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慢病毒介导Fg12基因沉默技术对自身免疫性心肌炎大鼠Th1/Th2漂移及Th17/Treg平衡的影响 被引量:2
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作者 张晶晶 刘婕 +3 位作者 杨占峰 孙岩 岳丽晓 何群力 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第7期38-44,共7页
目的探讨慢病毒介导Fg12基因沉默技术对自身免疫性心肌炎大鼠Th1/Th2漂移及Th17/Treg平衡的影响。方法将6周龄SD雄性大鼠随机分为4组,即对照组(NC组)、模型组(Model组)、空载慢病毒组(Vehicle组)、Fgl2-RNAi慢病毒组(RNAi组),每组10只... 目的探讨慢病毒介导Fg12基因沉默技术对自身免疫性心肌炎大鼠Th1/Th2漂移及Th17/Treg平衡的影响。方法将6周龄SD雄性大鼠随机分为4组,即对照组(NC组)、模型组(Model组)、空载慢病毒组(Vehicle组)、Fgl2-RNAi慢病毒组(RNAi组),每组10只。通过注射猪心肌球蛋白建立自身免疫性心肌炎大鼠模型,然后对大鼠尾静脉注射Fgl2-RNAi慢病毒进行免疫。分别在免疫28 d后检测各组大鼠VEDs、LVEDd、LVEF和FS,应用HE染色观察大鼠心肌组织病理情况,通过qRT-PCR和Western blot检测大鼠心肌组织中的IFN-γ、IL-4、IL-17和TGF-βmRNA和蛋白表达。结果建模28 d后,RNAi组的LVEDs和LVEDd显著低于Model组,而RNAi组的LVEF和FS显著高于Model组。Model组、Vehicle组和RNAi组的炎症评分均显著高于NC组,而RNAi组的炎症评分明显低于Model组。RNAi组大鼠心肌组织中的IFN-γ和IL-17 mRNA和蛋白表达水平均显著低于Model组,而IL-4和TGF-βmRNA和蛋白表达水平均显著高于Model组。结论Fg12基因通过调节Th1/Th2漂移及Th17/Treg平衡来参与自身免疫性心肌炎的发生发展,Fg12基因沉默可显著改善自身免疫性心肌炎大鼠的心脏功能,并降低心肌炎症反应。 展开更多
关键词 fg12基因 基因沉默 自身免疫性心肌炎 T细胞亚群 心脏功能 炎症反应
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fg12凝血酶原酶的研究进展 被引量:1
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作者 李学军 《国外医学(输血及血液学分册)》 2002年第4期318-320,共3页
fgl2凝血酶原酶是一种可直接激活凝血酶原的促凝因子,其结构与纤维蛋白原的β、γ链有高度同源性,与人、小鼠的暴发性肝炎的发生有密切关系,也可能和人类的其它疾病有关。
关键词 研究进展 fg12凝血酶原酶 暴发性肝衰竭 自发性流产 分子生物学 促凝因子
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Expression of Prothrombinase/fibroleukin Gene fg12 in Lung Impairment in a Murine Severe Acute Respiratory Syndrome Model 被引量:1
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作者 Wei-ming YAN  Jia-quan HUANG  +1 位作者 Xiao-ping LUO Qin NING 《中国病毒学》 CSCD 2007年第3期181-192,共12页
To evaluate the role of murine fibrinogen like protein 2 (mfgl2) /fibroleukin in lung impairment in Severe acute respiratory syndrome (SARS), a murine SARS model induced by Murine hepatitis virus strain 3 (MHV-3) thro... To evaluate the role of murine fibrinogen like protein 2 (mfgl2) /fibroleukin in lung impairment in Severe acute respiratory syndrome (SARS), a murine SARS model induced by Murine hepatitis virus strain 3 (MHV-3) through trachea was established. Impressively, all the animals developed interstitial pneumonia with extensive hyaline membranes formation within alveoli, and presence of micro-vascular thrombosis in the pulmonary vessels. MHV-3 