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叶片衰老诱导FLP重组酶删除转基因烟草外源基因的研究 被引量:2
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作者 秦利军 李启龙 赵德刚 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第6期90-97,共8页
【目的】"Gene-deletor"系统可实现转基因植物中外源基因的清除。为了研究该系统在转基因烟草中对清除外源基因的作用并最终创制不含外源基因的烟草新种质。【方法】以含有"Gene-deletor"系统的转基因烟株为材料,... 【目的】"Gene-deletor"系统可实现转基因植物中外源基因的清除。为了研究该系统在转基因烟草中对清除外源基因的作用并最终创制不含外源基因的烟草新种质。【方法】以含有"Gene-deletor"系统的转基因烟株为材料,分析外源筛合报告选融基因Bar::GUS、重组酶基因FLP在不同叶龄叶片中的表达水平,同时通过观察转基因烟草花粉中GUS蛋白的表达活性,分析外源基因GUS在花粉中的删除情况。【结果】(1)相同叶龄不同转基因烟株叶片均表现出GUS活性和对除草剂草铵膦抗性,且3个转基因烟草株系中GUS活性和对除草剂抗性都表现出随着叶龄增大而降低的特点。(2)Real-time PCR和RT-PCR结果进一步证明外源Bar::GUS基因表达水平随叶片发育成熟持续下降,而外源FLP基因的表达水平则出现先增后降的变化趋势,在测定后期两者的表达量均达到最低,(3)花粉GUS组织染色结果表明,"明,色结果降的变化趋势,特系统诱导各转基因植株中花粉外源基因清除效率不同,平均清除率分别78.3%,54.7%和75.2%。【结论】在转基因烟草中,叶片衰老特异表达基因SAG12基因启动子驱动"动启动子驱动达基因,平均清系统(LoxP/FRT)的表达不仅可引起转基因植株叶片中外源基因的特异性清除,还能诱导花粉中外源基因的删除,该技术可为进一步创制培育不含外源基因的烟草新种质提供参考。 展开更多
关键词 烟草 外源基因清除 筛选报告基因Bar::GUS 重组酶基因flp
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含FLP“交换盒”结构的打靶载体构建及ES细胞打靶研究 被引量:1
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作者 郑敬民 李坚 傅继梁 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期566-569,共4页
利用小鼠HPRT基因组DNA片段和人工合成的含有FLP重组酶识别位点变异体FRT和F3RT序列的寡核苷酸 ,构建了针对小鼠HPRT基因位点的置换型打靶载体pSP HPRT F Neo F3。经过限制酶酶切及部分测序鉴定其结构正确后 ,将线性化了的打靶载体以电... 利用小鼠HPRT基因组DNA片段和人工合成的含有FLP重组酶识别位点变异体FRT和F3RT序列的寡核苷酸 ,构建了针对小鼠HPRT基因位点的置换型打靶载体pSP HPRT F Neo F3。经过限制酶酶切及部分测序鉴定其结构正确后 ,将线性化了的打靶载体以电穿孔法导入ES细胞内 ,经G418和 6 -TG双药筛选和分子鉴定 ,得到了 2个在HPRT位点整合有FLP重组酶“交换盒”F Neo F3结构的双交换重组ES细胞克隆 ,为建立基于FLP重组酶介导的盒式交换的高效。 展开更多
关键词 基因打靶 胚胎干细胞 HPRT flp重组酶 载体
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FLP/FRT位点特异性重组系统在剔除植物筛选标记基因中的应用 被引量:2
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作者 游建 周岩 《河南科技学院学报(自然科学版)》 2012年第4期22-26,共5页
作为标记基因剔除的重要手段之一的FLP/FRT位点特异性重组系统自发现以来,在植物基因工程研究领域尤其是标记基因的删除方面得到了广泛应用,已成为提高转基因植物安全性的有效方法.文章就FLP/FRT位点特异性重组系统的基本概况及其在植... 作为标记基因剔除的重要手段之一的FLP/FRT位点特异性重组系统自发现以来,在植物基因工程研究领域尤其是标记基因的删除方面得到了广泛应用,已成为提高转基因植物安全性的有效方法.文章就FLP/FRT位点特异性重组系统的基本概况及其在植物基因工程中标记基因删除方面的应用进行综述,并讨论了其在实际应用中的利弊与在分子生物学研究中的应用前景. 展开更多
关键词 flp/FRT 基因工程 标记基因
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基于Flp重组酶介导的盒式交换HPRT位点定点转基因研究
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作者 郑敬民 贺艳 傅继梁 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2001年第4期279-282,共4页
