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猫杯状病毒实时荧光定量逆转录PCR检测方法的建立
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作者 李静怡 熊雷 +4 位作者 黄莉璎 刘晓鹏 杨盛奋 金京勋 王弋 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第12期64-72,共9页
为了建立可快速检测猫杯状病毒(FCV)的方法,本试验采用肽核酸(PNA)设计分子信标荧光探针,优化反应体系和条件,建立了FCV实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测方法,对该方法的敏感性、特异性和重复性进行验证,并进行临床样本检测。结果显... 为了建立可快速检测猫杯状病毒(FCV)的方法,本试验采用肽核酸(PNA)设计分子信标荧光探针,优化反应体系和条件,建立了FCV实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测方法,对该方法的敏感性、特异性和重复性进行验证,并进行临床样本检测。结果显示,建立的RT-qPCR检测FCV参考株具有良好的线性关系(R^(2)=0.9995),最低检测限为1×10^(2)TCID_(50)/mL,对其他相关病毒无有效响应,组内变异系数和组间变异系数均小于1%。应用该方法检测33份临床样本,阳性率为51.5%。由此可见,本试验建立的RT-qPCR敏感性、特异性和重复性均良好,可为FCV的早期快速诊断和疫病防控等提供检测手段。 展开更多
关键词 猫杯状病毒(FCV) 肽核酸(PNA) 分子信标荧光探针 实时荧光定量逆转录pcr(RT-qpcr) 开放阅读框(ORF)
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用RT-PCR对mRNA进行定量分析 被引量:9
2
作者 戴建国 肖华胜 +2 位作者 张萍 陈镔复 赵文明 《第四军医大学学报》 CAS 1999年第3期242-243,共2页
编码蛋白质的mRNA通过反转录酶的作用,将mR-NA反转录成cDNA,再通过PCR扩增,DNA产物得到指数形式的增加.在一定循环数内,PCR产物的量与其模板cD-NA,也就是相应mRNA的浓度有关.PCR产物电泳后掺入溴化乙锭,可通过扫描荧光强度来... 编码蛋白质的mRNA通过反转录酶的作用,将mR-NA反转录成cDNA,再通过PCR扩增,DNA产物得到指数形式的增加.在一定循环数内,PCR产物的量与其模板cD-NA,也就是相应mRNA的浓度有关.PCR产物电泳后掺入溴化乙锭,可通过扫描荧光强度来确定PCR产物的量.通过优化实验条件,可计算出所检测的mRNA的相对含量. 展开更多
关键词 RT-pcr 溴化乙锭 MRNA 聚合酶链反应
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荧光差异显示PCR分离果蝇七氟醚敏感性相关基因 被引量:5
3
作者 刘红 任笑蒙 +1 位作者 陈兰英 刘进 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期715-722,共8页
吸入麻醉药是临床上常用的一类全身麻醉药 .为深入研究吸入麻醉药的作用机理 ,以本实验室创建的对七氟醚敏感的果蝇品系 (F PS1 )和耐药 (F PR1 )的果蝇品系为研究模型 ,以野生型黑腹果蝇 (Drosophilamelanogaster)为对照 ,应用荧光mRN... 吸入麻醉药是临床上常用的一类全身麻醉药 .为深入研究吸入麻醉药的作用机理 ,以本实验室创建的对七氟醚敏感的果蝇品系 (F PS1 )和耐药 (F PR1 )的果蝇品系为研究模型 ,以野生型黑腹果蝇 (Drosophilamelanogaster)为对照 ,应用荧光mRNA差异显示PCR (fluorescentdifferentialdisplayreversetranscriptional PCR ,fluoroDDRT PCR)方法 ,分离与吸入麻醉药七氟醚敏感性相关的候选基因(EST) .在分离到的 32个差异片段中 ,经Northern印迹杂交鉴定后 ,得到 1个阳性片段 (No .4 1 ) ,其在敏感品系果蝇中表达较高 .通过cDNA末端快速扩增技术 (rapidamplificationofcDNAends ,RACE)克隆和拼接获得了 1 75kb的全长cDNA ,该基因位于Chr2R 4 5F3区域内 ,为一已知序列的新基因 .实验结果与前期工作用遗传学定位方法所得结果一致 ,从而可推测决定七氟醚敏感性的相关基因可能位于果蝇第 2号染色体上 . 展开更多
关键词 荧光mRNA差异显示pcr 七氟醚敏感性基因 果蝇 麻醉药 作用机理
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‘琯溪蜜柚’荧光定量PCR内参基因的筛选 被引量:15
4
作者 王梨嬛 潘永娟 +2 位作者 杨莉 蔡盛华 黄新忠 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期48-54,共7页
