妊娠糖尿病患者血清S100A4、FNDC5水平及其与妊娠结局的关系

目的 探究妊娠糖尿病(GDM)患者血清S100钙结合蛋白A4(S100A4)、Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5(FNDC5)水平及其与妊娠结局的关系。方法 选取2020年6月至2022年6月该院126例GDM患者作为GDM组,选取同期孕检的126例健康孕妇作为对照组。根据GDM患者妊娠结局情况分为妊娠结局良好组(76例)和妊娠结局不良组(50例)。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清S100A4、FNDC5水平,采用Logistic回归分析GDM孕妇妊娠结局,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清S100A4、FNDC5预测GDM孕妇妊娠不良结局的价值,采用Spearman相关性分析血清S100A4、FNDC5与不良妊娠结局的相关性。结果 GDM组血清S100A4水平明显高于对照组(P<0.05),血清FNDC5水平明显低于对照组(P<0.05)。妊娠结局良好组血清S100A4水平明显低于妊娠结局不良组(P<0.05),血清FNDC5水平明显高于妊娠结局不良组(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,GDM患者血清S100A4水平与不良妊娠结局呈正相关(P<0.05),FNDC5水平与不良妊娠结局呈负相关(P<0.05)。Logistic回归分析表明,血清S100A4、空腹血糖、HOMA-IR是GDM患者发生不良妊娠结局的危险因素(P<0.05),FNDC5是GDM患者发生不良妊娠结局的保护因素(P<0.05)。血清S100A4、FNDC5联合预测GDM妊娠结局的曲线下面积大于S100A4(Z=2.045,P=0.041)及FNDC5单项检测(Z=2.010,P=0.044)。结论 GDM患者血清S100A4水平升高,FNDC5水平降低,二者对评估GDM孕妇妊娠结局具有一定的参考价值。

CL、phIGFBP-1、fFN及阴道微生物代谢产物在早产孕妇中的表达水平及其意义

【目的】探讨宫颈分泌物中高磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1(phIGFBP-1)、胎儿纤维连接蛋白(fFN)、宫颈管长度(CL)以及阴道微生物代谢产物在早产孕妇中的表达水平及其意义。【方法】选取2020年9月至2021年10月在本院就诊的92例出现宫缩的未足月单胎孕妇,根据妊娠结局分为早产组(n=50)和足月组(n=42),比较两组宫颈分泌物中phIGFBP-1、fFN、CL及阴道微生物代谢产物阳性率,分析phIGFBP-1、fFN、CL的相关性及对孕妇早产的预测效能。【结果】早产组宫颈分泌物中phIGFBP-1和fFN水平显著高于足月组(P<0.05),CL显著短于足月组(P<0.05);宫颈分泌物中phIGFBP-1、fFN与CL呈负相关(r=-0.320、-0.387,P<0.05)。早产组和足月组阴道微生物代谢产物过氧化氢(H_(2)O_(2))、白细胞酯酶(LE)及唾液酸苷酶(SNA)阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。phIGFBP-1、fFN、CL及三者联合预测孕妇早产的受试者工作特征(ROC)曲线下面积分别为0.721、0.757、0.841和0.976。【结论】与足月孕妇比较,早产孕妇宫颈分泌物中phIGFBP-1、fFN水平明显升高,CL缩短,而阴道微生物代谢产物无明显差异,且phIGFBP-1、fFN和CL对孕妇早产有较好的预测效能。

金黄色葡萄球菌FnBPA D基因片段的表达

金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳腺炎的主要传染性病原菌。本实验采用分子克隆及蛋白表达技术,成功的表达了金黄色葡萄球菌纤维素结合蛋白A(FnBPA)D片段并对其免疫学活性进行了初步研究。表达产物免疫实验动物后,获得较高效价的抗体。用制备血清进行吞噬调理试验,抗金黄色葡萄球菌黏附等一系列试验,证明抗体对金黄色葡萄球菌具有吞噬调理作用,也有抗金黄色葡萄球菌黏附的作用,这将为制备奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌黏附素疫苗奠定基础。

