缺铁性贫血孕妇血清可溶性转铁蛋白受体、膜铁转运蛋白1、对氧磷酶1表达水平及检测意义

目的:探讨可溶性转铁蛋白受体(sTfR)、膜铁转运蛋白1(FPN1)、对氧磷酶1(PON1)在缺铁性贫血(IDA)孕妇中的表达及意义。方法:选取IDA孕妇182例为IDA组,根据IDA严重程度将IDA组分为轻度组(80例)、中度组(61例)和重度组(41例),另选取同期健康孕妇73例为健康对照组。比较各组孕妇血清sTfR、FPN1、PON1水平。比较IDA组和健康对照组贫血相关指标。分析血清sTfR、FPN1、PON1水平与血红蛋白(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、血清铁蛋白(SF)水平的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清sTfR、FPN1、PON1对孕妇IDA的诊断价值。记录所有孕妇不良结局发生情况,根据最终母婴结局将所有研究对象分为母婴结局正常组(179例)和母婴结局不良组(76例)。比较不同母婴结局孕妇血清sTfR、FPN1、PON1水平。结果:与健康对照组比较,IDA组sTfR、FPN1水平升高,PON1水平降低(均P<0.05)。IDA组Hb、MCV、SF水平低于健康对照组(均P<0.05)。血清sTfR、FPN1与Hb、MCV、SF呈负相关,PON1与Hb、MCV、SF呈正相关(均P<0.05)。血清sTfR、FPN1、PON1对孕妇IDA均有一定诊断效能,且联合检测诊断价值更高(均P<0.05)。重度组血清sTfR、FPN1水平高于轻度和中度组,PON1水平低于轻度和中度组(均P<0.05)。与健康对照组比较,IDA组母婴不良结局总发生率更高(P<0.05)。与母婴结局正常组比较,母婴结局不良组血清sTfR、FPN1水平升高,PON1水平降低(均P<0.05)。结论:血清sTfR、FPN1、PON1在IDA孕妇中均呈异常表达,三者联合检测对IDA诊断效能较高,且与IDA严重程度和母婴结局有关。

酿酒酵母转录因子Ask10p的研究进展

酿酒酵母的转录因子Ask10p又称Rgc2p,作为RNA聚合酶II全酶的一个组分参与调节氧化应激反应,还可以作为水甘油通道蛋白Fps1p的正调节因子调节胞内渗透压平衡,近年来随着研究的不断深入,Ask10p已被证实在氧化应激、渗透压胁迫、热激胁迫和木糖代谢等方面发挥重要的调节作用,本文将概述Ask10p在酿酒酵母中的生物学功能及研究进展,并对其未来研究提出展望,以期为今后的研究提供理论参考。

Nrf2/FPN1介导的铁稳态通路在有氧运动预防小鼠肝胰岛素抵抗中的作用

目的:探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)/膜铁转运蛋白1(FPN1)介导的铁稳态通路在有氧运动预防小鼠肝胰岛素抵抗中的调控作用。方法:40只5周龄SPF级C57BL/6雄性小鼠,随机分安静对照组(NC组)、跑台运动组(NE组)、安静高脂组(HC组)、高脂+跑台运动组(HE组),每组10只。NC和NE组每日基础饲料喂养(AIN-93G),HC和HE组喂养60%kcal SPF级高脂模型饲料,均自由进食。NC组和HC组不运动,NE和HE组进行跑台运动,5 d/w,60 min/d,坡度为0,第1~2周速度为13 m/min,每两周速度递增1 m/min,第13~14周速度为19 m/min。14周干预结束后测小鼠体脂含量,血糖及口服葡萄糖耐量试验。麻醉灌流后取材,肝切片进行HE染色,观察脂肪样变。ELISA检测血清铁蛋白(SF)、胰岛素(INS)、肝线粒体8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、4-羟基壬烯醛(4-HNE)。比色法测定肝糖原、甘油三酯(TG)、非血红素铁、血清铁(SI)含量。采用免疫共沉淀法(Co-IP)检测Nrf2与Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)结合量。Western blot检测肝FPN1、肝铁调素(hepcidin)、胰岛素受体(IR)、葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)、铁蛋白重链(FTH1)、铜蓝蛋白(CP)、细胞核Nrf2的表达量。结果:(1)运动可降低小鼠肝胰岛素抵抗(P<0.01),高脂显著增加胰岛素抵抗(P<0.01),有氧运动和高脂膳食对小鼠肝胰岛素抵抗的影响具有交互作用(P<0.01)。(2)运动可降低小鼠血清铁蛋白和肝铁含量(P<0.01),有氧运动和高脂膳食对血清铁蛋白(SF)、肝铁含量的影响具有交互作用(P<0.01)。(3)运动可降低小鼠肝线粒体8-OHdG和4-HNE(P<0.01),高脂增加8-OHdG和4-HNE(P<0.01),高脂和运动对8-OHdG和4-HNE的影响具有交互作用(P<0.01)。(4)运动增加肝FPN1、CP、IR、FTH1、GLUT2表达量(P<0.01),降低Nrf2/Keap1结合量(P<0.01),运动和高脂对FPN1、IR、Nrf2/Keap1结合量的影响具有交互作用(P<0.01)。结论:14周高脂膳食诱发小鼠肝胰岛素抵抗,有氧运动明显改善肝胰岛素抵抗。运动通过增加细胞核内Nrf2,调控FTH1、FPN1表达,减少肝脏铁储存,减轻肝过氧化损伤和脂质沉积,增加胰岛素受体和葡萄糖转运载体,促进葡萄糖摄取和储存,缓解胰岛素抵抗。Nrf2/FPN1介导的铁稳态通路在运动改善由高脂引发的肝胰岛素抵抗中发挥重要作用。