【目的】为了克隆‘琯溪蜜柚’的管家基因,并筛选合适的管家基因作为内参,【方法】以‘琯溪蜜柚’盛花期后5个不同时期的果实汁胞,以及根﹑茎﹑叶为材料,采用实时荧光定量PCR技术,分析actin1﹑β-tubulin﹑18S rRNA﹑EF1-α和Ubiquitin ... 【目的】为了克隆‘琯溪蜜柚’的管家基因,并筛选合适的管家基因作为内参,【方法】以‘琯溪蜜柚’盛花期后5个不同时期的果实汁胞,以及根﹑茎﹑叶为材料,采用实时荧光定量PCR技术,分析actin1﹑β-tubulin﹑18S rRNA﹑EF1-α和Ubiquitin 5个管家基因在不同材料中的表达情况,并结合geNorm、NormFinder﹑comparative Delta-CT和BestKeeper 4种评估方法进行稳定性分析。【结果】结果表明,actin1和β-tubulin是‘琯溪蜜柚’果实发育进程中较为稳定的内参基因,而EF1-α和β-tubulin则是研究不同组织特定靶基因表达中稳定的内参基因。【结论】筛选出了‘琯溪蜜柚’最佳的内参基因β-tubulin,为今后目的基因的表达分析奠定了基础。 展开更多
关键词 '琯溪蜜柚’ 荧光定量pcr 内参基因
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FISH联合multiplex RT-PCR检测MLL基因重排的价值探讨 被引量:2
5
作者 何易 李旭东 +4 位作者 王东宁 肖若芝 王文文 胡元 林东军 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1388-1391,共4页
目的:采用荧光原位杂交(FISH)与逆转录多重巢式聚合酶链反应(multiplex RT-PCR)技术检测急性白血病中MLL基因重排的情况,分析两者联合应用的诊断价值。方法:对2008年1月~2011年5月在我院诊断为急性白血病的201例患者采用MLL双色断裂分... 目的:采用荧光原位杂交(FISH)与逆转录多重巢式聚合酶链反应(multiplex RT-PCR)技术检测急性白血病中MLL基因重排的情况,分析两者联合应用的诊断价值。方法:对2008年1月~2011年5月在我院诊断为急性白血病的201例患者采用MLL双色断裂分离重排探针进行FISH检测,同时用multiplex RT-PCR技术检测11种较常见的MLL融合基因,观察MLL基因异常的检出率。所有患者均进行常规染色体核型分析(CCA),观察11q23重排率作为对照。结果:共有19例患者出现11q23/MLL基因重排,在急性髓细胞白血病(AML)中的检出13例(10.2%),急性淋巴细胞白血病(ALL)的检出6例(8.2%)。FISH联合multiplex RT-PCR对MLL基因重排的检出率为9.45%,CCA对11q23异常的检出率为5.47%。5例正常核型的患者和3例未涉及11号染色体异常的患者中FISH检出了1例MLL倒位和3例扩增信号,multiplex RT-PCR检出了7例dup MLL(11q23)重排。结论:FISH联合multiplex RT-PCR能提高MLL基因重排检出率。 展开更多
关键词 荧光原位杂交 基因 MLL 细胞遗传学 逆转录多重巢式pcr
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采用荧光定量PCR溶解曲线法监测人TCR alpha链CDR3谱系漂移技术的初步探讨 被引量:6
6
作者 汤贤英 孙永苹 +4 位作者 马锐 朱红倩 田祖国 孙万邦 姚新生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期727-730,共4页
目的:初步探讨荧光定量PCR溶解曲线分析技术监测人外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法:提取4例正常人、2例淋巴瘤型白血病患者PBMC中的总RNA,逆转录成cDNA,以32个人TCRalpha链胚系可变区基因家族(TRAV)设计上... 目的:初步探讨荧光定量PCR溶解曲线分析技术监测人外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法:提取4例正常人、2例淋巴瘤型白血病患者PBMC中的总RNA,逆转录成cDNA,以32个人TCRalpha链胚系可变区基因家族(TRAV)设计上游引物,共同的TCRalpha胚系链恒定区基因家族(TRAC)设计下游引物,荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增32个TRAV基因各家族CDR3谱系,溶解曲线法分析各家族CDR3谱系的单/寡/多克隆增生。结果:正常人外周血T细胞TCRalpha链32个家族CDR3表达频率不一致,各家族PCR产物的溶解曲线谱型图(melting curve spectratyping)呈现熔点不同的CDR3多态性,为多克隆增生的高斯分布,2例淋巴瘤型白血病患者外周血T细胞TCRalpha链32个家族CDR3表达频率不一致,部分家族呈缺失状态,患者各家族PCR产物的溶解曲线谱型图上,多数家族为多克隆增生的高斯分布,但每个患者均出现数量不等的单克隆和寡克隆增生家族。结论:荧光定量PCR溶解曲线分析TCRalpha链CDR3谱系漂移技术方法稳定简便,能较好地监测正常人和临床样本外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。 展开更多
