磁性附着体中铁素体不锈钢引起小鼠成纤维细胞L929的死亡模式

通过3种不同浓度的不锈钢浸提液处理体外培养的小鼠成纤维细胞L929,采用流式细胞术PI染色法检测L929细胞的凋亡率及细胞周期分布情况,并用电镜观察细胞凋亡的形态．同时应用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白结合碘化丙啶染色双参数技术对细胞死亡类型进行定量检测．与Tilite含钛医用合金、Co-Cr合金相比较的结果表明,26-1超纯铁素体不锈钢是以时间依赖的方式诱导L929细胞凋亡,凋亡率与浸提液呈浓度依赖关系．26-1超纯铁素体不锈钢符合临床应用材料的生物相容性要求,可以用于对磁性附着体的外包裹并可安全地应用于临床．

4种牙科金属材料对成纤维细胞L929凋亡相关基因及蛋白表达的影响

目的研究4种不同牙科金属材料(金合金、银钯合金、钴铬合金、镍铬合金)浸提液对小鼠成纤维细胞L929凋亡相关基因及蛋白表达的影响。方法以金合金(A组)、银钯合金(B组)、钴铬合金(C组)、镍铬合金(D组)的浸提液体外培养小鼠成纤维细胞L929,并以含10%胎牛血清的RPMI1640培养基作为阴性对照(E组)。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测了4种牙科金属材料浸提液对L929细胞凋亡相关基因caspase-3、8、9 mRNA和蛋白表达的影响。结果 4种牙科金属材料浸提液培养小鼠L929细胞48 h后,除A组与E组间差异无统计学意义外,各组间caspase-3 mRNA及caspase-9 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。各组间caspase-8 mRNA差异无统计学意义。除A组与C组、B组与D组间差异无统计学意义外,caspase-3及caspase-9蛋白表达差异有统计学意义,各组间caspase-8蛋白差异无统计学意义。结论 4种牙科金属材料,除金合金外,均诱导小鼠成纤维细胞L929凋亡相关基因表达增加,金属离子可能通过线粒体通路诱导细胞凋亡。

辐射对L929细胞生长及CCN1基因表达的影响

目的通过观察辐射对小鼠皮肤成纤维细胞系L929生长及CCN1基因表达的影响,探讨CCN1基因与辐射损伤的关系。方法体外培养L929细胞系,以4Gy60Coγ射线照射为辐射组,并设对照组,MTT法测细胞增殖变化,平板克隆形成实验检测克隆形成能力,流式细胞术测细胞周期,RT-PCR及免疫细胞化学法检测L929细胞中CCN1基因的表达情况。结果辐射组细胞辐照2d增殖抑制明显(P<0.01),克隆形成也明显受到抑制(P<0.05);辐射后24h,细胞出现G2期停滞;辐射后6hL929细胞CCN1的mRNA表达水平明显降低(P<0.01),至24h开始回调(P<0.05);辐照后24～48h,细胞CCN1蛋白的表达水平明显下降(P<0.01)。结论因辐照生长受到抑制的小鼠成纤维细胞L929,其CCN1基因的表达水平下调,提示CCN1基因的表达水平低下是辐射导致细胞生长抑制的因素之一。

3种牙科金属材料对L929细胞的毒性及对凋亡相关基因与蛋白表达的影响

目的:研究3种牙科金属材料(金合金、纯钛、镍铬合金)浸提液对小鼠成纤维细胞L929的细胞毒性及凋亡相关基因与蛋白表达的影响,探讨3种牙科金属材料引起细胞凋亡的可能通路。方法:以金合金(A组)、纯钛(B组)、镍铬合金(C组)的浸提液(每组8个样本)培养小鼠成纤维细胞L929,以含10%胎牛血清的RPMI1640培养基作为阴性对照(D组),以铜合金作为阳性对照(E组)。采用MTT法在细胞水平评价3种牙科金属材料的细胞毒性,采用RT-PCR在分子水平上检测3种牙科金属材料浸提液对L929细胞凋亡相关基因caspase-3、-8、-9 mRNA及蛋白表达的影响。采用SPSS11.5软件包对数据进行统计学分析。结果:各实验组细胞毒性均为0级。镍铬合金组caspase-3mRNA与caspase-9mRNA的表达与其他实验组、阴性对照及阳性对照组间差异显著,镍铬合金组caspase-3蛋白与caspase-9蛋白的表达与其他实验组及阴性对照组间差异显著,各组caspase-8mRNA及蛋白的表达无显著差异。结论:金合金与纯钛浸提液对小鼠L929细胞凋亡相关基因及蛋白的表达无显著诱导作用;镍铬合金诱导小鼠L929细胞凋亡相关基因caspase-3mRNA、caspase-9mRNA及蛋白表达增加,可能通过线粒体通路诱导细胞凋亡。

