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复合探针实时荧光RT-PCR法检测小儿上呼吸道感染甲型流感病毒的价值
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作者 杨彬彬 陈秋虾 郭丽清 《中国医药指南》 2024年第15期103-105,共3页
目的 分析小儿上呼吸道感染甲型流感病毒应用复合探针实时荧光反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测的临床价值。方法选择2023年1月至2023年12月流感监测信息系统两家监测点上呼吸道感染甲型流感病毒感染的患儿80例监测标本进行回顾性分析... 目的 分析小儿上呼吸道感染甲型流感病毒应用复合探针实时荧光反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测的临床价值。方法选择2023年1月至2023年12月流感监测信息系统两家监测点上呼吸道感染甲型流感病毒感染的患儿80例监测标本进行回顾性分析,均开展复合探针实时荧光RT-PCR法检测,分析其诊断价值。结果 根据监测标本最终诊断结果显示,阳性标本68例、阴性标本12例。经复合探针实时荧光RT-PCR法检出67例,检出率为83.75%,敏感度为95.59%、特异度为83.33%、准确度为93.75%、阳性结果预测值为97.01%、阴性结果预测值为76.92%;批间批内变异系数均小于5%。结论 小儿上呼吸道感染甲型流感病毒应用复合探针实时荧光RT-PCR技术具有较高的敏感度、特异度及准确度,且检查结果快速,可为小儿上呼吸道感染甲型流感病变提供可靠的诊断,有利于制订合理的治疗方案。 展开更多
关键词 复合探针 上呼吸道感染 实时荧光反转录聚合酶链反应 甲型流感病毒
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Real-time Fluorescence PCR Method for Detection of Burkholderia glumae from Rice 被引量:5
2
作者 FANG Yuan XU Li-hui TIAN Wen-xiao HUAI Yan YU Shan-hong LOU Miao-miao XIE Guan-lin 《Rice science》 SCIE 2009年第2期157-160,共4页
Burkholderia glumae causing seedling rot and grain rot of rice was listed as a plant quarantine disease of China in 2007. It's quite necessary to set up effective detection methods for the pathogen to manage further ... Burkholderia glumae causing seedling rot and grain rot of rice was listed as a plant quarantine disease of China in 2007. It's quite necessary to set up effective detection methods for the pathogen to manage further dispersal of this disease. The present study combined the real-time PCR method with classical PCR to increase the detecting efficiency, and to develop an accurate, rapid and sensitive method to detect the pathogen in the seed quarantine for effective management of the disease. The results showed that all the tested strains of B. glumae produced about 139 bp specific fragments by the real-time PCR and the general PCR methods, while others showed negative PCR result. The bacteria could be detected at the concentrations of 1×10^4 CFU/mL by general PCR method and at the concentrations below 100 CFU/mL by real-time fluorescence PCR method. B. glumae could be detected when the inoculated and healthy seeds were mixed with a proportion of 1:100. 展开更多
关键词 Burkholderia glumae bacterial grain rot DETECTION real-time fluorescence polymerase chain reaction DCE
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基于直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测方法的建立
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作者 李浪 古莉冰 +6 位作者 朱丽 何建安 叶颖 张然 李华文 李福缘 顾大勇 《国际检验医学杂志》 CAS 2024年第3期358-364,共7页