关键词 T淋巴细胞受体 互补决定区3 荧光定量pcr 溶解曲线
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针对Asia-1型FMDV的qRT-PCR终点法中和试验的建立及初步研究 被引量:2
7
作者 宋一鸣 杨洋 张志东 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第10期42-47,共6页
为了缩短病毒中和试验(VNT)在口蹄疫病毒(FMDV)疫苗毒株选择以及病原检测中的时间,减少结果判断时人为因素的影响,试验采用qRT-PCR方法改进了传统的VNT,首先建立基于FMDV 3D序列的Taqman探针法qRT-PCR,之后使用FMDV Asia-1/JSL/06毒株感... 为了缩短病毒中和试验(VNT)在口蹄疫病毒(FMDV)疫苗毒株选择以及病原检测中的时间,减少结果判断时人为因素的影响,试验采用qRT-PCR方法改进了传统的VNT,首先建立基于FMDV 3D序列的Taqman探针法qRT-PCR,之后使用FMDV Asia-1/JSL/06毒株感染IBRS-2细胞,提取不同时间收集的细胞病毒混合物的RNA进行qRT-PCR定量检测,获得FMDV Asia-1/JSL/06毒株在IBRS-2细胞中的病毒复制曲线,确定病毒复制的终点时间,即病毒中和试验中加入细胞维持液之后的第20小时,此时使用TRIzol裂解细胞并提取RNA进行qRT-PCR定量检测。以6作为拷贝浓度对数的临界值,拷贝浓度对数大于6的最低稀释度作为终点稀释度,建立了qRTPCR-VNT方法的终点稀释度判断标准,并应用该方法对19份阴性血清以及4份阳性血清进行qRT-PCR-VNT检测。结果表明:该方法获得的阴性、阳性结果与传统VNT检测获得的结果完全相符。说明该方法具有快速、有效、重复性好等优点,具有代替传统VNT的潜能。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 反转录荧光定量聚合酶链式反应(qRT-pcr) 病毒复制曲线 病毒中和试验 终点法
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实时荧光RT-PCR在SARS病毒定量检测中的应用
8
作者 冯艳铭 李振勇 刘宁 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期87-89,共3页
目的建立实时荧光定量PCR技术检测患者SARS病毒含量。方法通过高效样品处理方法提取血清、漱口液中SARS-CoV RNA,采用简巢式PCR和TaqMan荧光探针标记技术检测SARS-CoV核酸,阳性扩增产物制备重组质粒,重组质粒系列稀释后标定作为定量标... 目的建立实时荧光定量PCR技术检测患者SARS病毒含量。方法通过高效样品处理方法提取血清、漱口液中SARS-CoV RNA,采用简巢式PCR和TaqMan荧光探针标记技术检测SARS-CoV核酸,阳性扩增产物制备重组质粒,重组质粒系列稀释后标定作为定量标准曲线。结果本法具有很好的特异性、重复性,灵敏度达到1×105copies/L。132例漱口液标本中,40例SARS患者SARS-CoV核酸的检出率为65%(26/40),疑似病人检出率为11.5%(6/52),40例健康人均未检出;39例SARS患者的血清标本中SARS-CoV核酸检出率为25.6%(10/39),3例疑似病人血清均未检出。对52例疑似病人漱口液阳性的6例样本的基因扩增产物进行测序确认,与BJ01 AY278488标准序列一致,检测结果与临床表现基本相符。结论本法快速、特异,适用于临床样本中SARS冠状病毒的检测,同时为滴度低、取样困难的病原体的检测探索了一种新的方法。 展开更多
关键词 SARS冠状病毒 实时荧光定量 逆转录聚合酶链反应
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Identification and Characterization of Genes Responsible for Drought Tolerance in Rice Mediated by Pseudomonas fluorescens 被引量:3
9
作者 Manjesh SAAKRE Thirthikar Meera BABURAO +4 位作者 Abida Puthenpeedikal SALIM Rose Mary FFANCIES Valasala Poothecty ACHUTHAN George THOMAS Sajeevan Radha SIVARAJAN 《Rice science》 SCIE CSCD 2017年第5期291-298,共8页
