MRSA中mecA及femB基因的检测与耐药相关性

研究femB、mecA基因在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的表达与耐药的关系。运用PCR对MRSA的femB、mecA基因进行检测,MRSA耐药检测采用头孢西丁纸片法。40株金黄色葡萄球菌(下简称金葡菌)通过头孢西丁纸片法,检出30株耐头孢西丁的菌株,通过PCR检测这40株金葡菌mecA基因,30株MRSA全部为阳性,femB基因在30株MRSA中全部表达,而甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)的未表达。结果可见,PCR能快速准确地鉴定MRSA,mecA基因是MRSA的耐药基因,femB基因是MRSA的耐药相关基因。

金黄色葡萄球菌甲氧西林耐药辅助基因femB的克隆和原核表达

金黄色葡萄球菌femB基因与甲氧西林高水平耐药密切相关,可能成为开发抗MRSA药物的新靶位.以金葡菌基因组DNA为模板,PCR扩增femB全长基因,所得片段与pGM-T载体连接并转化感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆以PCR、双酶切及测序鉴定.将鉴定正确的目的片段定向克隆到pGEX-4T-1表达载体中,转化至大肠杆菌BL21后经IPTG诱导表达GST/FemB融合蛋白;采用SDS-PAGE及Western blot对融合蛋白进行鉴定.结果显示,重组质粒在宿主菌中获得了高效表达,融合蛋白相对分子质量为75 kD,该融合蛋白可与抗GST-tag抗体特异结合;表明femB基因的原核表达系统构建成功,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.