siRNA干扰对变形链球菌耐氟菌ffh基因产酸能力的影响

目的:探讨变形链球菌耐氟菌(UA159-FR)ffh基因siRNA干扰后对产酸能力的影响。方法:电穿孔法将siRNA转入UA159-FR与ffh基因序列靶向位点结合,将干扰前后细菌分别加入BHI培养液,含5%糖类的葡萄糖、蔗糖、乳糖、淀粉中培养,pH调至7.5,24h后测终末pH。结果:转染结果成功;干扰前后不同糖培养基中变形链球菌耐氟菌ffh基因对产酸有显著差异(P<0.05);干扰前后在常规、葡萄糖、及乳糖中差异极显著(P<0.01);蔗糖中差异显著(P<0.05);淀粉中无显著差异。结论:变形链球菌耐氟菌中基因ffh对产酸能力影响显著。

犊牛瘤胃干酪乳杆菌分离鉴定及其耐酸相关基因ffh的克隆

利用乳酸杆菌分离培养基(SL)对犊牛瘤胃内的乳酸杆菌进行分离,对分离出的乳酸杆菌进行革兰氏染色、生化反应及16S rRNA同源性分析鉴定。对分离鉴定的干酪乳杆菌提取其基因组,根据Genbank发表的干酪乳杆菌耐酸相关基因(ffh基因)设计1对引物进行PCR,利用pMD18-T载体进行克隆,构建重组质粒,进行PCR及测序鉴定,获得耐酸基因ffh,为下一步研制瘤胃微生态制剂及构建瘤胃内耐酸的乳酸分解基因工程菌奠定了基础。

干酪乳杆菌中耐酸相关基因ffh的检测及克隆

目的 :检测干酪乳杆菌中是否存在耐酸相关基因ffh并对其克隆测序。方法 :厌氧培养干酪乳杆菌 ,碱裂解法提取细菌基因组 ,根据耐酸相关基因ffh的同源性 ,从最保守区设计一对引物进行PCR ,利用 pGEM -T载体进行T -A克隆 ,构建重组质粒 ,酶切电泳 ,并测序鉴定。结果 :PCR获得耐酸相关基因ffh部分片段 ,重组质粒含有其目的片段。结论 :干酪乳杆菌中存在耐酸相关基因ffh。

变形链球菌耐氟菌ffh基因siRNA干扰序列的筛选鉴定

目的筛选鉴定变形链球菌耐氟菌(UA159-FR)ffh基因的siRNA干扰序列。方法设计合成4段21bp的核酸[1],利用电穿孔方法转入UA159-FR使其与ffh基因序列靶向位点结合。通过RT-PCR和Real-time PCR技术验证靶向沉默ffh基因的效果,筛选出最佳siRNA干扰序列。结果倒置显微镜观察细菌电转效果正常。转染12h内除siRNA1外其他3对siRNA都可以抑制ffh基因的表达,而在转染超过12h达到24h后,只有siRNA2可以更稳定的抑制ffh基因的表达。结论 siRNA干扰技术可以有效的沉默UA159-FR的ffh基因,siRNA2在沉默过程中效果较稳定。

变形链球菌耐氟菌株中耐酸相关基因ffh突变的检测

目的检测变形链球菌耐氟菌株中耐酸相关基因ffh是否存在突变。方法体外诱导变形链球菌耐氟菌株,碱裂解法提取细菌基因组,根据GenBank上公布的变形链球菌耐酸相关基因ffh的序列,设计一对引物进行PCR,利用PGEM-TEasy载体进行T-A克隆,构建重组质粒,酶切电泳,并测序鉴定。结果变形链球菌耐氟菌株中耐酸相关基因ffh发生了突变。结论变形链球菌耐氟菌株中耐酸相关基因ffh发生了突变,并可能与其耐酸性增强有关。

耐酸相关基因ffh的研究进展

耐酸性被认为是致龋菌在牙的生物膜上生存的一个重要决定因素。目前已分离、测序并克隆了几个相关基因。本文主要对 ffh耐酸相关基因的结构、功能和可能的作用机制等方面作一综述。

ffh基因沉默对变形链球菌耐氟菌株耐酸性的影响

目的 ：分析ffh基因沉默对变形链球菌耐氟菌株体外耐酸能力的影响。方法 ：利用电穿孔法,将si RNA转入UA159-FR,使其与ffh基因靶向位点结合,筛选出含ffh基因沉默的变形链球菌耐氟菌株,与UA159-FR的标准菌液分别在不同p H值（以0.5为间隔,p H为3.5~7.5）的BHI液体培养基中37℃微需氧（95%N2、5%CO2）培养24 h,离心,采用p H计测定培养物上清的终末p H值;5 m L生理盐水稀释细菌沉淀,用紫外分光光度计测定600 nm处的吸光度,采用SPSS 17.0软件包对所得数据进行统计学分析。结果：原菌株UA159-FR与ffh基因沉默的变形链球菌UA159-FR相比,Δp H差异显著（P〈0.05）,且前者高于后者。两者比较p H=3.5~5.0时,OD600有显著差异（P〈0.01）;p H=5.5~7.5时,OD600有显著差异（P〈0.05）,且两者生长趋势相似。结论：ffh基因沉默对变形链球菌耐氟菌株的耐酸性有一定影响。

血链球菌和变形链球菌耐酸相关基因ffh的同源性分析

目的根据耐酸相关基因ffh同源性高的特点,检测血链球菌中是否存在耐酸相关基因ffh,并对血链球菌和变形链球菌的同源性进行分析。方法厌氧培养变形链球菌和血链球菌,碱裂解法提取细菌基因组,根据GenBank基因库上发表的各种属ffh基因序列,从最保守区设计一对聚合酶链反应(PCR)引物,钓取基因,进行PCR。结果在以变形链球菌和血链球菌基因组为模板的PCR中,所获得的特异性片段与预期结果一致。结论血链球菌中存在耐酸相关基因ffh,且血链球菌和变形链球菌耐酸相关基因ffh同源性高。

不同pH值对变异链球菌ffh基因表达的影响

目的检测变异链球菌（S.mutans）劬基因在不同pH值条件下的表达水平，分析pH值对S.mutansffh基因表达的影响，分析调控锄表达的因素。方法在不同培养时段（4h和18h）和不同PH值（pH值4.0-7．0）条件下培养S.mutans标准菌株UA159，提取样本，用荧光定量聚合酶链反应（qRT—PCR）法检测样本中目的基因fm的mRNA转录水平的变化情况，分析S.mutansffh基因在不同培养时段和pH值条件下的表达变化趋势。结果培养4h时，胁基因相对表达量随着pH值的降低而减少，培养18h时，ffh基因相对表达量随着pH值的降低而增加；相同pH值条件下。ffh基因相对表达量在培养4h与18h时的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论S.mutansffla基因的表达受细菌培养时段和pH值的影响。