以电穿孔转染法将构建的交换质粒pF-HPRTF3和Flp表达载体pCMV-Flp共转染已在基因组HPRT位点整合有交换盒F-Neo-F3结构的ES细胞F18,经HAT筛选得到HAT抗性ES细胞克隆;G418敏感性试验和基因组Southern杂交表明,所分析的12个HAT抗性克隆中有... 以电穿孔转染法将构建的交换质粒pF-HPRTF3和Flp表达载体pCMV-Flp共转染已在基因组HPRT位点整合有交换盒F-Neo-F3结构的ES细胞F18,经HAT筛选得到HAT抗性ES细胞克隆;G418敏感性试验和基因组Southern杂交表明,所分析的12个HAT抗性克隆中有3个克隆发生了预期的盒式交换重组,转基因定点整合的相对效率为25%。这一结果表明,Flp重组酶是可以在HPRT位点有效地介导盒式交换反应的,我们提出的利用Flp重组酶介导的盒式交换反应建立基于HPRT位点的转基因定点整合体系的策略是可行的。 展开更多
关键词 flp重组酶 介导 盒式交换HPRT位点 定点转基因
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南方根结线虫Mi-flp-16基因的克隆及原位杂交分析 被引量:2
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作者 王天阳 肖罗 +3 位作者 陈国华 茆振川 杨宇红 谢丙炎 《中国蔬菜》 北大核心 2009年第4期7-11,共5页
以南方根结线虫2龄幼虫为材料,根据已知南方根结线虫flp基因的EST序列设计引物,利用末端快速扩增法(RACE)获得FLP基因Mi-flp-16的cDNA全长(GenBank登录号为EU549831)。该基因全长690bp,包括一个528bp的完整开放阅读框(ORF),编码一条176... 以南方根结线虫2龄幼虫为材料,根据已知南方根结线虫flp基因的EST序列设计引物,利用末端快速扩增法(RACE)获得FLP基因Mi-flp-16的cDNA全长(GenBank登录号为EU549831)。该基因全长690bp,包括一个528bp的完整开放阅读框(ORF),编码一条176个氨基酸残基的多肽。序列分析表明Mi-flp-16编码3个FLP肽,即2个AQTFVRF和1个GQTFVRF。原位杂交结果显示此基因表达位置在围喉神经环。 展开更多
关键词 南方根结线虫 flp基因 基因克隆 原位杂交
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FLP介导的酿酒酵母rDNA多拷贝定点整合
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作者 潘辉 邬向东 +1 位作者 袁汉英 李育阳 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第11期11-16,共6页
构建了一个带有FRT位点以及启动子缺陷的URA3d 选择标记的环状质粒,并通过位点特异性重组将其整合到酵母染色体rDNA中放置的一个FRT位点上。Southern杂交分析表明若处于很强的选择压力下,该质粒的拷贝数会发... 构建了一个带有FRT位点以及启动子缺陷的URA3d 选择标记的环状质粒,并通过位点特异性重组将其整合到酵母染色体rDNA中放置的一个FRT位点上。Southern杂交分析表明若处于很强的选择压力下,该质粒的拷贝数会发生有效的扩增。为了证明该质粒能够作为表达载体, 将乙肝融合表面抗原SA-28基因的表达单元插入该质粒后整合到rDNA位点。与rDNA位点整合了单个表达单元的菌株相比,SA-28蛋白的表达量提高了30~60倍。 展开更多
关键词 酿酒酵母 flp重组酶 定点整合 染色体rDNA
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利用FLP/frt重组系统产生无选择标记的转基因烟草植株 被引量:23
7
作者 单晓映 李蓓 张举仁 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期744-750,共7页
在植物转基因植株产生过程中,对转化细胞进行抗性筛选是通用程序,转化细胞的抗性一般是抗生素抗性或除草剂抗性,将赋予转化细胞抗性的选择标记基因删除是提高转基因植物生物安全性的重要措施。来自于啤酒酵母的FLP/frt位点特异性重组系... 在植物转基因植株产生过程中,对转化细胞进行抗性筛选是通用程序,转化细胞的抗性一般是抗生素抗性或除草剂抗性,将赋予转化细胞抗性的选择标记基因删除是提高转基因植物生物安全性的重要措施。来自于啤酒酵母的FLP/frt位点特异性重组系统可有效删除同向定点重组位点frt之间的基因。通过多步骤重组,建立了可在植物中广泛应用的FLP/frt位点特异性重组系统。该系统包括含有frt位点的植物表达载体pCAMBIA1300-betA-frt-als-frt和含有由热诱导启动子hsp启动的FLP重组酶基因的植物表达载体pCAMBIA1300-hsp-FLP-hpt。利用二次转化的方式将二者先后转入烟草植株,热激处理后,热诱导型启动子hsp调控的重组酶FLP基因的表达催化位于选择标记基因als两侧同向frt位点间的重组反应,有效地删除了选择标记基因als。41%的经热激处理的二次转化植株发生了选择标记基因的删除,表明该系统在获得无选择标记基因的转基因植株中有很好的应用价值。 展开更多
