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Effects of feeder layer and BRL conditioned medium on mouse embryonic stem cells 被引量:9
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作者 TsungHsiaochien christine,L.Mummery 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 1990年第1期35-52,共18页
In vitro growth and maintenance of embryonic stem (ES) cell lines derived from ICM cells of various blastocysts of 129 strain mice, the sustenance of their pluripotency and normal karyotype depend on the feeder layer ... In vitro growth and maintenance of embryonic stem (ES) cell lines derived from ICM cells of various blastocysts of 129 strain mice, the sustenance of their pluripotency and normal karyotype depend on the feeder layer of mouse embryonic fibroblasts (MEF). Compared with the feeder layer of MEF cells, medium conditioned by Buffalo rat liver cells (BRL-CM) is able to maintain pluripotency and karyo-typic normality of ES cells only in short term cell propagation. Besides, ES cells grown in BRL-CM are also capable of aggregation with 8-cell embryos of Swiss strain and develop into germ line chimaeras. Modification to the method of aggregating ES cells with early embryos by making a hole in agar layer on the top of MEF feeder cells was shown to be more convenient and efficient than the conventional microdrop method. 展开更多
关键词 embryonic stem (ES) cells feeder layer BRL conditioned medium chimearas.
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Comparative analysis of different feeder layers with 3T3 fibroblasts for culturing rabbits limbal stem cells 被引量:3
2
作者 Hui-Xian Wang Xiao-Wei Gao +4 位作者 Bing Ren Yan Cai Wen-Jing Li Yu-Li Yang Yi-Jian Li 《International Journal of Ophthalmology(English edition)》 SCIE CAS 2017年第7期1021-1027,共7页
AIM: To explore the possibility of human umbilical cord mesenchymal stem cells(h UCMSCs), human umbilical vein endothelial cells(h UVECs), human dental pulp stem cells(h DPSCs) and human periodontal ligament st... AIM: To explore the possibility of human umbilical cord mesenchymal stem cells(h UCMSCs), human umbilical vein endothelial cells(h UVECs), human dental pulp stem cells(h DPSCs) and human periodontal ligament stem cells(h PDLSCs) serving as feeder cells in co-culture systems for the cultivation of limbal stem cells.METHODS: Different feeder layers were cultured in Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM)/F12 and were treated with mitomycin C. Rabbits limbal stem cells(LSCs) were co-cultured on h UCMSCs, h UVECs, h DPSCs, h PDLSCs and NIH-3T3, and then comparative analysis were made between each group to see their