不同血清浓度对小鼠成纤维细胞L929生长增殖和胶原蛋白分泌的影响

目的：观察不同血清浓度对小鼠L929成纤维细胞生长增殖和分泌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和羟脯氨酸的影响,以了解适宜成纤维细胞生长和分泌的最佳血清浓度。方法：L929细胞分成6组：分别以血清浓度为0 mL/L、200 mL/L、400 mL/L、600 mL/L、800 mL/L和1 000 mL/L的培养液培养,培养2 d、4 d、6 d和8 d分别取各组细胞进行HE和吖啶橙荧光染色,了解细胞形态和生长状况变化。在2 d、4 d、6 d和8 d分别取各组上清,酶联免疫法检测Ⅰ型胶原,Ⅲ型胶原,羟脯氨酸水平。磺基罗丹明B（SRB）法检测培养2 d、4 d、6 d和8 d后各组细胞增殖情况。结果：（1）L929在血清浓度很高和很低（0%和100%）时细胞增殖率都明显下降,20%组血清浓度的增殖率最高;40%~100%组,随着血清浓度增高,细胞增殖率反而下降;（2）HE和AO染色发现0%血清浓度组细胞出现凋亡情况,80%组细胞开始出现空泡化,100%血清浓度时细胞空泡化严重。20%~60%血清浓度细胞形态基本正常。（3）0%、80%和100%血清浓度在培养的8 d内I型胶原浓度一直比较低,40%血清浓度I型胶原浓度最高。培养的第2天,各浓度组的Ⅲ胶原均有增加,后有所下降,6~8 d时又再次上升。各组血清浓度组的L929细胞在不同培养时间羟脯氨酸浓度变化不大。结论：20%~40%血清浓度最适合成纤维细胞的生长,增殖和胶原分泌,血清浓度过高或过低都会引起细胞增殖率下降、细胞凋亡、空泡化和胶原的分泌减少,自体血清注射时采用合适的血清浓度可能会取得更好的效果。

3种临床常用烤瓷合金对小鼠成纤维细胞L929的毒性评价

目的:评价3种临床常用牙科烤瓷合金材料的细胞毒性。方法:采用一种能快速评定细胞增殖率和细胞毒性的CCK-8比色法,检测镍铬合金(Ni,77.36%)、钴铬合金(Co,61.0%)、金合金(Au,58.0%)等3种烤瓷合金材料对小鼠成纤维细胞L929相对增殖率的影响;应用单细胞凝胶电泳(彗星电泳),检测3种烤瓷合金材料对小鼠成纤维细胞L929 DNA的损伤情况。采用SAS9.0软件包对数据进行统计学分析。结果:镍铬合金组、钴铬合金组和金合金组细胞的相对增殖率分别为(75.9510±7.6244)%、(84.8920±8.2660)%和(88.5420±12.3611)%。镍铬合金组的细胞毒性显著高于钴铬合金组(P<0.05)和金合金组(P<0.05),而钴铬合金组与金合金组之间无显著差异(P>0.05),但3种材料的细胞毒性分级均为1级,表现为轻微毒性;镍铬合金组DNA损伤程度的彗星数目显著高于钴铬合金组(P<0.05)和金合金组(P<0.05),而钴铬合金组与金合金组无显著差异(P>0.05)。结论:钴铬烤瓷合金材料的细胞毒性显著低于镍铬烤瓷合金材料,而与58%金烤瓷合金材料的细胞毒性接近。临床上应尽可能选择钴铬烤瓷合金或58%金烤瓷合金等细胞毒性较低的烤瓷合金材料。

AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸对L929成纤维细胞增殖及纤维化介质表达的影响

目的探讨AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸对L929成纤维细胞增殖及纤维化介质表达的影响。方法设计并合成AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸、AP-1,Smad3阳性对照诱骗寡核苷酸及随机诱骗寡核苷酸,然后通过脂质体分别转染进入L929成纤维细胞内。分别通过ELISA法、细胞计数、ATP生物荧光法及免疫印迹法检测合成的诱骗寡核苷酸及其对L929细胞增殖及纤维化介质表达的影响。结果与随机诱骗核酸对照相比,双功能诱骗核苷酸既能明显抑制AP-1的DNA结合活性,又能抑制Smad3的DNA结合活性(P<0.01)。与随机诱骗寡核苷酸相比,AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸、AP-1,Smad3阳性对照诱骗核酸均能抑制TGF-β诱导的L929细胞的增殖并且降低其表达FN、PAI-1、c-fos、Collα2、TGF-β1、CTGF等纤维化介质,其中以AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸的作用最为显著。结论设计并合成的AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸可以有效地抑制L929成纤维细胞的增殖和纤维化介质的表达。

高浓度花生四烯酸诱导小鼠成纤维细胞L929凋亡的研究(英文)

目的 探讨花生四烯酸是否能诱导小鼠成纤维细胞L92 9凋亡及其可能机制。方法 用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和乳酸脱氢酶 (LDH)释放率测定细胞存活率及损伤程度 ,比色法测定细胞脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)含量 ,Hoechst 3 3 2 58染色观察凋亡细胞核形态变化 ,DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA降解情况。结果 L92 9细胞在低浓度花生四烯酸 (40～ 160 μmol·L- 1)作用 2 4h后 ,细胞存活率明显下降 ,LDH释放率和细胞MDA含量显著增加 (P <0 .0 1)。经 160 μmol·L- 1花生四烯酸处理后的L92 9细胞呈现典型的凋亡核固缩表现。琼脂糖凝胶电泳显示DNA凋亡梯带。结论 高浓度花生四烯酸 (80～ 160 μmol·L- 1)能诱导小鼠成纤维细胞L92 9凋亡 。

5种根管冲洗液对小鼠成纤维细胞L929的毒性评价

目的:评价复方冰硼冲洗液、冰硼冲洗液、次氯酸钠溶液、金栀洁龈含漱液和复方氯己定含漱液的细胞毒性。方法:体外培养L929细胞,选用复方冰硼冲洗液(A组),冰硼冲洗液(B组),NaClO(C组),金栀洁龈含漱液(D组),复方氯己定含漱液(E组),培养基作为空白对照组,分别与L929接触6、12、24、48h,用MTT法测细胞增殖率。结果:高浓度冲洗液一般比低浓度具有更强的细胞生长抑制作用。A组和B组对L929无明显细胞毒性,D组有中度细胞毒性,C组和E组均有较强细胞毒性。冲洗液细胞毒性由高到低排序为:E组,C组,D组,A组,B组。结论:中药制剂复方冰硼冲洗液对L929细胞无明显细胞毒性,认为可临床用于根管冲洗。

赤芝提取物的抗氧化美白及细胞增殖作用研究

目的:研究赤芝提取物(GLE)抗氧化美白及细胞增殖作用。方法:以测定GLE中糖类含量,体外1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除力、蘑菇酪氨酸酶活性抑制力、抑制B16F10细胞黑色素合成及酪氨酸酶活性抑制、结晶紫实验和划痕实验为评价指标,研究GLE抗氧化美白及对L929成纤维细胞增殖的作用。结果:GLE中富含总糖、多糖,GLE相较于β-熊果苷对DPPH自由基和ABTS自由基表现出较弱的清除作用,其自由基清除率半抑制浓度(IC 50)分别为1.6 mg/mL和1.2 mg/mL;对蘑菇酪氨酸酶活性有很强的抑制能力,基于α-MSH促黑激素细胞表型造模实验显示,0.4 mg/mL和0.8 mg/mL的GLE具有显著抑制B16F10细胞酪氨酸酶活性以及黑色素生成的作用;GLE具有促进L929成纤维细胞增殖作用。结论:GLE是美白及功能食品开发利用领域的候选者。