目的建立基于直扩实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术的寨卡病毒快速检测方法。方法采用特殊功能的DNA聚合酶,以及优选PCR增强剂,以此建立直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测5种样本(全血、血清、唾液、咽拭子和尿)的方法。结果... 目的建立基于直扩实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术的寨卡病毒快速检测方法。方法采用特殊功能的DNA聚合酶,以及优选PCR增强剂,以此建立直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测5种样本(全血、血清、唾液、咽拭子和尿)的方法。结果5种样本检测限分别为血清103 PFU/mL,尿、咽拭子和唾液102 PFU/mL,全血104 PFU/mL,标准曲线的拟合优度的可决系数均在0.98以上,扩增效率均在90%~110%;寨卡病毒核酸成功扩增,非寨卡病毒核酸均未能扩增;尿、全血和唾液样本的重复性实验中106 PFU/mL和102 PFU/mL两个浓度的6个重复Ct值的变异系数均<5%。该研究建立的直扩RT-PCR技术的寨卡病毒检测方法与常规RT-PCR技术的检测结果一致,8个寨卡病毒样本,均只检测出2个血清样本,其余62个非寨卡病毒样本及12个阴性样本均未得到扩增。结论成功建立基于直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测方法,该方法简便快捷且灵敏度高、特异度强。 展开更多
关键词 寨卡病毒 直扩实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术 DNA聚合酶
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柯萨奇病毒A组5型实时荧光RT-PCR检测方法的建立与评价 被引量:1
4
作者 罗娟 田维霞 +8 位作者 李永文 宋光敏 姚淼 陈佳丽 胡雨萌 刘娇阳 罗南宁 艾远航 吴凯峰 《国际检验医学杂志》 CAS 2023年第7期803-807,共5页
目的建立柯萨奇病毒A组5型(CVA5)特异的一步法实时荧光反转录聚合酶链反应(RT-PCR)核酸检测方法。方法以流行于遵义地区的CVA5病毒株和NCBI基因库中随机下载的CVA5 VP1基因序列作为参考序列,分析这些序列的保守区域,在其保守区设计特异... 目的建立柯萨奇病毒A组5型(CVA5)特异的一步法实时荧光反转录聚合酶链反应(RT-PCR)核酸检测方法。方法以流行于遵义地区的CVA5病毒株和NCBI基因库中随机下载的CVA5 VP1基因序列作为参考序列,分析这些序列的保守区域,在其保守区设计特异性的引物与Taqman探针,建立检测CVA5的一步法实时荧光RT-PCR。通过构建含CVA5 VP1保守区域的重组质粒,绘制标准曲线,并对检测方法的灵敏度、特异性、重复性及临床样本检出限进行评价。利用该方法对遵义地区273份未明确分型的肠道病毒阳性样本进行检测,将检出的部分CVA5阳性产物进行测序。结果成功建立一种基于实时荧光RT-PCR的CVA5检测方法,该方法在10^(4)~10^(9)copy/mL范围内具有良好的线性关系(R 2>0.999),平均扩增效率为102.26%。灵敏度高,对临床样本的检出限为103copy/mL。该方法的特异性强,与柯萨奇病毒A组2型(CVA2)、柯萨奇病毒A组4型(CVA4)、柯萨奇病毒A组6型(CVA6)、丙型肝炎病毒、呼吸道合胞病毒和鼻病毒等均不发生交叉反应。重复性实验的变异系数低于1.5%。273份未明确分型肠道病毒阳性样本中共检出25份CVA5,占未明确分型阳性样本的9.16%。结论该研究建立的一步法CVA5RT-PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于CVA5的检测。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A5 实时荧光反转录聚合酶链反应 肠道病毒 手足口病 疱疹性咽峡炎
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Clinical application of real time-polymerase chain reaction in determining cytomegalovirus viral DNA load in renal transplant recipients 被引量:2
5
作者 ZHANG Chuan-bao LAI Hui-ying +2 位作者 XU Hong-tao WANG Da-guang XIAO Fei 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2012年第19期3575-3577,共3页
Background Cytomegalovirus (CMV) remains a significant clinical problem among immunosuppressed renal transplant patients. Quantitative PCR assays have become the most common methods in the determination of CMV infec... Background Cytomegalovirus (CMV) remains a significant clinical problem among immunosuppressed renal transplant patients. Quantitative PCR assays have become the most common methods in the determination of CMV infections in transplant patients. This study was to determine the relationship between CMV infection and the acute