成人牙周健康状况与fimA基因型牙龈卟啉单胞菌的相关性

目的分析不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)在牙周健康人群和慢性牙周炎人群中的分布,探讨不同fimA基因型P.gingivalis与成人牙周状况的相关关系。方法收集牙周健康组(136例)和慢性牙周炎组(115例)的龈下菌斑样本,采用16SrRNAPCR法检测P.gingivalis,并根据各fimA基因型(Ⅰ～Ⅴ和Ⅰb)的特异性引物检测不同fimA基因型P.gingivalis菌株的分布,计算OR值和95%可信区间。结果牙周健康组和慢性牙周炎组龈下菌斑样本中P.gingivalis阳性率分别为22.1%和81.7%,多数样本中只检测到1种fimA基因型。牙周健康组中ⅠfimA型的检出率最高(占66.7%);慢性牙周炎组中则为ⅡfimA基因型(占43.6%),其次为Ⅳ和ⅠbfimA基因型。慢性牙周炎的发生与P.gingivalis的关系密切(OR=16.36),Ⅰ、Ⅰb、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、ⅤfimA基因型P.gingivalis与慢性牙周炎相关性的OR值分别为0.97、13.26、36.62、4.57、22.86、1.19;ⅡfimA基因型P.gingivalis与慢性牙周炎的相关性最强,其次为Ⅳ和Ⅰb型。结论P.gingivalis菌株的fimA基因型存在差异,特异性fimA基因型P.gingivalis可能与成人慢性牙周炎的发生关系密切。

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌在慢性牙周炎患者中的分布

目的 分析不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(P .gingivalis)在慢性牙周炎患者中的分布状况。方法 收集10 1例慢性牙周炎患者的龈下菌斑,采用常规培养法和16SrRNAPCR检测P .gingivalis,并根据各fimA基因型的特异引物,用聚合酶链反应(PCR)检测不同fimA基因型菌株的分布。结果 16SrRNAPCR检测P .gingivalis阳性检出率为88 1%。大多数受检牙龈下菌斑中只检测出一种fimA基因型菌株(6 5 1% ) ,各fimA基因型的总检出率:ⅠfimA为2 4 7% ;ⅡfimA为4 3 8% ;ⅢfimA为15 7% ;ⅣfimA为4 0 4 % ;VfimA为3 4 %。结论 慢性牙周炎患者龈下菌斑中的牙龈卟啉单胞菌存在fimA基因多态性,ⅡfimA和ⅣfimA基因型P .

不同FIMA基因型牙龈卟啉单胞菌与慢性牙周炎相关性的研究

目的检测不同FIMA基因型牙龈卟啉单胞菌在我国慢性牙周炎患者中的分布状况,及其与牙周炎的相关性。方法收集101例慢性牙周炎患者的龈下菌斑,采用P.GINGIVALIS16S RRNA和5种FIMA基因型的特异引物,用PCR法检测不同FIMA基因型P.GINGIVALIS的分布;记录取样牙六个位点(近颊、颊正中、远颊、近舌、舌正中、远舌)的牙周临床指标,包括牙周探诊深度,临床附着丧失和探诊出血。结果16S RRNA PCR,P.GINGIVALIS检出率为88.1%。大多数受检牙龈下菌斑只检测出一种FIMA基因型(65.1%),FIMA的总检出率最高为43.8%,其次为FIMA,检出率为40.4%;FIMA型和FIMA型P.GINGIVALIS在轻中度和重度牙周组的检出率均最高。结论FIMA型和FIMA型P.GINGIVALIS是我国牙周炎患者龈下菌斑中的优势菌株,表明FIMA型和FIMA型P.GINGIVALIS与我国人群牙周炎的发生发展密切相关。