nucleocapsid gene transcripts were identified in multiple organs including lungs, spleen etc. As a representative proinflammatory gene, mfgl2 prothrombinase expression was evident in terminal and respiratory bronchioles, alveolar epithelia and infiltrated cells in the lungs associated with fibrin deposition and micro-vascular thrombosis. In summary, the established murine SARS model could mimic the pathologic characteristics of lungs in patients with SARS. Besides the physical damages due to virus replication in organs, the up-regulation of novel gene mfgl2 in lungs may play a vital role in the development of SARS associated lung damage. 展开更多
关键词 凝血酶原酶 fg12基因 肺损伤 急性呼吸综合征 基因表达
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hfg12凝血酶原酶短干扰RNA表达质粒的构建及其效应 被引量:1
4
作者 习东 李黎 +5 位作者 高随 朱传龙 郭健文 王鸣 罗小平 宁琴 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期930-934,共5页
目的探索人fg12凝血酶原酶(hfg12)短干扰RNA(siRNA)在体外对hfg12凝血酶原酶基因表达的干预效应。方法构建产生hfg12短发夹状RNA(shRNA)的载体Phfg12shRNA,将其与hfg12-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因表达质粒pEGFPhfg12共... 目的探索人fg12凝血酶原酶(hfg12)短干扰RNA(siRNA)在体外对hfg12凝血酶原酶基因表达的干预效应。方法构建产生hfg12短发夹状RNA(shRNA)的载体Phfg12shRNA,将其与hfg12-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因表达质粒pEGFPhfg12共转染到中国仓鼠卵母细胞(CHO细胞),转染48h后,倒置荧光显微镜下观察EGFP在CHO细胞中的表达,并通过流式细胞仪检测荧光细胞阳性率。将Phfg12shRNA和hfg12表达质粒pcDNA3.1-hfg12共转染到CHO细胞,通过实时荧光定量PCR和免疫组织化学检测hfg12基因转录和蛋白表达水平的变化。分为4组:共转染P—hfg12shRNA和pcDNA3.1-hfg12为干预组,共转染无关序列shRNA表达质粒和pcDNA3.1-hfg12为非相关干预组,仅转染pcDNA3.1-hfg12为未干预组,不转染任何质粒为空白组。结果在CHO细胞中,含Phfg12shRNA的干预组较未干预组和非相关干预组的绿色荧光强度明显减弱,荧光细胞数明显减少;荧光表达阳性细胞率:干预组α为6.5%±0.2%,未干预组α为40.1%±1.8%,两组比较,Χ^2=8.056,P〈0.01,差异有统计学意义。抑制效率达85.5%。hfg12shRNA显著抑制了hfg12mRNA和蛋白质的表达,干预组hfg12mRNA水平为0.11±0.01,未干预组为0.84±0.06,两组比较,F=10.7,P〈0.01,差异有统计学意义。结论P—hfg12shRNA可在体外高效特异地抑制hfg12基因转录和蛋白的表达,为进一步的体内干扰实验奠定了基础。 展开更多
关键词 肝功能衰竭 RNA CHO细胞 fg12凝血酶原酶
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RT-PCR半定量检测外周血单个核细胞中fgl2凝血酶原酶基因的表达 被引量:1
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作者 李学军 罗军 +3 位作者 魏文宁 夏凌辉 胡豫 宋善俊 《临床血液学杂志》 CAS 2003年第3期132-134,共3页
目的:探讨逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测fg12凝血酶原酶在正常人外周血单个核细胞(PBMNC)中的表达及其规律。方法:根据genbank中fg12凝血酶原酶基因序列设计一对引物,以β-actin的表达为内参照,采用RT-PCR方法半定量检测体外培... 目的:探讨逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测fg12凝血酶原酶在正常人外周血单个核细胞(PBMNC)中的表达及其规律。方法:根据genbank中fg12凝血酶原酶基因序列设计一对引物,以β-actin的表达为内参照,采用RT-PCR方法半定量检测体外培养体系中不同时点的PBMNC中fg12凝血酶原酶mRNA的表达及变化规律。结果:fg12凝血酶原酶mRNA的表达水平在新鲜分离的PBMNC中表达最高,随着培养时间的延长而逐渐降低,至72h几乎不能检测出。结论:RT-PCR方法半定量检测PBMNC中fg12凝血酶原酶mRNA灵敏度高;PBMNC中的fg12凝血酶原酶在体外培养体系中不能持续表达。 展开更多