rejection of the transplanted kidney. Methods Plasma samples from 77 renal transplant patients that were pre-transplant negative for CMV infection were tested using reaD-time quantitative PCR and CMV gene-specific primers. The detected viral loads were retrospectively compared with the acute rejection rate and the chronic or mild rejection rates of the renal transplant. Results CMV-DNA was detected in 29 of 77 recipients, yielding a positive rate of detection of 37.7% for this procedure. Twelve of the 21 recipients (57.1%) who suffered acute rejection had positive CMV-DNA. Among the 56 recipients suffered from chronic or mild rejection, 17 (30.4%) had positive CMV-DNA plasma. Moreover, of the 29 recipients who had detectable CMV-DNA after transplant, 12 (41.4%) suffered from acute rejection; of the 48 recipients with undetectable CMV-DNA, only nine (18.8%) developed acute rejection. Post-transplant patients with acute rejection had a higher rate (57.1% vs. 30.4%, P=0.03) of post-transplant CMV infection than those with chronic or mild rejection. Conclusion CMV infection is a risk factor of acute renal transplant rejection and CMV infection should be prevented and treated in renal transplant recipients. 展开更多
关键词 real time-polymerase chain reaction renal transplant cytomegalovirus infection REJECTION
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饮食习惯与肥胖患儿性早熟的相关性分析 被引量:1
6
作者 连学刚 高兰平 《临床研究》 2024年第1期190-192,共3页
目的探讨饮食习惯与肥胖患儿性早熟的相关性分析。方法选取苏州市吴中人民医院2019年3月至2022年3月期间收治的72例性早熟肥胖患儿作为观察组,另选取同期体检的健康肥胖儿童71例作为常规组。采用实时-逆转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qP... 目的探讨饮食习惯与肥胖患儿性早熟的相关性分析。方法选取苏州市吴中人民医院2019年3月至2022年3月期间收治的72例性早熟肥胖患儿作为观察组,另选取同期体检的健康肥胖儿童71例作为常规组。采用实时-逆转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测两组外周血miR-125b水平,分析患儿饮食习惯。通过比较两组肥胖儿童的外周血miR-125b、饮食习惯,采用Logistic回归分析法分析外周血miR-125b、饮食习惯与肥胖患儿性早熟的关系。结果观察组外周血miR-125b表达水平高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组饮食没规律、荤多素少、高添加剂食品占比均高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组女性患儿、不良饮食习惯占比高于常规组,且经多因素分析显示外周血miR-125b表达水平、女性、不良饮食习惯是肥胖患儿性早熟的独立危险因素,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肥胖患儿性早熟外周血miR-125b表达水平高于健康肥胖儿童,不良饮食习惯高于健康肥胖儿童,外周血miR-125b表达水平偏高、不良饮食习惯偏低均为肥胖患儿性早熟的影响因素。 展开更多
关键词 肥胖儿童 不良饮食习惯 微小核糖核酸-125b 实时-逆转录荧光定量聚合酶链反应
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Influences of bracket bonding on mutans streptococcus in plaque detected by real time fluorescence-quantitative polymerase chain reaction 被引量:1
7
作者 AI Hong LU Hong-fei +4 位作者 LIANG Huan-you WU Jian LI Ruo-lan LIU Guo-ping XI Yun 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2005年第23期2005-2010,共6页
