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椰子Acyl-ACP硫酯酶相关基因的克隆及其表达分析 被引量:8
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作者 肖勇 杨耀东 +3 位作者 夏薇 范海阔 赵松林 马子龙 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期149-152,共4页
椰子是一种重要的热带油料作物,椰子果成熟后,椰子果肉脂肪酸的主要成分为C12的月桂酸。应用椰子转录组测序的结果,从中挖掘了11个脂酰-ACP硫脂酶基因,分别是2个FatA基因、4个FatB1基因、3个FatB2以及2个FatB3基因。应用荧光定量PCR检测... 椰子是一种重要的热带油料作物,椰子果成熟后,椰子果肉脂肪酸的主要成分为C12的月桂酸。应用椰子转录组测序的结果,从中挖掘了11个脂酰-ACP硫脂酶基因,分别是2个FatA基因、4个FatB1基因、3个FatB2以及2个FatB3基因。应用荧光定量PCR检测了Unigene9211、Unigene19303、Unigene45926、Unigene27250以及Unigene22278在果肉形成的3个阶段的表达变化,结果显示,这些基因在果肉形成的3个阶段持续表达。同时,对3个时期的果肉的脂肪酸成分也进行了测定,结果显示,在椰果发育7个月时,中低碳链的脂肪酸含量较低,但随着椰果的发育,中低碳链的脂肪酸逐步增加。 展开更多
关键词 椰子 acyl-acp硫酯酶 脂肪酸 椰果 椰肉
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Investigation of GhFAT Genes Related to Seed Oil Content and Fatty Acid Composition in Gossypium hirsutum L.
2
作者 Ziyang Feng Xinqi Cheng +6 位作者 Tianwen Wang Yongchao Han Haihong Chen Xinyu Zhang Jie Sun Wei Zhang Feng Liu 《Phyton-International Journal of Experimental Botany》 SCIE 2023年第5期1633-1647,共15页
Fatty Acyl-ACP thioesterase(FAT)is a key enzyme controlling oil biosynthesis in plant seeds.FATs can be divided into two subfamilies,FATA and FATB according to their amino acid sequences and substrate specificity.The ... Fatty Acyl-ACP thioesterase(FAT)is a key enzyme controlling oil biosynthesis in plant seeds.FATs can be divided into two subfamilies,FATA and FATB according to their amino acid sequences and substrate specificity.The Upland cotton genome contains 20 GhFAT genes,amongst which 6 genes were of the GhFATA subfamily and 14 of the GhFATB subfamily.The 20 GhFAT genes are unevenly distributed on 14 chromosomes.The GhFATA genes have 5 or 7 exons and the GhFATB genes have 6 or 7 exons.All GhFAT proteins have the conserved Acyl-ACP_TE domain and PLN02370 super family,the typical characteristics of plant thioesterases.Analyses of the expression level of GhFATs and the compositions of fatty acid in 5-60 days-post-anthesis