关键词 凝血酶原酶 fg12 单个核细胞 逆转录聚合酶链反应
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人fgl2凝血酶原酶纤维蛋白原相关结构域cDNA的扩增、克隆和鉴定
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作者 李学军 宋善俊 +1 位作者 夏凌辉 魏文宁 《临床血液学杂志》 CAS 2004年第4期224-226,共3页
目的 :扩增人fgl2凝血酶原酶纤维蛋白原相关结构域 (FRED)cDNA ,构建原核表达质粒。方法 :从外周血单核细胞 (PBMNC)中提取细胞总RNA后 ,应用RT PCR方法扩增fgl2凝血酶原酶FRED段cDNA ,酶切后与pET2 2b(+)原核表达载体连接 ,然后经酶切... 目的 :扩增人fgl2凝血酶原酶纤维蛋白原相关结构域 (FRED)cDNA ,构建原核表达质粒。方法 :从外周血单核细胞 (PBMNC)中提取细胞总RNA后 ,应用RT PCR方法扩增fgl2凝血酶原酶FRED段cDNA ,酶切后与pET2 2b(+)原核表达载体连接 ,然后经酶切和测序鉴定。结果 :从PBMNC中扩增了 72 7bp长的PCR产物 ,构建的重组原核表达质粒经酶切和测序鉴定与设计的相符。结论 :成功地从PBMNC中扩增了人fgl2凝血酶原酶FRED段cDNA ,构建了FRED pET2 2b(+)原核表达质粒 ,为进一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 基因 fg12凝血酶原酶 FRED结构域
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小鼠纤维介素蛋白2微小RNA表达质粒的构建及其对体内外相应基因的干预效应
7
作者 王鸣 习东 +4 位作者 叶华丽 刘君慧 马文文 罗小平 宁琴 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2012年第3期148-150,154,共4页
目的:探讨小鼠纤维介素蛋白2(fgl2)的miRNA(微小RNA)表达质粒在体外对相应基因表达的干预效应及在体内对重型肝炎小鼠的治疗作用。方法:分别构建产生小鼠fgl2-miRNA的表达载体(P-mfgl2-miRNA),将其转染到中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中。实验... 目的:探讨小鼠纤维介素蛋白2(fgl2)的miRNA(微小RNA)表达质粒在体外对相应基因表达的干预效应及在体内对重型肝炎小鼠的治疗作用。方法:分别构建产生小鼠fgl2-miRNA的表达载体(P-mfgl2-miRNA),将其转染到中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中。实验分组:将P-mfgl2-miRNA与小鼠fgl2的表达质粒(pcDNA3.1-mfgl2)共转染到CHO细胞作为干预组,无关序列miRNA表达质粒(irrelevant P-miRNA)与pcDNA3.1-mfgl2共转染为非相关对照组,仅转染pcDNA3.1-mfgl2为阳性对照组,未转染任何质粒为空白对照组。通过实时荧光定量PCR及Western blot观察fgl2在基因转录水平及蛋白水平表达量的改变。建立重型肝炎小鼠模型,通过尾静脉高压注射P-mfgl2-miRNA者为治疗组,注射irrelevant P-miRNA者为非相关组,注射相同剂量生理盐水者为阴性对照组,观察P-mfgl2-miRNA对重型肝炎小鼠的治疗作用。结果:成功构建了针对小鼠fgl2的miRNA。在CHO细胞中,干预组fgl2在RNA水平及蛋白水平的表达均较非相关对照组显著降低。P-mfgl2-miRNA可提高重型肝炎小鼠生存率至8.3%。结论:Fgl2可作为重型肝炎基因治疗的靶点,利用miRNA沉默fgl2基因将有利于重型肝炎的治疗,为后续的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 重型肝炎 RNA干扰 纤维介素蛋白2 微小RNA
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fgl2凝血酶原酶多肽抗体的制备和应用 被引量:2
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作者 韩梅芳 宁琴 +4 位作者 严伟明 习东 Laisum Fung Gary Levy 罗小平 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期649-652,共4页