金黄色葡萄球菌粘附素Fnbp A功能区基因的克隆和原核表达

【目的】克隆和表达奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌纤连蛋白连接蛋白A(Fnbp A)的功能基因。【方法】采集奶牛急性乳腺炎乳样,分离金黄色葡萄球菌,提取其DNA作为模板,利用设计合成的特异性引物,对金黄色葡萄球菌进行FnbpA功能基因的PCR扩增。回收目的基因并连接到T载体,鉴定后进行测序,然后将FnbpA基因连接到pET-32a(+)质粒中,经鉴定后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导后采用SDS-PAGE分析蛋白质的表达情况。【结果】PCR产物经电泳成像,仅金黄色葡萄球菌在1.7 kb处出现特异性条带,测序发现其与GenBank公布的FnbpA序列的同源性为98%;蛋白诱导表达SDS-PAGE分析发现,在80 ku处出现特异性条带。【结论】试验成功地克隆到FnbpA基因,并在大肠杆菌中获得高效表达,蛋白量为33.4%,为进一步研究金黄色葡萄球菌粘附素基因工程疫苗奠定了基础。

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌FnbpB-D基因的表达及其抗血清活性

纤维素结合蛋白B(FnbpB)是金黄色葡萄球菌(S.aureus)最主要的黏附因子之一,它能够介导S.aureus结合于细胞表面的纤维连结素(Fn)和纤维蛋白原(Fg)。FnbpB基因中D区为主要活性部位。本实验利用pET-32a表达载体表达了S.aureus FnbpB-D重组蛋白(34.7ku),并通过动物实验对重组FnbpB-D蛋白的抗血清活性进行了初步研究。采用ELISA对抗血清进行抗粘附性检测,结果显示实验组与对照组差异极显著(p<0.01),抗血清具有较强的抑制S.aureus黏附纤维连结素的作用。此外,调理吞噬实验结果显示,免疫兔全血对S.aureus有较强的调理作用。这些实验结果将为制备奶牛乳房炎S.aureus黏附素疫苗的研制提供参考。

猪链球菌2型四川人源分离株ZYH18纤连蛋白结合蛋白基因的克隆和序列分析

目的对2005年猪链球菌2型(Streptococcus suistype 2,S.suis2)四川资阳人源分离株ZYH18纤连蛋白结合蛋白(FBPS)基因进行克隆和序列分析。方法以ZYH18的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增出纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白基因片段,克隆于pMD-T18载体,构建成载体pMD-T-fbps,转化到宿主菌TG1中,进行序列测定(GenBank登录号为DQ345444)。测序结果与实验室保存的其它7株猪链球菌2型临床分离菌株测序结果及GenBank提交序列AF438158进行编码区基因的同源性比对。结果成功克隆了实验室保存的分离于不同时间和地点的,包括ZYH18在内的8株S.suis2临床分离菌株的fbps基因,并对其编码区基因进行了同源性比对。结论实验室保存的8株菌的FBPS编码区基因同源性高达100%,并不因分离时间和地点的不同而不同;与GenBank提交序列AF438158同源性为99%,存在两个氨基酸的差异。

52例肠瘘患者血清中营养相关蛋白质的检测及临床意义

目的探讨前白蛋白(PA)、转铁蛋白(TF)、白蛋白(Alb)、纤维连接蛋白(FN)和视黄醇结合蛋白(RBP)在肠瘘患者营养治疗支持疗法疗效评价中的临床意义。方法分别测定52例医源性肠瘘患者在肠外营养支持(TPN)前和TPN治疗1周后血清PA、TF、Alb、FN和RBP水平。结果血清PA和RBP水平在TPN治疗1周后明显增加(P<0.01),而Alb、FN和TF水平在治疗前、后差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PA和RBP作为评估TPN疗效的指标比Alb、FN和TF更加敏感。