关键词 选择标记基因 flp/frt 位点特异性重组系统 hsp热诱导启动子
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副猪嗜血杆菌Flp-FRT双基因敲除方法的建立与优化
8
作者 肖静 肖坤雪 +3 位作者 王翘楚 陈焕春 蔡旭旺 徐晓娟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期219-230,共12页
本研究旨在利用Flp-FRT位点特异性重组系统建立副猪嗜血杆菌(Glaesserella parasuis)的无抗性标记基因敲除方法,为G.parasuis的毒力因子、致病机制和基因工程疫苗研究提供有力的遗传操作工具。首先利用λ噬菌体cI857/P_(RM)/P_(R)基因... 本研究旨在利用Flp-FRT位点特异性重组系统建立副猪嗜血杆菌(Glaesserella parasuis)的无抗性标记基因敲除方法,为G.parasuis的毒力因子、致病机制和基因工程疫苗研究提供有力的遗传操作工具。首先利用λ噬菌体cI857/P_(RM)/P_(R)基因表达调控系统调控Flp重组酶的表达,实现抗性突变体中抗性基因的消除;然后将Flp表达质粒电转化引入G.parasuis CF7066,再自然转化介导同源重组的自杀性质粒获得有抗性标记的基因缺失突变株,调节Flp酶表达并筛选无抗突变株,提高培养温度消除表达Flp酶的温敏质粒;进一步通过筛选突变FRT位点以保证基因敲除的效率。结果表明成功构建了温敏穿梭质粒pSHG5C-Flp,证实了λcI857/P_(RM)/P_(R)表达系统可调控Flp重组酶在G.parasuis中表达并切除抗性突变株ΔnanH::Kan_(R)中的抗性基因;然后用Flp重组酶表达质粒pSHG5C-Flp电转化G.parasuis CF7066,再用自杀性质粒pKF-ΔnanH和pKF-Δapd2对其进行两次连续自然转化,依次在自然转化的初代转化子中筛选并获得了无抗的单基因缺失株ΔnanH和双基因缺失株ΔnanHΔapd,提高培养温度至42℃培养消除了Flp重组酶表达质粒。尽管该系统实现了G.parasuis两个基因的连续敲除,但敲除第2个基因时的效率明显下降,这很可能源于细菌细胞中Flp重组酶表达的积累,对转化质粒介导的同源重组产生了干扰。因此,作者筛选了突变的FRT位点、构建自杀性质粒pKFM-Δapd进行自然转化,显著提高了自然转化后获得突变株的效率,从而保证了该敲除系统的有效性和稳定性。本研究首次报道了可用于G.parasuis的无抗性标记双基因缺失突变系统,为其分子致病基因与基因工程疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 表达调控 flp-FRT 基因敲除 无抗缺失
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重组酶FLP在弱氧化葡糖杆菌中的表达及应用
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作者 刘静文 李天明 +1 位作者 杜红燕 冯惠勇 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第11期204-208,共5页
本实验借助宽宿主载体pBBR1MCS-5,构建在弱氧化葡糖杆菌(Gluconobacter suboxydans)中表达FLP重组酶的表达载体,转化弱氧化葡糖杆菌,获得阳性转化子;采用两步法RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)验证,结果表明:... 本实验借助宽宿主载体pBBR1MCS-5,构建在弱氧化葡糖杆菌(Gluconobacter suboxydans)中表达FLP重组酶的表达载体,转化弱氧化葡糖杆菌,获得阳性转化子;采用两步法RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)验证,结果表明:flp基因在宿主细胞中转录表达;将pBBR1MCS-psldh-flp重组质粒转化至带有四环抗性的突变菌株JGDH-,PCR验证表明带有FTR位点的抗性标记得到有效删除。重组酶FLP在Gluconobacter suboxydans的表达提供了一种循环使用选择标记基因进行多个位点基因敲除或置换的方法。 展开更多
关键词 弱氧化葡糖杆菌 flp/FRT 位点特异性重组 启动子 基因敲除
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一种利用λRed重组技术在杀鱼爱德华氏菌基因组添加标签的方法
10
作者 张淑雅 李端友 +3 位作者 刘莹莉 贺甜甜 聂品 谢海侠 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期895-902,共8页