Drought is one of the major abiotic stresses which adversely affect crop plants limiting growth and yield potential.Structural and functional characterization of drought stress-induced genes has contributed to a bette... Drought is one of the major abiotic stresses which adversely affect crop plants limiting growth and yield potential.Structural and functional characterization of drought stress-induced genes has contributed to a better understanding of how plants respond and adapt to the drought stress.In the present study,differential display technique was employed to study the gene expression of rice plants at the reproductive stage that were subjected to drought stress by withholding water,Pseudomonas fluorescens strain(Pf1) treated plants subjected for drought stress by withholding water and control(well-watered).Differentially expressed c DNAs of six genes(COX1,PKDP,b ZIP1,AP2-EREBP,Hsp20 and COC1) were identified,cloned and sequenced.Real-time q PCR analysis showed that all the six genes were upregulated in drought-stressed plants treated with Pf1.This revealed that the remarkable influence of Pf1 colonization leads to drought tolerance at the reproductive stage.These results showed that high levels of gene expression in plants lacking adequate water can be remarkably influenced by Pf1 colonization,which might be a key element for induced systemic tolerance by microbes. 展开更多
关键词 RICE drought tolerance PSEUDOMONAS fluorescENS differential display reverse transcription POLYMERASE chain reaction quantitative real-time pcr transcript derived fragment
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樱桃病毒A实时荧光定量PCR检测技术的建立与应用 被引量:1
10
作者 刘欢 刘格 李锐 《湖北农业科学》 2023年第7期163-169,共7页
在樱桃病毒A(CVA)mp基因保守区域设计了3对检测引物,经特异性筛选后,获得可用于病毒定量研究的引物。制备质粒标准品,建立标准曲线,同时验证该方法的灵敏度和特异性,并应用于田间果树样品CVA定量检测。最终成功筛选出1对检测效率高、特... 在樱桃病毒A(CVA)mp基因保守区域设计了3对检测引物,经特异性筛选后,获得可用于病毒定量研究的引物。制备质粒标准品,建立标准曲线,同时验证该方法的灵敏度和特异性,并应用于田间果树样品CVA定量检测。最终成功筛选出1对检测效率高、特异性强的引物(CVA-dF2、CVA-dR2),基于SYBR Green I荧光染料建立反转录实时荧光定量PCR检测CVA的方法。该方法重复性好、灵敏度高,无需借助内参基因即可准确检测目的病毒载量,绝对定量标准曲线斜率为-3.5746,决定系数R2为0.9986,扩增效率为0.9044,比常规RT-PCR检测灵敏度高10倍。该方法的建立为CVA定量研究提供了有力工具,可用于果树中CVA批量检测或低丰度病毒样品检测。 展开更多
关键词 樱桃病毒A(CVA) 反转录实时荧光定量pcr 快速检测
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不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒的动态监测
11