seeds showed that the ratio of saturated fatty acids to unsaturated fatty acids was consistent with the expression profile of GhFATB12,GhFATB3,and GhFATB10;the ratio of monounsaturated fatty acid to polyunsaturated fatty acids was consistent with the expression profile of GhFATA3.The oil contents of mature cottonseeds were positively correlated with the contents of palmitic acid and linolenic acid as well as seed vigor.These results provide essential information for further exploring the role(s)of the specific GhFATs in determining oil biosynthesis and cottonseed compositions. 展开更多
关键词 Gossypium hirsutum fatty acyl-acp thioesterase biological information expression profile seed vigor
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向日葵HaFATA基因的生物信息学和表达分析
3
作者 周菲 《安徽农业科学》 CAS 2024年第7期96-98,共3页
FATA编码脂酰-酰基载体蛋白硫酯酶A,将质体中以脂酰-ACP形式存在的脂肪酸水解成游离的脂酰-CoA和酰基载体蛋白。为了解向日葵HaFATA基因编码蛋白的结构、功能及基因表达特性,对HaFATA编码蛋白进行生物信息学和基因表达分析。预测HaFATA... FATA编码脂酰-酰基载体蛋白硫酯酶A,将质体中以脂酰-ACP形式存在的脂肪酸水解成游离的脂酰-CoA和酰基载体蛋白。为了解向日葵HaFATA基因编码蛋白的结构、功能及基因表达特性,对HaFATA编码蛋白进行生物信息学和基因表达分析。预测HaFATA为碱性且为亲水性蛋白,二级结构主要是无规则卷曲,预测亚细胞定位于叶绿体。系统进化分析表明,HaFATA与同属菊科的莴苣(Lactuca sativa L.)和水飞蓟(Silybum marianum L.)FATA进化关系近,序列相似性分别为90%、87%。HaFATA表达分析结果显示,HaFATA在向日葵种子中表达最高,其次为在管状花和叶中,在茎、舌状花和根中不表达,在发育的种子中,HaFATA除在开花后12 d表达相对较低,在其他6个发育时期表达均较高,表明其对于种子发育和油脂积累可能具有重要作用。 展开更多
关键词 向日葵 脂酰-酰基载体蛋白硫酯酶 脂肪酸 生物信息学 表达分析
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谷氨酸棒状杆菌硫酯酶基因表达对脂肪酸合成的影响
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作者 王佳 刘瑾 +2 位作者 孙子羽 满都拉 陈忠军 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期82-86,共5页
旨在为进一步构建脂肪酸高产菌株奠定基础,通过异源和同源表达,研究了谷氨酸棒状杆菌ATCC13032中硫酯酶的基因(NCgl2365和NCgl0090)对脂肪酸合成的影响。结果表明:硫酯酶的过表达对大肠杆菌和谷氨酸棒状杆菌中脂肪酸的种类和含量都产生... 旨在为进一步构建脂肪酸高产菌株奠定基础,通过异源和同源表达,研究了谷氨酸棒状杆菌ATCC13032中硫酯酶的基因(NCgl2365和NCgl0090)对脂肪酸合成的影响。结果表明:硫酯酶的过表达对大肠杆菌和谷氨酸棒状杆菌中脂肪酸的种类和含量都产生了影响;基因NCgl2365在大肠杆菌中过表达后脂肪酸产量增加了37.86%,且促进了饱和脂肪酸C16∶0、C18∶0和不饱和脂肪酸C17∶1和C20∶3的生成,在谷氨酸棒状杆菌中同源表达后脂肪酸产量提高了33.43%,C17∶0相对含量增加了51.82%,而C6∶0、C8∶0、C12∶0、C17∶1、C18∶0、C18∶1和C18∶3的相对含量显著减少;基因NCgl0090在大肠杆菌中过表达后脂肪酸产量增加了58.15%,促进了饱和脂肪酸C14∶0、C16∶0、C18∶0和不饱和脂肪酸C17∶1的生成,而在谷氨酸棒状杆菌中同源表达后脂肪酸产量提高了59.12%,其中C16∶0相对含量增加了40.18%,促进了C10∶0、C14∶0、C14∶1、C15∶0、C16∶1、C18∶2、C20∶1和C21∶0 8种新脂肪酸的合成。综上,基因NCgl2365和NCgl0090对宿主菌体中的脂肪酸代谢产生了重要的作用。 展开更多