在杀鱼爱德华氏菌病原学研究中,在动物中制备杀鱼爱德华氏菌蛋白抗体耗时长,且获得的多克隆或多肽抗体在宿主细胞中特异性差,背景信号强。为解决这一问题,对在大肠杆菌(Escherichia coli)和沙门氏菌(Salmonella)中建立起来的λRed基因... 在杀鱼爱德华氏菌病原学研究中,在动物中制备杀鱼爱德华氏菌蛋白抗体耗时长,且获得的多克隆或多肽抗体在宿主细胞中特异性差,背景信号强。为解决这一问题,对在大肠杆菌(Escherichia coli)和沙门氏菌(Salmonella)中建立起来的λRed基因编辑方法进行调整和优化,建立了在杀鱼爱德华氏菌(Edwardsiella piscicida)基因组基因上添加HA标签序列的方法,为使用标签抗体研究杀鱼爱德华氏菌基因功能提供便利。λRed重组系统利用同源线性DNA片段与基因组DNA进行重组。即以质粒pSU315为模板,在引物上引入目的基因的特异性序列,扩增FRT序列和抗生素抗性基因;以获得的PCR产物转化携带pKD46的杀鱼爱德华氏菌,在pKD46表达的λ噬菌体的3个重组蛋白(Exo、Beta和Gam)作用下,PCR产物与杀鱼爱德华氏菌基因组发生同源重组,获得引入了抗生素抗性的靶基因缺失或靶基因携带标签序列的菌株;接着利用pKD46的温敏型特性,消除引入的pKD46;最后向杀鱼爱德华氏菌引入文章构建的表达Flp重组酶的质粒pKD46-flp,在FLP作用下,两个FRT位点之间发生重组,消除抗生素抗性基因和一个FRT位点,获得携带一个FRT位点序列、靶基因缺失或靶基因添加标签序列的杀鱼爱德华氏菌菌株。该遗传操作平台的建立为杀鱼爱德华氏菌基因功能研究提供便利条件,亦为其他水产病原细菌遗传操作方法的建立提供借鉴。 展开更多
关键词 λRed重组 基因组基因标签序列添加 pKD46-flp 杀鱼爱德华氏菌
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ipt基因促进矮牵牛遗传转化效率及热激启动子驱动基因删除 被引量:11
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作者 李岩 赵德刚 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期145-151,共7页
本研究主要探讨ipt基因对矮牵牛遗传转化不定芽诱导影响及拟南芥热激启动子hsp18.2驱动重组酶基因flp的热诱导外源基因删除表达载体在矮牵牛中的基因删除效果。本研究中将植物表达载体pBin-hsp18.2:flp-35S:ipt及对照载体pBin-hsp18.2:... 本研究主要探讨ipt基因对矮牵牛遗传转化不定芽诱导影响及拟南芥热激启动子hsp18.2驱动重组酶基因flp的热诱导外源基因删除表达载体在矮牵牛中的基因删除效果。本研究中将植物表达载体pBin-hsp18.2:flp-35S:ipt及对照载体pBin-hsp18.2:flp遗传转化矮牵牛,以获得转基因植株,分析比较不定芽的诱导和转基因植株进行的热激基因删除。研究结果表明,ipt基因可促进矮牵牛遗传转化过程中不定芽的诱导,其不定芽诱导率为21.5%,显著高于对照的8.7%。在44℃,6h,热激6次的条件下,转基因矮牵牛植株表型恢复正常,经GUS蛋白表达分析及PCR、RT-PCR检测,证明外源基因已经被删除。转基因矮牵牛基因删除效率最高可达43.8%。本研究为ipt基因在一些遗传转化困难植物转基因中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 矮牵牛 重组酶基因 异戊烯基转移酶基因 基因删除
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云南汉族人群D17S30位点扩增片段长度多态性 被引量:4
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作者 欧炯文 邹浪萍 +3 位作者 李建京 申滨 韩晓华 赵永和 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期11-14,共4页
应用PCR技术和小型聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法,对云南汉族人群D17S30位点扩增片段长度多态性进行了分析。在被检的105名无关个体中,共检出12个等位基因,41种基因型。等位基因频率范围在00048~02190之... 应用PCR技术和小型聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法,对云南汉族人群D17S30位点扩增片段长度多态性进行了分析。在被检的105名无关个体中,共检出12个等位基因,41种基因型。等位基因频率范围在00048~02190之间,杂合度为8381%,DP值为09647。观察的基因型分布符合Hardy-Weinberg定律。 展开更多
关键词 人类遗传学 D17S30位点 扩增片段长度 多态性
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髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠的构建与鉴定 被引量:1
