富血小板纤维蛋白对人牙髓干细胞增殖、凋亡及碱性磷酸酶活性的影响

目的探讨富血小板纤维蛋白(PRF)对人牙髓干细胞增殖、凋亡及碱性磷酸酶活性的影响及机制。方法从人牙髓组织中分离出人牙髓干细胞(h DPSCs),h DPSCs随机分为对照组及实验组,CCK8实验检测PRF刺激h DPSCs第0、1、3、5及7天时细胞增殖情况;RT-PCR检测PRF刺激h DPSCs第0、3、7及14天时碱性磷酸酶(ALP)的m RNA表达情况;流式细胞仪检测PRF刺激h DPSCs 7 d后细胞的凋亡情况,Western blotting检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、p38、p-p38蛋白表达。结果实验组第1天时细胞的增殖与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),第3、5、7天时细胞的增殖均高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);实验组第3天时ALP mRNA表达与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),第7和14天时ALP mRNA表达均高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);细胞的凋亡率及Cleaved Caspase-3蛋白、p-p38蛋白表达实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05),实验组细胞的凋亡率及Cleaved Caspase-3蛋白表达均下降,p-p38蛋白表达上调,p38蛋白表达两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PRF可促进hDPSCs的增殖,上调ALP的mRNA表达,抑制其凋亡,其机制与激活p38信号通路有关。

抑肽酶的提取及活性研究

以牛肺为原料,经酸沉淀,胰蛋白酶亲和层析,分离提纯抑肽酶。并建立了二种抑肽酶活性测定方法(UKIU法及PKAIU法)。提纯后抑肽酶纯度提高88.3倍。得率为96.8％。活性抑制试验表明,该抑肽酶可抑制PKA对前激肽释放酶(PK)的作用,以及尿激酶对纤溶酶原的作用,对纤溶酶原的活化及纤溶酶活性也有较强抑制作用。

外周血来源的间充质干细胞与内皮祖细胞体外构建血管化组织的研究

目的利用两种外周血细胞在体外构建出血管样组织。方法从外周血提取内皮祖细胞与间充质干细胞并鉴定,在纤维蛋白凝胶中以不同的密度培养,在显微镜下观察至第7天。结果兔外周血可以提取出内皮祖细胞与间充质干细胞,内皮祖细胞与间充质干细胞的比值为100万/m L:200万/m L时可以在体外形成血管样结构。结论外周血中可以提取出特定细胞并在体外共培养形成血管样组织。

CRP、IL-6及D—Dimer在急性下肢深静脉血栓形成中的作用及相关性分析

【目的】探讨炎症因子血浆C反应蛋白（CRP）、白介素-6（IL-6）和I）_二聚体（D-Dimer）在急性下肢深静脉血栓形成（DVT）中的作用及相关性。【方法】30例DVT患者为DVT组，30例健康自愿者为正常对照组，检测DVT组患者治疗前、后及正常对照组血清CRP、IL-6及D-Dimer浓度并行相关性分析。【方法】DVT组患者治疗前血浆CRP、IL-6和D-Dimer浓度均明显高于正常对照组（P〈0．01）；治疗后DVT组患者血浆CRP、IL-6和DDimer浓度显著低于治疗前（P〈0．01），而治疗后DVT组患者血清CRP、D-Dimer浓度仍高于正常对照组（P〈0．05）；CRP、IL-6和D-Dimer相互呈正相关。【结论】炎症因子CRP、IL-6及D-Dimer在下肢深静脉血栓急性期起重要作用。

3D共培养模型对体外培养兔角膜缘干细胞的影响

目的探讨三维(three-dimension,3D)共培养模型对体外扩增兔角膜缘干细胞(limbal stem cells,LSCs)的作用。方法体外培养兔LSCs,以牙周膜干细胞(human periodontal stem cell,HPDLSCs)作为饲细胞建立共培养模型,根据载体不同分为3组,纤维蛋白胶组:将兔LSCs、HPDLSCs、纤维蛋白胶3D共培养;羊膜组:将兔LSCs、HPDLSCs、羊膜3D共培养;对照组:将兔LSCs、HPDLSCs共培养。共培养5 d后,用倒置显微镜、HE染色、扫描电镜观察兔LSCs的细胞形态,采用免疫荧光染色检测各组兔LSCs阳性标志物p63的表达,并比较各组p63的阳性率。结果共培养5 d后,倒置显微镜、HE染色观察细胞形态,羊膜组、纤维蛋白胶组细胞排列紧密,呈大小不等的团块状集落,细胞大小基本一致;对照组细胞排列相对稀疏;扫描电镜下观察见纤维蛋白胶组和羊膜组细胞与载体贴附良好。免疫荧光染色显示纤维蛋白胶组、羊膜组和对照组LSCs的p63阳性率分别为(69.93±8.76)%、(78.36±8.56)%和(58.59±8.31)%,三组间总体比较差异有统计学意义(F=9.43,P=0.000)。两两比较中纤维蛋白胶组、羊膜组LSCs的p63阳性率均大于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。纤维蛋白胶组、羊膜组的p63阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论以纤维蛋白胶、羊膜作为载体,HPDLSCs作为饲细胞的3D共培养模型有助于体外扩增兔LSCs。