LncRNA COL1A2-AS1调控人瘢痕疙瘩成纤维细胞功能的研究

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)Ⅰ型胶原α2自然反义转录物1(COL1A2-AS1)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡、迁移的影响。方法在COL1A2-AS1的功能研究中将人成纤维细胞分为3组:空白组、空载组、COL1A2-AS1-过表达组。qRT-PCR检测miR-181a-5p、TGF-β1、Smad7、Col-Ⅲ、COL1A2-AS1的表达。CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移,Western blot检测TGF-β1、Smad7、Col-Ⅲ蛋白的表达水平。双荧光素酶报告实验验证COL1A2-AS1与所预测的靶标miR-181a-5p的结合关系。结果与空载组比较,COL1A2-AS1-过表达组的人成纤维细胞增殖OD值、迁移细胞数以及Col-Ⅲ的表达都明显下调(P<0.05),而TGF-β1和Smad7的表达水平都明显升高(P<0.05)。与空载组比较,COL1A2-AS1-过表达组细胞的凋亡率增加(P<0.05)。另外,与空载组比较,COL1A2-AS1-过表达组明显抑制miR-181a-5p的表达(P<0.05),且经过双荧光素酶报告实验验证COL1A2-AS1和miR-181a-5p可直接结合。结论COL1A2-AS1直接靶向抑制miR-181a-5p的表达,并抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和迁移,促进细胞的凋亡。

整合素α_1在口腔黏膜下纤维性变发病机制中的作用

目的:观察口腔黏膜下纤维性变(OSF)组织中整合素α1的表达与分布,及槟榔碱对体外培养的人口腔黏膜成纤维细胞(FB)表达整合素α1mRNA的影响,探讨整合素α1在OSF发病中的作用与机制。方法:①采用免疫组织化学染色方法,观察整合素α1在10例正常口腔黏膜组织和OSF早、中、晚期各20例病变组织中的表达与分布,并采用半定量方法检测正常口腔黏膜组和OSF各组FB上整合素α1的表达强度。②采用RT-PCR法检测体外培养FB分别在0、10、20、40μg/ml浓度组别槟榔碱刺激下,整合素α1mRNA的表达水平。结果:①正常口腔黏膜组织中,整合素α1表达低,主要分布于上皮基底细胞和血管内皮细胞,呈胞膜或胞质阳性,FB极少见阳性表达;而OSF病变组织中,除表皮基底细胞及血管内皮细胞外,FB细胞膜及胞质内均见整合素α1的大量表达,炎症细胞上亦可见少量表达。OSF各期FB表达整合素α1均强于正常组(P<0.05),早中期组表达增高,晚期组表达降低,与中期组有统计学差异(P<0.05)。②对照组整合素α1mRNA表达量低,在槟榔碱10、20μg/ml浓度组表达逐渐升高与对照组存在显著性差异(P<0.05),40μg/ml组出现下降与10μg/ml组无显著性差异(P>0.05);结论:槟榔碱通过刺激口腔黏膜FB表达与分泌整合素α1,进而诱导胶原合成增多,可能是OSF发生机制之一。

抑制沉默信息调节因子1/p53通路对同型半胱氨酸诱导的心肌纤维化的影响

目的探讨抑制沉默信息调节因子1(SIRT1)/p53通路对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的心肌纤维化的影响。方法体外培养心肌成纤维细胞(CF),分为NC组、Hcy组、EX527+Hcy组进行实验。NC组为正常培养的CF;Hcy组的CF给予0.5 mmol/L的Hcy刺激;EX527+Hcy组的CF在给予0.5 mmol/L的Hcy刺激后加入SIRT1/p53通路抑制剂EX527进行干预。干预结束后,检测各组细胞的增殖率、凋亡率,细胞中纤维化相关因子Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)、Ⅲ型胶原α1链(COL3A1)和肌动蛋白α2(Acta2)的mRNA和蛋白表达水平,以及细胞中SIRT1/p53通路相关蛋白SIRT1、乙酰化p53(Ac-p53)的表达水平。结果(1)与NC组比较,Hcy组CF增殖率升高,凋亡率降低(均P<0.05);与Hcy组比较,EX527+Hcy组细胞增殖率降低,而凋亡率升高(均P<0.05)。(2)与NC组比较,Hcy组CF中COL1A1、COL3A1和Acta2的mRNA和蛋白相对表达水平均升高(均P<0.05);与Hcy组比较,EX527+Hcy组CF中COL1A1、COL3A1和Acta2的mRNA和蛋白相对表达水平均降低(均P<0.05)。(3)与NC组比较,Hcy组CF细胞中SIRT1蛋白相对表达水平升高,Ac-p53蛋白相对表达水平降低(均P<0.05);与Hcy组比较,EX527+Hcy组细胞中SIRT1蛋白相对表达水平降低,Ac-p53蛋白相对表达水平升高(均P<0.05)。结论抑制SIRT1/p53信号通路可促进Hcy诱导的CF凋亡,并抑制CF增殖,从而缓解Hcy诱导的心肌纤维化。

槟榔碱对口腔黏膜成纤维细胞分泌整合素α_2的影响

目的:通过研究槟榔碱对体外培养的人口腔黏膜成纤维细胞(FB)表达整合素α2的影响,探讨整合素α2在口腔黏膜成纤维性变(OSF)发病机制中的可能作用。方法:体外培养人正常口腔黏膜成纤维细胞(FB),培养基中加入不同浓度(0、10、20、40、80、160μg/ml)的槟榔碱孵育,MTT法12h后检测FB的增殖水平。RT-PCR法24h后检测0、10、20、40μg/ml浓度组整合素α2mRNA的表达水平。结果:槟榔碱浓度为20μg/ml时,FB增殖活性开始下降,与对照组相比无统计学差异(p>0.05),40μg/ml时下降明显与对照组相比有统计学差异(p<0.05)。正常对照组整合素α2mRNA表达量低,随槟榔碱浓度增高其表达量呈增高趋势(p<0.05)。结论:槟榔碱具有刺激FB表达整合素α2的作用,提示FB分泌整合素α2增多,进而诱导胶原合成增多,可能是OSF发生机制之一。