目的 利用人工合成多肽制备针对人源、鼠源fgl2凝血酶原酶 (hfgl2、mfgl2 )的特异性多克隆抗体 ,以期用于与fgl2表达异常密切相关的疾病的研究和诊治。方法 根据mfgl2、hfgl2基因编码的氨基酸序列合成多肽 3(Pep3)和多肽 4 (Pep4 ) ,... 目的 利用人工合成多肽制备针对人源、鼠源fgl2凝血酶原酶 (hfgl2、mfgl2 )的特异性多克隆抗体 ,以期用于与fgl2表达异常密切相关的疾病的研究和诊治。方法 根据mfgl2、hfgl2基因编码的氨基酸序列合成多肽 3(Pep3)和多肽 4 (Pep4 ) ,并用化学方法与匙孔血蓝蛋白 (KLH)连接 ,纯品Pep3 KLH和Pep4 KLH免疫动物 ,所制备的抗血清用ELISA、Westernblot和前凝血质活性 (PCA)实验鉴定 ,并采用免疫组化法应用于乙型肝炎患者肝组织中hfgl2的检测。结果 ELISA检测表明 ,所制备的抗血清可分别与Pep3和Pep4发生特异性免疫反应 ;Westernblot结果显示 ,抗血清可识别MHV 3感染BALB cJ小鼠腹腔巨噬细胞特异性条带 ,相对分子质量 (Mr)为 6 5× 10 3;PCA实验提示 ,抗血清具有中和mfgl2分子酶活性的作用。对病毒性乙型肝炎患者肝组织免疫组织化学染色发现hfgl2仅在重型乙型肝炎患者高表达 ,而在慢性乙型肝炎和肝硬化患者的肝组织中无表达。结论 所制备的fgl2的多肽抗体 (多克隆抗体 )可识别mfgl2和hfgl2分子 ,具有与抗原特异性结合、中和其酶活性的特征 ,为深入研究这一新发现的分子提供了有力的科学手段。 展开更多
关键词 fg12凝血酶原 酶多肽抗体 3型鼠肝炎病毒 纤维介素
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fgl2凝血酶原酶功能及临床意义的新认识
9
作者 苏冠华 王朝晖 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2006年第3期233-235,共3页
fgl2凝血酶原酶是新近发现的一种可直接激活凝血酶原的促凝因子,可能还具有如免疫抑制活性、细胞因子样作用等功能。目前研究表明,fgl2凝血酶原酶与人、小鼠暴发性肝炎,流产,器官移植排斥反应的发生密切相关,也可能参与了传染性非典型... fgl2凝血酶原酶是新近发现的一种可直接激活凝血酶原的促凝因子,可能还具有如免疫抑制活性、细胞因子样作用等功能。目前研究表明,fgl2凝血酶原酶与人、小鼠暴发性肝炎,流产,器官移植排斥反应的发生密切相关,也可能参与了传染性非典型肺炎的发病。对fgl2凝血酶原酶在其中的具体机制和多重角色的进一步阐明,将可能为此类疾病的诊治提供全新的思路。 展开更多
关键词 fg12凝血酶原酶 病毒性肝炎 流产 器官移植 传染性非典型肺炎
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小鼠纤维介素基因shRNA表达质粒的构建及体外RNA干扰
10
作者 汪之沫 严伟明 +3 位作者 习东 朱传龙 罗小平 宁琴 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期358-363,共6页
目的探讨纤维介素蛋白(fg12)的双链RNA(dsRNA)在体外对fg12凝血酶原酶基因表达的干扰作用及其规律。方法构建能产生鼠垃12(mfg12)的发夹状双链RNA(shRNA)的载体p-mfg12shRNA,将其与mfg12- EGFP融合基因表达质粒pEGFP-mfg12共转染(用量比... 目的探讨纤维介素蛋白(fg12)的双链RNA(dsRNA)在体外对fg12凝血酶原酶基因表达的干扰作用及其规律。方法构建能产生鼠垃12(mfg12)的发夹状双链RNA(shRNA)的载体p-mfg12shRNA,将其与mfg12- EGFP融合基因表达质粒pEGFP-mfg12共转染(用量比为1:5)到中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)作为实验组,另仅转染pEGFP-mfg12或共转染无关序列shRNA表达质粒和pEGFP-mfg12(用量比为1:5)作为对照组。转染24、48、 72 h后,观察mfg12-EGFP融合蛋白在CHO细胞中的表达情况,并通过流式细胞仪检测荧光细胞阳性率。分别将p- mfg12shRNA和mfg12cDNA表达质粒pcDNA3.1-mfg12共转染(用量比为1:5)到CHO细胞和人宫颈癌细胞(Hela 细胞),作为试验组,另转染pcDNA3.1-mfg12或共转染无关序列shRNA表达质粒和pcDNA3.1-mfg12(用量比为1:5) 或不转染任何质粒作为对照组。通过逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学检测mfg12在CHO和Hela这两种细胞株中表达的情况。结果实验组较对照组的绿色荧光强度明显减弱,荧光细胞数明显减少。在CHO和Hela两种细胞株,均显示mfg12shRNA显著抑制mfg12 mRNA和蛋白质的表达。结论本研究所构建的mfg12shRNA表达质粒p-mfg12shRNA 可在体外高效特异地抑制mfg12的表达,为进一步的体内实验奠定了基础。 展开更多
关键词 纤维介素蛋白 小鼠 凝血酶原酶 RNA干扰
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