关键词 硫酯酶 异源表达 同源表达 脂肪酸
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代谢工程改造大肠杆菌对中碳脂肪酸生产的加强作用 被引量:4
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作者 刘强 郑艳宁 +3 位作者 姜兴林 刘东杰 秦文 咸漠 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第21期131-135,共5页
通过在大肠杆菌(Escherichia coli)中过量表达来自加州月桂(Umbellulana california)的硫酯酶基因BTE,极大地加强了大肠杆菌中碳脂肪酸(MCFAs)的生产。并对MCFAs在大肠杆菌胞内外的分布,以及是否对大肠杆菌细胞膜磷脂组成产生影响等进... 通过在大肠杆菌(Escherichia coli)中过量表达来自加州月桂(Umbellulana california)的硫酯酶基因BTE,极大地加强了大肠杆菌中碳脂肪酸(MCFAs)的生产。并对MCFAs在大肠杆菌胞内外的分布,以及是否对大肠杆菌细胞膜磷脂组成产生影响等进行了系统的分析。结果发现,产生的MCFAs绝大部分存在于大肠杆菌细胞内,且未对其细胞膜磷脂组成产生明显影响。为了继续提高MCFAs的产量,又进一步对大肠杆菌进行了代谢工程改造,通过结合表达乙酰-CoA羧化酶(ACCase),优化硫酯酶的表达水平等,最终获得了188.9mg/L的总MCFAs产量,并且产生的MCFAs的比例高达85%以上,实现了MCFAs的高特异性生产。 展开更多
关键词 中碳脂肪酸 大肠杆菌 硫酯酶 代谢工程
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紫苏脂肪酸硫酯酶基因PfFatA生物信息学及其表达特性分析 被引量:3
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作者 李璐 梁倩 +2 位作者 安茜 周雅莉 王计平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期104-108,共5页
为研究脂肪酸硫酯酶A(FatA)在紫苏脂肪酸合成机制中发挥的作用,对紫苏FatA基因及其编码的蛋白质进行生物信息学分析。结果表明,PfFatA基因cDNA全长1 652 bp,开放阅读框1 119 bp,编码372个氨基酸;紫苏FatA基因编码的蛋白质为亲水性不稳... 为研究脂肪酸硫酯酶A(FatA)在紫苏脂肪酸合成机制中发挥的作用,对紫苏FatA基因及其编码的蛋白质进行生物信息学分析。结果表明,PfFatA基因cDNA全长1 652 bp,开放阅读框1 119 bp,编码372个氨基酸;紫苏FatA基因编码的蛋白质为亲水性不稳定蛋白,无跨膜区域;含Acyl-ACP_TE保守结构域,属于Hotdog fold超蛋白家族;多序列比对结果发现,序列C端含有保守的三联肽AKL和SKV结构;系统进化树分析表明,紫苏与丹参亲缘关系较近。通过Real-time PCR分析得知,PfFatA在紫苏根、茎、叶、花和种子不同发育时期均有表达,其中,在种子发育初期表达量最高。该研究结果可为进一步阐明PfFatA基因的功能及作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 紫苏 脂肪酸硫酯酶基因(FatA) 生物信息学 表达分析
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可可FAT基因家族进化及表达模式分析 被引量:2
7
作者 李付鹏 邓云梅 +3 位作者 伍宝朵 秦晓威 闫林 赖剑雄 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2020年第5期947-954,共8页