猪链球菌2型FBPS的纤连蛋白结合部位的初步确定

根据猪链球菌2型江苏分离株HA9801的fbps基因序列,设计合成不同的引物,用含全长fbps的pMD-T-FBPS质粒为模板,通过PCR技术,扩增不同片段fbps,并按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pET-32a(+),构建分别表达全长7～82、7～165和87～320氨基酸FBPS的重组表达质粒pFBPS、pFBPS(7～82)、pFBPS(7～165)和pFBPS(87～320);将重组质粒转化大肠杆菌BL 21(DE)株,经IPTG诱导,表达rFBPS(7～82)、rFBPS(7～165)、rFBPS(87～320)和rFBPS(全长),分子量分别为29、34、42及83kD的融合蛋白.配基亲和Western blot试验表明,表达的融合蛋白除rFBPS(7～82)外,均可与人纤连蛋白(Fn)结合,由此可以推断SS2的纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(FBPS)N端87～165氨基酸区域为具有结合活性的线性部位.

妊娠期糖尿病早期预测标记物研究进展

妊娠期糖尿病（GDM）是妊娠期重要的并发症之一。GDM对孕产妇及围生儿均有较大危害：孕妇易并发妊娠期高血压疾病、胎膜早破、产后出血等,孕妇产后发生2型糖尿病的概率增加,胎儿巨大儿的发生率和畸形率高,新生儿窒息和低血糖发生率高,新生儿成年后罹患代谢性疾病及肥胖的概率增高。目前临床上GDM筛查是在孕24～28周通过糖耐量实验进行的。但对于孕早期患GDM的孕妇目前尚无很好的技术进行检测。随着GDM患者的不断增多,早期筛查越来越引起重视。目前已开展了关于GDM早期预测标记物的研究,这些预测标记物主要包括超敏C反应蛋白、性激素结合球蛋白、可溶性肾素/肾素原受体、糖基化纤连蛋白和甘丙肽等,对这些标记物的基本性质及其在预测GDM时的效果等方面的研究进展进行综述。

金黄色葡萄球菌纤连结合蛋白信号肽的生物信息学分析及其真核分泌表达

参考GenBank中收录的金黄色葡萄球菌FnBPA(fibronectin-binding protein A)基因和牛IFN-γ序列进行了信号肽序列的分析。分析结果显示,牛IFN-γ信号肽序列相关指标优于金黄色葡萄球菌FnBPA基因自身的信号肽序列。在此基础上利用重叠延伸PCR法以牛IFN-γ信号肽序列取代金黄色葡萄球菌FnBPA基因的信号肽序列,并构建分泌型真核表达载体PV-SFn。该重组表达载体转染BHK-21细胞后经ELISA及Western-blot检测证实可有效分泌表达目的蛋白。

牛源金黄色葡萄球菌黏附素纤连结合蛋白A分泌型DNA疫苗诱导小鼠免疫效应的研究

采用PCR方法对编码金黄色葡萄球菌黏附素纤连结合蛋白A(FnbpA)的A区基因片段进行了特异性扩增,构建了真核表达载体pVAX-SFn,转染BHK-21细胞后经ELISA可检测出分泌表达的FnbpA蛋白。将真核重组表达质粒肌肉注射C57BL/6小鼠,免疫后检测小鼠血清抗体效价、淋巴细胞增殖及对试验小鼠攻毒试验。结果表明,该重组表达载体诱导细胞和体液免疫应答的强度均明显超过对照组。对小鼠的攻毒试验结果提示该重组DNA经肌肉注射途径接种可对小鼠产生免疫保护。本试验的结果对该DNA疫苗今后在实际中的应用奠定了良好的试验基础。

梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136前炎症活性的研究

目的初步研究梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136潜在的前炎症活性。方法构建重组质粒p ET-28a/Tp0136并诱导其表达目的蛋白;将不同浓度(1、2、5、10μg/m L)的r Tp0136分别刺激THP-1源性巨噬细胞,ELISA法分别检测其产生前炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平;并同时用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)预先处理巨噬细胞,检测相应细胞因子分泌量。结果成功构建了p ET-28a/Tp0136重组质粒,并诱导表达和纯化出r Tp0136;重组蛋白能诱导巨噬细胞产生IL-1β、IL-6和TNF-α,并且呈浓度和时间依赖性;重组蛋白刺激经PDTC预处理后的巨噬细胞,其IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平分别降至32%、35%和27%。结论r Tp0136可诱导巨噬细胞产生前炎症细胞因子,该过程可能受NF-κB调控。