作者 徐凤霞 孙万里 +3 位作者 张亚文 常爽 王一新 赵鹏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期11-17,共7页
为明确鸡群经不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的排毒动态,本试验通过设立无特定病原体(SPF)鸡胚6胚龄卵黄囊感染组、1日龄SPF鸡腹腔感染组以及对上述两组SPF鸡分别加入感染鸡的卵黄囊感染同居组和腹腔感染同居组,建立SPF鸡感... 为明确鸡群经不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的排毒动态,本试验通过设立无特定病原体(SPF)鸡胚6胚龄卵黄囊感染组、1日龄SPF鸡腹腔感染组以及对上述两组SPF鸡分别加入感染鸡的卵黄囊感染同居组和腹腔感染同居组,建立SPF鸡感染REV模型,同时设置空白对照组,在不同日龄记录各组鸡的体重和死亡情况,并综合运用反转录PCR(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和间接免疫荧光试验(IFA)3种检测方法对各感染组进行REV的动态监测。结果显示:(1)与空白对照组相比,腹腔感染组和卵黄囊感染组SPF鸡体重增长在感染后第21~70天均受到显著抑制(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡的死亡率在感染后第49和63天显著升高(P<0.05),腹腔感染组SPF鸡的死亡率在感染后第42天显著升高(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡血浆中REV病毒载量在感染后第21天显著高于腹腔感染组(P<0.05);(2)卵黄囊感染组SPF鸡自出壳即可检测到病毒血症阳性,并在感染后第21天时达到排毒高峰,腹腔感染组SPF鸡在感染后第14天时达到排毒高峰;(3)卵黄囊感染同居组的10只SPF鸡在感染后第7天时即检测到2只鸡呈病毒血症阳性,腹腔感染同居组SPF鸡在感染后第21天时检测到1只鸡呈阳性;(4)3种检测方法中,RT-qPCR和IFA检出REV效果更好。本试验通过分析不同途径感染REV后鸡群血浆中的带毒状态,为REV感染的科学防控和净化提供参考数据。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增殖病病毒(REV) 排毒规律 反转录pcr(RT-pcr) 实时荧光定量pcr(RT-qpcr) 间接免疫荧光试验(IFA)
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肉鸡心脏热应激损伤和热休克蛋白mRNA转录水平的相关性 被引量:12
12
作者 孙培明 刘雨田 +2 位作者 赵永刚 鲍恩东 王志亮 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期2536-2541,共6页
通过分光光度计、组织病理学和荧光定量反转录PCR检测技术,研究肉鸡心脏热应激损伤和热休克蛋白mRNA变化的相关性。试验结果显示,热应激过程中肌酸激酶和谷丙转氨酶的活性呈现波动性变化,肌酸激酶的变化更明显;心脏的组织病理学变化主... 通过分光光度计、组织病理学和荧光定量反转录PCR检测技术,研究肉鸡心脏热应激损伤和热休克蛋白mRNA变化的相关性。试验结果显示,热应激过程中肌酸激酶和谷丙转氨酶的活性呈现波动性变化,肌酸激酶的变化更明显;心脏的组织病理学变化主要表现为心肌纤维变性和坏死;热应激过程中HSC70mRNA也呈现波动性变化,而HSP70mRNA水平呈现上升趋势。结果提示,HSC70mRNA与肌酸激酶活性变化呈现一定负相关,HSC70有可能作为心脏热应激损伤的标志物。 展开更多
关键词 肉鸡 热休克蛋白 荧光定量反转录pcr 心脏 热应激
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实时荧光定量检测HCV RNA含量的临床意义 被引量:8
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作者 张冬雷 施健 +5 位作者 崔之础 王惠民 鞠少卿 李立人 倪红兵 苏建友 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第1期39-43,共5页
目的:建立实时荧光定量RT-PCR(RFQ-RT-PCR)检测HCV RNA含量的方法,初步探讨HCV RNA含量变化与病情的相关性. 方法:HCV抗体阳性样本80例,包括慢性肝炎(CH) 39例,肝硬化(LC)23例,肝癌(HCC)18例,献血员样本40例为正常对照.在HCV基因组5’... 目的:建立实时荧光定量RT-PCR(RFQ-RT-PCR)检测HCV RNA含量的方法,初步探讨HCV RNA含量变化与病情的相关性. 方法:HCV抗体阳性样本80例,包括慢性肝炎(CH) 39例,肝硬化(LC)23例,肝癌(HCC)18例,献血员样本40例为正常对照.在HCV基因组5’非编码区(5’UTR)设计特异性引物和一对杂交探针,构建相应基因片段载体,体外转录RNA作为标准品,根据其建立的标准曲线对血清HCV RNA进行定量,同时用传统的套式RT-PCR进行定性分析. 结果:本法检测HCV RNA含量的线性范围为1012-104copies/L,批内和批间重复性测定的v分别为1.68-5.97%和6.40-10.58%.在HCV抗体阳性患者中, 肝硬化和肝癌患者的HCV RNA含量显著高于慢性肝炎患者(7.75±0.29,7.86±0.32 vs 4.67±0.41,P<0.05), 而且HCV RNA含量与ALT水平呈正相关(r=0.89, t=8.29,P<0.05). 结论:RFQ-RT-PCR检测HCV RNA含量具有较好的灵敏度和特异性,其含量与丙型肝炎患者的病情变化及严重程度有一定相关性. 展开更多