在植物中,酰基-ACP硫酯酶(fatty acyl-ACP thioesterase, FAT)是调控脂肪酸合成的关键酶。为解析可可FAT基因家族成员的特点与功能,本研究从可可基因组中筛选鉴定出FAT基因家族的6个成员,分别命名为TcFATA、TcFATB1、TcFATB2、TcFATB3、... 在植物中,酰基-ACP硫酯酶(fatty acyl-ACP thioesterase, FAT)是调控脂肪酸合成的关键酶。为解析可可FAT基因家族成员的特点与功能,本研究从可可基因组中筛选鉴定出FAT基因家族的6个成员,分别命名为TcFATA、TcFATB1、TcFATB2、TcFATB3、TcFATB4、TcFATB5。6个基因外显子数目为6~7个,编码区(CDS)长度介于1128~1263 bp,预测蛋白分子量介于42.72~46.47 kDa,等电点介于6.57~9.10。进化分析结果表明可可FAT基因家族分成FATA与FATB亚群,FATA亚群包含1个可可TcFATA成员,FATB亚群包含5个可可TcFATBs成员。不同可可种子发育时期表达分析结果表明:TcFATA和TcFATB1伴随果实发育成熟,表达量呈下降趋势,TcFATA和TcFATB1在不同种质中表达量与油酸(C18:1)和棕榈酸(C16:0)比例呈正相关,表明其与脂肪酸组分比例调控有紧密关联。 展开更多
关键词 可可 酰基载体蛋白硫酯酶(FAT) 系统进化 表达模式
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植物脂酰-酰基载体蛋白硫酯酶研究综述 被引量:4
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作者 王威浩 谭晓风 《经济林研究》 2009年第2期118-124,146,共8页
植物脂酰-酰基载体蛋白硫酯酶(FAT)是一种终止脂肪酸合成的酶。它的基本功能就是将acyl-ACPs水解成游离脂肪酸和ACP,从而终止脂肪酸从头合成途径中脂肪酸链的延长。植物中,不同的FAT具有不同的底物特异性,直接决定植物细胞油脂中的脂肪... 植物脂酰-酰基载体蛋白硫酯酶(FAT)是一种终止脂肪酸合成的酶。它的基本功能就是将acyl-ACPs水解成游离脂肪酸和ACP,从而终止脂肪酸从头合成途径中脂肪酸链的延长。植物中,不同的FAT具有不同的底物特异性,直接决定植物细胞油脂中的脂肪酸的种类和数量。不同的植物组织和物种对于每种脂肪酸的需求各不相同,因此FAT在植物细胞代谢中就有着极为重要的作用。本文对FAT的种类、结构、功能、序列的分离克隆及其应用等方面进行综述。 展开更多
关键词 脂酰-酰基载体蛋白硫脂酶 种类 结构 功能 应用
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利用工程大肠杆菌生产不同类型的游离脂肪酸 被引量:4
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作者 李玲玲 刘强 +2 位作者 郑艳宁 秦文 咸漠 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第23期158-162,共5页
游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)对食品风味能够产生重要的影响,生产更多类型的FFAs能够更好的满足食品工业的需求。通过在大肠杆菌(E.coli)中分别过量表达7种不同的硫酯酶基因,7个用于生产FFAs的重组菌株被成功构建。并对重组菌株的... 游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)对食品风味能够产生重要的影响,生产更多类型的FFAs能够更好的满足食品工业的需求。通过在大肠杆菌(E.coli)中分别过量表达7种不同的硫酯酶基因,7个用于生产FFAs的重组菌株被成功构建。并对重组菌株的FFAs生产条件进行了优化,确定最佳的培养条件为:以15g/LNa2HPO4和7.5g/LKH2PO4作为培养基中的磷酸盐浓度,采用0.25mmol/L的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)在30℃进行诱导培养。在优化的培养条件下,7个重组菌株的FFAs通过气相色谱(GC)进行了定性和定量分析。结果显示,过量表达BTE、AtFatA、‘tesA的重组菌株LL1、LL2、LL4均显著提高了FFAs的产量,其中LL1取得了346.4mg/L最高的FFAs产量。进一步对LL1、LL2、LL4的FFAs组成进行分析表明,BTE、AtFatA、‘TesA具有不同的底物特异性,能够用来生产C12~C18等不同链长和饱和度的FFAs。因此,通过微生物代谢工程可以获得天然动植物油脂中不存在的更多类型的FFAs。 展开更多