Background Enamel demineralization occurs frequently during orthodontic treatment. In this study, we evaluated the changes of the density of mutans streptococcus (MS) in plaque after bracket bonding and using fluori... Background Enamel demineralization occurs frequently during orthodontic treatment. In this study, we evaluated the changes of the density of mutans streptococcus (MS) in plaque after bracket bonding and using fluoride adhesive on maxillary incisors by real time fluorescence-quantitative polymerase chain reaction (RT-FQ PCR).Methods The study was designed as a self-paired test. Brackets were bonded with fluoride adhesive on the left side, while non-fluoride adhesive on the right side for each patient. Plaque samples were taken from the surfaces around the brackets of four maxillary incisors before brackets bonding and after the bonding 4 weeks later. The amount of MS was measured by RT-FQ PCR. The data obtained were analyzed statistically using the SPSS 11.5 version and the alpha level was set at 0. 05 ( 2-tailed).Results The amount of MS in plaque increased significantly after bracket bonding ( P 〈 0.01 ), whereas no significant differences were observed among four maxillary incisors both before and after brackets bonding (P 〉 0. 05 ), and among the incisors using and not using fluoride adhesive ( P 〉 0. 05 ).Conclusions The increase of the density of MS in plaque after bracket bonding is one of the etiological factors for enamel demineralization in orthodontic patients. The result of this study did not support what we observed clinically that the incidence of enamel demineralization for lateral incisors was higher than that for central incisors. Using fluoride adhesive for bonding did not affect the amount of MS in plaque in our study. Further study is needed. 展开更多
关键词 mutans streptococcus · enamel demineralization · plaque · bracket bonding · fluorideadhesive· real time fluorescence-quantitative polymerase chain reaction
原文传递
实时荧光定量RT-PCR分析非小细胞肺癌SATB1的表达和临床病理意义 被引量:32
8
作者 周来勇 刘芳 +3 位作者 童健 陈群请 张福伟 郭琳琅 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期534-537,共4页
目的检测非小细胞肺癌组织中SATB1 mRNA的表达,探讨SATB1表达与非小细胞肺癌发生、发展的关系及其临床病理意义。方法用TRIZOL提取非小细胞肺癌组织和正常肺组织总RNA后,将其反转录为cDNA,以实时荧光定量RT-PCR方法检测非小细胞肺癌组... 目的检测非小细胞肺癌组织中SATB1 mRNA的表达,探讨SATB1表达与非小细胞肺癌发生、发展的关系及其临床病理意义。方法用TRIZOL提取非小细胞肺癌组织和正常肺组织总RNA后,将其反转录为cDNA,以实时荧光定量RT-PCR方法检测非小细胞肺癌组织及正常肺组织中SATB1 mRNA的表达,分析SATB1基因表达与临床病理参数的相关性。结果癌组织中SATB1 mRNA表达量为正常组织13倍,两者差异显著(P<0.001),其中有、无转移组分别为正常组织23.63倍和5.57倍。结论SATB1 mRNA的表达水平可能与非小细胞肺癌发生发展及淋巴转移有关,有望成为判断非小细胞肺癌预后的一个指标。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 SATB1 mRNA 实时荧光定量rt-pcr
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鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平快速定量方法的建立及应用