SAE1与SAE2蛋白相互作用肽抑制剂的多种体外筛选体系的构建与评价

目的·构建用于发现小泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)的活化酶亚基1(SUMO-activating enzyme subunit 1,SAE1)与亚基2(SUMO-activating enzyme subunit 2,SAE2)相互作用的肽抑制剂的多种体外筛选体系,并对不同筛选体系的优势与不足进行评价。方法·将编码SAE1和SAE2的目的基因分别插入pET-28a载体以构造原核蛋白表达质粒,在大肠埃希菌中表达并纯化人源SAE1和SAE2蛋白;利用纯化的蛋白先后构建等温滴定量热检测(isothermal titration calorimetry,ITC)实验、荧光偏振(fluorescence polarization,FP)实验、表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)实验和基于SAE酶活的荧光实验等多种筛选体系。尝试利用不同的筛选体系检测候选多肽的抑制活性,基于检测结果,从灵敏度、稳定性、检测通量和检测成本等维度评价各筛选体系的优缺点与适用性。结果·经ITC测得SAE1和SAE2蛋白在体外相互作用的解离常数(K_(d))为0.96μmol/L,并将活性最好的多肽PEPT7改造为FP实验的示踪剂(tracer),但同SAE2的亲和力无法满足FP的要求;SPR测得SAE1和SAE2相互作用的K_(d)值为1.13μmol/L,与ITC数据接近;基于SAE酶活的荧光实验筛选得到抑制活性最强的多肽HP1B[半数抑制浓度(half-maximalinh ibitory concentration,IC_(50))达15.72μmol/L],SPR进一步确定其同SAE1的亲和力为34.4μmol/L。结论·尝试构建并比较了多种常见的蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)抑制剂的筛选体系。其中,ITC的检测通量低,且难以准确评估结合热不显著的低亲和力多肽;FP体系的可行性高度依赖于示踪剂同靶点蛋白之间的强亲和力,同样无法用于低亲和力多肽的筛选与优化;SPR检测的灵敏度高,但检测成本较高;酶活实验兼具高灵敏度、稳健性、高通量和可接受的检测成本,是最适宜的筛选方法。

膜铁转运蛋白Ferroportin1的研究进展

膜铁转运蛋白Ferroportin 1(2 0 0 0年发现 )在细胞铁的输出中起重要作用。它在成熟的十二指肠绒毛上皮细胞基底面、脾和肝的巨噬细胞、胎盘的合体滋养层细胞等都有表达。经序列分析显示Ferroportin 1具有十个跨膜结构域、一个还原酶位点和一个基底定位信号位点。此外 ,Ferroportin1mRNA转录在 5’非翻译区包含一个铁反应元件。本文对Ferroportin 1的目前研究进行了综述 ,并阐述了其医学应用前景。

肥胖对小鼠十二指肠DMT1和FPN1表达的影响

目的观察肥胖对小鼠十二指肠二价金属离子转运体(divalent metal transporter 1,DMT1)mRNA、膜铁转运蛋白(ferroportin1,FPN1)mRNA及蛋白表达的变化,探讨肥胖影响铁吸收的机制。方法 C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组和肥胖模型组,每组6只,通过喂养高脂饲料喂养建立肥胖模型,对照组采用普通饲料饲养,实验干预期14周。建模完成后,采用实时荧光定量PCR方法检测小鼠十二指肠DMT1、FPN1 mRNA的表达,用Western blot检测小鼠十二指肠FPN1蛋白表达。结果与对照组小鼠相比,肥胖模型组小鼠十二指肠DMT1、FPN1mRNA表达以及FPN1蛋白表达水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论肥胖会下调机体十二指肠DMT1、FPN1的表达,导致铁吸收不良,为进一步研究肥胖引起铁缺乏机制提供理论和实验依据。

