黄花苜蓿黄酮醇合成酶基因(MfFLS1)的克隆及生物信息学分析

以呼伦贝尔黄花苜蓿品种为材料,根据黄花苜蓿基因组测序获得的FLS基因序列设计一对特异性引物,采用RT-PCR方法首次在黄花苜蓿中分离得到了972bp的核苷酸序列,命名为MfFLS1基因。该序列含801bp的完整开放阅读框,编码266个氨基酸,主要由Leu(10.53%)、Ser(10.15%)、Lys(7.89%)、Glu(7.52%)、Pro(6.77%)组成。黄花苜蓿MfFLS1蛋白为非分泌蛋白,不具有跨膜区域,具有6个高疏水区,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲结构为主。MfFLS1蛋白与蒺藜苜蓿的FLS蛋白亲缘关系最近,与其他植物的FLS蛋白亲缘关系均较远。

FL基因的克隆及在大肠杆菌中表达

目的获得人FLcDNA膜外序列 ,构建表达人FL蛋白的重组体并实现其有效表达 ,更深入地探讨FL的生物学功能。方法提取胎肝细胞总RNA经RT PCR扩增目的cDNA片段 ,并将其克隆至pUC 18T载体中 ,测定其DNA序列 ,将该基因重组于GST融合蛋白表达载体pEGX 4T 1并进行表达。结果从胎肝细胞总RNA中扩增得到 5 46bp片段 ,序列测定结果与文献报道一致 ,表达的FL蛋白占菌体总蛋白的 10 %左右。结论人FL基因在大肠杆菌DH5α中获得了有效表达 ,为进一步的基础研究和临床应用奠定基础。

斑地锦黄酮醇合成酶基因(EmFLS)及其启动子克隆及表达分析

【目的】克隆斑地锦黄酮醇合成酶基因(EmFLS)及其启动子序列,并检测EmFLS基因在斑地锦不同生长期不同组织中的表达模式,为后续研究该基因对黄酮醇化合物生物合成的调控机制提供理论参考。【方法】以斑地锦为材料,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术和热不对称交互式PCR(Tail-PCR)技术克隆EmFLS基因及启动子序列,对其进行生物信息学分析,并通过实时荧光定量PCR检测其在不同生长期不同组织中的表达模式。【结果】扩增获得EmFLS基因开放阅读框(ORF)(GenBank登录号ON821211.1),长度为1002 bp,编码333个氨基酸残基,蛋白相对分子质量为37.62 kD,定位于细胞质,为不稳定的亲水性蛋白,属于2OG-Fe(II)加氧酶超家族。EmFLS蛋白与其他13种植物FLS蛋白的氨基酸序列相似性为63.55%~70.51%,其中与木薯FLS蛋白的氨基酸序列相似性最高,且在系统发育进化树上处于一个独立的分支。EmFLS基因启动子约1800 bp,除含有真核生物启动子核心元件TATA-box和CAAT-box外,还含激素响应、胁迫响应和光响应等顺式作用元件。EmFLS基因在营养生长期和生殖生长期的根、茎、叶和果中均有表达,但在根和茎中的相对表达量显著高于叶和果(P<0.05,下同),斑地锦从营养生长期到生殖生长期EmFLS基因在根和茎中的相对表达量显著下降,而在叶中无显著变化(P>0.05)。【结论】EmFLS基因表达具有组织特异性,且在根和茎中具有发育阶段特异性,推测EmFLS基因主要参与调控斑地锦根和茎中黄酮醇化合物的生物合成。

Saffron (<i>Crocus sativus L.</i>) Inhibits Aflatoxin B₁Production by <i>Aspergillus parasiticus</i>