青少年正畸治疗患者牙龈卟啉单胞菌及其毒力因子FimA基因型的变化研究

目的:分析牙龈卟啉单胞菌(Pg)及其毒力因子FimA在青少年正畸患者治疗过程中的变化。方法:随机收集青少年需正畸患者中牙龈健康者61例,分别采集正畸矫治器粘戴前及粘戴后第1、2、3、6个月时的龈沟液样本,并记录其牙龈指数,用16S rDNAPCR技术检测各样本中Pg及其毒力因子FimA(6种类型)的表达,并对实验数据进行统计学分析。结果:与矫治前相比,矫治后3个月Pg和FimA基因Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ型均显著增加(P<0.05)。Pg和6种基因型的阳性检出率在佩戴矫治器前3个月呈增长趋势,并在第3个月时达到最高水平,随后开始下降;到第6个月时,Ⅰ、Ⅰb型恢复到了矫治前的状态。Pg及Ⅰ、Ⅰb、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ型与牙龈指数呈正相关关系(P<0.05)。结论:青少年患者在正畸治疗过程中,矫治器戴入早期可导致Pg及FimA各基因型的增加,诱发牙龈炎症。

维吾尔族慢性牙周炎中牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA毒力基因型的分布

目的:分析维吾尔族慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA毒力基因型的分布情况。方法:收集52例维吾尔族慢性牙周炎患者的龈下菌斑,采用16S rRNAPCR法检测牙龈卟啉单胞菌,并根据菌毛fimA毒力基因型的特异引物,用聚合酶链反应(PCR)检测Ⅱ型fimA和Ⅳ型fimA菌株的分布。结果:16S rRNAPCR法检测牙龈卟啉单胞菌在龈下菌斑中阳性检出率是76.9%。牙周袋PPD>6mm位点龈下菌斑标本的P.gingivalis检出率高于4<PPD≤6mm采样的位点,2组差异有统计学意义(P<0.05)。牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA毒力基因型在牙龈卟啉单胞菌感染者的检出率分别是:ⅡfimA型为37.5%,ⅣfimA型为22.5%。结论:维吾尔族慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌有较高的检出率。牙龈卟啉单胞菌存在fimA毒力基因多态性。

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌刺激口腔上皮细胞白细胞介素-8的表达

目的比较不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌（P.gingivalis）刺激下口腔上皮细胞白细胞介素-8（IL-8）的表达水平,初步探讨P.gingivalis致病性与其fimA基因型的关系。方法P.gingivalis ATCC 33277（Ⅰ型fimA）、W83、47A-1（Ⅳ型fimA）和KB细胞ATCC CCL-17共同孵育24h,以未受刺激的KB细胞作为对照组,分别在1、3、6、24h收集细胞和培养上清液。RT-PCR检测KB细胞IL-8m RNA的动态表达,酶联免疫反应检测培养上清液中IL-8的动态变化。结果2种fimA基因型菌株刺激1h,KB细胞IL-8mRNA的表达上调至峰值,高于对照组,3～24hIL-8m RNA的表达水平接近对照组;P.gingivalis感染细胞后3～24h,上清液中的IL-8水平低于对照组,Ⅳ型菌株低于Ⅰ型菌株;IL-8mRNA及其蛋白表达不完全一致,提示IL-8的表达存在转录后水平的调节。结论fimA基因型与口腔上皮细胞IL-8的表达水平相关,提示P.gingivalis致病性与其fimA基因型相关。

