西马特罗分子印迹荧光检测试纸条的研制

将分子印迹技术良好的选择性与试纸条快速检测的特点相结合,研制了一种快速检测西马特罗的分子印迹试纸条。以西马特罗为模板分子,化学聚合法制备西马特罗分子印迹聚合物,将其附着在硝酸纤维素膜上。洗脱模板分子后,裁剪压制得到分子印迹试纸条。试纸条识别样品中西马特罗后,滴加荧光物质曙红Y,根据反应区内西马特罗与曙红Y反应后荧光猝灭程度对西马特罗进行分析。研究结果表明,在0.01~100μg/m L浓度范围内,荧光猝灭程度随着西马特罗浓度的增加而增大,最低检测浓度为0.01μg/m L。此试纸条制备简单,操作简便,可用于现场检测。将其用于猪肉和饲料样品中西马特罗的快速测定,结果令人满意。

猪流行性腹泻病毒时间分辨荧光免疫层析检测方法的建立

为建立一种快速、定量检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)时间分辨荧光免疫层析检测方法(TRFIA),本研究采用杂交瘤技术制备了抗PEDV N蛋白特异性单克隆抗体(MAb)5E6和1B7,将MAb 5E6与荧光微球偶联包被结合垫,将MAb 1B7和兔抗鼠IgG抗体分别包被硝酸纤维素膜作为检测线和质控线制备PEDV荧光微球免疫层析试纸条。优化了标记MAb 5E6、包被MAb 1B7的反应条件,并对其性能进行评价。结果显示,10μL 1%浓度的荧光微球标记MAb 5E6的量为18μg,MAb 1B7的包被浓度为1.2 mg/mL,最佳检测时间为点样后15 min;该方法与CSFV、PRRSV、TGEV、PDCoV及PRV Batha-K61株等均无交叉反应,特异性强;对PEDV的检测下限为389699.7 TCID50/0.1 mL,敏感性较高;对PEDV检测的线性范围为24940778.9 TCID50/0.1 mL~389699.7 TCID50/0.1 mL,线性范围较宽;批内和批间变异系数分别为8.76%、10.53%,重复性较好;试纸条在4℃和室温至少保存8个月,37℃则可保存10d,稳定性较好。该TRFIA试纸条与PEDV荧光定量PCR(FQ-PCR)平行检测160份疑似发病猪肛门拭子或小肠内容物样品。结果显示,该试纸条检测出76份阳性样品,84份阴性样品;FQ-PCR法检测出81份阳性样品,79份阴性样品,二者的总符合率为90.63%;经SPSS 22统计软件分析结果显示,K值为0.813,二者检测结果的一致性较高。本研究建立了一种简单、快速、灵敏和特异的基于MAb的TRFIA,为PEDV的现场检测提供了一种新方法。

高灵敏度磁荧光免疫层析试纸模式构建及在呕吐毒素检测中的应用

构建基于磁荧光纳米材料的免疫层析试纸模式,弥补现在免疫层析技术的不足,为更灵敏的免疫学快速检测提供技术支撑。以呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)为靶标,采用溶剂热法制备羧基修饰的超顺磁颗粒,碳二亚胺法将磁颗粒、绿色荧光蛋白及DON单克隆抗体进行偶联,一步法制备磁荧光抗体探针,以DON人工抗原(DON-BSA)为检测线建立磁荧光免疫层析试纸。同时用胶体金标记DON单克隆抗体,以DON-BSA为检测线建立胶体金免疫层析试纸;制备的磁荧光抗体探针具有很好的磁性、荧光特性及抗体反应性,基于该探针成功制备了DON磁荧光免疫层析试纸,该试纸回归方程为y=-0.562x+0.921,R^(2)=0.990,IC_(50)为5.611 ng/mL,检出限为1.089 ng/mL;制备了DON胶体金免疫层析试纸,该试纸裸眼检测灵敏度为500 ng/mL;定量检测回归方程为y=-0.543x+1.485,R^(2)=0.991,IC_(50)为65.16 ng/mL,检出限为11.94 ng/mL。DON磁荧光免疫层析试纸的灵敏度是胶体金免疫层析试纸的10.96倍。本实验建立的磁荧光免疫层析试纸模式可以同时实现样品的富集及荧光信号检测,提高检测灵敏度,并成功用于DON的检测,为磁荧光纳米颗粒广泛应用于免疫层析领域提供参考。