9
作者 彭新凯 王娉 +5 位作者 武运 陈颖 曲天铭 王宇 赵晓美 郜忠川 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第7期167-174,共8页
目的应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR),建立鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平的快速定量检测方法。方法通过比对鼠李糖乳杆菌HN001的近缘菌株的基因组,筛选出鼠李糖乳杆... 目的应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR),建立鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平的快速定量检测方法。方法通过比对鼠李糖乳杆菌HN001的近缘菌株的基因组,筛选出鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平的特异基因,以菌株水平的特异基因为靶标设计引物及探针,优化反应体系和条件,建立鼠李糖乳杆菌HN001株水平的qPCR检测方法。对方法的特异性、灵敏度、检出限进行验证,并采用已建立的qPCR方法进行模拟添加样品和实际样品的检测。结果所建立的方法特异性强,与近缘菌株无交叉反应,鼠李糖乳杆菌HN001纯培养液检出限为10^(2)CFU/mL,灵敏度可达到650 copies/μL,可在2 h内完成样品检测。对模拟添加样品以及实际样品检测中qPCR和平板计数法结果的对数值进行显著性分析检验,两种方法的测定值结果均无显著性差异(P>0.05)。结论本研究建立的qPCR检测方法可有效应用于益生菌产品中鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平定量检测,具有快速、灵敏、准确的特点。 展开更多
关键词 实时荧光定量聚合酶链式反应 鼠李糖乳杆菌HN001 菌株水平定量检测 益生菌产品
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实时荧光RT-PCR在人感染H7N9禽流感病毒检测中的应用 被引量:11
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作者 华哲云 褚维 +3 位作者 宋黎黎 王宇 高淑娜 劳宝法 《检验医学》 CAS 2013年第9期755-757,共3页
目的评估实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测H7N9禽流感病毒的应用效果,为人感染H7N9禽流感监测和防控提供可靠的实验室检测数据。方法采集各级医疗单位人感染H7N9禽流感监测及可疑病例标本137例,同时使用4种实时荧光RT-PCR试剂分... 目的评估实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测H7N9禽流感病毒的应用效果,为人感染H7N9禽流感监测和防控提供可靠的实验室检测数据。方法采集各级医疗单位人感染H7N9禽流感监测及可疑病例标本137例,同时使用4种实时荧光RT-PCR试剂分别检测上呼吸道标本和下呼吸道标本中H7N9禽流感病毒核酸。结果 H7N9禽流感病毒核酸阳性率为3.65%(5/137);H7N9禽流感病毒核酸阳性标本中上呼吸道标本检出率为60%(3/5),下呼吸道标本检出率为100%(3/3)。4种试剂符合率为100%。结论实时荧光RT-PCR能有效检出H7N9禽流感病毒核酸,检测下呼吸道标本有助于提高阳性检出率。 展开更多
关键词 H7N9禽流感病毒 人类感染 实时荧光逆转录聚合酶链反应 下呼吸道标本
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RT-PCR检测在疑似肺炎支原体感染患者中的应用研究 被引量:4
11
作者 胡淼 马燕芬 +2 位作者 李向平 马亚琼 李平法 《国际检验医学杂志》 CAS 2017年第11期1480-1481,1484,共3页
目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测肺炎支原体(MP)DNA在疑似MP感染患者中的应用价值。方法采用RT-PCR对疑似MP感染患者血清、痰、胸腔积液、鼻咽拭子、肺泡灌洗液、支气管灌洗液标本进行MP-DNA检测。结果 1 402例标本MP-DNA检... 目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测肺炎支原体(MP)DNA在疑似MP感染患者中的应用价值。方法采用RT-PCR对疑似MP感染患者血清、痰、胸腔积液、鼻咽拭子、肺泡灌洗液、支气管灌洗液标本进行MP-DNA检测。结果 1 402例标本MP-DNA检测总阳性率为12.20%,血清标本检测阳性率最低,仅为2.36%,痰、肺泡灌洗液及支气管灌洗液检测阳性率较高,依次为62.96%、77.08%和88.71%。结论 RT-PCR法适用于多种类型标本MP-DNA检测,是诊断MP感染的有效方法之一。 展开更多
关键词 实时荧光定量 聚合酶链反应 肺炎支原体 DNA
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应用实时荧光定量RT-PCR法建立肝癌分子诊断指数 被引量:4
12
作者 王伟丽 高英堂 +5 位作者 杜智 王毅军 景丽 郭华 杨斌 白同 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2009年第10期985-991,共7页