Aflatoxin B1 (AFB1) is a carcinogenic metabolite produced by certain Aspergillus species. The aim of the present study was to investigate the effect of saffron stigmas on A. parasiticus growth and AFB1 production in Yeast Extract Sucrose (YES) medium. AFB1 was extracted from cultures and purified with immunoaffinity columns followed by high performance liquid chromatography (HPLC) coupled to fluorescence detector (FL) analysis. Methods' recovery and limit of detection were 95.3% and 0.02 ng AFB1·ml–1 of YES respectively. Results indicated that AFB1 production in samples of YES inoculated with A. parasiticus after the addition of saffron dried stigmas (100 mg·flask–1) was significantly lower (p 1 was detected, after the 7th day of observation in cultures with saffron alone. Maximum production was observed on the 12th day (0.018 μg AFB1·flask–1) and on the 9th day (0.051 μg AFB1·flask–1) for samples of YES with the addition of saffron inoculated with A. parasiticus and samples with saffron alone (non-inoculated), respectively. In control samples (inoculated without saffron) the maximum production on the same days 12 and 9 was 75.31 μg AFB1·flask–1 and 64 μg AFB1·flask–1 respectively. Conclusively when saffron was added to YES inoculated with A. parasiticus, AFB1 production decreased by 99.9% compared to control cultures without saffron addition. This inhibition can be attributed to the antioxidant capacity of saffron constituents.

FL-10风洞单支杆支撑装置结构设计及有限元分析

阐述FL-10风洞单支杆支撑装置的结构形式,根据传动结构形式建立数学计算公式,结合数模测量运动部件的转动惯量,确定电机、丝杠等参数。基于Workbench有限元分析软件,对单支杆支撑装置的结构刚强度进行有限元分析。结果表明,设计的单支杆支撑装置的结构强度和刚度满足风洞的实验要求,说明该结构设计形式可靠。

基于相关性的Swarm联邦降维方法

联邦学习(Federated learning,FL)在解决人工智能(Artificial intelligence,AI)面临的隐私泄露和数据孤岛问题方面具有显著优势.针对联邦学习的已有研究未考虑联邦数据之间的关联性和高维性问题,提出一种基于联邦数据相关性的去中心化联邦降维方法.该方法基于Swarm学习(Swarm learning,SL)思想,通过分离耦合特征,构建典型相关分析(Canonical correlation analysis,CCA)的Swarm联邦框架,以提取Swarm节点的低维关联特征.为保护协作参数的隐私安全,还构建一种随机扰乱策略来隐藏Swarm特征隐私.在真实数据集上的实验验证了所提方法的有效性.

全民健身场地设施配置政策的多源流分析与启示

推进全民健身场地设施配置政策高质量发展是构建更高水平全民健身公共服务体系的基本内容。运用文献资料、逻辑分析等方法,以多源流理论为学理支撑,解析我国全民健身场地设施配置政策高质量发展的多元动力,探究三大源流中的现实桎梏。研究发现:问题识别与问题反馈窗口模糊、精英决策与群众民主失调、党建引领作用与政府职能弱化是缓滞政策之窗启动的重要因素。为加快实现健身设施配置政策的高质量发展,一要深谙问题源流,重视关键问题导向,完善问题反馈窗口;二要把握政策源流,强化民主决策,畅通政策执行机制;三要推进政治源流,发展党建引领作用,突出政府部门主导功能,同时在政策企业家的积极助力下促进三源流耦合,共同推动全民健身场地设施配置政策科学化发展。

连续流动分析法同时测定地表水中的总氮和氨氮

结合地表水特性,为充分了解连续流动分析法在其总氮和氨氮测定中的实用价值。本研究通过采集地表水样本,运用连续流动分析法和手工法进行测定,统计两种方法的检测结果。连续流动分析法检测总氮、氨氮的线性范围内的相关系数(r)分别为0.9998、0.9997,检出限均为0.04 mg/L。检出精密度总氮、氨氮相对标准偏差分别在1.11%~2.38%、0.76%~1.28%范围内。以手工方法为对照,连续流动分析法的中总氮、氨氮样品检出准确度误差更低,且准确度与要求相符合。证实在地表水检测中,连续流动分析法不仅操作更加简单方便快捷,且有着更高的精密度和更好的准确度,可以更好满足实验室质量控制要求,可应用于地表水大批量样品的测定。