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作者 黄梦怡 钟玙沄 +5 位作者 黄穗 孙江 李月 王娟 姜勇 刘靖华 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第2期177-182,共6页
目的利用FLP/FRT、Cre/Loxp重组酶系统构建并鉴定髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠,为深入研究SETD4的生物学功能奠定基础。方法将引进的Setd4^(flox/+)小鼠自交,筛选出子代基因型为Setd4^(flox/flox)的小鼠;与FLP小鼠交配,得到Setd4^(f... 目的利用FLP/FRT、Cre/Loxp重组酶系统构建并鉴定髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠,为深入研究SETD4的生物学功能奠定基础。方法将引进的Setd4^(flox/+)小鼠自交,筛选出子代基因型为Setd4^(flox/flox)的小鼠;与FLP小鼠交配,得到Setd4^(fl/+/flp)小鼠;然后分别与C57BL/6小鼠交配去除FLP酶,筛选出Setd4^(fl/+)小鼠;与Lyz2-Cre小鼠交配,筛选出Setd4^(fl/+)/Lyz2-Cre小鼠;将得到的Setd^(4fl/+)和Setd4^(fl/+)/Lyz2-Cre小鼠交配,筛选出Setd4^(-/-)/Lyz2-Cre小鼠,即髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠。利用PCR技术鉴定小鼠基因型;实时荧光定量PCR技术检测小鼠腹腔巨噬细胞及肝组织中SETD4的mRNA表达水平验证敲除情况。结果髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞中SETD4 mRNA水平较野生型小鼠显著降低;而在肝组织中无显著差异。结论利用FLP/FRT、Cre/Loxp系统成功构建髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠,为后续的功能学研究提供了动物模型。 展开更多
关键词 flp/FRT Cre/Loxp SETD4 基因敲除
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利用Red系统快速改构含鼠β-酪蛋白基因的细菌人工染色体
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作者 辛艳丽 贾玉艳 +1 位作者 王恒梁 邓继先 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期45-50,共6页
采用Red系统介导的同源重组方法对含有鼠β-酪蛋白基因的RPCI23-440C1BAC进行快速改构。首先通过PCR方法,获得两端带有鼠β-酪蛋白基因同源序列的tPAm-Zeo同源重组片段,然后将此同源重组片段电击转化至已含有编码Red重组酶质粒的RPCI23-... 采用Red系统介导的同源重组方法对含有鼠β-酪蛋白基因的RPCI23-440C1BAC进行快速改构。首先通过PCR方法,获得两端带有鼠β-酪蛋白基因同源序列的tPAm-Zeo同源重组片段,然后将此同源重组片段电击转化至已含有编码Red重组酶质粒的RPCI23-440C1BAC菌中,在λRed重组系统的帮助下,通过同源重组片段两端与RPCI23-440C1中β-酪蛋白同源的序列在菌体内与β-酪蛋白基因发生同源重组,将其置换。最后利用Zeocin抗性基因两侧的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将抗性基因剔除。经Southern blot和序列分析鉴定表明,获得了重组正确且无编码两种重组酶质粒的tPAm-RPCI23-440C1BAC克隆。 展开更多
关键词 细菌人工染色体 λ RED重组系统 Β-酪蛋白基因 flp Southern 同源重组 BAC克隆 同源序列
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西安汉人D1S80位点基因频率调查 被引量:1
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作者 张改英 刘明俊 李生斌 《中国法医学杂志》 CSCD 1995年第3期133-135,共3页
利用PCR技术、小型聚丙烯酰胶凝胶电泳及银染法,检测D1S80位点的VNTR扩增片段长度多态性(Amp-FLP)。在175名无关的西安地区汉族人群中发现了22个等位基因,片段大小分布于320~750bp之间,频率分布为0.0057~03314,杂合度为82.3... 利用PCR技术、小型聚丙烯酰胶凝胶电泳及银染法,检测D1S80位点的VNTR扩增片段长度多态性(Amp-FLP)。在175名无关的西安地区汉族人群中发现了22个等位基因,片段大小分布于320~750bp之间,频率分布为0.0057~03314,杂合度为82.3%,个人识别率(DP)为0.9588,非父排除率(EPP)为0.6704。对7个家系23名相关个体分析,证实DIS80位点的遗传符合孟德尔方式。已发现的64种基因型分布符合Hardg-Weinberg定律。 展开更多