不同骨水泥材料在炎症条件下对小鼠成纤维细胞L929的生物安全性研究

目的评价不同骨水泥材料在炎症条件下对小鼠成纤维细胞L929的生物安全性。方法分别采用CCK-8法、DAPI荧光染色法、FITC/PI凋亡染色法检测3种骨水泥材料对炎症条件下小鼠成纤维细胞L929细胞活性、细胞分裂生长及细胞凋亡的影响,同时利用RT-PCR和Western blot分别检测3种骨水泥材料对炎症条件下小鼠成纤维细胞L929中炎症相关因子IL-1、IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ的mRNA水平和蛋白表达水平。结果聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、纳米羟基磷灰石/聚酰胺66(n-HA/PA66)、磷酸钙骨水泥(CPC)在炎症条件下均能够显著抑制小鼠成纤维细胞L929的活性和增殖,CPC抑制最显著(P<0.05);PMMA、n-HA/PA66、CPC在炎症条件下均能够显著促进小鼠成纤维细胞L929的凋亡(P<0.05),3种骨水泥材料之间差异无统计学意义(P>0.05);3种骨水泥材料在炎症条件下对小鼠成纤维细胞L929不同炎症因子表达的影响不同,但CPC相对于PMMA、n-HA/PA66更能刺激细胞多种炎症因子的表达(P<0.05)。结论不同骨水泥材料在炎症条件下对小鼠成纤维细胞L929的生物安全性不同,其中PMMA、n-HA/PA66差别不大,而CPC在炎症条件下对小鼠成纤维细胞L929的影响最显著。

血清介质对体外培养L929系小鼠成纤维细胞表达产物Ⅰ、Ⅲ型胶原及其比值的影响

目的探讨不同浓度血清、不同体外培养时间对L929系小鼠成纤维细胞表达产物Ⅰ、Ⅲ型胶原及其比值的影响。方法采用双抗体夹心法检测细胞培养液中Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量,并同时计算出Ⅰ/Ⅲ型胶原的比值。结果除0%血清浓度组的Ⅰ、Ⅲ型胶原呈现无明显变化的微弱升高趋势外,其余各血清浓度组的Ⅰ、Ⅲ型胶原均处于增加状态,且在6~8 d时增加最为明显;另外,Ⅰ/Ⅲ型胶原比值随着血清浓度和细胞生长时间不同,表现出不同的变化趋势。其中20%和40%血清浓度组随着培养细胞生长时间延长,Ⅰ/Ⅲ型胶原比值逐渐增加;而其他血清浓度组,随着细胞培养时间的延长,Ⅰ/Ⅲ型胶原比值增加并不明显。结论 L929细胞在不同体外培养时间和不同浓度血清下其表达产物Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及其比值有一定变化,为今后优化体外细胞培养条件提供了相关的实验数据。

MTT法检测钛酸钡涂层对小鼠成纤维细胞L929增殖率的影响

目的:探索纯钛烤瓷冠中钛酸钡涂层对小鼠成纤维细胞L929形态及增殖率的影响,并评价其细胞毒性分级。方法:以含钛酸钡涂层的钛瓷试件、常规钛瓷试件的浸提液体外培养小鼠成纤维细胞1、3、5 d,并以含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基为阴性对照组,1%苯酚溶液为阳性对照组,采用MTT法检测试件浸提液对小鼠成纤维细胞L929增殖率的影响。结果:含钛酸钡涂层的钛瓷结合试件浸提液培养的小鼠成纤维细胞L929形态正常,生长旺盛;钛酸钡涂层组吸光度值大于阴性对照组(P<0.05),含钛酸钡涂层的纯钛试件浸提液的细胞毒性分级为0级。结论:含钛酸钡涂层的钛瓷结合试件有良好的细胞相容性。

低弹性模量医用钛合金梯度复合材料对L929细胞周期及凋亡的影响

将实验对象分为3组,分别为低弹性模量医用钛合金试件、经氧化处理、经氧化处理并在其表面喷涂钽的低弹性模量医用钛合金试件,制备浸提液培养小鼠成纤维细胞L929。利用流式细胞术检测细胞周期及凋亡并与常规钛合金Ti-6Al-4V试件及阴性组(含10%FBS的培养液18 ml)进行比较。浸提液培养48 h后,G2期细胞周期比例涂层组为(14.43±0.18)%,Ti-6Al-4V组为(13.97±1.39)%(P>0.05);细胞早期凋亡率涂层组为(1.39±0.08)%,Ti-6Al-4V组为(1.40±0.05)%(P>0.05)。低弹性模量医用钛合金梯度复合材料与Ti-6Al-4V比较对L929细胞周期及凋亡无差异,细胞相容性良好。

