mecA、femA基因PCR联合扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的 探讨 m ec A、fem A基因 PCR联合扩增快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA )的敏感性及特异性。方法 用纸片扩散法及 m ec A、fem A基因 PCR联合扩增检测 178株葡萄球菌中的 MRSA,并与琼脂稀释法的结果比较。结果 纸片扩散法筛检 MRSA (耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 ,MRCNS)的敏感性、特异性分别为 94 .4 % (89.5 % )、92 .4 % (73.7% )。在金黄色葡萄球菌中若以 mec A基因阳性为判定 MRSA的指标 ,则敏感性、特异性分别为 91.7%、95 .5 %。在 178株葡萄球菌中若以 mec A、fem A基因阳性作为判定 MRSA的指标 ,特异性提高到 97.9%。结论 PCR m ec A、fem A基因联合扩增既可用于筛检 MRSA,又可免去常规生化鉴定 ,具快速。

实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌femA表达水平

目的探讨实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌femA表达的方法。方法以BB270femA基因表达为标准,建立实时荧光定量PCR方法,对实验菌株femA表达进行相对定量。结果建立的实时荧光定量PCR方法所得结果标准曲线线性关系好,熔解峰单一。随MIC变化,金黄色葡萄球菌femA表达水平也随之变化。结论用实时荧光定量PCR方法研究金黄色葡萄球菌femA表达量结果可靠、敏感、重复性好。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌femA调控基因的研究

目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的辅助基因femA是否存在调控基因,以进一步揭示其耐药机制。方法用最低抑菌浓度法(MIC)筛选对苯唑西林高耐株、低耐株、敏感株;用头孢色芬纸片法(Nitrocephin)筛选出不产β-内酰胺酶菌株;用PCR筛选出含mecA的菌株。将含mecA不产酶的高耐株、低耐株、敏感株纳入进一步研究中;PCR扩增femA及femA5?上游基因;提取细菌总蛋白;生物素标记DNA探针;滞留电泳检测调控基因。结果滞留电泳检测对苯唑西林高度耐药不产β-内酰胺酶含mecA基因菌株均出现滞留条带。结论耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的辅助基因femA有调控基因存在。

复方“连黄”对金黄色葡萄球菌耐药基因femA的影响

采用聚合酶链式反应（PCR）扩增金黄色葡萄球菌耐药基因femA；通过耐药基因失活试验，研究了中药复方“连黄”对金黄色葡萄球菌耐药基因femA的影响，探讨了中药“连黄”降低金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类药物耐药性的作用机理。结果显示，中药“连黄”作用前后金黄色葡萄球菌的耐药基因femA在23～72碱基区发生较大改变，对应的氨基酸序列也发生改变，从而导致femA基因失活。

多重PCR在诊断慢性上颌窦炎耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的作用

目的 设计慢性上颌窦炎中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的快速检出方法。方法 利用多重聚合酶链反应 (MPCR)技术 ,同时检测同一DNA模板中的金黄色葡萄球菌耐药基因mecA及金黄色葡萄球菌固有的femA基因。结果 femA基因为金黄色葡萄球菌的特有基因 ,mecA基因在MRSA中检出率为 96 .2 %(5 1/ 5 3例 )。结论 MPCR方法能快速准确地鉴定MRSA。

实时荧光环介导等温扩增快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的建立与评价

目的 建立实时荧光环介导恒温扩增(Rea-LAMP)快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法。方法 针对葡萄球菌的mec A耐药标志性基因和SA特有的fem A基因的6个区域设计6条特异性引物,对MRSA、MSSA以及其他菌株等19株标准菌株的全基因组DNA进行Rea-LAMP,评价这些标准菌株的特异性、灵敏度和重复性;根据这些标准菌株的特异性,用Rea-LAMP反应体系检测临床分离的68株金黄色葡萄球菌(SA)菌株,并与VITEK2 Compact全自动微生物分析仪鉴定结果进行比较。结果 本研究体系的引物扩增效果好,无引物二聚体,在19株标准菌株的检测中,除了MRSA和MSSA有相应的反应曲线外,其余菌株均为阴性;本体系的灵敏度可达1μg/L,68株临床SA菌株检测结果与VITEK2 Compact全自动微生物分析仪鉴定结果一致。结论 Rea-LAMP反应体系检测MRSA特异性强、稳定性好、灵敏度高、操作简单快捷,可用于MRSA的快速检测。

His-FemA融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达

目的构建His标签的金黄色葡萄球菌甲氧西林耐药相关蛋白FemA的融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌中表达,为进一步研究femA基因的生物学功能和临床应用奠定基础。方法根据GenBank中金黄色葡萄球菌femA基因序列,利用Primer Premier 5.0设计PCR引物,并在引物的5'加入BamHI及SalI酶切位点;以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模版,PCR扩增出femA基因片段。将目的 DNA片段及质粒pQE30分别进行双酶切、连接并转化大肠埃希菌DH5α;阳性克隆以PCR、双酶切及测序进行鉴定。将鉴定正确的pQE30-femA重组质粒转化大肠埃希菌JM109,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达His-femA融合蛋白;采用SDS-PAGE及Western blot分析对表达蛋白进行验证。结果经PCR、双酶切鉴定及序列测定,证实重组质粒pQE30-femA构建成功;重组质粒pQE30-femA转化大肠埃希菌JM109经IPTG诱导后,SDS-PAGE和Western blot分析显示表达出53 kD目的蛋白;经Bandscan软件分析,目的蛋白质在4 h的表达量占细胞总蛋白的27.5%。结论成功构建了His-FemA原核表达载体(pQE30-femA),并在大肠埃希菌中高效表达。

慢性上颌窦炎患者耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测与耐药性研究

目的 :研究慢性上颌窦炎患者耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的分布和对常见抗菌药物的耐药情况。方法 :采用多重聚合酶链反应 (PCR)同时检测金葡菌的耐药基因 mec A及辅助基因 fem A ;药敏试验采用纸片扩散法。结果 :fem A基因为金葡菌的特有基因 ,mec A基因在 MRSA中检出率为 96 .2 % (5 1/ 5 3)。 MRSA除对万古霉素敏感外 ,对其它抗菌药物都有耐药。结论 :多重 PCR能快速而准确地鉴定 MRSA;MRSA对多种抗菌药物有耐药性。