关键词 游离脂肪酸 工程大肠杆菌 硫酯酶
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甘蓝型油菜中5个脂酰-ACP硫酯酶基因的克隆与功能初步分析 被引量:3
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作者 熊腾 陈张彬 +6 位作者 张振乾 陈浩 袁勇 熊兴华 邬贤梦 官春云 肖钢 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期212-218,共7页
为了解影响油菜种子含油量的关键基因,从高含油量(HO)和低含油量(LO)甘蓝型油菜中克隆了5个脂酰-ACP硫酯酶(fatty acyl-ACP thioesterase, FAT)的基因。序列分析表明这5个FAT基因在HO和LO油菜基因组之间没有序列差异。5个FAT基因分别命... 为了解影响油菜种子含油量的关键基因,从高含油量(HO)和低含油量(LO)甘蓝型油菜中克隆了5个脂酰-ACP硫酯酶(fatty acyl-ACP thioesterase, FAT)的基因。序列分析表明这5个FAT基因在HO和LO油菜基因组之间没有序列差异。5个FAT基因分别命名为:BnaA.FATA.a、BnaC.FATA.b、BnaA.FATA.c、BnaC.FATB.a和BnaA.FATB.b。分析表明,HO种子中5个FAT基因的表达水平显著高于LO种子。异源表达结果显示,5个FAT基因的所有酵母转化子的含油量均显著增加,并且它们的脂肪酸组成均发生了变化。将这5个FAT基因转化到拟南芥中进行进一步的功能分析。5个转基因材料T1种子含油量均显著增加;BnaA.FATA.a、BnaC.FATA.b、BnaA.FATA.c转基因株系中的饱和脂肪酸含量显著降低,而不饱和脂肪酸含量均显著增加;相反,在BnaC.FATB.a和BnaA.FATB.b转基因材料中,饱和脂肪酸含量显著增加,而不饱和脂肪酸含量显著降低。结果表明,这5个FAT基因不仅可以增加拟南芥含油量,而且可以改变脂肪酸组成比例。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 脂酰-ACP硫脂酶 异源表达 含油量 脂肪酸组成 RT-QPCR
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花生酰基载体蛋白硫酯酶(FATB2)基因的克隆与表达分析 被引量:6
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作者 李昊远 郝翠翠 +7 位作者 潘丽娟 陈明娜 陈娜 王冕 王通 禹山林 侯艳华 迟晓元 《花生学报》 北大核心 2017年第4期7-14,共8页
本研究从花生中分离得到1个FATB基因,命名为AhFATB2,其全长为1245bp,编码414个氨基酸,属于亲水性蛋白。利用荧光定量PCR分析了该基因在不同组织、种子不同发育时期、多种非生物逆境胁迫和激素处理下的表达情况。结果显示,AhFATB2基因在... 本研究从花生中分离得到1个FATB基因,命名为AhFATB2,其全长为1245bp,编码414个氨基酸,属于亲水性蛋白。利用荧光定量PCR分析了该基因在不同组织、种子不同发育时期、多种非生物逆境胁迫和激素处理下的表达情况。结果显示,AhFATB2基因在花中表达量最高,并且在种子发育过程中表达量逐渐升高。在非生物胁迫和激素处理下,AhFATB2基因的表达量均有不同程度的上调,推测该基因可能参与花生对逆境胁迫的适应性调控。该研究为将来改良花生品种提供了基因资源,同时揭示了AhFATB2基因在花生抗逆性中可能发挥的作用。 展开更多
关键词 花生 酰基载体蛋白硫酯酶 克隆 荧光定量PCR 非生物胁迫
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花生FAT基因家族的全基因组分析 被引量:1
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作者 张会 单雷 +4 位作者 李新国 郭峰 孟静静 万书波 彭振英 《山东农业科学》 2018年第6期19-26,共8页