水质检测中荧光检测技术的运用探究

为了能够针对性地解决传统水质检测工作中所面临的主要问题,现以荧光检测技术的原理与指标分析为切入点,基于实验准备、光谱采集、COD值检测、标准溶液光谱建模以及实验水样光谱建模等环节对水质荧光检测实验的具体流程进行设计,同时对实验结果进行分析和讨论,梳理了荧光检测技术在水质监测工作中的应用优势以及保障检测结果准确可靠的注意事项,以期为有关技术人员提供参考。

云南横断山区蚤类物种丰富度与区系的垂直分布格局

为探讨横断山区蚤类物种丰富度与区系垂直分布格局的基本规律以及影响它们分布的主要生态因子,本文以云南西部横断山区18个山峰为主体,对海拔高度在1000–5000m之间已知分布的9科43属142种(亚种)蚤类的垂直分布资料进行综合整理和统计分析。结果显示:(1)蚤类的属丰富度、物种丰富度、特有种丰富度和特有度以及不同区系成分物种丰富度的垂直分布都呈现随海拔先增高后降低的单峰分布格局,最大峰值出现在中山海拔2500–3800m之间;(2)东洋和古北两区系成分物种构成比的垂直分布格局截然不同,前者随着海拔梯度的升高基本递减,后者则随着海拔的升高递增,垂直分布格局反映了它们沿纬度梯度分布的一般规律;(3)聚类分析将横断山9个不同海拔带的蚤类归为6个生态类型,反映出海拔高度、气候环境和森林植被等重要因素对蚤类分布的影响以及蚤类群落的组成、分布沿海拔梯度变化的一般规律,表达了蚤类分布与环境条件的统一性;(4)β多样性沿海拔梯度呈现为双峰形分布格局,两高峰值都反映出蚤类的组成和分布在不同气候环境和植被带之间的过渡与转变,说明β多样性垂直分布格局与海拔梯度上的气候和生境的变化程度有关。研究认为,中山地段物种丰富度高峰的形成主要是由于两大动、植物区系过渡区的边缘效应和山地水湿条件的影响。影响该区域蚤类垂直分布格局的综合因素有山体海拔高度、动植物区系过渡区的边缘效应、山地雨量分配特征、气候环境条件以及人们的生产活动等。

鸽基因Ⅶ型新城疫病毒的分离鉴定

从外表健康的法国进口鸽中分离到一株鸽Ⅰ型副粘病毒(FP株),电镜观察病毒形态不规则,以圆形为主,平均直径100mm～120mm,表面有许多突起。其鸡胚平均死亡时间(MDT)为59 2h,鸡脑内接种指数(ICPI)为1 88。接种1月龄鸽能使其发病,出现明显症状和病变并有80%试验鸽死亡,接种2月龄SPF鸡全部死亡。经多重RT-PCR鉴定,属速发型新城疫病毒。应用RT-PCR技术对F基因重要功能区片段扩增后进行序列测定、分析表明,F蛋白裂解位点处的序列(112R-R-Q-K-R-117F)与新城疫强毒在这一区域的序列相符。与国内强毒F48E9株、疫苗毒Lasota株的核苷酸同源性分别为84 1%、82%,氨基酸同源性为84 5%、80 6%。与多株已报道的NDV参考株相应片段进行序列比较,经遗传基因进化树分析,鉴定为基因Ⅶ型,由此首次报道了鸽源基因Ⅶ型NDV株的存在。