respective colony-forming efficiency(CFE) assay and immunofluorescence(IPO13,CK3/12).RESULTS: The efficiency of the four type cells in supporting the LSCs morphology and its cellular differentiation was similar to that of NIH-3T3 fibroblasts as demonstrated by the immunostaining properties analysis, with each group exhibiting a similar strong expression pattern of IPO13, but lacking CK3 and CK12 expression in terms of immunostaining. But h UCMSCs, h DPSCs and h PDLSCs feeder layers were superior in promoting colony formation potential of cells when compared to h UVECs and feedercell-free culture.CONCLUSION: hUCMSCs, hDPSCs and hPDLSCs can be a suitable alternative to conventional mouse NIH-3T3 feeder cells, so that risk of zoonotic infection can be diminished. 展开更多
关键词 limbal stem cells feeder layers umbilical cord mesenchymal stem cells umbilical vein endothelial cells dental pulp stem cells periodontal ligament stem cells
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Study on the Cultivation of the Mycardium and Myocardium Self-disciplining Cell Mass of Mouse Embryonic Bodies with their Own Feeder Layer
3
作者 LIU Yan ZHANG Gui-xue CAO Yun-kao 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2003年第2期131-136,共6页
Myocardium tissue of Kunming mouse embryonic bodies was cultured with the feeder layer of their embryonic fibroblasts in TCM199.The results indicate that some piece of myocardium tissue can be cultured in the feeder l... Myocardium tissue of Kunming mouse embryonic bodies was cultured with the feeder layer of their embryonic fibroblasts in TCM199.The results indicate that some piece of myocardium tissue can be cultured in the feeder layer;Their contracting frequency changed with the temperature and the morphology changed with the time;It was not all pieces of tissue with the same appearance that could contract,even though some of them grow well. 展开更多
关键词 MYOCARDIUM feeder layer mouse self-disciplining
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Preliminary study on human fibroblasts as feeder layer for human embryonic stem cells culture in vitro 被引量:2
4
作者 XIEChangqing LINGe 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2003年第4期354-357,共4页
To avoid the direct contact with mouse cells and possible heterogeneous pathogen in future application, we need to replace mouse embryonic fibroblasts with human fibroblasts as the feeder layer to maintain human embry... To avoid the direct contact with mouse cells and possible heterogeneous pathogen in future application, we need to replace mouse embryonic fibroblasts with human fibroblasts as the feeder layer to maintain human embryonic stem cells growth in the undifferentiated state. We success-fully use human fibroblasts derived from aborted fetus and adult prepuce as feeder layer to maintain human embryonic stem cells growth. During the passage and growth on this feeder layer, the human embryonic stem cells can keep their undifferentiated state. 