp,其ORF长度为1 311 bp,编码436个氨基酸,定位于叶绿体上,其氨基酸序列与葡萄FAD6同源性达81%。荧光定量PCR结果表明,铁观音茶树幼苗在4℃低温胁迫处理72 h过程中,这两个基因的表达均受低温的诱导,其表达量随着处理时间的延长而升高,在处理48 h时,表达量水平最高;在100 g·L-1的PEG胁迫处理12 h过程中,这两个基因的表达均受PEG胁迫处理的诱导;在ABA(100μmol·L-1)胁迫处理72 h过程中,在处理6~24 h期间,CsFAD2的表达量显著升高,而CsFAD6的表达不受ABA处理的影响,CsFAD6的表达量在处理72 h时显著降低;在Na Cl(250 mmol·L-1)胁迫72 h过程中,CsFAD2的表达量全程降低,而CsFAD6在处理24~72 h期间表达量显著升高。

牛乳腺脂肪合成关键酶基因在乳汁体细胞中的表达研究

为了阐明乳脂合成的影响因素及其内在分子机理,为反刍动物原料乳的优化,特别是为乳脂肪的营养调控和遗传改良提供理论依据。本试验以奶牛初乳、常乳和末乳中的乳汁体细胞为研究对象,以看家基因GAPDH为内参,对初乳、常乳和末乳中LPL、CD36、VLDLR、ACSS2、ACSL1、FABP3、ACC、FASN、SCD、ADFP、XDH和BTN1A1 mRNA进行半定量RT-PCR分析。结果发现,LPL、CD36、VLDLR、ACSS2、ACSL1、FABP3、SCD、AD-FP、XDH和BTN1A1 mRNA在初乳、常乳和末乳中均有表达,而ACC和FASNmRNA只在初乳中表达,常乳和末乳中均不表达;半定量结果表明,与初乳相比,常乳和末乳中LPL、CD36、VLDLR、ACSS2、ACSL1、FABP3、SCD、ADFP、XDH和BTN1A1 mRNA转录水平显著降低(P<0.05),且常乳与末乳间差异不显著(P>0.05)。研究结果提示初乳期乳腺脂肪合成能力明显高于常乳和末乳期乳腺,且脂肪合成关键酶基因的表达与细胞内脂转运和代谢的生理变化有关。

大豆含硫氨基酸相关酶基因发掘

大豆（Glycine max）含硫氨基酸合成途径中的酶基因是含硫氨基酸组分的重要调控基因,发掘相关酶基因对高含硫氨基酸分子育种具有重要意义.文章采用大豆物理与遗传整合图谱,通过BioMercator2.1将113个含硫氨基酸合成途径酶基因及33个控制含硫氨基酸含量的QTL整合到遗传图谱Consensus Map 4.0上,依据酶基因位点与QTL的一致性以及QTL的效应值,初步筛选到16个与含硫氨基酸合成相关的候选基因.通过生物信息学方法对候选基因进行拷贝数、SNP、表达谱等分析,鉴定到12个相关酶基因,分别位于D1a、M、A2、K和G等8个连锁群上.生物信息学分析显示这些基因所在QTL可解释含硫氨基酸遗传变异的6.0％～38.5％,其中9个基因的间接效应值超过10％. 12个相关酶基因参与含硫氨基酸代谢的重要途径,且多在子叶、花中高丰度表达,存在丰富的SNP.这些基因可作为候选基因进行功能标记开发,将为大豆分子设计育种奠定基础.

饲料中脂肪酸对动物脂肪合成酶及其基因表达的影响

本文综述了饲料中脂肪酸对动物组织中脂肪酸合成酶的酶活性及其酶基因表达的影响，并就脂肪酸与家畜生产性能的关系进行了讨论。

ω-3脂肪酸去饱和酶基因对番茄抗旱性的影响

为探讨番茄类囊体膜脂ω-3脂肪酸去饱和酶基因（LeFAD7基因）在干旱胁迫下对番茄抗旱性的影响,以野生型（WT）和转正义LeFAD7基因株系T（＋）-12为试材,测定了番茄叶片类囊体膜脂脂肪酸组成,干旱胁迫后的光合参数、叶绿素荧光参数和活性氧清除酶（SOD、CAT和POD）活性的含量变化。结果表明：转正义基因番茄植株类囊体膜脂中亚麻酸（18∶3）含量升高,亚油酸（18∶2）含量下降,导致膜脂脂肪酸不饱和度升高。与WT相比,干旱胁迫下转正义基因番茄植株的PSⅡ最大光化学效率（Fv/Fm）和光合速率（Pn）下降程度较小,转正义基因番茄植株能维持较高的抗氧化酶活性。干旱胁迫下LeFAD7基因对番茄起一定的保护作用。

过表达三角褐指藻苹果酸酶基因提高E.coli脂肪酸合成能力研究

为验证三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)苹果酸酶基因的功能,本研究将PtME1插入pET-30a中得到重组质粒pET30a-PtME1。IPTG诱导后,携带pET30a-PtME1的大肠杆菌BL21(DE3)高效表达一分子量约为72kDa的可溶性重组蛋白。重组蛋白经Ni SephroseTM6Fast Flow系统纯化,酶活力达75.18U/mg。GC-MS分析显示表达PtME1提高了大肠杆菌脂肪酸合成能力,其C14∶0、C16∶0、C18∶1及总脂肪酸含量较对照分别提高了34.8%、69.9%、54.2%和50.2%,C16∶1产量是对照的5.6倍。研究结果表明,NADP依赖型苹果酸酶能为大肠杆菌脂肪酸合成及脂肪酸去饱和提供充足的NADPH,为进一步研究该酶在藻体内的功能奠定了基础。

性别因素对苏尼特羊背最长肌肌内脂肪沉积的影响及相关性研究

实验旨在研究性别因素对苏尼特羊背最长肌脂代谢相关基因和酶活性的影响,及其与背最长肌肌内脂肪(IMF)含量、脂肪酸的相关性。选取相同饲喂条件,体重(33.5 kg左右)和月龄(6月龄)接近的苏尼特羊24只,采用单因素完全随机设计,分为公、母2组,每组12只。选用心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和脂蛋白脂酶(LPL)为目的基因检测其mRNA表达量,并测定脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、甘油三酯水解酶(ATGL)的活性、IMF以及脂肪酸含量。结果表明:性别因素对IMF影响显著(母羊高于公羊),对豆蔻酸、棕榈油酸影响显著,同时对H-FABP、ACC和ACC基因有显著影响;相关性分析表明,H-FABP与IMF含量、棕榈油酸具有正相关性,ATGL与IMF含量呈负相关,FAS与油酸、CLA具有正相关,与α-亚麻酸、花生四烯酸呈负相关。综上,性别因素对H-FABP、ACC基因影响显著,同时发现H-FABP与IMF含量呈正相关,进而导致母羊IMF显著高于公羊。