酰基-ACP硫酯酶(fatty acyl-ACP thioesterase,FAT)是控制植物种子油脂合成的关键酶,根据其氨基酸序列和底物特异性不同可分为FATA和FATB两类。为了更深入了解花生FAT(Ah FAT)的特点与功能,本研究对Ah FAT家族基因进行了全基因组生物信... 酰基-ACP硫酯酶(fatty acyl-ACP thioesterase,FAT)是控制植物种子油脂合成的关键酶,根据其氨基酸序列和底物特异性不同可分为FATA和FATB两类。为了更深入了解花生FAT(Ah FAT)的特点与功能,本研究对Ah FAT家族基因进行了全基因组生物信息学分析。在花生基因组中共有20个FAT基因,不均匀分布在2个基因组的12条染色体上。20个Ah FATs可以分为Ah FATA和Ah FATB两个亚家族,Ah FATA亚家族有2个基因,Ah FATB亚家族有18个基因。Ah FATA家族基因具有6或8个外显子,Ah FATB家族基因结构较为复杂,外显子数目5~8个;Ah FATs都不具有跨膜结构域但是都具有保守的Acyl-ACP_TE结构域。对Ah FAT家族基因进行可变剪接分析,发现只有少数发生了可变剪接,且具有组织特异性。对Ah FATs表达模式分析的结果显示,Ah FATAs和Ah FATBs都在种子发育后期表达量较高。 展开更多
关键词 花生 酰基载体蛋白硫酯酶(FAT) 可变剪接 表达模式
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油棕乙酰基酰基载体蛋白硫酯酶EgFATA基因的克隆与功能分析 被引量:1
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作者 金柳 李萌晗 +1 位作者 郑育声 李东栋 《热带生物学报》 2023年第4期357-363,共7页
为了探索油棕(Elaeis guineensis Jacq.)EgFATA基因的生物学功能,解析EgFATA基因在油棕中与脂肪酸积累的对应关系,为进一步研究EgFATA作用机制奠定基础,从油棕果cDNA中克隆得到了EgFATA基因的全长序列,经生物信息学分析发现,EgFATA编码... 为了探索油棕(Elaeis guineensis Jacq.)EgFATA基因的生物学功能,解析EgFATA基因在油棕中与脂肪酸积累的对应关系,为进一步研究EgFATA作用机制奠定基础,从油棕果cDNA中克隆得到了EgFATA基因的全长序列,经生物信息学分析发现,EgFATA编码区由1155个碱基组成,可编码385个氨基酸,相对分子量为91.89 kDa,与海藻PdFATA亲缘关系最近。在此基础上,构建EgFATA的病毒沉默载体并侵染油棕胚状体,RT-qPCR结果表明,EgFATA的表达量被下调85%~90%。同时,对基因沉默胚状体进行脂肪酸气相色谱法分析,硬脂酸(C18:0)、油酸(C18:1)、亚油酸(C18:2)的含量均显著性降低。以上结果表明在油棕胚状体中,EgFATA对C18:0-ACP、C18:1-ACP、C18:2-ACP的水解具有催化作用,且对C18:1-ACP的催化活性最强。 展开更多
关键词 油棕 乙酰基酰基载体蛋白硫酯酶 油脂代谢调控
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微拟球藻硫脂酶基因克隆及其在大肠杆菌中的表达
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作者 王丽丽 朱葆华 +1 位作者 杨官品 潘克厚 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期31-35,共5页
微拟球藻(Nannochloropsis oceanica)基因组序列注释的硫脂酶基因(NoTE)长1 314bp,其编码的硫脂酶长437氨基酸,与其他物种硫脂酶序列相似性较低。为验证其功能,将NoTE克隆到原核表达载体pET-30a上并在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了表达。... 微拟球藻(Nannochloropsis oceanica)基因组序列注释的硫脂酶基因(NoTE)长1 314bp,其编码的硫脂酶长437氨基酸,与其他物种硫脂酶序列相似性较低。为验证其功能,将NoTE克隆到原核表达载体pET-30a上并在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了表达。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测到预期大小的蛋白质条带。气相色谱(GC)分析显示,表达NoTE未改变大肠杆菌脂肪酸种类,但改变了其总脂肪酸含量和脂肪酸比例,其C14∶1、C16∶0、C16∶1、C18∶1及总脂肪酸含量较不含重组质粒菌株分别提高了11%、18%、32%、49%和30%。研究结果证明了克隆的硫脂酶基因能在大肠杆菌中表达并具有相应的酶活性。 展开更多