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 体外培养 细胞培养 饲养层 人类成纤维细胞
原文传递
浅析细胞治疗产品中滋养细胞的使用及控制策略 被引量:1
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作者 尹慧芳 徐隆昌 +2 位作者 邱晓 陈爱萍 韦薇 《中国食品药品监管》 2024年第2期24-29,共6页
滋养细胞因能促进目的细胞的扩增效率,已被应用于自然杀伤细胞、肿瘤浸润淋巴细胞等的体外扩增。滋养细胞的来源及改造具有多样性,本文以基因编辑的人慢性髓系白血病细胞(K562细胞)为例,总结了细胞系来源的滋养细胞特点和最新研究进展,... 滋养细胞因能促进目的细胞的扩增效率,已被应用于自然杀伤细胞、肿瘤浸润淋巴细胞等的体外扩增。滋养细胞的来源及改造具有多样性,本文以基因编辑的人慢性髓系白血病细胞(K562细胞)为例,总结了细胞系来源的滋养细胞特点和最新研究进展,并围绕滋养细胞的作用、起始细胞、工程细胞株的构建和建库、生产工艺、质量研究和质量控制、滋养细胞的使用和控制策略等方面提出了药学审评考虑和讨论,以期为业界和监管机构交流探讨提供参考与思路,促进此类产品的临床转化和应用。 展开更多
关键词 滋养细胞 基因编辑的K562细胞 药学评价 使用和控制
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基于5G通信时延的配电网馈线自动化切换方法 被引量:2
6
作者 朱卫卫 朱清 +3 位作者 高文森 刘财华 王录泽 刘增稷 《综合智慧能源》 CAS 2024年第5期1-11,共11页
针对5G通信不确定时延导致数据传输时间难以预测,从而影响馈线自动化(FA)系统故障响应及时性和决策准确性的问题,提出一种基于5G通信时延的配电网FA切换方法。首先,建立馈线终端之间的拓扑关系,根据FA系统中每一分支的最大通信时延计算... 针对5G通信不确定时延导致数据传输时间难以预测,从而影响馈线自动化(FA)系统故障响应及时性和决策准确性的问题,提出一种基于5G通信时延的配电网FA切换方法。首先,建立馈线终端之间的拓扑关系,根据FA系统中每一分支的最大通信时延计算得到FA系统的实时通信时延;其次,针对不同时延下不同FA策略故障处理速度的历史数据,通过层堆叠长短时记忆神经网络(LSTM)模型进行训练,学习出不同通信时延下故障处理速度最快的FA策略;最后,根据层堆叠LSTM模型的学习结果,选择切换到当前通信时延下故障处理速度最快的FA策略。试验结果表明:该方法能有效应对5G通信的不确定性时延对FA系统的影响,保障FA系统可靠运行;此外,与其他机器学习方法相比,层堆叠LSTM模型在预测准确性和预测时延方面具有优势,能够有效提高馈线终端系统的自适应能力和故障响应速度。 展开更多
关键词 馈线自动化 5G通信 通信时延 层堆叠LSTM 故障处理 机器学习 智能配电网
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以支持细胞为饲养层培养小鼠精原干细胞 被引量:17
7
作者 李恩中 李德雪 +5 位作者 张世庆 王常勇 张学明 王海滨 鲁景艳 王静 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第4期774-779,共6页
为探索精原干细胞(Spermatogonialstemcells,SSCs)体外自增殖的条件以及SSCs体外快速扩增的方法,以6-8日龄昆明乳鼠为材料,分离小鼠睾丸细胞,采用Percoll梯度离心法富集SSCs;以经丝裂霉素C处理的Sertoli细胞作饲养层,以DMEM为基本培养基... 为探索精原干细胞(Spermatogonialstemcells,SSCs)体外自增殖的条件以及SSCs体外快速扩增的方法,以6-8日龄昆明乳鼠为材料,分离小鼠睾丸细胞,采用Percoll梯度离心法富集SSCs;以经丝裂霉素C处理的Sertoli细胞作饲养层,以DMEM为基本培养基,加入5%胎牛血清和103u/ml的白血病抑制因子(Leukemiainhibitoryfactor,LIF),体外培养SSCs;运用免疫荧光技术,以SSCs特异性表面分子Thy1为标志,对原代培养20d和传代培养14d的细胞进行鉴定。该培养体系下,SSCs贴壁时间为6h-9h,48h后可见细胞分裂,迅速增殖出现在接种12d以后。接种后第20d形成数十至上百个细胞的细胞团,细胞总数比接种时增加了45-245倍,100倍显微镜下观察可见,单位视野内细胞团数为26±4个。传代后细胞增殖较快。原代培养20d和传代培养14d的细胞均为Thy1阳性;而传代20d后,细胞周缘不整,有伪足出现,呈现出死亡迹象。该培养条比较适合SSCs短期快速增殖。 展开更多
关键词 小鼠 精原干细胞 SERTOLI细胞 饲养层
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几种因素对培养小鼠精原干细胞的影响 被引量:16
8
作者 张学明 李子义 +4 位作者 赖良学 文兴豪 李德雪 岳占碰 杜惜明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期497-500,共4页
