福州城区内河主要野生鱼类体内抗菌药物残留调查与分析

目的:为更好评价福州内河治理后的生态环境,在福州城区内河首次开展主要野生鱼体内6类抗菌药物残留调查。方法:以光明港、晋安河、白马河和凤坂河等4条福州主要内河水系为调查对象,共布设11个调查站位;并分别于2021年12月和2022年6月共采集27份样品,参照GB/T 22955-2008、GB/T 20762-2006等标准方法进行检测。调查结论:福州城区内河生态环境未受大部分常用抗菌药物污染,总体情况良好。

一步净化结合超高液相色谱串联质谱同时测定雅鱼中13类54种兽药残留

目的:本研究建立了一种一步净化法结合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)同时检测雅鱼(Schizothorax prenanti)中13类54种兽药残留的快速检测方法。方法:向2.0 g样品中加入8 mL 0.2%甲酸-乙腈:水溶液(90:10,V/V)提取,冰水浴超声提取,LPAS一步净化。采用C18柱,甲醇-0.1%甲酸/5 mmol/L乙酸铵溶液梯度洗脱,动态多反应监测(dMRM),正/负离子模式,内标法定量,LC-MS/MS测定。以添加54种兽药的方式,对提取方式、提取体积、盐的加入、液相和质谱条件进行了优化,对方法性能(基质效应、方法检出限、方法定量限、准确度、精密度)等进行了验证。结果:54种兽药在0.1~50μg/L范围内线性关系良好,决定系数(R^(2))≥0.992,方法检出限(LOD)为0.03~2.5μg/kg之间,方法定量限(LOQ)为0.1~8.3μg/kg之间,在低(添加量5~10μg/kg)、中(添加量10~20μg/kg)、高(添加量50μg/kg)三个水平下54种药物的平均回收率为70.45%~118.1%,RSD为0.01%~9.9%。对50份养殖雅鱼样本应用该方法进行检测,7份样品有药物检出,恩诺沙星和达氟沙星各检出2次,磺胺甲噁唑检出4次,均低于定量限的定性检出。结论:该方法操作简单,一步净化,且方法检出限低、灵敏度高,准确度和精密度均较好,方法性能验证其符合多种兽药残留要求,可为大批量检测雅鱼中多种类兽药残留提供有力支持。

一株鹅-鱼养殖环境下罗非鱼无乳链球菌的分离鉴定及药物敏感性分析

【目的】为确定鹅-鱼立体养殖环境下引发罗非鱼疾病的病原菌,通过分析病原菌的生长特性、致病性与药物敏感性,为罗非鱼病的深入研究与精准防控提供科学依据。【方法】从患病罗非鱼组织中分离病原菌,采用形态观察、生理生化鉴定、16S rRNA序列分析等方法鉴定菌株;绘制菌株生长曲线,分析温度、盐度及pH值对病原菌生长的影响;通过腹腔注射和拌料口服投喂方式人工回归感染健康罗非鱼,分析病原菌的致病性;采用药敏纸片法测定病原菌对11类共26种抗菌药物的敏感性。【结果】从患病罗非鱼的脑组织中分离纯化得到一株优势菌株,编号为SAYJN,经形态学观察、生理生化鉴定、16S rRNA序列分析及回归感染试验,鉴定此菌株为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae);SAYJN菌株的生长迟缓期为0~5 h,对数期为5~12 h;最适生长温度37℃、最适pH值7.0、最适盐度为5‰。腹腔注射和拌料口服投喂SAYJN菌株均可感染健康罗非鱼;水温为29(±1)℃时,腹腔注射SAYJN菌液对罗非鱼有较强的致病性,半致死浓度(LC_(50))为2.4×10^(8)CFU/mL;SAYJN菌株致病力与其浓度和水温密切相关。SAYJN菌株对甲氧苄啶、庆大霉素、新霉素等6种药物产生耐药性,对恩诺沙星、环丙沙星、阿米卡星等4种药物中度敏感,对多西环素、氟苯尼考、利福平等16种药物敏感。【结论】无乳链球菌SAYJN菌株是鹅-鱼立体养殖环境下罗非鱼疾病爆发的主要病原菌,该菌的致病力强弱与其浓度和水温密切相关。

靶向垂钓技术在肝脏疾病防治中的研究进展

肝脏疾病是全球主要的死亡原因之一,对公共卫生构成重大挑战。靶向垂钓技术,作为一种新兴的药物筛选方法,因其高特异性和高效率在药物活性成分的筛选中显示出巨大潜力。本文综述了靶向垂钓技术的原理与分类,以及在肝脏疾病防治中的应用现状,总结了配体垂钓和靶标垂钓技术的优缺点并探讨其未来趋势,分析了该技术当前面临的挑战和潜在的解决策略,以期为肝病患者带来更多有效的治疗选择。

QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法快速测定海水鱼中四环素和喹诺酮类药物的残留量

取1.00 g均质好的样品,加入500μg·L^(-1)混合内标工作液100μL,涡旋混匀后加入2 mL0.1 mol·L^(-1)Na2EDTA溶液,涡旋1 min。加入8 mL乙腈,涡旋1 min,超声15 min,离心3 min。取全部上清液,加至Cleanert LipoNo净化管,振摇1 min,静置1 min。取全部上清液,于45℃氮吹至干,用体积比95∶5的0.1%(体积分数,下同)甲酸-乙腈溶液1.0 mL复溶,过0.22μm有机滤膜,采用超高效液相色谱-串联质谱法测定滤液中4种四环素类和5种喹诺酮类药物的含量。在色谱分析中,以ACQUITY UPLC?BEH C18色谱柱为固定相,以不同体积比的0.1%甲酸溶液和乙腈的混合溶液作流动相进行梯度洗脱;在质谱分析中,以电喷雾离子源正离子(ESI+)模式电离,多反应监测(MRM)模式扫描,同位素内标法定量。结果显示:4种四环素类和5种喹诺酮类药物与内标的质量浓度比值均在5.00~125μg·L^(-1)内和相应的峰面积比值呈线性关系,检出限均为2.00μg·kg^(-1)。按照标准加入法进行回收试验,回收率为91.3%~110%,测定值的相对标准偏差(n=6)为3.4%~11%。方法用于200批海水鱼样品的分析,检出结果和国家标准方法的基本一致,所用前处理时间和投入人员数更少。

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定鱼肉中105种兽药残留

建立超高效液相色谱-串联质谱法测定鱼肉中11大类105种兽药残留。样品用含0.2%甲酸的乙腈-水(体积比为8∶2)提取,离心,上清液经Prime HLB固相萃取柱净化,氮吹后,用初始流动相复溶。样品溶液经Waters HSS T3色谱柱分离,选用电喷雾正离子扫描模式进行检测,色谱峰面积外标法定量。105种兽药在质量浓度1~20 ng/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数均不小于0.98,定量限为1μg/kg,高、中、低三个水平(1、2、10μg/kg)样品加标回收率分别为60.1%~120.1%,60.6%~120.0%,60.7%~120.5%,测定结果的相对标准偏差均小于20%(n=6)。该方法能满足同时检测完成鱼肉中11大类105种兽药的残留量的定性和定量检测,为水产品中上百种兽药残留的快速筛查提供了科学依据。

HPLC-MS法同时检测鱼肉中32种兽药残留

用PLS-A固相萃取小柱处理鱼肉样品,采用高效液相色谱-串联质谱法对鱼肉中的32种兽药残留进行测定。实验优化了样品提取方法、色谱条件,并研究了方法的线性范围、准确度、精密度以及基质效应。结果表明,32种兽药的回收率在75.3%~114.7%,检出限为1.0μg·kg^(-1),相对标准偏差均小于15%(n=6),32种兽残在1~100 ng·mL^(-1)线性关系良好,相关系数均高于0.991。该方法准确度高、精密度好,可为鱼肉中32种兽药残留的检测提供技术支撑。

后基因组时代的药物发现:趋势和实践

人类基因组计划深刻地影响了药物研究和开发的思路和策略 ,生命科学的研究方法和技术与药物研究的结合日益紧密 ,计算机信息技术也越来越多应用到药物研究过程中来。本文以实例说明了虚拟筛选。

淡水养殖鱼类细菌出血性败血病药物防治研究

通过对防治淡水养殖鱼类细菌出血性败血病的口服药物败血宁的系列实验研究表明：败血宁主药（ＢＬ）对嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）的ＭＩＣ为４μｇ／ｍｌ，在剂量１０～３０ｍｇ／ｋｇ范围内进行鱼体内抗菌试验，对鲢、银鲫的预防和治疗性给药有效率皆在８０％以上，其ＬＤ５０为６１５．２ｍｇ／ｋｇ，属低毒，对鱼类较为安全；以３０、６０ｍｇ／ｋｇ的剂量口灌银鲫进行微核试验证实ＢＬ诱发红细胞微核率不明显，无潜在致突变作用。用ＨＰＬＣ法测定ＢＬ在鱼体内治疗浓度维持时间为８～９ｈ，消除半衰期ｔ（１／２β）为２．５ｈ，连续灌药３ｄ后停药５ｄ在银鲫血浆中未检测到ＢＬ的含量。以３０ｍｇ／ｋｇ的剂量进行了四年的池塘应用试验，统计有效率为９２．９％，疗效肯定。