阴道毛滴虫7个分离株表面黏附蛋白33基因序列比较

目的 分析我国阴道毛滴虫 7个分离株表面黏附蛋白 3 3 (AP3 3 )基因的遗传多态性。 方法 抽提基因组DNA ,用特异引物PCR扩增AP3 3基因、测序、分析其同源性并构建系统进化树。用甲硝唑体外分别作用于 7个分离株 ,得其最小致死量 (MLC)。 结果 阴道毛滴虫北京 1、2株 ,唐山株 承德株、九江 1、2、 3株 7个分离株AP3 3基因与Gen Bank中U870 98株同源性高达 98.2 %～ 10 0 % ,属同型虫株。其中承德株和U870 98株 北京 1株和唐山株 北京 2株和九江 3株 九江 1株和九江 2株各形成一个分支 ,两两之间具有较近的亲缘关系。7个分离株的地理来源与其进化关系未见相关性。 结论 阴道毛滴虫 7个分离株AP3 3基因的遗传关系密切 ,属同型虫株 ,但其基因序列存在一定差异。亲缘关系较近的虫株间甲硝唑MLC值相差较大。

河南黄杨属植物的研究

该文对《河南植物志》(第二册 )、《河南树木志》和《河南木本植物图鉴》中黄杨属植物进行了修订与增补 .其主要内容 :①补充了黄杨属花的形态描述 ;②纠正了锦熟黄杨和雀舌黄杨的错误鉴定 ,两者在河南均无栽培 ,后者也无野生 ;③报道了 1新记录变种———越桔叶黄杨 ;④发表了黄杨属 1新亚属———异雄蕊黄杨亚属、1新种———河南黄杨和 1新变种———雌花黄杨 ,并采用系统聚类和同工酶分析技术的研究结果 。

应用荧光原位杂交方法检测亚历山大藻

采用PCR方法对三株亚历山大藻核糖体DNA大亚基部分序列和ITS区序列进行了特异性扩增和序列测定。ITS区测序及BLAST比对结果显示,三株藻类分别为塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense),链状亚历山大藻(A. catenella)和微小亚历山大藻(A. minimum)。在此基础上,针对中国沿海分布的有毒亚历山大藻,根据其核糖体DNA大亚基(LSU rD-NA)序列信息,设计了特异性的荧光标记探针,建立了基于荧光原位杂交技术(FISH)上的有毒亚历山大藻检测方法。结果表明,探针Alexp1较理想地标记选定的目标藻——塔玛亚历山大藻(YA藻株),经探针标记的藻细胞在荧光显微镜下可以明显区分于其他非目标藻。

贵州省遵义地区3个酱香型大曲细菌群落的比较分析

研究酱香型大曲主要产地遵义地区的细菌类群组成,并利用主成分分析法对这些细菌的类群和大曲的关系进行评定。样品采用454 FLX＋平台进行测序,样品中所测微生物为细菌,测序片段为16S r DNA V3~V5区,所有样品的优质序列按97%的相似度进行聚类,计算这些细菌类群的相对含量。用主成分分析法对细菌类群和大曲样品进行分析,结果显示：从3个大曲样品中共检测出6个门49个属细菌,主要是厚壁菌门;样品MT01以高温放线菌属（Thermoactinomyces）34.40%、芽孢杆菌属（Bacillus）31.40%、Scopulibacillus 13.60%为主,占总量的79.40%,样品ZJ01以高温放线菌属（Thermoactinomyces）34.80%、芽孢杆菌属Bacillus 49.00%为主,占总量的84.80%,样品ZX01以高温放线菌属（Thermoactinomyces）66.10%为主;对3个大曲样本进行主成分分析,发现棒状杆菌属（Corynebacterium）、魏斯氏菌属（Weissella）是影响样品MT01与ZJ01距离最近,ZX01相对距离较远的细菌类群。

谷子弯孢病菌Clgα-1基因克隆及特征分析

谷子弯孢病菌(Cochliobolus lunatus)引起的谷子叶斑病是谷子生产上的重要病害之一,常造成严重经济损失。本研究利用候选基因法和RACE技术克隆了谷子弯孢病菌中的1个Gα基因,命名为Clgα-1,在GeneBank登陆号为HQ699081。Clgα-1基因开放阅读框为1 062 bp,编码353个氨基酸多肽,该开放阅读框被3个大小分别为57,49,59 bp的内含子隔开。聚类分析结果表明,谷子弯孢病菌Clgα-1基因与其他植物病原真菌Gα基因的同源性很高,Southern杂交结果表明该基因以单拷贝形式存在。Clgα-1基因具有其他病原真菌Gα基因具有的保守结构,如在氮端有豆蔻酰化位点,碳端具有ADP核糖基化位点。谷子弯孢病菌Clgα-1基因的克隆,为进一步研究Clgα-1基因在该菌致病过程中的功能奠定基础。