关键词 HCV抗体 RNA 含量 实时荧光定量 患者 阳性 慢性肝炎 RT—pcr 基因组 体外转录
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猪瘟病毒3种检测方法的比较 被引量:7
14
作者 张艳英 高桂生 +4 位作者 高光平 史秋梅 张贵贤 田和杰 李秋艳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第3期205-209,共5页
本研究旨在比较3种检测猪瘟病毒方法的优缺点。应用反转录—复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)、荧光抗体法、胶体金免疫层析试纸条3种方法,分别对30份疑似猪瘟病料中的猪瘟病毒进行检测。试验结果显示,RT-nPCR方法检出阳性样品数为11份... 本研究旨在比较3种检测猪瘟病毒方法的优缺点。应用反转录—复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)、荧光抗体法、胶体金免疫层析试纸条3种方法,分别对30份疑似猪瘟病料中的猪瘟病毒进行检测。试验结果显示,RT-nPCR方法检出阳性样品数为11份,荧光抗体法为13份,胶体金免疫层析试纸条为8份;3种方法检测全为阳性8份,全为阴性17份。试验结果表明,荧光抗体检测法所需时间较短,但需要经验比较丰富人员来判定结果,且存在假阳性结果,敏感性比较差;胶体金免疫层析试纸条诊断方法最大的优点就是简便快速,且适合基层的应用,该方法的不足之处就是敏感性较低;RT-nPCR检测法具有快速、敏感等优点,但需一定仪器设备及成熟的技术方法。RT-nPCR还能区分待检样品为疫苗毒株(弱毒)还是野毒株感染(强毒),这是其他2种方法所不可比拟的。 展开更多
关键词 猪瘟 荧光抗体法 反转录—复合套式聚合酶链式反应 胶体金免疫层析试纸条
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SALL4在肝癌中的表达及其对预后的影响 被引量:5
15
作者 王亚婷 何彩霞 +3 位作者 卢振辉 王琦 杨少奇 李洋 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期113-117,共5页
目的 检测人类婆罗双树样基因4(SALL4)在肝癌中的表达情况,探讨SALL4表达与原发性肝细胞癌(HCC)患者预后的相关性。方法 应用免疫组织化学法检测60例石蜡HCC标本及其中32例癌旁组织标本SALL4蛋白的表达,分析其与HCC患者临床病理学... 目的 检测人类婆罗双树样基因4(SALL4)在肝癌中的表达情况,探讨SALL4表达与原发性肝细胞癌(HCC)患者预后的相关性。方法 应用免疫组织化学法检测60例石蜡HCC标本及其中32例癌旁组织标本SALL4蛋白的表达,分析其与HCC患者临床病理学资料及预后的关系;采用荧光定量RT-PCR、Western blot法,分别检测23例新鲜HCC及癌旁肝组织中SALL4mRNA和蛋白的相对含量。结果 HCC组织中SALL4蛋白的表达率(81.67%,49/60)显著高于癌旁组织(6.25%,2/32),差异有统计学意义(χ~2=48.047,P〈0.01);SALL4蛋白在HCC中的表达与甲胎蛋白水平有关(P〈0.05);SALL4高表达和低表达组患者的平均生存时间分别为(26.20±2.37、34.05±1.26)个月,SALL4高表达组患者的1、3年生存率(75.9%、55.2%)显著低于SALL4低表达组1、3年生存率(95.0%、85.0%,χ~2=5.044,P〈0.05)。肝癌及癌旁组织的SALL4mRNA的相对量分别为14.80±8.62、0.17±0.13,两组比较差异有统计学意义(t=8.14,P〈0.01)。Western blot检测结果显示,SALL4蛋白在HCC中的相对量为0.354±0.103。癌旁组织中几乎不表达。结论 SALL4表达与肝癌患者预后密切相关,可作为肝癌患者判断预后的预测指标。 展开更多
关键词 肝癌 SALL4基因 免疫组织化学 WESTERN BLOT 实时荧光定量pcr
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糖皮质激素受体在类风湿关节炎外周血单个核细胞中表达水平的研究 被引量:5