关键词 微拟球藻 硫脂酶 脂肪酸 大肠杆菌 原核表达
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过表达酰基蛋白硫酯酶促进产油真菌卷枝毛霉脂肪酸合成 被引量:1
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作者 高萌 辛菲菲 +3 位作者 王瑞雪 赵燕磊 张怀渊 张瑶 《粮食与食品工业》 2021年第3期1-5,8,共6页
本实验以卷枝毛霉为研究对象,探讨了酰基蛋白硫酯酶在其脂质合成与代谢中的作用。通过同源重组的方法在卷枝毛霉中过表达了酰基蛋白硫酯酶TE21,研究了重组菌株在发酵过程中对碳源、氮源的消耗情况以及生物量、脂肪酸含量的变化。结果表... 本实验以卷枝毛霉为研究对象,探讨了酰基蛋白硫酯酶在其脂质合成与代谢中的作用。通过同源重组的方法在卷枝毛霉中过表达了酰基蛋白硫酯酶TE21,研究了重组菌株在发酵过程中对碳源、氮源的消耗情况以及生物量、脂肪酸含量的变化。结果表明:过表达酰基蛋白硫酯酶能提高卷枝毛霉的总脂肪酸含量,并使游离脂肪酸的含量提高了1.3倍。 展开更多
关键词 卷枝毛霉 酰基蛋白硫酯酶 脂质合成 脂肪酸
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两种硫脂酶对重组菌游离脂肪酸合成能力的影响
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作者 侯艳玢 闫依狄 孟鑫 《生物化工》 2020年第4期89-91,共3页
为考察两种不同来源的硫酯酶对原核生物脂肪酸合成能力的影响,在大肠杆菌(E.coli)中分别表达了拟南芥硫酯酶基因PtFATB和内源硫酯酶基因tesA,结果表明:两种酶均能有效改善重组菌游离脂肪酸的合成能力,分别为33.53 mg/L和25.23 mg/L。这... 为考察两种不同来源的硫酯酶对原核生物脂肪酸合成能力的影响,在大肠杆菌(E.coli)中分别表达了拟南芥硫酯酶基因PtFATB和内源硫酯酶基因tesA,结果表明:两种酶均能有效改善重组菌游离脂肪酸的合成能力,分别为33.53 mg/L和25.23 mg/L。这一研究实现了在E.coli中获得胞外游离脂肪酸的新途径,并为进一步解析原核脂肪酸转运机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌 拟南芥 硫酯酶 游离脂肪酸
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拟南芥硫酯酶基因(atfata)在大肠杆菌中的表达及其对游离脂肪酸合成的影响 被引量:6
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作者 程涛 杨建明 +3 位作者 刘辉 张英伟 宋秋华 咸漠 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期568-571,共4页
硫酯酶催化脂酰ACP(酰基载体蛋白)水解生成游离脂肪酸和ACP载体蛋白,能够解除脂肪酸合成与磷脂合成的偶联,是获得游离脂肪酸的关键基因.将拟南芥的硫酯酶基因atfata克隆到原核表达载体pET30a上,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了His-tag... 硫酯酶催化脂酰ACP(酰基载体蛋白)水解生成游离脂肪酸和ACP载体蛋白,能够解除脂肪酸合成与磷脂合成的偶联,是获得游离脂肪酸的关键基因.将拟南芥的硫酯酶基因atfata克隆到原核表达载体pET30a上,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了His-tag融合蛋白,经SDS-PAGE检测获得特异性表达条带.对该重组菌株进行摇瓶发酵实验,GC-MS检测表明其与对照菌株脂肪酸组成并未发生变化;但其脂肪酸产量达到232.06 mg/L,比对照菌株提高了70%;同时胞外游离脂肪酸产量达到了33 mg/L,占总脂肪酸含量的15%,是野生菌株胞外脂肪酸产量的7倍. 展开更多
关键词 拟南芥 硫脂酶 工程大肠杆菌 胞外游离脂肪酸
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优化硫酯酶表达提高大肠杆菌脂肪酸乙酯的生物合成效率