黄鳍金枪鱼巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的克隆与序列分析

采用同源克隆的方法、利用RACE技术从黄鳍金枪鱼(Thunnus albacares)肝脏中克隆了其MIF(TaMIF)的cDNA序列。TaMIF的cDNA全长706 bp含一个345 bp的开放阅读框,编码一个长115氨基酸的蛋白质。信号肽预测分析表明TaMIF没有信号肽。序列分析与进化分析表明,黄鳍金枪鱼与近海养殖鱼类MIF的氨基酸序列高度相似、进化地位相近,预示着深海鱼类TaMIF与近海养殖鱼类具有相似的生物学功能。研究结果是对深海鱼类MIF基因信息资料的重要补充。

两个大豆灰斑病抗性相关SCAR标记的发现与鉴定

大豆灰斑病是一种由大豆灰斑病菌引起的真菌性病害,会导致大豆叶片出现病斑、大豆籽粒斑驳,造成减产和品质下降,对大豆生产有重要影响。研究通过田间试验对142份育成大豆新品种(系)的灰斑病抗性进行鉴定,进而对大豆灰斑病抗性资源进行评估。利用前期开发的功能分子标记进行候选基因关联分析,筛选得到两个与大豆灰斑病抗性相关的SCAR标记,可用于大豆抗灰斑病的分子辅助育种研究。测序分析发现,它们定位于两个磷脂酶D基因内含子上,是由大豆转座子插入突变形成的。这两个SCAR标记具有功能基因靶向和操作简便等优点,具有广阔的大豆抗灰斑病育种应用前景。

哈萨克羊肉和市售普通羊肉营养品质与风味特性的对比分析研究

为了研究哈萨克羊肉质与市售普通羊肉的区别,采用凯氏定氮、液相色谱、气相色谱-质谱连用等方法分别测定蛋白质、氨基酸、脂肪、矿物质、维生素、挥发性风味物质等营养品质与风味特性的指标。结果表明:哈萨克羊肉的蛋白质、必需氨基酸含量分别为20.81%、86.69 mg/g,显著高于市售样品(P<0.05);哈萨克羊瘦肉中单不饱和脂肪酸中的油酸和多不饱和脂肪酸中的亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸含量显著高于市售样品(P<0.05);与市售样品相比,哈萨克羊肉中Fe、Cu和VE的含量较高,两者的VA含量并无显著差异(P<0.05);哈萨克羊肉中挥发性风味物质的种类明显多于市售样品,且酮类物质、酯类物质和含硫类物质含量较高,反,反-2,4-癸二烯醛、3,6-二甲基-2-辛酮、茨酮仅在哈萨克羊肉中检出。

人类TAP1基因克隆及表达载体pcDNA3.1/V5-His TOPO TA-TAP1的构建(英文)

目的 克隆TAP1 (抗原处理相关转运 1 )基因cDNA序列 ,构建其真核表达载体pcDNA3.1 V5 HisTOPOTA TAP1。方法 从人类B LCL细胞中提取总RNA ,以RT PCR技术扩增TAP1基因片段 ,将该段基因克隆到表达载体pcDNA3.1 V5 HisTOPOTA上测序。结果 通过RT PCR扩增获得 1个 2 5 93bp的DNA片段 ,测序分析表明为TAP1基因。结论 通过RT PCR等技术成功克隆出人类TAP1基因并成功构建了表达载体pcDNA3.1 V5 HisTOPOTA TAP1。