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作者 李薇 于孟学 +4 位作者 王国锋 曹金 张红宇 杨玲 刘利成 《北京医学》 CAS 2008年第4期208-211,共4页
目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞中糖皮质激素受体(GR)α、βmRNA的表达水平及其与RA发病机制、活动性的关系。方法从44例RA患者(活动期24例、缓解期20例)、20例健康对照人群外周血单个核细胞(PBMCs)中提取总RNA,并逆转录... 目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞中糖皮质激素受体(GR)α、βmRNA的表达水平及其与RA发病机制、活动性的关系。方法从44例RA患者(活动期24例、缓解期20例)、20例健康对照人群外周血单个核细胞(PBMCs)中提取总RNA,并逆转录为cDNA。应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-FQ-PCR)检测GRα和GRβmRNA的表达水平,并研究其与血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)的相关性。结果RA患者GRα和GRβmRNA的表达水平均明显高于健康对照人群(P﹤0.01);活动期RA患者GRβmRNA表达水平(-3.5442±0.8017)明显高于缓解期RA患者(1.2175±1.5969)(P﹤0.01);活动期RA患者GRαmRNA表达水平(4.2333±2.1775)与缓解期RA患者(4.2985±1.6109)比较无显著性差异(P﹥0.05);RA患者GRβ表达水平与CRP呈正相关(P=0.01),与ESR、RF均无关;RA患者GRα表达水平与CRP、ESR、RF均无关。结论GRα和GRβ的表达异常可能参与了RA的发病;GRβ表达水平与CRP呈明显正相关,提示其可能与RA疾病活动性相关。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 糖皮质激素受体 逆转录-实时荧光定量聚合酶链反应
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GSTP1基因在急性低压低氧大鼠模型肺组织中的定量检测 被引量:2
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作者 闫惠琴 孙学川 +2 位作者 胡斌 林文弢 黄森 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第2期405-409,共5页
通过模拟低压低氧(7000±50 m)考察谷胱苷肽转移酶p1基因(G lu tath ione S-transferase p1,G STP 1)对低压低氧的敏感性,以探讨G STP 1在机体适应急性低压低氧环境中的分子机制。30只雄性SD大鼠随机分为5组:0、1、3、5、7 d组,每... 通过模拟低压低氧(7000±50 m)考察谷胱苷肽转移酶p1基因(G lu tath ione S-transferase p1,G STP 1)对低压低氧的敏感性,以探讨G STP 1在机体适应急性低压低氧环境中的分子机制。30只雄性SD大鼠随机分为5组:0、1、3、5、7 d组,每天在模拟7000±50 m高度的低压低氧舱内暴露12 h,连续暴露6 h后,休息1 h,再继续暴露6h。采用荧光定量-反转录-聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)技术对急性低压低氧大鼠模型肺组织中G STP 1基因表达进行定量分析,同时用分光光度法测定了肺组织中谷胱苷肽转移酶(g lu tath ione S-transferases,G ST s)的活性和丙二醛(M a le ic d ia ldehyde,M DA)的变化。结果显示,与未暴露组相比,G STP 1基因从第1 d到第7 d的表达有显著性差异(P<0.05);G ST s活性从第1 d到第7 d呈下降趋势,M DA呈上升趋势,与未暴露组相比,均有显著性差异(P<0.05)。结果表明:G STP 1基因对低压低氧敏感,并可考虑作为机体适应特殊环境进行基因选材的一个新指标。 展开更多
关键词 胱苷肽转移酶p1基因 低压低氧 荧光定量反转录聚合酶链反应
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SFTPB、TACSTD1、PVA基因联合检测非小细胞肺癌淋巴结微转移的研究 被引量:5
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作者 陈文学 方选妹 +2 位作者 黎文婷 齐淑轶 邹学森 《实用癌症杂志》 2013年第6期587-589,共3页