目的:筛选肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中表达水平较正常肝细胞差异大、特异性好的基因,建立肝癌分子诊断指数,以期从分子病因学角度实现对肝癌的早期诊断.方法:随机选择38例手术切除组织标本,其中正常肝5例、肝炎4例、肝硬... 目的:筛选肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中表达水平较正常肝细胞差异大、特异性好的基因,建立肝癌分子诊断指数,以期从分子病因学角度实现对肝癌的早期诊断.方法:随机选择38例手术切除组织标本,其中正常肝5例、肝炎4例、肝硬化(LC)12例、HCC和癌旁组织17例,实时荧光定量RT-PCR检测9个基因的表达,以管家基因G3PDH为对照,2-△△CT法计算目的基因相对表达量,依据表达异常的基因个数建立分子诊断指数.结果:GPC3等6个基因在正常肝、肝炎、LC与HCC组的两组或多组间存在差异(P<0.05);GPC3、E2F1从肝炎组到LC、HCC组呈递增趋势,HGF、CLDN10在LC组表达量升高,而在HCC组明显下降,PTEN、PRDM2、MGMT从肝炎组到LC、HCC组呈递减趋势;9个基因在LC组分子诊断指数平均值为1.58,在HCC组平均值为5.24,二者差异显著;GPC3、E2F1、MMP2从癌旁到癌呈递增趋势,CLDN10、HGF、PTEN、DLC1、PRDM2、MGMT从癌旁到癌呈递减趋势.结论:通过筛选更多基因的组合分析,分子诊断指数有望成为鉴别诊断早期肝癌的一种有效方法. 展开更多
关键词 肝细胞癌 基因 表达 实时荧光定量RT—PCR 分子诊断指数
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大鼠TGF-β1 mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法的建立 被引量:12
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作者 陈英剑 胡成进 赵苗青 《中国实验诊断学》 2005年第2期279-281,共3页
目的 建立检测大鼠TGF- β1mRNA表达水平的SYBRGreenⅠ荧光定量RT- PCR方法。方法 摸索SYBRGreenⅠ工作液的配制方法,筛选PCR反应液,优化反应中引物和MgCl2 的浓度,以actin为对照,建立大鼠TGF -β1mR NA表达水平的SYBRGreenⅠ荧光定量... 目的 建立检测大鼠TGF- β1mRNA表达水平的SYBRGreenⅠ荧光定量RT- PCR方法。方法 摸索SYBRGreenⅠ工作液的配制方法,筛选PCR反应液,优化反应中引物和MgCl2 的浓度,以actin为对照,建立大鼠TGF -β1mR NA表达水平的SYBRGreenⅠ荧光定量RT PCR方法并检测大鼠肾皮质TGF -β1mRNA表达水平。结果 SYBRGreenⅠ工作液,4 0倍水溶液稳定性好,最佳反应稀释度为1∶1 0 0 0 0。大鼠TGF β1表达水平的SYBRGreen荧光定量PCR方法,TGF- β1和actin的最佳MgCl2 反应浓度分别为2 5mM和3 5mM ,引物浓度分别为0 . 8μM和0. 5μM ,特异扩增产物的熔解温度分别为88 1和88 .6℃,因此选择在85℃时收集荧光信号。正常大鼠TGF- β1的Ct值在2 9 0 3,actin的Ct值在2 4 .86 ,扩增效率分别为0 . 995和1 . 0 8。结论 通过优化反应条件和特异性分析,成功地建立了特异、敏感的大鼠TGF- β1mRNASYBRGreenⅠ荧光定量RT PCR。SYBRGreenⅠ荧光定量PCR快速、敏感、特异、经济,可以满足临床和科研的需要。 展开更多
关键词 TGF-β1 mRNA SYBR Green 荧光定量rt-pcr
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实时荧光定量RT-PCR检测急性白血病中Bmi-1基因mRNA的表达及意义 被引量:2
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作者 于琦 孟秀香 +3 位作者 袁宏 王楠 姜艳梅 马末娇 《大连医科大学学报》 CAS 2010年第1期90-93,共4页
[目的]建立荧光实时定量RT—PCR(FQRT—PCR)检测Bmi—1基因mRNA的方法并研究该基因在急性白血病细胞中表达的意义。[方法]根据Genbank提供的序列,设计目的基因Bmi-1及内参基因GAPDH的扩增引物,将Bmi-1及GAPDHRT—PCR扩增片段克隆入... [目的]建立荧光实时定量RT—PCR(FQRT—PCR)检测Bmi—1基因mRNA的方法并研究该基因在急性白血病细胞中表达的意义。[方法]根据Genbank提供的序列,设计目的基因Bmi-1及内参基因GAPDH的扩增引物,将Bmi-1及GAPDHRT—PCR扩增片段克隆入载体pMDl8-Tsimple,经测序鉴定正确后,进行纯化、定量及系列稀释,应用SYBRGreenI荧光染料,建立检测Bmi-1mRNA的FQRT—PCR方法,并对其线性及特异性进行评价。应用此方法检测21例急性白血病及10例健康人外周抗凝血中Bmi-1mRNA的表达水平。【结果]该方法的线性范围为1.0×10^3-1.0×10^8eopies/txL,相关系数为-1.00,熔解曲线分析扩增产物显示单-的峰,熔解温度(Tm)为80.4℃。急性白血病患者的相对表达量为0.56±0.12,健康对照组中Bmi-1mRNA的相对表达量为0.19±0.08,两者的表达差异有统计学意义(P〈0.05)。[结论]实时荧光定量RT—PCR方法检测Bmi-1基因表达,具有高敏感性和高特异性等优点,可作为进-步研究Bmi-1基因的方法。Bmi-1基因参与急性白血病的发生,可能是一种新的肿瘤标志物。 展开更多
关键词 BMI-1基因 急性白血病 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量rt-pcr
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实时荧光定量RT-PCR检测肝细胞肝癌中B-myb的表达及其临床意义 被引量:1
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作者 吴华 曹骥 +7 位作者 杨春 李丽萍 欧超 潘南海 段小娴 李瑗 苏建家 岳惠芬 《广西医学》 CAS 2007年第11期1663-1666,共4页