铁调素对小鼠单核细胞RAW264.7膜铁转运蛋白1(FPN1)表达的影响

目的观察铁调素对小鼠单核细胞RAW264.7膜铁转运蛋白1(FPN1)的表达,探讨铁调素对RAW264.7细胞作用的可能通路和机制。方法将不同浓度的铁调素加入含有核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的RAW264.7细胞培养基,24h后用免疫荧光和Western-blot方法测定FPN1的表达,共聚焦显微镜(CLSM)测定细胞内铁离子的浓度。结果 RAW264.7细胞膜上存在FPN1受体的阳性表达;在本实验铁调素浓度干预范围内,FPN1的表达随着铁调素浓度的增加呈浓度依赖性降低(P<0.05),同时细胞内铁离子的含量随着铁调素浓度的增加呈浓度依赖性增加(P<0.05)。结论小鼠单核细胞RAW264.7是铁调素作用的靶细胞,铁调素可通过降解其细胞膜上的FPN1增加细胞内的铁离子。

PV_1、B.fp在不同水样及温度条件下的灭活动力学

研究了脊髓灰质炎病毒 (Poliovirus1,PV1)、脆弱拟杆菌噬菌体 (bacteriophageinfectingBacteroidesfragilis,B .fp)在不同水样 (自来水、超纯水、闽江水、生活污水和滤膜过滤除菌生活污水 ) ,不同温度 (4℃、2 0℃、35℃ )条件下的灭活动力学 .结果显示 :温度是导致病毒灭活的重要因素 ,温度升高 ,病毒灭活速率加快 .同时 ,某些水质因子也明显影响病毒的灭活 .实验结果还表明 ,在任一灭活实验条件下 ,B .fp的灭活速率都比PV1低 ,表明B .fp是一个更合适的用于指示水体病毒污染程度与灭活效率的指示生物 .图 4表 2参 2

pEGFP/A_2M(FP_6)转染神经干细胞海马移植治疗APP/PS1双转基因AD小鼠的实验观察

目的:携带pEGFP/A2M(FP6)的神经干细胞(NSCs)定向移植到APP/PS1双转基因AD小鼠海马内,观察移植细胞的分化、迁移,脑内Aβ沉积的变化,以及对AD小鼠学习记忆功能的影响。方法:APP/PS1转基因AD小鼠分为假手术(SO)组、人工脑脊液(ACSF)组、转染pEGFP的NSCs(pEGFP-NSCs)组及转染pEGFP/A2M(FP6)的NSCs(pEGFP/A2M(FP6)-NSCs)组,移植物小鼠海马CA1区定位注射,水迷宫实验检测小鼠认知功能,免疫组化观察小鼠脑内移植细胞的分化、迁移及Aβ病理变化。结果:pEGFP/A2M(FP6)-NSCs组和pEGFP-NSCs组转基因小鼠逃避潜伏期较SO组及ACSF组显著缩短(P<0.05);pEGFP/A2M(FP6)-NSCs组转基因小鼠逃避潜伏期较pEGFP-NSCs组缩短(P<0.05)。pEGFP/A2M(FP6)-NSCs组和pEGFP-NSCs组转基因小鼠海马及皮质内,部分Aβ染色阳性斑块周围可见表达EGFP的移植细胞。pEGFP/A2M(FP6)-NSCs组转基因小鼠额叶、海马区域,Aβ染色阳性斑块数量和平均面积均较其他3组显著减少(P<0.05)。移植的NSCs,部分细胞Nestin染色呈阳性,部分细胞GFAP染色呈阳性,少数细胞MAP-2染色呈阳性。结论:移植pEGFP/A2M(FP6)NSCs到APP/PS1双转基因AD小鼠海马,可减少AD小鼠脑内Aβ斑块沉积,部分移植的NSCs分化为神经元及星形胶质细胞,小鼠的学习记忆功能显著改善。

