花鲈类胰岛素生长因子-1基因的全长cDNA分离与表达分析

采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增法(RACE)获得花鲈(Lateolabrax japonicus)类胰岛素生长因子-1(IGF-1)的cDNA全长序列,利用荧光实时定量PCR技术研究了花鲈IGF-1mRNA在成鱼各组织中的表达特征。结果显示,花鲈IGF-1cDNA全长序列为873bp,编码区序列为555bp,编码186个氨基酸,推测成熟氨基酸分为6个结构域,分别是信号肽区域,A、B、C、A、D区域和E肽。花鲈IGF-1氨基酸序列与其他海水鱼类的IGF-1相似度较高,与淡水鱼类相似度较低,与高等脊椎动物相似度更低,说明海水鱼类的IGF-1在进化过程中发生了较大的变化。组织表达分析显示,花鲈IGF-1mRNA在肝脏中表达量最高,在肠、盲肠、肌肉、脾脏中次之;在鳃、垂体、性腺、胃、肾脏、脑、头肾、心脏中表达量较低。本文为鱼类IGF基因功能研究奠定基础,为花鲈生长调控提供科学依据。

海产花鲈IGFBP-1、2基因的克隆及表达分析

利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆得到花鲈的IGFBP-1和IGFBP-2基因cDNA全长序列,IGFBP-1全长1 779bp,编码248个氨基酸,IGFBP-2全长815bp,编码267个氨基酸。花鲈的IGFBP-1和IGFBP-2氨基酸序列同其他硬骨鱼类一样都包括C-端结构域、N-端结构域和多变的中央L-结构域。二者均存在18个保守的半胱氨酸残基以维持氨基酸二级结构的稳定,同时也都拥有N-端结构域的CGCCXXC-box和C-端结构域的CWCV-box,它们都是与IGF配体结合的重要结构。此外,IGFBP-2的C-端结构域还存在一个RGD结构,它能够与整合素相互作用,介导细胞与细胞之间、细胞与细胞外基质之间的黏附作用。利用荧光实时定量PCR技术对花鲈的脑、垂体、心脏、鳃、胃、盲肠、肠、头肾、肾脏、肝脏、性腺(雄)、脾脏和肌肉这13个组织的IGFBP-1和IGFBP-2mRNA的相对表达水平进行分析。结果显示,花鲈IGFBP-1mRNA表达量较为广泛,在肝脏中的转录水平最高,在肌肉和脾脏有较多的表达。花鲈IGFBP-2mRNA仅在肝脏中的表达水平最高,在肌肉中表达水平较高,其他组织表达量较低。

血清SOD、TNF-α及荧光实时定量PCR检测在婴幼儿支原体肺炎中的应用

目的：探讨血清中超氧化物歧酶（SOD）、肿瘤坏死因子（TNF-α）及荧光实时定量PCR（FQ—PCR）检测在婴幼儿支原体肺炎（MPP）早期诊断和治疗中的价值。方法：选择2010年1月-2011年12月肺炎患儿136例，x光检查肺部有明显改变、血清MP抗体4倍及以上滴度升高为MPP患儿，余下为非MPP患儿。分别检测患儿治疗前后的血清SOD、TNF—α浓度及对部分患儿取肺泡灌洗液后进行FQ—PCR；以80份健康儿童血清作为阴性对照。组间率的比较采用χ2检验，计量资料采用t检验，双变量相关分析采用Pearson检验。结果：治疗前MPP患儿血清中SOD和TNF—α浓度均显著高于对照组（P〈0．01）。相关分析显示，MP患儿组的血清SOD、TNF-α水平与PCR检测结果呈正相关，对照组的血清水平与PCR检测结果无相关性；治疗后MPP患儿组的SOD和TNF-α浓度水平均显著下降（P〈0．01）。结论：联合测定血清中SOD、TNF—α水平及FQ—PCR对MPP患儿的早期诊断、治疗和预后有十分重要的临床价值，可作为评价MPP的转归以及判断临床疗效的指标。