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌对牙龈成纤维细胞表达白细胞介素-8的影响

目的：研究不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）对人牙龈成纤维细胞表达IL-8的影响,探讨fimA基因型与Pg致病力差异之间的关系。方法：PgATCC 33277（Ⅰ型）,WCSP115（Ⅱ型）,WCSP1.5（Ⅲ型）,W83（Ⅳ型）分别与牙龈成纤维细胞在标准条件下共同孵育,于孵育后1、3、6、12 h收集细胞和上清,应用实时荧光定量RT-PCR和ELISA法分别检测牙龈成纤维细胞IL-8 mRNA和蛋白的动态表达。结果：与对照组比较,各fimA型Pg对牙龈成纤维细胞IL-8mRNA和蛋白的表达均有明显的促进作用（P＜0.01）;其中ⅡfimA型组IL-8 mRNA和蛋白的表达量明显高于其它fimA型组,不同时间点IL-8 mRNA相对表达量分别为20.42±2.21～103.01±12.50,蛋白分泌水平为（137.46±4.97～323.24±13.74）pg/ml;而ⅢfimA型Pg组的表达水平弱于其它fimA型组,IL-8 mRNA相对表达量为3.61±0.39～12.88±1.56,蛋白分泌水平为（44.83±3.68～189.19±87.34）pg／ml，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：Pg可促进牙龈成纤维细胞IL-8mRNA和蛋白的表达，且各fimA型Pg的促进作用有所差异。提示：fimA基因型的不同可能是pg的致病力差异的基因基础。

感染根管中牙龈卟啉单胞菌fimA基因多态性研究

目的研究根尖周炎患牙感染根管内牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)不同fimA基因型的分布情况。方法收集200例感染根管内样本,经DNA抽提后使用16S r DNA PCR方法检测P.gingivalis。在P.gingivalis检出阳性样本中,根据各fimA基因型的特异引物,采用PCR检测不同fimA基因型菌株的分布,并通过Pearsonχ2检验对不同fimA基因型与临床症状进行相关性分析。结果感染根管中P.gingivalis的检出率为48%,其中79例样本只检测到1种fimA基因型P.gingivalis菌株(82.3%);12例样本检测到2种或2种以上fimA基因型P.gingivalis(12.5%)。各fimA基因型P.gingivalis的检出情况:Ⅰ型29.2%、Ⅰb型8.3%、Ⅱ型37.5%、Ⅲ型14.6%、Ⅳ型19.8%。各型fimA基因与临床症状之间无统计学相关性(P<0.05)。结论感染根管内P.gingivalis的fimA基因存在基因多态性,其中以fimAⅡ型P.gingivalis菌株检出率最高,其次为Ⅰ型和Ⅳ型。

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌在牙周健康人群中的分布

目的调查不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)在牙周健康人群中的分布情况。方法收集136例牙周健康者的龈下菌斑样本,采用16S rRNAPCR法检测P.gingivalis;并根据各fimA基因型特异性引物,用PCR法检测不同fimA基因型P.gingivalis的分布。结果136例牙周健康者的龈下菌斑样本中携带P.gingivalis的阳性率为22.1%。大多数受检者龈下菌斑中只检测到1种fimA基因型P.gingivalis菌株(80.0%);5例样本检出了2种fimA型P.gingivalis(16.7%),且均为ⅠfimA型与其它fimA型P.gingivalis的联合检出。各fimA型P.gingivalis的检出情况:Ⅰ型(66.7%)、Ⅰb型(6.7%)、Ⅱ型(6.7%)、Ⅲ型(10%)、Ⅳ型(6.7%)、Ⅴ型(16.7%)。Ⅰ型的检出率明显高于其它各型,差异有统计学意义(P<0.05);其它各fimA型P.gingi-valis间的检出差异均无统计学意义。结论本研究条件下ⅠfimA型P.gingivalis在牙周健康人群中检出例数最高,提示:我国牙周状况不同人群携带的P.gingivalis菌株fimA基因型可能存在差异。