孕晚期母亲铁状态对胎盘ferroportin1表达的影响

目的研究孕晚期母亲不同铁营养状态下胎盘ferroportin1(FP1)的蛋白定位、蛋白表达及其mRNA的表达。方法临床选择不同铁营养状态的孕妇,收集分娩时的胎盘。采用免疫组织化学方法测定FP1蛋白的定位,Western Blot测定蛋白表达量的变化,采用实时定量RT-PCR测定mRNA表达。结果FP1蛋白主要表达在人足月胎盘的合体滋养细胞(STB)胞浆;母亲不同铁营养状态下胎盘FP1蛋白和mRNA的表达均无明显变化。结论孕晚期胎盘FP1蛋白和mRNA的表达不受孕妇铁状态的影响。

大鼠ferroportin 1过表达慢病毒载体构建及其转染PC12细胞

目的:构建含大鼠ferroportin 1(FP1,膜铁转运蛋白1)基因和EGFP(绿色荧光蛋白)基因的过表达慢病毒载体并转染PC12细胞。方法:化学合成含有目的基因FP1的质粒,将酶切获得的目的基因连接入线性化慢病毒载体,构建重组质粒PGC-FU-FP1并进行测序鉴定;鉴定正确的阳性克隆采用Lipofectamine2000转染293T细胞,通过荧光显微镜和Western Blot检测FP1表达情况;在脂质体介导下将PGC-FU-FP1、pHelper1.0和pHelper2.0三质粒系统共转染入293T细胞,包装产生慢病毒,并通过实时荧光定量PCR法检测病毒滴度。以重组慢病毒载体质粒PGC-FU-FP1转染PC12细胞,荧光显微镜下观察EGFP的表达,实时荧光定量PCR和Western Blot法分别检测FP1mRNA和蛋白表达情况。结果:FP1基因序列经测序后与GeneBank报道的序列完全一致;重组质粒PGC-FU-FP1中携带有正确的FP1基因并能在293T细胞中表达;病毒滴度为2×108TU/ml。荧光显微镜、实时荧光定量PCR和Western Blot法证实目的基因FP1能被重组慢病毒高效导入PC12细胞并得到过表达。结论:成功构建携带FP1基因的慢病毒载体,并获得FP1基因修饰的PC12基因工程细胞。为进一步研究FP1在帕金森病中的作用及基因治疗奠定基础。

FP1株番鸭源禽Ⅰ型副粘病毒抗原性分析

为明确FP1株番鸭源禽I型副粘病毒强毒与鸡新城疫强毒标准株F48E9之间的抗原性差异,本研究通过交互血凝抑制试验、血清交叉中和试验及雏番鸭免疫攻毒保护试验比较了FP1株番鸭源禽I型副粘病毒强毒与鸡新城疫强毒标准株F48E9之间的抗原性。结果显示同源阳性血清对病毒的血凝抑制效价比异源阳性血清对病毒的血凝抑制效价高2.66～4个滴度;两者之间的抗原相关值R为0.35;对于5日龄经肌注途径免疫接种1羽份量La Sota弱毒疫苗14 d后的雏番鸭,以FP1株番鸭源禽1型副粘病毒强毒、鸡新城疫强毒标准株F48E9分别攻击后,其保护指数分别为54.5、92.9。以上结果表明,FP1株番鸭源禽1型副粘病毒与鸡新城疫强毒标准株F48E9存在较明显的抗原性差异,为鸭副粘病毒病疫苗的研制和该病的防控提供了依据。

基于FP1-C24型松下PLC四层电梯的设计

随着科学技术和社会经济的发展,高层建筑已成为现代城市的标志。电梯成为输送人流和物流的交通工具。目前,电梯控制系统主要有3种:继电器控制系统、微机控制系统、PLC控制系统。国内20世纪七八十年代的电梯采用继电器控制系统,可靠性和安全性低,线路复杂。微机控制系统虽然在智能控制方面功能强,但抗干扰性差,设计复杂,维修难。自从80年代后期,PLC控制系统在电梯中得到广泛应用,PLC又称可编程控制器,是以微处理器为基础,综合了计算机技术与自动化技术而开发的新一代工业控制器。它可靠性高,线路简化,维修简单,成为电梯控制中常用的控制方式。该文以松下FP1-C24型PLC为例,对四层电梯控制系统的硬件和软件系统进行了设计,并编制了PLC控制程序,实现了对电梯的上行、下行、呼梯等功能。

FP-1装置铝套筒内爆动力学过程的一维磁流体力学模拟

作为一种重要的柱面会聚冲击和准等熵压缩加载源,磁驱动固体套筒内爆技术已广泛应用于高能量密度物理实验研究.针对FP-1装置驱动的固体套筒内爆动力学过程,建立了含强度的一维磁流体力学模型,并对典型实验进行了模拟.计算获得的套筒内爆速度同实验结果较为相符.模拟结果显示,该装置在40 kV充压条件下,可以将直径3 cm,厚0.5 mm的铝套筒加速至1.1 km/s,内壁速度超过1.5 km/s,同时保持大部分材料为固体状态.内爆套筒与相同材料靶筒碰撞产生的冲击压力约9 GPa.改变靶筒内部填充气体的压力,可以获得不同的靶筒运动速度、轨迹以及反弹半径,以满足不同类型实验的研究需要.