探讨了小鼠胚胎成纤维细胞饲养层及干细胞因子 ( SCF)、白血病抑制因子 ( LIF)、碱性成纤维细胞生长因子 ( b FGF)等对体外培养小鼠精原干细胞的作用。结果显示 ,在饲养层上 ,精原干细胞贴壁时间缩至 8~1 2 h,饲养层具有促进其分裂增... 探讨了小鼠胚胎成纤维细胞饲养层及干细胞因子 ( SCF)、白血病抑制因子 ( LIF)、碱性成纤维细胞生长因子 ( b FGF)等对体外培养小鼠精原干细胞的作用。结果显示 ,在饲养层上 ,精原干细胞贴壁时间缩至 8~1 2 h,饲养层具有促进其分裂增殖的作用 ;培养液中加入不同浓度的 SCF、LIF及 b FGF,可延长精原干细胞在体外的存活时间 ,其中加入 30μg/L SCF后 ,其体外存活时间与对照组相比差异显著 ( P <0 .0 5 )。 展开更多
关键词 饲养层 SCF LIF BFGF 精原干细胞 小鼠 体外培养
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小鼠胚胎成纤维细胞的分离与培养 被引量:28
9
作者 张怡 赵连三 +1 位作者 汪成孝 雷秉钧 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期344-346,共3页
目的 探讨影响小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)分离和培养的一些因素 ,以建立稳定的 MEF培养体系。方法 取 BAL B/ c小鼠胚胎分离成纤维细胞 ,利用体外培养体系 ,对 MEF的生长形态、生长曲线及细胞周期进行观察 ,并对不同胚胎日龄以及不同... 目的 探讨影响小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)分离和培养的一些因素 ,以建立稳定的 MEF培养体系。方法 取 BAL B/ c小鼠胚胎分离成纤维细胞 ,利用体外培养体系 ,对 MEF的生长形态、生长曲线及细胞周期进行观察 ,并对不同胚胎日龄以及不同胰酶作用时间对 MEF分离及培养的影响进行研究。结果  13.5 d胎龄鼠胚的 MEF分离效果优于 10 .5 d、18.5 d胎龄鼠胚 ;MEF在体外为贴壁生长型细胞 ,第三代细胞增殖旺盛 ;在室温条件下 ,0 .2 5 %胰酶消化 MEF时间以 3~ 5 min为宜。结论  MEF在第 3代增殖旺盛 。 展开更多
关键词 小鼠胚胎成纤维细胞 胚胎干细胞 饲养层
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胰蛋白酶消化法和组织块法原代培养人包皮成纤维细胞的比较 被引量:21
10
作者 王志强 梁锐 +5 位作者 陈明清 邓俊 李文亮 陈天星 文政琦 杨军 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期242-247,共6页
小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)是目前国际上公认的人胚胎干细胞(hESCs)体外培养的饲养层细胞,但MEFs存在寿命短、动物源性污染等问题,需要探索适于hESCs体外培养且寿命长的人源性饲养层.采用胰蛋白酶消化法和组织块法分别原代培养人包皮成... 小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)是目前国际上公认的人胚胎干细胞(hESCs)体外培养的饲养层细胞,但MEFs存在寿命短、动物源性污染等问题,需要探索适于hESCs体外培养且寿命长的人源性饲养层.采用胰蛋白酶消化法和组织块法分别原代培养人包皮成纤维细胞(hFFs),探索hFFs原代培养的最佳方法,为hFFs作为饲养层在hESCs研究中的应用提供可靠的科学依据;通过倒置显微镜下观察其生长状态和免疫细胞化学染色鉴定,结果显示两种原代培养方法获得的hFFs的形态及生物学特性均符合成纤维细胞;通过测定细胞生长曲线及MTT法检测,结果显示两种原代培养方法获得的不同代数的hFFs均具有较高的增殖活性,传代10余代仍能保持较好的细胞形态,可以制备成饲养层用于hESCs的研究. 展开更多
关键词 人包皮成纤维细胞 原代培养 胰蛋白酶消化法 组织块法 饲养层 人胚胎干细胞
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大鼠胚胎神经干细胞的纯化、诱导分化及鉴定 被引量:6
11
作者 刘福云 刘文英 +2 位作者 师红 胡廷泽 刘利君 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2004年第4期591-596,共6页
探讨胚胎神经干细胞 (Neural stem cell,NSCs)的体外纯化扩增、保存标记、诱导分化及其鉴定方法。将14 .5 d胎龄大鼠大脑额叶皮质 NSCs在无血清 DMEM/ F12 (含 2 0 ng/ ml b FGF,2 0 ng/ m l EGF及 B2 7辅助培养液 )培养 ,利用有限稀释... 探讨胚胎神经干细胞 (Neural stem cell,NSCs)的体外纯化扩增、保存标记、诱导分化及其鉴定方法。将14 .5 d胎龄大鼠大脑额叶皮质 NSCs在无血清 DMEM/ F12 (含 2 0 ng/ ml b FGF,2 0 ng/ m l EGF及 B2 7辅助培养液 )培养 ,利用有限稀释法将悬浮生长的单个细胞所形成的克隆球挑选出来、通过亚克隆连续传代大量扩增而纯化 ,免疫组化鉴定 nestin抗原阳性 ;选取部分 NSCs冻存、复苏后 nestin抗原阳性 ;用 Brd U孵育 NSCs,被 Brd U标记的 NSCs及其血清诱导分化后仍均呈 Brd U阳性。用血清或饲养层诱导 NSCs分化为大量表达 Tubulin- (神经元特异性抗原微管蛋白 3)阳性的神经元和 GFAP(神经胶质纤维酸性蛋白 )阳性的神经胶质细胞。由该实验可知有限稀释单细胞克隆连续传代是分离纯化、大量扩增胚胎期大脑 NSCs的简单有效方法。饲养层细胞也能诱导 NSCs分化为神经细胞。 Brd U可标记、示踪神经系统疾病动物模型 NSCs的实验治疗。掌握 NSCs的体外纯化培养、保存标记、诱导分化及鉴定方法可为进一步研究 NSCs的生物学特性及神经系统疾病的治疗提供新方法。 展开更多