ZD制剂对RAW264.7细胞分泌TNF-α水平及TNF-α诱导L929细胞死亡的影响

[目的]研究ZD制剂对炎症模型细胞中TNF-α含量及对TNF-α诱导小鼠成纤维细胞L929死亡的影响。[方法]通过脂多糖(LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7细胞系来构建炎症细胞模型,使用5种不同浓度(100、10、1、0.1、0.01μg/m L)的ZD制剂进行试验,并用ELISA法检测ZD制剂干预前后细胞上清液中TNF-α浓度。通过TNF-α刺激小鼠成纤维细胞L929细胞系来构建细胞毒性模型,采用MTT法检测ZD制剂干预前后L929细胞活力。[结果]ZD制剂浓度为100、10、1、0.1μg/m L时,TNF-α浓度与LPS模型组相比,差异极显著(P<0.01);ZD制剂浓度为0.01μg/m L时,TNF-α浓度与LPS模型组相比,差异显著(P<0.05)。经100、10μg/m L ZD制剂干预后的小鼠成纤维细胞L929细胞活力与TNF-α组相比显著提高。[结论]ZD制剂可以通过降低TNF-α的分泌量和降低TNF-α的生物学活性来达到抗炎的目的。

L929细胞骨架系统的图像分析

细胞骨架系统在维持细胞形态的同时也辅助细胞的代谢、增殖、迁移及分化等作用。通过图像处理软件ZEN和ImageJ、统计分析软件SPSS等3种软件对L929的黏着斑及微丝免疫荧光染色图像进行预处理、图像有效部分提取以及数据处理。结果表明黏着斑的数量与细胞面积、微丝总长度存在极显著的正相关关系。

碳纤维增强碳与碳化硅双基体陶瓷基复合材料作为口腔种植体材料的细胞毒性

目的通过体外细胞培养法评价碳纤维增强碳与碳化硅双基体陶瓷基复合材料(C/C-SiC)对细胞生长和凋亡的影响。方法用实验材料不同浓度浸提液培养小鼠成纤维细胞L929,采用MTT法检测细胞的相对增殖度;采用急性溶血试验检测材料对血细胞的溶血作用,计算溶血率;采用流式细胞仪、Annexin V-FITC/PI双染法检测阴性对照组、100%C/C-SiC组、纯钛组、阳性对照组的细胞散点图,计算正常细胞、早期凋亡、晚期凋亡和坏死细胞的比例。结果 C/C-SiC复合材料的细胞毒性为1级,溶血率为0.156%,无明显溶血反应,与阴性对照组和纯钛组的差异无统计学意义(P>0.05)。C/C-SiC组4个象限细胞比例与纯钛组和阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),阳性对照组的早期凋亡、正常细胞比例与其他任一组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 C/C-SiC复合材料有生物安全性基础,无细胞毒性,无溶血反应。

染氟成纤维细胞内Ca^(2+)水平的变化及其意义

目的研究氟对成纤维细胞Ca2+浓度的影响并探讨其意义。方法应用扫描共聚焦显微技术测定不同染氟条件下(0.0001、1、10mg/LF-)成纤维细胞Ca2+水平的变化。结果染氟1mg/L组成纤维细胞在染氟500s左右时[Ca2+]i水平开始升高,约1500s达到高峰,然后开始下降,3000s左右回到起点位置。结论成纤维细胞染氟1mg/LF-组[Ca2+]i有一过性升高。认为这种[Ca2+]i浓度的变化在影响成纤维细胞中cbfa1和某些生长因子之间的相互关系、促进细胞增殖、分化及成骨表型转换中可能起重要作用。

聚合磷酸钙骨水泥细胞毒性评价

目的：对自已合成的聚合磷酸钙骨水泥细胞毒性进行了研究。方法：将材料浸提液与小鼠成纤维细胞接触２、４、７ｄ后，用分光光度仪在５８８ｎｍ波长处测定吸光度，以评价材料的细胞毒性。结果：该材料细胞毒性为Ⅰ级，存在轻微的细胞毒性。

蚕蛹羧甲基壳聚糖对小鼠成纤维细胞增殖与生长的影响

手术后组织粘连与组织损伤部位纤维的增生有密切关系。研究蚕蛹羧甲基壳聚糖对小鼠成纤维细胞L929增殖与生长的影响,探索其用作预防组织粘连生物医用材料的可行性。体外试验结果表明,培养液中添加0.1 mg/m L蚕蛹羧甲基壳聚糖能够极显著抑制小鼠成纤维细胞的增殖(P<0.01),抑制率达到50.08%±10.12%;荧光定量PCR检测小鼠成纤维细胞中的细胞生长因子TGF-β1和VEGF编码基因的表达极显著下调(P<0.01),并且这种抑制作用呈现明显的剂量效应。据此初步认为,蚕蛹羧甲基壳聚糖可有效控制成纤维细胞中关键的自分泌生长因子编码基因的表达,进而抑制机体的细胞增殖与生长以及炎症反应和血管增生,预防术后组织粘连。