不同fimA型牙龈卟啉单胞菌降解上皮细胞间连接蛋白能力的初步研究

目的:研究不同fimA型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)破坏上皮细胞间连接能力,探讨fimA基因型与致病力差异之间的关系。方法:应用不同fimA型P.g菌株ATCC 33277(Ⅰ型),WCSP115(Ⅱ型),WCSP1.5(Ⅲ型),W83(Ⅳ型),3501(Ⅴ型),4702(Ib型)分别与口腔上皮细胞系KB细胞在标准条件下共同孵育,于孵育后0.5、1和3 h,收集细胞蛋白,应用Westen-blot检测N-钙粘素(N-cadherin)和β-连环素(β-Catenin)的动态表达。结果:与对照组比较,各fimA型P.g对KB细胞N-cadherin和β-Catenin蛋白的表达均有明显的降解作用;其中ⅡfimA型组N-cadherin和β-Catenin蛋白的表达量低于其它fimA型组。结论:P.g可破坏上皮细胞间连接成分,破坏上皮细胞的完整性,而Ⅱ型fimA型P.g水解上皮细胞间粘合连接蛋白的能力强于其它fimA型。提示fimA基因型的不同可能是P.g的致病力差异的基因基础。

牙龈卟啉菌菌毛FimA基因高效植物表达载体的构建

目的:构建果实特异启动子驱动的含牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA基因的高效植物表达载体,并进一步提高抗原基因的表达量和免疫原性,为研制有效的转基因植物牙周炎疫苗打下基础。方法:以提取的番茄基因组DNA为模板扩增番茄果实特异表达启动子E8的核心序列(约1.11kb),同时合成通过接头连接的霍乱毒素B亚基和FimA(266～337)(约600bp),并通过SOE PCR,即重叠区扩增基因拼接法(genesplicing by overlap extension)将两者拼接,拼接后的序列为EF。用EcoR I和Pst I分别双酶切EF序列及表达载体pCAMBIA1302,连接转化,得到的重组质粒pCAMBIA1302-EF用电击法转化根癌农杆菌GV3103。结果:重组质粒经PCR和酶切鉴定证明已成功转化。结论:本研究成功构建了番茄果实特异性启动子驱动FimA基因,以CTB为黏膜免疫佐剂的高效植物表达载体。

牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA与福赛斯类杆菌表面蛋白间相互结合机制

目的 :探讨牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA与福赛斯类杆菌相互结合的机制。方法 :将福赛斯类杆菌ATCC 4 30 37全菌蛋白经室温、DTT和加热处理 ,SDS -PAGE梯度胶电泳 ,采用Western -blot技术检测其与牙龈卟啉单胞菌全菌蛋白及其菌毛FimA之间相互作用的表面蛋白分子。结果 :福赛斯类杆菌与牙龈卟啉单胞菌菌体蛋白相互结合的蛋白Mr分别为 36× 10 3 、2 1.9× 10 3 、7.4× 10 3 ;牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA与Mr为 36×10 3 的福赛斯类杆菌菌体蛋白发生结合 ,且福赛斯类杆菌菌体蛋白变性不影响两者间结合。结论 :牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA能与福赛斯类杆菌菌体蛋白相互结合 ,两者结合为碳水化合物 -蛋白质凝集素样机制。

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌刺激上皮细胞表达细胞因子的比较

目的比较不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)刺激下口腔上皮细胞表达细胞因子的水平。方法P.gingivalis ATCC33277(IfimA),W83(ⅣfimA),47A-1(ⅣfimA)分别与KB细胞ATCCCCL17共同孵育6h,在3h和6h收集细胞和培养上清液。逆转录-聚合酶链式反应检测KB细胞IL-8,IL-6,IL-1βmRNA的表达,酶联免疫反应检测培养上清液中IL-8,IL-6,IL-1β的变化。结果3h时,ⅣfimA组IL-6蛋白水平低于IfimA组(P<0.05),6h时,ⅣfimA组IL-6和IL-8蛋白水平均低于ⅠfimA组(P<0.05);IL-8,IL-6mRNA和蛋白水平表达不一致,提示存在转录后水平的调节。3h,6h时,IL-1β对P.gingvalis刺激不敏感,mRNA和蛋白表达水平都很低。结论P.gingivalis fimA基因型与上皮细胞表达细胞因子的水平相关,提示P.gingivalis致病性与其fimA基因型相关。