关键词 D1S80 AMP-flp PCR 基因频率
全文增补中
胸膜肺炎放线杆菌flp基因缺失菌株的构建及生物学特性 被引量:1
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作者 张四化 尹伟力 +9 位作者 阮征 万云 李婷婷 周慧 刘开武 章娅琳 李东 吴君 宫时玉 周锐 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1453-1457,共5页
flp(fimbrial low-molecular-weight protein)操纵子由13~15个基因组成,在细菌中广泛存在,主要编码一种类菌毛(Flp菌毛)的束状纤维蛋白,与细菌在宿主中的黏附和定植有关。本试验利用同源重组技术获得了无抗性标记的猪胸膜肺炎放线... flp(fimbrial low-molecular-weight protein)操纵子由13~15个基因组成,在细菌中广泛存在,主要编码一种类菌毛(Flp菌毛)的束状纤维蛋白,与细菌在宿主中的黏附和定植有关。本试验利用同源重组技术获得了无抗性标记的猪胸膜肺炎放线杆菌血清Ⅰ型4074菌株的flp基因缺失菌株,通过对基因缺失菌株进行一系列的生物学特性研究,探索胸膜肺炎放线杆菌的flp基因功能。结果表明,flp基因的缺失不会对胸膜肺炎放线杆菌在体外的生长和其溶血活性产生明显影响,但能导致猪胸膜肺炎放线杆菌4074菌株丧失形成菌毛的能力;以小鼠为模型的动物试验结果显示,基因缺失菌株的致病力较亲本菌株有所降低。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 flp基因 菌毛 基因缺失菌株
原文传递
Candida amazonensis FLP/FRT基因敲除系统的构建及初步验证
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作者 高芝 张梁 +3 位作者 李由然 顾正华 丁重阳 石贵阳 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1839-1852,共14页
【目的】构建一个适用于Candida amazonensis抗性标记可重复使用的FLP/FRT基因敲除系统,并通过敲除C.amazonensis的丙酮酸脱羧酶基因(Pyruvate decarboxylase,PDC)对该系统进行初步验证。【方法】以gfpm(绿色荧光蛋白基因)为报告基因,... 【目的】构建一个适用于Candida amazonensis抗性标记可重复使用的FLP/FRT基因敲除系统,并通过敲除C.amazonensis的丙酮酸脱羧酶基因(Pyruvate decarboxylase,PDC)对该系统进行初步验证。【方法】以gfpm(绿色荧光蛋白基因)为报告基因,通过添加相应诱导剂评估Spathaspora passalidarum来源启动子(SpXYLp、SpMAL6p、SpMAL1p、SpGAL1p)和Saccharomyces cerevisiae来源Sc GAL1p启动子在C.amazonensis中的诱导调控性能。选择严格诱导型启动子调控FLP重组酶的表达,并在FLP表达盒和潮霉素(Hygromycin B)抗性标记基因(hphm)两端添加同向重复的FRT位点,以PDC基因作为靶基因构建敲除盒PRFg HRP,转化宿主菌C.amazonensis CBS 12363,筛选得到阳性转化子后,通过添加诱导剂,表达FLP重组酶,实现FRT位点间片段切除。【结果】诱导调控实验表明启动子SpGAL1p(受半乳糖诱导)和SpMAL1p(受麦芽糖诱导)是适用于C.amazonensis的严格诱导型启动子。以SpGAL1p调控FLP基因表达,构建的敲除盒PRFg HRP成功转化宿主菌,获得阳性转化子C.amazonensis PDC01,通过添加半乳糖诱导,成功切除基因组中FLP表达盒和抗性标记盒,获得突变株C.amazonensis PDC02。【结论】首次建立了一个适用于C.amazonensis抗性标记可重复使用的FLP/FRT基因敲除系统,并利用该系统成功敲除了C.amazonensis内的PDC基因,为进一步利用代谢工程改造C.amazonensis酵母奠定了良好基础。 展开更多
关键词 CANDIDA amazonensis flp/FRT 诱导型启动子 基因敲除
原文传递
Gene deletor: a new tool to address gene flow and food safety concerns over transgenic crop plants 被引量:3
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作者 Yi LI 《Frontiers in Biology》 CAS CSCD 2012年第6期557-565,共9页