m-AST、RBP、PA、ADA和FN在肝脏疾病诊断中的临床评价

目的了解视黄醇结合蛋白（RBP）、前白蛋白（PA）、天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶（m-AST）、纤维结合蛋白（FN）、腺苷脱氨酶（ADA）5项指标在肝病诊断和治疗中的意义。方法使用日立7180全自动生化分析仪测定132例急性肝炎、16例重型肝炎、32例肝硬化、35例酒精性肝炎、68例慢性肝炎和92例健康对照者的血清m-AST、RBP、PA、FN、ADA水平。绘制5项指标在不同肝病中的受试者工作特征（ROC）曲线,并计算ROC曲线下面积（AUC）。结果急性肝炎组和重型肝炎组m-AST、ADA显著增高,RBP、FN、PA显著降低;m-AST的异常比例最高（均为100%）;m-AST、RBP、PA的AUC较高,分别为0.94、0.90、0.85和0.96、0.92、0.87。肝硬化组ADA升高,m-AST轻度升高,RBP、PA、FN降低;FN的异常比例最高（100%）;FN的AUC为0.88,ADA为0.66,其他3项仅为0.46~0.47。酒精性肝炎组m-AST轻度升高,FN显著下降,其余项目均变化不大,m-AST、FN异常比例较高（98%、81%）;m-AST的AUC为0.86,其他4项的AUC均较低。慢性肝炎组中以m-AST升高最为明显,5项指标的异常比例均≤60%,各指标的AUC也较低。结论急性肝炎中m-AST、RBP、ADA、PA、FN均有应用价值;重型肝炎中m-AST、RBP、PA应用价值较大;肝硬化中FN、ADA有应用价值;酒精性肝炎m-AST轻度升高,能区别于慢性肝炎。

牛GM-CSF与金黄色葡萄球菌黏附素FnBPB共表达质粒的构建与原核表达

采用PCR方法对牛粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和金黄色葡萄球菌FnBPB的D区进行特异性的扩增,并通过重叠延伸PCR扩增GM-CSF-FnBPB串联基因,构建了克隆质粒pMD19-GM-CSF-FnBPB。利用表达载体pET-32a(+)对该融合基因片段进行原核表达,SDS-PAGE分析表明,在1mmol/L IPTG诱导浓度下,在39ku处出现了与目的蛋白一致的外源蛋白带,Western blot分析表明,该蛋白具有反应原性,进而证明该融合基因成功在原核细胞中表达。

胰岛素样生长因子结合蛋白-1/胎儿纤维连接蛋白联检联合宫颈长度预测早产的价值

目的探讨宫颈分泌物中胰岛素样生长因子结合蛋白-1/胎儿纤维连接蛋白(insulin-like growth factor binding protein-1/fetal fibronectin,IGFBP-1/fFN)联检与超声行宫颈长度(cervical length,CL)联合检测在预测早产中的临床应用价值。方法选取2021年3月—2022年3月苏州大学附属太仓医院收治的140例先兆早产孕妇为研究对象,按照妊娠结局分为早产组(n=38),足月产组(n=102)。对比两组孕妇的IGFBP-1/fFN和宫颈长度的检查结果。分析CL、IGFBP-1/fFN、CL+IGFBP-1/fFN用于预测早产的准确率、特异度、灵敏度、阴性预测值与阳性预测值。结果早产组CL(20.1±13.5)mm显著低于足月产组,差异有统计学意义(t=-6.859,P<0.001);在预测早产方面,IGFBP-1/fFN可实现的准确率、特异度、灵敏度、阴性预测值与阳性预测值依次为77.1%、78.4%、73.6%、88.8%、56.0%;CL可实现的准确率、特异度、灵敏度、阴性预测值与阳性预测值依次为83.5%、95.0%、52.6%、84.3%、80.0%;IGFBP-1/fFN+CL可实现的准确率、特异度、灵敏度、阴性预测值与阳性预测值依次为86.4%、99.0%、52.6%、84.9%、95.2%。使用孕妇宫颈分泌物中IGFBP-1/fFN联检预测早产的灵敏度较高,IGFBP-1/fFN联检与CL联合检测在预测早产的特异度和准确率以及预测早产的阳性预测值均高于分别单独使用IGFBP-1/fFN、CL的诊断。结论IGFBP-1/fFN联检+CL,能够使先兆早产预测的准确率、特异度以及阳性预测值明显提升,在一定程度上有助于先兆早产的预测。