关键词 大鼠 胚胎 神经干细胞 纯化 诱导分化 鉴定
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小鼠胚胎成纤维细胞饲养层制备条件的研究 被引量:12
12
作者 王国云 李栋 +1 位作者 张辉 白增亮 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2005年第5期396-400,共5页
目的:建立小鼠胚胎成纤维细胞饲养层最佳分离培养及丝裂霉素C(MMC)处理的方法,用于培养胚胎干细胞。方法:取不同胎龄的胎鼠分离原代成纤维细胞,观察不同胎龄和培养、分离条件对细胞增殖的影响;观察不同浓度和不同作用时间下MMC对细胞增... 目的:建立小鼠胚胎成纤维细胞饲养层最佳分离培养及丝裂霉素C(MMC)处理的方法,用于培养胚胎干细胞。方法:取不同胎龄的胎鼠分离原代成纤维细胞,观察不同胎龄和培养、分离条件对细胞增殖的影响;观察不同浓度和不同作用时间下MMC对细胞增殖的抑制作用。用MTT法测定细胞增殖的数量。取妊娠3.5d的囊胚在经MMC处理的饲养层上培养,观察胚胎干细胞集落生成情况。结果:制备小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的最佳胎龄是12.5~14.5d;室温条件下,0.25%胰蛋白酶消化时间最好在3~5min之内;原代细胞培养2~4d后即可传代,MMC能抑制胚胎成纤维细胞的增殖,最佳的作用浓度和时间是20μg/ml,2~4h,成纤维细胞饲养层可以维持10d。囊胚在饲养层上能发育成典型的“鸟巢”状干细胞集落。结论:从12.5~14.5d胎龄小鼠胚胎分离培养的胚胎成纤维细胞质量最佳,经20μg/mlMMC处理2~4h后,可以作为饲养层用于胚胎干细胞的分离克隆。 展开更多
关键词 小鼠 胚胎成纤维细胞 胚胎干细胞 丝裂霉素C 饲养层
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家兔囊胚在饲养层上的生长行为 被引量:6
13
作者 赖良学 郑瑞珍 +3 位作者 辛俭 朱少侠 秦鹏春 孙方臻 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 1998年第3期335-340,共6页
研究了家兔囊胚在饲养层上的生长行为。结果表明,滋养层细胞铺展后,形成一层透明的膜状结构。覆盖在内细胞团之上。内细胞团在培养48小时后,可见到一定程度的增殖,第3天增殖速度加快。生长的内细胞团可呈团状、条状、网状和混合... 研究了家兔囊胚在饲养层上的生长行为。结果表明,滋养层细胞铺展后,形成一层透明的膜状结构。覆盖在内细胞团之上。内细胞团在培养48小时后,可见到一定程度的增殖,第3天增殖速度加快。生长的内细胞团可呈团状、条状、网状和混合型四种形态。混合型内细胞团分化出现较早,呈团状、条状和网状生长的内细胞团分化较晚。团状内细胞团一般在原位生长,而呈条状和网状生长的内细胞团增殖很快并迅速扩展到各处。滋养层细胞覆盖于未分化的内细胞团表面,剥离滋养层后,内细胞团迅速分化,说明滋养层具有保护兔胚内细胞团,减小外界环境对其诱发分化的作用。 展开更多
关键词 家兔 囊胚 饲养层 生长行为
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家兔桑椹胚和早期囊胚在饲养层表面的贴壁行为 被引量:7
14
作者 赖良学 郑瑞珍 +1 位作者 秦鹏春 孙方臻 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期161-165,共5页
探讨了不同状态家兔3日龄桑椹胚和4日龄囊胚在饲养层上的贴壁规律。结果表明,去除或保留透明带和胶膜的全胚贴壁最晚,离散胚在培养24h内即可贴壁,切割胚贴壁大多数发生于体外培养24~48h之间。离散胚和切割胚都可能在培养... 探讨了不同状态家兔3日龄桑椹胚和4日龄囊胚在饲养层上的贴壁规律。结果表明,去除或保留透明带和胶膜的全胚贴壁最晚,离散胚在培养24h内即可贴壁,切割胚贴壁大多数发生于体外培养24~48h之间。离散胚和切割胚都可能在培养12h后重新聚集成中空的亚囊胚结构。亚囊胚的贴壁过程是某一部位首先附着于饲养层表面,然后滋胚层铺展形成向下的拉力,使其全部贴壁。 展开更多
关键词 囊胚 桑椹胚 贴壁 饲养层
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小鼠胚胎成纤维细胞的分离和饲养层细胞的制备 被引量:14
15
作者 张学明 李德雪 +4 位作者 赖良学 李子义 文兴豪 杜惜明 曾发贵 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 1999年第9期5-6,共2页
通过实验确定分离小鼠胚胎成纤维细胞的最适胚龄,探讨小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的效果及其寿命。结果表明,从10 、11 d 小鼠胚胎所获的胚胎成纤维细胞中混有大量神经母细胞和红细胞;用14 、15 d 的胚胎则基本不能获得胚胎... 通过实验确定分离小鼠胚胎成纤维细胞的最适胚龄,探讨小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的效果及其寿命。结果表明,从10 、11 d 小鼠胚胎所获的胚胎成纤维细胞中混有大量神经母细胞和红细胞;用14 、15 d 的胚胎则基本不能获得胚胎成纤维细胞;消化3 ~4 个12 ~13 d 胚胎所获细胞悬液可接种8~9 个25 cm2 的培养瓶。从一只孕鼠的所有胚胎所获的成纤维细胞可接种约20 个25 cm2 的培养瓶。所获细胞悬液的活细胞百分率可达90% ,接种成活率达85 % 。胚胎成纤维细胞贴壁时间为5~6 h ,12 h 后进入增殖期,48 h 形成细胞单层。ES细胞克隆在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上形态典型、增殖迅速、不分化。饲养层寿命可维持2 ~3 周。 展开更多