不同来源株香港海鸥形菌药敏试验结果分析

目的 对分离自社区获得性胃肠炎患者及淡水鱼肠道内的香港海鸥形菌（Laribacter hongkongensis，LH）进行药敏试验，为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法 2005年至2006年杭州市第一人民医院肠道门诊从社区获得性胃肠炎患者中分离到4株及2种淡水鱼体内10株LH菌株，计14株，按美国CLSI推荐的纸片扩散法进行药敏试验。结果 药敏结果显示，14株LH菌株对24种常用抗菌药物中的15种药物，分别表现出不同程度的耐药性，耐药率达62．5％；尤其对青霉素、头孢唑啉和头孢哌酮等3种药物，14株LH菌株均为耐药，耐药率为100．0％；其中人体株LHHZ26，对12种药物耐药、1种为中介。LH对3代头孢表现为较高的耐药性，3种头孢药物的耐药率为71．43％～100％；14株LH株对头孢吡肟及头孢哌N／舒巴坦均为敏感。对氨曲南（14．29％）、庆大霉素（7．14％）、复方新诺明（7．14％）的耐药率较低；喹诺酮类、氯霉素、阿米卡星、美罗培南、亚胺培南等药物均敏感。结论 LH菌株对β-内酰胺类药物表现出耐药性，对青霉素类、头孢菌素类药物广泛耐药。建议对LH感染患者喹诺酮类为首选治疗用药。

丝足鲈致病性诺卡氏菌的鉴定及系统发育分析

为查明养殖的丝足鲈内脏结节病的病因,由患病丝足鲈内脏分离到菌株1214,并对该菌进行了鉴定及致病性验证。结果显示所分离菌株1214革兰氏染色呈阳性,长短不一,为丝状分支状杆菌;回归感染试验证实菌株1214为引起此次丝足鲈结节病的病原菌;生理生化鉴定结果表明菌株1214与诺卡氏菌属细菌的基本特征相符;对该菌株的16SrDNA序列分析显示其与鱼诺卡氏菌JCM 3360的16SrDNA序列同源性最高,达到99.9%。综合以上结果最终确定此次丝足鲈结节病的病原为鱼诺卡菌。药敏试验结果显示,该菌株对红霉素、氟苯尼考、链霉素、强力霉素、阿奇霉素等抗生素敏感,但对磺胺类和青霉素有耐药性。

半咸水、海水对几种渔用抗菌药物体外活性的影响

研究了人工海水、天然半咸水以及生理盐水对６种我国常用抗菌药物（环丙沙星、四环素、土霉素、氯霉 素、磺胺以及呋喃唑酮）体外抗两种鱼类病原细菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ和Ｖｉｂｒｉｏ ｆｌｕｖｉａｌｉｓ）活性的影响。结果表明：海水对几乎所有受试药物的抗菌活性均呈抑制作用，其中对土霉素的影响最为显著；半咸水可使土霉素、 四环素及磺胺药的抗菌活性下降；生理盐水对不同药物或不同细菌的作用不一致；呋喃唑酮的抗菌活性不受 ３种水质的影响。此外，喹诺酮与二价阳离子的螯合产物可能并不稳定，当用无二价阳离子水稀释后药物可 被重新释放。

广东省水产品中香港海鸥型菌的污染调查与耐药性检测

目的初步了解广东省水产品中香港海鸥型菌(Laribacter hongkongensis)污染及分离株的耐药情况。方法采用改良头孢哌酮麦康凯琼脂(CMA)作为分离培养基,以API 20NE鉴定系统鉴定结果作为确认依据;采用K-B法进行药物敏感试验。结果222份水产样本检出15株目标菌,阳性率6.76%。其中14株分离自草鱼肠脏,1株来自鲤鱼肠脏。分离株及香港海鸥型菌模式株HKU1的药敏结果,对β-内酰胺类抗生素如氨苄西林、头孢噻酚、头孢他啶、头孢曲松等均出现耐药株,未见耐庆大霉素和阿米卡星株。结论结果表明香港海鸥型菌在广东省的草鱼污染率最高,为17.3%(14/81),分离株对β-内酰胺类抗生素耐药情况较严重。

32种常用渔药对大黄鱼致病菌哈维氏弧菌的体外抗菌试验

采用试管二倍稀释法测定了32种常用渔药对本实验室分离鉴定的一株大黄鱼致病菌-哈维氏弧菌GYC1108-1的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。其中中草药7种,抗菌药8种,常用水体消毒剂17种。结果显示,7种中草药对受试菌GYC1108-1的MIC介于0.039～625 mg/L,MBC介于0.078～1 250 mg/L;8种抗菌药对该菌的MIC介于0.078～1.25mg/L,MBC介于0.156～2.5 mg/L;17种水体消毒剂对该菌的MIC介于0.062～3.125 mg/L,MBC介于0.078～6.25 mg/L。试验表明,这些渔药都对哈维氏弧菌有较好的抗菌效果。