目的探讨SFTPB、TACSTD1、PVA基因联合检测预测非小细胞肺癌(NSCLC)微转移的可行性。方法采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测20例NSCLC的肺癌组织及有转移淋巴结标本中SFTPB、TACSTD1、PVA mRNA表达,20例肺良性病变的淋巴结作... 目的探讨SFTPB、TACSTD1、PVA基因联合检测预测非小细胞肺癌(NSCLC)微转移的可行性。方法采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测20例NSCLC的肺癌组织及有转移淋巴结标本中SFTPB、TACSTD1、PVA mRNA表达,20例肺良性病变的淋巴结作为阴性对照。结果 SFTPB、TACSTD1、PVA mRNA在肿瘤组织和阳性淋巴结中的表达水平相近,与良性淋巴结有显著性差异。ROC曲线分析在100.0%特异性时诊断NSCLC总的敏感性分别为SFTPB(45.7%)、TACSTD1(100.0%)、PVA(75.4%),在不同的组织学类型中PVA对鳞癌诊断的敏感性达100.0%,SFTPB对腺癌诊断的敏感性达83.2%。结论 SFTPB、TACSTD1、PVA mRNA可作为检测非小细胞肺癌患者淋巴结微转移的分子标志物,有助于早期诊断肺癌转移及组织学分型。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 微转移 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 SFTPB基因 TACSTD1基因 PVA基因
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沙门氏菌环丙沙星诱导株marR,soxR和acrR基因突变与多重耐药性的相关性研究(英文) 被引量:1
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作者 李琳 王玉平 +2 位作者 吴永宁 吴聪明 沈建忠 《食品安全质量检测学报》 CAS 2009年第1期1-9,共9页
本文对11株动物源体外诱导的环丙沙星抗性沙门氏菌的m ar操纵子基因marO,marR,marA,marB,soxR,soxS和acrR基因(包括启动子区)的点突变进行检测,结果显示在沙门氏菌诱导株中marR,soxR和acrR基因检测到新突变,而marO,marA,marB和soxS基因... 本文对11株动物源体外诱导的环丙沙星抗性沙门氏菌的m ar操纵子基因marO,marR,marA,marB,soxR,soxS和acrR基因(包括启动子区)的点突变进行检测,结果显示在沙门氏菌诱导株中marR,soxR和acrR基因检测到新突变,而marO,marA,marB和soxS基因未发现突变。应用实时荧光定量PCR对诱导株的marA和soxS基因及外排泵基因acrA,acrB和tolC的mRNA表达水平进行检测,结果表明这些基因的表达量均显著增加,且marA,soxS和acrAB-tolC的mRNA表达水平与沙门氏菌诱导株的多重耐药表型(M ar表型)相关,环丙沙星诱导株对其它氟喹诺酮类药物和结构不相关的抗生素均产生耐药。本研究结果表明沙门氏菌诱导株的调控基因突变和mar操纵子介导的acrAB-tolC的表达上调均贡献了沙门氏菌诱导株的氟喹诺酮抗性和Mar表型,且诱导株的marR,soxR和acrR基因突变与氟喹诺酮抗性和Mar表型具有相关性。 展开更多
关键词 氟喹诺酮抗性 MARR soxR acrR基因突变 实时荧光定量pcr mar操纵子 acrAB-tolC
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脂多糖致小鼠急性肺损伤组织病理变化与角质细胞生长因子受体表达的关系 被引量:1
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作者 刘斌剑 王建民 +3 位作者 陈林 宋瑞华 赵玲 宋维威 《微循环学杂志》 2004年第2期18-20,F004,共4页
目的 :观察急性肺损伤 (ALI)时小鼠肺组织损伤程度与角质细胞生长因子受体 (KGFR)表达水平的关系 ,为基因治疗急性肺损伤提供依据。方法 :建立脂多糖 (LPS)造成的小鼠肺损伤模型和Ⅱ型肺泡上皮细胞 (A5 49细胞 )损伤模型 ,通过病理分析... 目的 :观察急性肺损伤 (ALI)时小鼠肺组织损伤程度与角质细胞生长因子受体 (KGFR)表达水平的关系 ,为基因治疗急性肺损伤提供依据。方法 :建立脂多糖 (LPS)造成的小鼠肺损伤模型和Ⅱ型肺泡上皮细胞 (A5 49细胞 )损伤模型 ,通过病理分析、反转录聚合酶链反应 (RT PCR)和荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)观察肺组织损伤程度与KGFR表达水平的关系。结果 :LPS造成轻度、中度和重度肺损伤时肺组织KGFR表达水平逐步下降 ,各种损伤程度之间KGFR表达存在显著差异 (P <0 .0 5 )。A5 49细胞的KGFR表达变化不明显 (P >0 .0 5 )。结论 :随着肺损伤程度的加重 ,肺组织KGFR表达水平逐次减低 。 展开更多
关键词 脂多糖 小鼠 急性肺损伤 组织病理 角质细胞 生长因子 受体表达 ALI 肺组织
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