肠炎沙门菌Ⅰ型菌毛主要亚单位FimA原核表达及纯化

为探讨肠炎沙门菌非编码小RNA(non-coding small RNA)IsrE在转录后水平是否参与对fimA的调控作用,在大肠杆菌中构建并表达FimA重组蛋白,并对其培养条件进行优化,制备高纯度FimA重组蛋白。利用原核表达载体p ET-28a(+)构建出能表达fimA的重组质粒,并分别对IPTG浓度、诱导温度和诱导时间等条件进行优化,以提高目的蛋白的产量和增大其可溶性,最后经Ni-NTA亲和层析分离纯化FimA重组蛋白。通过酶切、测序和Western blot鉴定分析,成功构建并表达肠炎沙门菌I型菌毛主要亚单位FimA,蛋白分子质量约为19.3 kDa,且主要以包涵体的形式表达,经Ni-NTA亲和层析纯化后的重组蛋白在SDS-PAGE中显示单一条带。本研究构建、表达并获得纯度较高的重组蛋白FimA,为进一步研究和验证肠炎沙门菌非编码sRNA IsrE是否在转录后水平参与对fimA的调控奠定了基础。

牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA基因型在牙周病患者中的分布情况

目的 :探讨牙龈卟啉单胞菌 Fim A基因型在牙周患者的分布情况。方法 :采用 PCR技术对 40例牙周患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌及其基因型进行检测。结果 :牙龈卟啉单胞菌在牙周患者的牙周袋内检出率为 87.5% ,牙龈卟啉单胞菌 Fim A各基因型在牙龈卟啉单胞菌携带者的检出率分别为 : 型2 2 .9% , 型 60 .0 % , 型 17.1% , 3 7.1% , 型未检出 ;基因 型在牙周袋内未单独检出 ,与基因 型混合感染。结论 :牙龈卟啉单胞菌 Fim A基因 型和 型是牙龈卟啉单胞菌在牙周病损部位的主要定植菌 。

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌对人脐静脉内皮细胞分泌相关蛋白及细胞因子的影响

背景:牙龈卟啉单胞菌感染是近年发现与动脉粥样硬化等多种疾病发生有关的危险因素,但不同fimA基因型的牙龈卟啉单胞菌致病能力不同,积极探明牙龈卟啉单胞菌高危菌株对于完善动脉粥样硬化诊疗机制具有重要作用。目的:探讨不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌对人脐静脉内皮细胞分泌单核细胞趋化蛋白1、白细胞介素6、内皮素1/一氧化氮的影响。方法:厌氧条件下对Ⅳ、Ⅱ、ⅠfimA基因型牙龈卟啉单胞菌进行培养,应用感染复数值为100感染人脐静脉内皮细胞,同时设阳性对照组为牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激人脐静脉内皮细胞、阴性对照组人脐静脉内皮细胞仅加细胞培养液培养。采用酶联免疫吸附法检测各组培养2,6,24 h后人脐静脉内皮细胞培养上清液中单核细胞趋化蛋白1、白细胞介素6、内皮素1/一氧化氮水平。结果与结论:除阴性对照组外,其他4组人脐静脉内皮细胞培养上清液中白细胞介素6、内皮素1/一氧化氮、单核细胞趋化蛋白1水平逐渐增高,且ⅣfimA基因型刺激组白细胞介素6、内皮素1/一氧化氮水平高于Ⅱ、ⅠfimA基因型刺激组及阳性对照组、阴性对照组(P<0.05);ⅡfimA基因型刺激组单核细胞趋化蛋白1水平高于Ⅳ、ⅠfimA基因型刺激组、阴性对照组(P<0.05)。结果表明,不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌刺激人脐静脉内皮细胞功能紊乱机制存在一定差异,Ⅱ、ⅣfimA基因上调单核细胞趋化蛋白1、白细胞介素6、内皮素1/一氧化氮分泌能力较强,可能在引起血管内皮细胞功能紊乱中占主导地位。

牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA基因型在牙周牙髓联合病变中的分布

目的分析牙龈卟啉单胞菌菌毛不同fimA基因型在牙周源性牙周牙髓联合病变患牙根管内的分布状况。方法收集因牙周损害导致的牙周牙髓联合病变患牙43例,开髓揭髓顶后用纸尖采集根管内组织液,提取DNA。采用16SrRNA PCR检测牙龈卟啉单胞菌,并根据各fimA基因型的特异性引物,用聚合酶链反应检测不同fimA基因型菌株的分布。结果 16S rRNA PCR检测牙龈卟啉单胞菌阳性率76.7%。牙龈卟啉单胞菌fimA各基因型在牙龈卟啉单胞菌携带者的检出率分别为:TypeⅠfimA为24.2%;TypeⅠb fimA为27.2%;TypeⅡfimA为75.8%;TypeⅢfimA为9.1%;TypeⅣfimA为48.5%;TypeⅤfimA未检出;同时检测出TypeⅠ和Ⅰb fimA为3.0%;TypeⅡ和ⅣfimA为39.4%;TypeⅠ、Ⅰb和ⅡfimA为21.2%。TypeⅡ和ⅣfimA基因型的检出率显著高于其他基因型(P<0.05)。结论牙周源性牙周牙髓联合病变根管内牙龈卟啉单胞菌存在fimA基因多态性。TypeⅡ和ⅣfimA基因型牙龈卟啉单胞菌菌株是牙周牙髓联合病变根管内的主要定植菌,可能与牙周牙髓联合病变的发生、发展相关密切。

两种fimA基因型牙龈卟啉单胞菌刺激下口腔上皮细胞ICAM-1的表达

目的比较2种fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)刺激下口腔上皮细胞ICAM-1的表达水平。方法实验组用P. gingivalis ATCC 33277(I型菌毛组),W83(IV型菌毛组),47A-1(IV型菌毛组)分别与KB细胞(ATCC CCL17)共同孵育24h;对照组为未受P. gingivalis刺激的KB细胞。分别在1h、3h、6h和24h收集细胞,运用流式细胞仪检测KB细胞膜上ICAM-1的动态表达。结果P. gingivalis刺激细胞后3h、6h和24h,实验组ICAM-1的表达水平均高于对照组;2种fimA基因型P. gingivalis调节KB细胞表达ICAM-1的方式相似,IV型菌毛组的调节作用强于I型菌毛组。结论P. gingivalis上调口腔上皮细胞表达ICAM-1的水平与其fimA基因型相关,提示P. gingivalis致病性与其fimA基因型相关。

牙龈紫质单胞菌菌毛fimA的致病机理

牙龈紫质单胞菌是成年人牙周炎的致病菌,表面的菌毛fimA是其主要的致病因子。本文对菌毛fimA的一般性质、结构特点、基因研究以及对宿主唾液蛋白、细胞外基质、宿主细胞表面的粘附机理、致病毒性以及免疫原性进行了综述。

沙门菌fimA-LAMP快速检测方法的建立及其应用

研究针对沙门菌保守菌毛fim A基因,设计4条两对特异性引物,建立快速检测沙门菌的环介导等温扩增(LAMP)方法,并对反应温度、检测特异性和灵敏度等反应条件进行一系列优化,与常规PCR进行比较,及对临床样品进行检测。结果显示:LAMP方法最适反应温度为64℃,Mg^(2+)浓度为8 mmol/L,d NTPs浓度为0.8 mmol/L,内外引物浓度比为1∶8;对6种相关肠道细菌进行LAMP扩增,仅沙门菌扩增阳性;对沙门菌检测的灵敏度为8.6×101cfu/m L,比PCR灵敏10倍;对市场肉类产品检测,LAMP与传统方法符合率为100%。试验表明,建立的沙门菌LAMP方法特异性强、灵敏度高、结果可视,且操作简单,无需昂贵的仪器,适合基层实验室和食品监测部门应用。