水产养殖鱼药化合物对发光细菌毒性的研究

目的探索铅、铜、呋喃唑酮、氯霉素对发光细菌的毒性作用及其联合效应。方法采用发光细菌毒性试验分别测定鱼药化合物对发光细菌的发光抑制毒性及其混合物的联合毒性。结果四种化合物浓度与发光细菌的发光强度相关系数绝对值均大于0.99,呈负相关关系。以半数发光抑制浓度(EC50)为毒性评价标准,铅、铜、呋喃唑酮、氯霉素的EC50依次为:0.61、0.79、0.81和489.2mg/L。联合毒性试验中铅与呋喃唑酮,铅与氯霉素,呋喃唑酮与氯霉素联合作用系数K分别为:1.65,1.09,1.58。结论铅、铜、呋南唑酮、氯霉素在一定剂量条件下对发光细菌发光强度有抑制作用;铅与呋喃唑酮,铅与氯霉素,呋喃唑酮与氯霉素表现为相加作用。

我国渔药的发展概况和安全使用体系建设研究

介绍了我国渔药的发展概况、渔药使用原则和渔药使用安全体系建设的内容,指出了我国目前渔药使用过程中存在的问题,并提出了相关建议。我国渔药研究是随着鱼病调查和对鱼类病原体研究而开始的。20世纪80年代以前,我国渔药研究偏重于药物筛选、有效浓度、安全浓度、应用范围和给药方法等应用方面,尚未形成商品。20世纪80年代末,随着对细菌性鱼病研究的深入,出现了以鱼服康A型、B型为代表的商品性渔药。渔药科学安全体系建设内容应涵括法规标准制度、渔药管理技术支撑体系、渔药检测及安全评估体系、渔药安全使用和残留监控等。

诺氟沙星在鱼类细菌性疾病中的应用研究

以鲤细菌出血性败血病致病菌强毒力菌株对诺氟沙星 (Norfloxacin)等 7种抑菌药物进行体外敏感性测定 ,其中诺氟沙星高度敏感 ,最小抑菌浓度 <0 2 μg/mL。体内抗菌药效试验结果表明 ,每kg鱼体重注射 1mg诺氟沙星和口服 1 0mg/d诺氟沙星均能有效杀灭致病菌 ,提高感染鱼成活率。诺氟沙星的药动学研究结果表明 ,混饲给药后 0 75h至 2 4h ,血药浓度在 0 2 μg/mL以上。据此确定给药方案 :口服给药剂量为 1 0mg/(kg·d) ,连续给药 5次 ,在生产中应用效果良好。诺氟沙星对鲤急性口灌毒性实验结果LD50>1 0 0 0mg/kg ( 96h) ,肌肉残毒测定结果证明 ,停药 1 44h即无诺氟沙星检出 ,该药安全范围大 ,残余期短。

绿色食品养殖鱼类用药之浅见

绿色食品的养殖鱼类分为AA级与A级，它们的用药标准有所不同。本文作者依据国内外有关资抖对部分常用鱼药进行了讨论，同时也提出了一些建议性问题。其目的旨在于提醒人们在鱼类的养殖过程中下可滥用药物，从而使水产品成为真正无污染无病害、有益于人类健康的营养食品。

中西药物对鱼类病原菌的抑菌作用

本试验用３种中药配方和８种抗菌素及化学药物分别对５种海水海贝类病原菌和５种淡水鱼类病原菌进行了抑菌试验研究．结果表明，中药配方Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对副溶血性弧菌具有较强的抑菌作用．中药Ⅰ对５种淡水鱼类病原菌均有一定的抑菌作用．中西药结合配制的９种药物时鱼贝类病原菌具有很强的抑菌和杀菌作用．

淀粉、壳聚糖及明胶为基材制备的缓释丸药的制备及性能测定

目的淀粉、壳聚糖及明胶为基材制备的缓释丸药的制备及性能测定。方法采用电镜扫描、紫外分光仪等手段对此药丸的物理形貌、吸水率、密度、孔隙率、缓释性能和药理性质等进行检测分析。结果此药丸具有分布均匀的多孔结构,孔之间连通性良好,孔隙率为(93.5±1.2)%。在海水中静置48 h后释放值为(207.2±2.8)mg/L,释放比较缓慢。并对药物及药物载体成分的抑菌性进行了检测,证明制得药丸的抑菌性能和药物抑菌性能无明显差别。结论以壳聚糖和淀粉为基材,加以一定量的交联剂明胶,以抗生素氟苯尼考为药物模型,制备的渔用药丸为安全环保具有缓释功能的新型渔药。