基于FP1-C40的稀油润滑站电控系统改造

针对继电器-接触器控制系统元件多、线路杂、故障率高等特点,提出了基于现有松下FP1-C40 PLC的稀油润滑站电控系统改造方案,增强了系统安全联锁、自动控制和报警等功能。实践表明,该方案改造周期短、成本低,故障率降低53.33%。

肥胖对小鼠肝脏铁代谢调控分子hepcidin、lipocalin-2和ferroportin-1表达的影响

目的通过建立高脂饮食诱导的肥胖动物模型,观察肥胖对小鼠肝脏中铁代谢相关调控分子铁调素（hepcidin）、脂质运载蛋白-2（lipocalin-2,LCN2）和膜铁输出蛋白-1（ferroportin-1,FPN1）mRNA及蛋白表达的变化,初步探讨肥胖影响肝脏铁代谢相关分子表达调控的机制。方法将4-6周龄C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组和膳食诱导的肥胖模型组,每组10只,对照组给予正常饲料喂养,肥胖组给予高脂饲料喂养,实验饲喂周期为15周。建模成功后取小鼠肝脏,采用实时荧光定量PCR法检测小鼠肝脏中铁代谢相关调控分子hepcidin、LCN2和FPN1 mRNA的表达,并应用Western Blot法检测小鼠肝脏LCN2和FPN1蛋白的表达。结果与对照组小鼠比较,肥胖模型组小鼠肝脏hepcidin mRNA表达水平显著升高,差异具有统计学意义（P〈0.05）,而LCN2和FPN1mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义（P〉0.05）。结论肥胖可以显著上调小鼠肝脏hepcidin的表达,而对肝脏铁代谢相关调控分子LCN2和FPN1的表达并无显著影响。故还不能够认为肥胖可以影响肝脏铁代谢调控分子lipocalin-2和ferroportin-1的表达,进而导致细胞摄取及释放铁的能力发生障碍,使得机体对铁的需求不能满足要求,出现铁代谢功能紊乱,导致肥胖性铁缺乏的发生,而是通过上调肝脏hepcidin表达直接或间接影响其他铁代谢相关调控分子或者存在更为复杂的调控机制,这仍需我们进一步的实验研究及探索。这也为进一步研究肥胖对肝脏铁代谢相关调控分子表达的影响及引起铁缺乏的机制提供了理论和实验基础。

6-OHDA所致帕金森病模型大鼠黑质FP1基因表达及启动子甲基化状态变化

目的研究6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致帕金森病(PD)模型大鼠黑质膜铁转运蛋白1(FP1)基因表达及其启动子甲基化状态的变化。方法采用6-OHDA单侧损毁大鼠内侧前脑束(MFB),免疫组化方法观察脑黑质区酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元细胞存活情况,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测黑质区FP1mRNA表达的变化,甲基化特异性PCR(MSP)检测FP1基因启动子区甲基化状态的变化。结果 6-OHDA单侧损毁大鼠MFB后,与未损毁侧及对照组相比,损毁侧中脑黑质区TH阳性细胞显著减少(t=20.619、18.404,P<0.01),FP1表达下调(t=8.123、7.609,P<0.01);与对照组相比,实验组注射侧FP1基因启动子区甲基化阳性率增高,差异有显著性(χ2=20.0,P<0.01)。结论 6-OHDA所致PD大鼠模型中黑质FP1基因表达降低,该基因启动子区甲基化可能参与FP1的表达下调。

基于FP1-C24型PLC交通信号灯的设计

随着社会的发展,城市交通控制系统越来越受到关注,交通信号灯的控制是城市交通监控系统中的重要组成部分。可编程控制器(简称PLC)是一台计算机,是专为工业应用设计制造的计算机,它可靠性高,编程简单,使用方便,用PLC来控制城市交通信号灯工作可靠,解决了交通管理部门需要解决的重要问题。

FP1-75型分配器主要故障及解决办法

东方红-75、铁牛-55等拖拉机均采用分置式液压悬挂系统,其工作状态的调节通过操纵FP1-75型分配器手柄来实现,如出现故障,直接影响悬挂系统的正常工作.