赭曲霉毒素产生菌筛选方法的对比与优选

【目的】探求一种能够快速、准确地筛选出赭曲霉毒素产生菌的分析方法,为赭曲霉毒素的检测与防治奠定基础。【方法】分别采用紫外荧光法、胶体金免疫试纸条法和高效液相色谱(HPLC)法,对分离自葡萄表面的189株霉菌产生赭曲霉毒素A(OTA)的能力进行分析,并对3种方法的鉴定结果进行比较。其中在紫外荧光法中,黑曲霉接种至可可浆培养基(CCA)培养,其他霉菌接种至察氏培养基(CA)培养,培养后能够产生荧光的菌株被认为是OTA产生菌。同时分别用高效液相色谱法(HPLC)和OTA胶体金试纸条对所有菌株培养物中的OTA进行检测。【结果】以HPLC检测结果为标准,用紫外荧光法对OTA产生菌初筛的假阳性率较高,假阴性率为0;胶体金免疫试纸条法用于筛选OTA产生菌的假阴性率为47.4%,假阳性率为0,适合于产毒量高的菌种筛选。【结论】用紫外荧光法作为OTA产生菌的初筛方法可以排除大部分非OTA产生菌,漏检率低,从而大大降低HPLC检测的工作强度和检测成本;将紫外荧光法和HPLC定量分析结合使用,可以快速、准确地分离到OTA产生菌;将紫外荧光法和胶体金免疫试纸条相结合,可以快速筛选OTA产量高的菌株,且该方法较为经济,对环境和人体的污染较小。

基于咖啡酸的水合肼荧光探针的合成及应用

以天然产物咖啡酸为原料,设计、合成了一种可快速识别水合肼(N_(2)H_(4))的咖啡酸乙酯荧光探针(ED)。通过^(1)HNMR、^(13)CNMR和HRMS对其结构进行了表征。探针ED对N_(2)H_(4)具有高选择和高灵敏性识别,检测极限为0.31μmol/L,最适pH范围为3~8,响应时间为48 s。采用HRMS和^(1)HNMR确定探针与N_(2)H_(4)的作用机理,结果表明,探针ED与N_(2)H_(4)作用后不饱和酮结构与N_(2)H_(4)反应后生成吡唑环。此外,探针ED与N_(2)H_(4)作用后,溶液颜色从无色变为黄色,可实现N_(2)H_(4)的“裸眼检测”,并成功用于水样中N_(2)H_(4)的检测。

莱克多巴胺荧光试纸的初步研制及性能测定

基于河南省动物免疫学重点实验室制备并保存的莱克多巴胺单克隆抗体(RAC McAb),采用异硫氰酸荧光素(FITC)作为标记材料对之进行荧光标记,并对荧光探针FITC-RAC McAb进行纯化和荧光光谱鉴定;应用免疫层析技术研制RAC残留荧光检测试纸,并对其敏感性、特异性、重复性进行初步测定。结果表明:荧光探针标记成功,并应用于免疫层析试纸,检测试纸的最低检测限为1μg/L,较同抗体的胶体金试纸的敏感性提高10倍;与其他激动剂类药物无交叉反应,具有良好的特异性;以不同批次的检测试纸对猪尿样和牛奶样进行检测,结果一致,具有良好的重复性;检测试纸在10min内可显示结果。

基于香豆素的比率型荧光探针对溶液及气相中三氟化硼的检测

合成了一种以香豆素为主体的具有高选择性及灵敏性的比率型荧光探针3-对甲基苯基-7-二乙氨基香豆素(TDC),并将其用于溶液及气相中三氟化硼(BF_(3))的即时可视化检测,检出限为5.5×10^(-7)mol/L.通过荧光光谱、紫外-可见吸收光谱和核磁共振波谱(~(19)F NMR)等方法证实,该探针与BF_(3)之间发生的路易斯酸碱反应会对TDC分子内电荷转移(ICT)过程产生影响,从而引起光谱和溶液颜色的明显变化.基于TDC分子制成的试纸能够实现裸眼检测溶液和气相中的BF_(3).

荧光免疫层析试条定量检测仪的研制

为了对AMI疑似患者进行现场快速筛查,研制了一款可对AMI荧光免疫层析试条进行定量、快速检测的仪器。该仪器主要由光路单元、数据采集单元、处理及显示单元组成,激发光聚焦于试条上产生荧光,荧光通过收集光路聚焦于线阵CCD,ARM9芯片通过CCD的灰度值对试条进行判断。测试结果表明,仪器检测得到试条的相对荧光强度与心肌标志物浓度成正比,该仪器可实现对患者心肌标志物浓度的定量检验,为患者病情的诊断和康复提供了有力保证。