Environmental and food safety concerns over transgenic plants have hampered commercial applications of transgenic plant technology worldwide. A recently developed transgene deletion technology, named gene deletor tech... Environmental and food safety concerns over transgenic plants have hampered commercial applications of transgenic plant technology worldwide. A recently developed transgene deletion technology, named gene deletor technology, may be used to eliminate all transgenes from pollen, seeds, fruits or other organs when functions of transgenes are no longer needed or their presence may cause concerns. In this review, I will briefly describe the principle of the gene deletor technology with major supporting experimental data. I will also explain main characteristics and requirements of the gene deletor technology. Finally, I will discuss the gene deletor technology in the context of how it may be used to alleviate environmental and food safety concerns over transgenic plants in vegetatively and sexually propagated plants, to prevent volunteer transgenic plants, to protect proprietary transgenic technologies, and to allow farmers to reuse their harvested seeds for future planting. 展开更多
关键词 gene deletor pollen-mediated gene flow seed-mediated gene flow food safety transgene deletion transgenicplants loxP/Cre flp/FRT volunteer transgenic plants proprietary technologies
原文传递
新型CHO/dhfr^-细胞定点整合和表达系统的建立 被引量:5
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作者 刘志刚 林建波 +2 位作者 许凌峰 徐桂清 俞炜源 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2004年第6期501-504,共4页
目的 :建立CHO/dhfr-细胞的定点整合和表达系统。方法 :利用常规分子生物学方法 ,构建了一个新的高效筛选表达载体 ,该载体含有一个由FRT(flprecombinationtarget)位点、报告基因 (LacZ)及筛选基因 (zeocin)三片段构成的融合基因 ,而且... 目的 :建立CHO/dhfr-细胞的定点整合和表达系统。方法 :利用常规分子生物学方法 ,构建了一个新的高效筛选表达载体 ,该载体含有一个由FRT(flprecombinationtarget)位点、报告基因 (LacZ)及筛选基因 (zeocin)三片段构成的融合基因 ,而且该基因的表达受一个弱化的SV4 0启动子的控制。借助于随机整合及高效筛选 ,实现FRT位点在CHO/dhfr-细胞基因组中转录活跃区的整合 ,然后利用该位点介导的特异性重组实现了目的基因 (单链抗体 尿激酶融合基因 )的定点整合和有效表达 ,而且随后通过DHFR/MTX系统的加压扩增 ,以提高单链抗体 尿激酶融合基因在宿主细胞中的表达水平。结果与结论 :获得了能够实现外源基因在基因组中定点整合和有效表达的CHO/dhfr-细胞系 ,并利用该细胞系实现了单链抗体 尿激酶融合基因的高表达 ,表达量达到 5 μg/ (10 6细胞·2 4h)。 展开更多
关键词 CHO/dhfr^-细胞 flp—FRT重组系统 定点整合 基因表达
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