关键词 胚胎成纤维细胞 饲养层 小鼠
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Wnt3a转基因基质细胞的建立及其对脐血CD34^+造血干/祖细胞扩增作用的研究 被引量:5
16
作者 师伟 韩姝 +8 位作者 李艳华 谢小燕 施双双 陈琳 白慈贤 闫舫 南雪 王韫芳 裴雪涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第9期835-841,共7页
Wnt信号通路在造血干/祖细胞自我更新的过程中发挥至关重要的作用.纯化的Wnt3a蛋白可以实现造血干/祖细胞的扩增.通过病毒转染原代小鼠骨髓基质细胞,建立转基因滋养层细胞.通过共培养对转基因滋养层细胞扩增CD34+造血干/祖细胞的作用进... Wnt信号通路在造血干/祖细胞自我更新的过程中发挥至关重要的作用.纯化的Wnt3a蛋白可以实现造血干/祖细胞的扩增.通过病毒转染原代小鼠骨髓基质细胞,建立转基因滋养层细胞.通过共培养对转基因滋养层细胞扩增CD34+造血干/祖细胞的作用进行了研究.实验结果显示,与普通滋养层加细胞因子组相比,经转基因滋养层加细胞因子组培养的CD34+造血干/祖细胞集落形成能力(CFC)是其(1.55±0.06)倍;混合集落形成能力是其(1.95±0.26)倍;高增殖潜能集落形成能力(HPP-CFC)是其(1.45±0.40)倍;LTC-IC活性是其(3.83±0.86)倍.结果表明,转基因滋养层细胞通过分泌具有天然活性的Wnt3a蛋白能在体外有效地扩增造血干/祖细胞的数量. 展开更多
关键词 WNT3A 滋养层细胞 造血干/祖细胞 扩增
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鸡胚胎干细胞的分离、培养和鉴定 被引量:21
17
作者 安静 杜立新 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第5期698-703,共6页
SNL cells(permanent line of irradiated mouse fibroblast cells), primary mice embryonic fibroblasts (PMEF) cells and primary chicken embryonic fibroblasts (PCEF) cells were respectively used as the feeder cells for chi... SNL cells(permanent line of irradiated mouse fibroblast cells), primary mice embryonic fibroblasts (PMEF) cells and primary chicken embryonic fibroblasts (PCEF) cells were respectively used as the feeder cells for chicken embryonic stem cell culture. The isolated blastoderm cells from the stage X embryos of chicken were cultured in Dulercco’s Modified Eagle Medium (DMEM) supplemented with leukemia inhibitory factor (LIF, 1 000 IU/ml), basic fibroblast growth factor (bFGF 10 ng/ml) and stem cell factor (SCF, 5 ng/ml). The alkaline phosphatase (AKP) test, differentiation experiment in vitro and chimeric chicken production were carried out. The resuts showed that culture on feeder layer of PMEF yielded high quality CES cell colonies. The shape of typical CES clone showed as follows: nested aggregation (clone) with clear edge and round surface as well as close arrangement within the clone. Strong positive AKP reactive cells were observed. On the other hand, the fourth passage CES cells could differentiate into various cells in the absence of feeder layer cells and LIF in vitro . The third and fourth passage cells were injected into the subgerminal cavity of recipient embryos at stage X. The manipulated embryos were incubated until hatching. Of 269 Hailan embryos injected with CES cells of Shouguang Chickens, 8 2% (22/269) survived to hatching, 3 feather chimeras had been produced, which suggests that an effective culture systems were established and it could promote the growth of CES cells and maintain them in an undifferentiated state . 展开更多