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作者 杨柳 朱至 +1 位作者 刘爱秋 吕雪峰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1681-1686,共6页
利用基因工程大肠杆菌直接从头生物合成脂肪酸乙酯(生物柴油)的相关研究引起了国内外研究人员的广泛关注。在本课题组已经构建的能够从头合成脂肪酸乙酯的大肠杆菌菌株KC3的基础上,通过替换表达不同来源的硫酯酶,发现表达来源于香樟树... 利用基因工程大肠杆菌直接从头生物合成脂肪酸乙酯(生物柴油)的相关研究引起了国内外研究人员的广泛关注。在本课题组已经构建的能够从头合成脂肪酸乙酯的大肠杆菌菌株KC3的基础上,通过替换表达不同来源的硫酯酶,发现表达来源于香樟树的硫酯酶Cc FatB1基因能够提高脂肪酸乙酯产量。进一步通过共表达Cc FatB1和大肠杆菌硫酯酶tesA’基因,以及启动子优化,获得了高产脂肪酸乙酯工程菌株KC4。KC4菌株在摇瓶条件和发酵条件下的单位生物量脂肪酸乙酯产率分别为21.4 mg/(L OD600)和31.16 mg/(L OD600)。该工程菌株的构建进一步提高了脂肪酸乙酯产量,显示了通过基因工程改造大肠杆菌从头合成生物柴油的应用潜力。 展开更多
关键词 硫酯酶 脂肪酸乙酯 大肠杆菌 基因工程
原文传递
拟南芥硫酯酶基因在毕赤酵母中的表达 被引量:6
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作者 郝昭程 王腾飞 +3 位作者 李忠奎 郝梓凯 戴琨 王瑞明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期115-122,共8页
硫酯酶在生物体内能催化水解脂酰酰基载体蛋白和饱和脂肪脂酰链,对中链脂肪酸(Medium chain fatty acids,MCFAs)的积累起着关键作用。为获得具有生产中链脂肪酸能力的工程菌,以拟南芥c DNA为模板,PCR扩增得到其脂酰-ACP硫酯酶基因At Fat... 硫酯酶在生物体内能催化水解脂酰酰基载体蛋白和饱和脂肪脂酰链,对中链脂肪酸(Medium chain fatty acids,MCFAs)的积累起着关键作用。为获得具有生产中链脂肪酸能力的工程菌,以拟南芥c DNA为模板,PCR扩增得到其脂酰-ACP硫酯酶基因At Fat A,经Eco RⅠ/XbaⅠ双酶切后连接至同样双酶切的质粒中,获得重组质粒p PICZαA-At Fat。将重组质粒电击转入毕赤酵母GS115中,通过Zeocin抗性筛选,挑选出阳性克隆子并摇瓶发酵诱导,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析获得明显目的蛋白条带,首次成功构建At Fat A的真菌表达系统。气质联用法检测发酵产物胞外游离脂肪酸,发现毕赤酵母At Fat A重组菌株比起始GS115菌株胞外游离MCFAs(主要是辛酸)产量增加51%,MCFAs产量占胞外总脂肪酸产量的28.7%,而野生菌中这一比例仅有18.1%,这为日后生产安全无毒害的MCFAs探索了一条新的途径。 展开更多
关键词 拟南芥 脂酰-ACP硫酯酶 毕赤酵母 基因重组表达 游离中链脂肪酸 胞外
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酰基辅酶A硫酯酶在脂肪酸代谢途径中的作用 被引量:3
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作者 胡泰文 薛永常 《生命的化学》 CAS CSCD 2020年第5期663-667,共5页
酰基辅酶A硫酯酶(acyl-CoA thioeaterase,ACOT)属于广泛的硫酯水解酶的一类酶,分属于α/β水解酶超家族和"HotDog"超家族。ACOT作用范围很广,可以裂解支链脂肪酸、短链和长链饱和及不饱和酰基辅酶A等多种含辅酶A的底物,在脂... 酰基辅酶A硫酯酶(acyl-CoA thioeaterase,ACOT)属于广泛的硫酯水解酶的一类酶,分属于α/β水解酶超家族和"HotDog"超家族。ACOT作用范围很广,可以裂解支链脂肪酸、短链和长链饱和及不饱和酰基辅酶A等多种含辅酶A的底物,在脂肪酸代谢途径中发挥信号转导、基因调控等生理生化作用。因此研究ACOT的结构和功能,可以为某些疾病治疗和发病机理研究提供依据,也可以为指导现有的代谢途径和重新设计新的合成途径来合成天然或非天然产物提供依据和基础。 展开更多
关键词 酰基辅酶A硫酯酶 脂肪酸代谢 疾病治疗 代谢途径
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