目的建立B-myb mRNA表达量检测的实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)系统,检测肝细胞肝癌(HCC)中B-myb的表达并分析其临床意义。方法用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测70例HCC患者癌组织、癌旁肝组织及18例正常肝组织中B-myb mRNA的表... 目的建立B-myb mRNA表达量检测的实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)系统,检测肝细胞肝癌(HCC)中B-myb的表达并分析其临床意义。方法用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测70例HCC患者癌组织、癌旁肝组织及18例正常肝组织中B-myb mRNA的表达情况。结果B-myb mRNA在肝癌组织(0.0375±0.0168)及癌旁肝组织(0.0353±0.0128)中的表达水平明显高于在正常肝组织(0.0265±0.0099)中的表达水平(P<0.05),而在肝癌组织及癌旁肝组织中的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。B-myb在人肝癌组织中的表达与临床分期、肝外转移及术后复发明显有关,而与门静脉癌栓、肿瘤个数、肿瘤直径、血清AFP水平及分化程度无明显关系。结论该方法克服了传统PCR只能定性检测而不能定量检测的缺点,为研究B-myb在HCC中的表达提供了定量方法。B-myb可能与肝癌的发生、发展有关。 展开更多
关键词 肝细胞肝癌 B-MYB 实时荧光定量聚合酶链反应
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实时荧光定量RT-PCR与ELISA检测孕妇血清风疹病毒的比较分析 被引量:2
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作者 赵立红 《泰山医学院学报》 CAS 2011年第5期358-360,共3页
目的应用TaqMan实时荧光定量RT-PCR技术定量检测孕妇血清标本中风疹病毒RNA,并与ELISA法比较其敏感度与特异度,为孕妇早期风疹病毒检测提供迅速准确的方法。方法收集126例已确诊风疹病毒阳性孕妇血清标本与107例女性健康查体者血清标本... 目的应用TaqMan实时荧光定量RT-PCR技术定量检测孕妇血清标本中风疹病毒RNA,并与ELISA法比较其敏感度与特异度,为孕妇早期风疹病毒检测提供迅速准确的方法。方法收集126例已确诊风疹病毒阳性孕妇血清标本与107例女性健康查体者血清标本,同时进行实时荧光定量RT-PCR核酸检测与风疹病毒ELISA法IgM抗体检测,比较两种方法的敏感度与特异度。结果以细胞培养法为金标准,实时荧光定量RT-PCR法敏感度为92.9%,特异度为98.1%。ELISA IgM抗体法的敏感度和特异度分别为97.6%,86.9%。两种方法的敏感度无显著性差异(p>0.05),实时荧光定量RT-PCR法的特异度明显高于ELISA IgM抗体法(p<0.01)。结论实时荧光定量RT-PCR简便快捷、敏感性高、特异性高、定量准确,在临床风疹病毒基因检测中具有很大的应用潜力。 展开更多
关键词 风疹病毒 核酸 逆转录-聚合酶链反应 荧光定量聚合酶链反应 酶联免疫吸附测定 免疫球蛋白M
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五重实时荧光聚合酶链式法快速筛查食用淀粉及其制品中植物源性成分
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作者 张明娟 余秋地 +3 位作者 王娟 李根容 肖昭竟 周朝旭 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第13期207-214,共8页
目的 建立五重实时荧光聚合酶链式方法 快速筛查食用淀粉及其制品中植物源性成分。方法 首先设计豌豆、绿豆、木薯、玉米的特异性引物、探针,建立多重实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法 ,再验证方法 的特异... 目的 建立五重实时荧光聚合酶链式方法 快速筛查食用淀粉及其制品中植物源性成分。方法 首先设计豌豆、绿豆、木薯、玉米的特异性引物、探针,建立多重实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法 ,再验证方法 的特异性和绝对灵敏度,最后通过样品掺假模拟实验验证方法 的检出限。结果 该方法 的特异性强,仅能检出豌豆源性、绿豆源性、木薯源性、玉米源性成分;灵敏度较高,对绿豆源性和木薯源性的检测灵敏度可达到1×10^(–1) ng/μL水平,豌豆源性和玉米源性的检测灵敏度可达到1×10^(–2) ng/μL水平。结论 本研究建立的五重实时荧光PCR方法 可用来区分市场上淀粉及其制品中的豌豆源性、绿豆源性、玉米源性和木薯源性成分,具有较好的应用价值。 展开更多
关键词 五重实时荧光聚台酶链式反应 淀粉 淀粉制品 检测方法
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叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应-高通量测序技术鉴定冷链食品中多种病原菌
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作者 柯振华 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第5期85-96,共12页