关键词 胚胎干细胞 饲养层 嵌合体 分离 培养
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影响体外培养兔胚发育和兔类ES细胞分离的若干因素 被引量:16
18
作者 赖良学 郑瑞珍 +1 位作者 秦鹏春 孙方臻 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1996年第1期16-21,共6页
本试验系统地比较了影响兔囊胚体外培养和免类ES细胞系分离的几个主要因素。结果表明,3种不同糖浓度(4.5,1.0,0.2g/L)在48h内对胚胎贴壁均无显著影响。在高糖DMEM中,早期胚胎内细胞团(innercell... 本试验系统地比较了影响兔囊胚体外培养和免类ES细胞系分离的几个主要因素。结果表明,3种不同糖浓度(4.5,1.0,0.2g/L)在48h内对胚胎贴壁均无显著影响。在高糖DMEM中,早期胚胎内细胞团(innercellmass,ICM)增殖速度最快,分化也快;超低糖组,ICM增殖缓慢,分化出现时间较晚;低糖组,ICM既能保持较快的增殖速度,又能维持较长时间的未分化状。高糖组和低糖组的ES细胞样集落的传代能力相似,可达6~7代,超低糖组中不超过2代。胰岛素能促进ICM的增殖,并可提高传代过程中ES细胞样克隆的形成率。在小鼠胚胎原代成纤维细胞(MEF)和一种经白血病抑制因子转化了的小鼠成纤维细胞系(SNL)上,ICM都能维持较快的增殖速度,在家兔胚胎原代成纤维细胞(REF)中ICM增殖较慢,无饲养细胞条件下,ICM存活率低,生长状况不佳。传代能力,REF要比MEF和SNL低,且主要形成上皮样集落。作者根据以上实验结果认为,用低糖DMEM为基本培养基,再加入胰岛素,在MEF或SNL上培养切割胚胎和连续传代的技术路线是较为可行的。 展开更多
关键词 ES细胞 葡萄糖 胰岛素 胚胎发育
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抗G418小鼠胚胎干细胞饲养层的制备 被引量:4
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作者 张梅英 李华 +5 位作者 董婉维 杨葳 汪瑛 秦英 王禄增 王太一 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期1-3,共3页
目的:建立具有G418抗性的 3T3细胞系,用于转染pTet on基因的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。方法: 通过脂质体转染的方法,将含有neo基因的质粒pWL/neo导入 3T3细胞中,利用G418的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,并对其进行PCR鉴定。... 目的:建立具有G418抗性的 3T3细胞系,用于转染pTet on基因的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。方法: 通过脂质体转染的方法,将含有neo基因的质粒pWL/neo导入 3T3细胞中,利用G418的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,并对其进行PCR鉴定。结果:经 500μg/ml的G418压力筛选后,获得了抗G418细胞克隆。抗性 3T3细胞的形态和生长速度与正常 3T3细胞没有差异,用特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA,可以扩增出对应的核苷酸片段,Southernblot鉴定结果表明neo基因片段已整合入G418抗性 3T3细胞中。结论:成功地培育了G418抗性的 3T3细胞,为进行pTet on基因转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选奠定了基础。 展开更多
关键词 3T3细胞 C418抗性 饲养层 胚胎干细胞
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小鼠胚胎干细胞饲养层培养体系的优化筛选 被引量:7
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作者 郭雨霁 高英茂 邴鲁军 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期437-441,共5页
目的 :建立小鼠胚胎干细胞饲养层培养体系。方法 :用 5种不同鼠胚成纤维细胞为饲养层 ,进行小鼠胚胎干细胞的分离培养 ,观察 5种饲养层培养体系对小鼠胚泡发育、内细胞团增殖及胚胎干细胞分离培养的作用。结果 :原代或冻存复苏后的原代... 目的 :建立小鼠胚胎干细胞饲养层培养体系。方法 :用 5种不同鼠胚成纤维细胞为饲养层 ,进行小鼠胚胎干细胞的分离培养 ,观察 5种饲养层培养体系对小鼠胚泡发育、内细胞团增殖及胚胎干细胞分离培养的作用。结果 :原代或冻存复苏后的原代培养鼠胚成纤维细胞用于制备饲养层 ,有利于胚泡的贴壁、孵化 ,内细胞团增殖形成巢式生长集落 ,离散后培养 ,可以观察到胚胎干细胞集落的出现 ,并可在短期内维持胚胎干细胞的正常形态 ,不发生分化 ,与其他三组有明显差异。结论 展开更多
关键词 小鼠 胚胎干细胞 饲养层 培养体系 优化筛选
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