穿透支原体纤连蛋白结合蛋白的鉴定及分离纯化

目的 探讨穿透支原体对宿主细胞的黏附机制。方法 用去污剂Triton X-100提取穿透支原体蛋白,用配体免疫印迹试验鉴定纤连蛋白结合蛋白(FnBP);然后制备纤连蛋白Sepharose 4B亲和柱,运用亲和层析技术从制备的样品中分离纯化FnBP,在非还原状态下进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。结果 配体免疫印迹试验鉴定出一65kDa的蛋白条带,可特异性地结合Fn;亲和层析技术得到相应的FnBP的纯化产物。结论FnBP与穿透支原体对宿主细胞的黏附过程有关。

早产的预测

早产是围生儿患病和围生儿死亡的最主要因素,因此预测早产具有重要的临床意义。早产往往是一些隐藏的病理情况的具体表现,这些病理情况会导致子宫,特别是子宫颈的生理和生化性的改变。宫颈的生理变化主要表现为宫颈的缩短和宫颈口的扩张,生化改变则比较复杂,有许多生化因子被证实和早产有关,该文就近几年研究比较多、具有一定临床指导意义的一些早产预测指标研究进展作以综述。

结肠癌组织中SATB1、FN1、COL1A2蛋白表达变化及意义

目的探讨结肠癌组织中特异AT序列结合蛋白1(SATB1)、纤维连接蛋白1(FN1)、Ⅰ型胶原蛋白α2链(COL1A2)蛋白的表达变化及意义。方法选择83例结肠癌组织及癌旁正常组织(距肿瘤边缘>5 cm),用免疫组化SP法检测组织中SATB1、FN1、COL1A2蛋白表达,并分析三种蛋白阳性表达与患者临床病理特征的关系,用Spearman相关法分析三者之间的关系。结果结肠癌组织中SATB1、FN1、COL1A2蛋白阳性表达率均高于癌旁正常组织(P均<0.05)。结肠癌组织SATB1、FN1与COL1A2蛋白阳性表达与肿瘤TNM分期、组织分化程度及淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者年龄、性别及肿瘤直径无关(P均>0.05)。结肠癌组织中SATB1蛋白表达与FN1、COL1A2蛋白表达呈正相关(r分别为0.584、0.657,P均<0.001),FN1蛋白表达与COL1A2蛋白表达无相关性(r=0.212,P=0.605)。结论SATB1、FN1、COL1A2蛋白在结肠癌组织中呈高表达,三者共同参与肿瘤的发生发展。

链球菌属纤连蛋白结合蛋白的生物信息学分析

对链球菌属纤连蛋白结合蛋白进行系统的分析,找出其特征,为以后的研究奠定基础。通过MUSCLE、BLASTP、PSI-BLAST、PHYLIP、Perl编程等生物信息学方法对217条候选纤连蛋白结合蛋白进行研究。发现共有31个序列纤连蛋白结合蛋白重复单元序列模体,绝大部分蛋白由两个或两个以上的不同模体序列构成,其保守结构域组合呈现多样性等特征。表明链球菌属纤连蛋白结合蛋白重复单元序列模体不是严格统一的,总体上具有变异性,但模体之间又有很大的相似性。

金黄色葡萄球菌组分疫苗研究进展

临床上,耐药性的金黄色葡萄球菌日益增多,极其耐药的菌株甚至获得了超级耐药细菌的称谓,难以找到有效的抗菌素控制其感染,因而研制有效的疫苗来防治金黄色葡萄球菌感染显得更加重要。对研制开发的金黄色葡萄球菌荚膜多糖疫苗、纤维粘连结合蛋白疫苗、RNAⅢ激活蛋白疫苗以及核酸疫苗等进行了综述。