目的 应用叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应-高通量测序技术鉴定冷链食品中多种病原菌,构建病原菌分子进化树。方法 以冷链食品中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特氏菌5种病原菌作为研究对... 目的 应用叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应-高通量测序技术鉴定冷链食品中多种病原菌,构建病原菌分子进化树。方法 以冷链食品中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特氏菌5种病原菌作为研究对象,应用叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应技术作为冷链食品中病原菌检测初筛手段,应用微生物培养法以及生化鉴定仪器法进行方法比对与结果验证,运用高通量测序以及分子进化树构建作为冷链食品中所分离病原菌的种属地位确证方法。结果 叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应技术成功扩增了冷链食品中生活状态病原菌的特征性核酸片段,排除了死亡细菌以及阴性对照菌的干扰,病原菌检出限可达到1×10^(3)CFU/mL,一次反应可检测42份试样,可以在18 h内完成检测工作。在冷链食品中病原菌抽样检测调查中,随机采集的751份冷链食品,共检出62株病原菌,病原菌总体检出率为8.3%(62/751)。通过后续的16S rRNA测序以及葡萄球菌属、弧菌属以及李斯特菌属分子进化树的构建,成功溯源了金黄色葡萄球菌的污染来源并完成病原菌种属定位。结论 本方法特异性好、灵敏度高、检测通量高,为冷链食品及相关食品中病原菌的精确检测与溯源分析提供新的思路与方法。 展开更多
关键词 叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应技术 高通量测序 分子进化树 冷链食品 病原菌
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实时荧光定量RT-PCR检测胃癌腹腔冲洗液CK19 mRNA的临床意义
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作者 盛贤能 刘宏斌 +2 位作者 朱万坤 韩晓鹏 苏琳 《医学研究杂志》 2010年第5期45-47,124,共4页
目的评估实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(real-time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,FQ-RT-PCR)方法检测胃癌腹腔冲洗液沉渣中CK19mRNA的表达,探讨其对预测胃癌腹膜微转移的临床意义。... 目的评估实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(real-time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,FQ-RT-PCR)方法检测胃癌腹腔冲洗液沉渣中CK19mRNA的表达,探讨其对预测胃癌腹膜微转移的临床意义。方法收集36例胃癌和7例胃良性病变患者腹腔冲洗液沉渣及临床病理资料,分别采用FQ-RT-PCR检测腹腔冲洗液沉渣中CK19 mRNA的表达;HE染色行腹腔冲洗液细胞学(peritoneal lavage cytology,PLC)检查。结果胃癌CK19 mRNA的阳性检出率为(23/36)63.9%,明显高于PLC(9/36)25.0%(P<0.01),PLC检查阳性的9例患者CK19 mRNA检测结果均为阳性;且CK19 mRNA的检测阳性率与浆膜浸润与否、胃癌浸润深度、组织学分化程度、淋巴结转移情况及病期进展有关(P<0.05)。胃良性病变两项检查结果均为阴性。结论 FQ-RT-PCR检测胃癌腹腔冲洗液沉渣中CK19 mRNA,可提高检测腹腔游离癌细胞的灵敏性,适用于预测胃癌患者腹膜微转移,有助于指导术后治疗及判断预后。 展开更多
关键词 实时荧光定量RT—PCR CK19 胃癌 腹腔冲洗液 细胞学检查
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市售食品21种动植物过敏原成分的检测分析
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作者 何名扬 王鸣秋 +6 位作者 刘艳 李诗瑶 朱必婷 张涛 郭雅晴 周陶鸿 彭青枝 《中国酿造》 CAS 北大核心 2024年第5期255-260,共6页
为进一步明确市售食品动植物过敏原标注情况,该研究建立一种可同时检测21种动植物过敏原成分的多重连接依赖性探针扩增(MLPA)技术,并对其进行灵敏度实验,并结合实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-fqPCR)检测技术对38种市售预包装食品中动... 为进一步明确市售食品动植物过敏原标注情况,该研究建立一种可同时检测21种动植物过敏原成分的多重连接依赖性探针扩增(MLPA)技术,并对其进行灵敏度实验,并结合实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-fqPCR)检测技术对38种市售预包装食品中动植物过敏原成分进行比较分析。结果表明,采用MLPA检测技术可同时对21种动植物过敏原成分进行检测,扩增峰之间不存在交叉干扰,扩增峰实际大小和理论大小相差≤3 bp,检出最低脱氧核糖核酸(DNA)质量浓度为1 ng/μL;RT-fqPCR、MLPA技术检测标注过敏原成分食品的检出率分别为51.5%、44.1%,此外,MLPA检测法检出了6个标注可能含有过敏原成分样品中的过敏原成分,10个样品中未标记的过敏原成分。因此,采用MLPA技术检测21种动植物过敏原成分的灵敏度更高。 展开更多
关键词 动植物过敏原 多重连接依赖性探针扩增 实时荧光定量聚合酶链式反应 多重检测
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