呼吸道合胞病毒荧光纳米颗粒快速检测试纸条检测效能评价

目的评估呼吸道合胞病毒(RSV)荧光纳米颗粒快速检测试纸条的灵敏度和特异性等检测效能。方法以培养的RSV和其他呼吸道病原体以及280例具有上呼吸道感染症状的患者作为标本来源。分别anjiang采用RSV荧光纳米颗粒快速检测试纸条和胶体金快速检测试纸条检测同一份标本,分析两种检测试纸条的检测效能。结果荧光纳米颗粒快速检测试纸条的灵敏度高于胶体金快速检测试纸条;对甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道腺病毒和肺炎支原体无特异性反应。结论 RSV荧光纳米颗粒快速检测试纸条在检测性能上高于胶体金快速检测试纸条。

荧光纳米微球免疫层析技术检测新型冠状病毒研究

采用碳二亚胺(EDC)法将抗新冠病毒核衣壳蛋白(N蛋白)单克隆抗体与稀土铕荧光纳米微球共价偶联,合成荧光标记免疫探针,并用透射电子显微镜进行表征。开发了一种检测新型冠状病毒的荧光免疫检测试纸条,通过荧光检测仪测定检测线上的荧光强度,建立了定量检测新冠病毒的荧光免疫检测技术。本研究研制的新冠病毒荧光免疫层析试纸条,与荧光检测仪配套使用,对新冠病毒N蛋白的最低检出限达到0.01 ng/mL;对新冠病毒检测特异性强,与肺炎支原体、禽流感病毒等其它呼吸道肺炎病原物无交叉反应;对新冠灭活病毒的检测,用本研究开发的荧光免疫试纸条技术与荧光定量PCR进行比对验证,灵敏度为荧光定量PCR的1/100;与胶体金抗原检测试纸条相比较,比胶体金试纸条灵敏10倍以上。本研究开发的新冠病毒荧光检测试纸条,操作简便、快速、灵敏、成本低、体积小,适于现场快速检测。

腺病毒荧光纳米颗粒快速检测试纸条应用评价

目的评估腺病毒荧光纳米颗粒快速检测试纸条的灵敏度和特异性。方法以培养的腺病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和肺炎支原体以及70例具有上呼吸道感染症状的患者的鼻拭子作为标本，分别同时用腺病毒荧光纳米颗粒快速检测试纸条和腺病毒胶体金快速检测试纸条检测。结果腺病毒荧光纳米颗粒快速检测试纸条的灵敏度高于胶体金快速检测试纸条；对甲、乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和肺炎支原体无交差反应。结论腺病毒荧光纳米颗粒快速检测试纸条检测灵敏度高于胶体金快速检测试纸条，特异性良好。

基于上转换纳米荧光快速定量检测PCT技术研究

目的研制基于上转换纳米荧光快速定量检测降钙素原(PCT)的免疫层析检测技术。方法采用溶剂热法制备上转换纳米荧光颗粒(UCNP),为稀土镱和铒掺杂于四氟钇钠的混合物(NaYF4:Yb3+,Er3+),利用反相微乳法对UCNP进行改性和二氧化硅(SiO_2)包裹,利用干式免疫层析技术建立PCT检测技术。结果利用反向微乳法成功制备了分散性好的水溶性UCNP,基于UCNP的干式免疫层析技术检测降钙素原的最低检测限为0.02ng/mL,线性范围为0.05~44.00ng/mL,批内精密度CV<10%,批间精密度CV<13%。结论基于UCNP的免疫层析检测技术是快速、灵敏定量检测血清PCT的有效方法。

一种现场快速型HBV基因分型方法及装置

介绍一种现场快速型HBV(乙型肝炎病毒)基因分型方法及装置,包括生物传感器与手持式荧光检测仪。为了提高检测灵敏度与准确性,采用荧光标记法。荧光检测仪采用简化方法来快速读取侧向流试纸上各测试线及质控线的信号幅值,基于预先建立的HBV基因分型模式匹配模型,实现快速分型。对48份HBV血清样本进行检测,实验结果表明,基于荧光检测仪及侧向流试纸的分型检测结果与传统核酸分析方法的分型检测结果一致,分型准确率达100%。与传统方法相比,现场快速型基因分型方法及装置可降低HBV分型检测的复杂度,缩短检测时间,降低检测成本,对乙肝个体化用药与个性化治疗具有重要意义。

上转换荧光-适配体免疫层析试纸条的构建及其在黄曲霉毒素B1检测上的应用

食品及农产品中,因真菌而产生的黄曲霉毒素B1是人们健康的一大威胁.因此,探寻一种简便快速检测黄曲霉毒素B1的方法对食品安全、农产品质量等方面具有重要意义.该文通过配体交换的方法,使用磷酸化的黄曲霉毒素B1适配体将油酸分子包裹的油溶性上转换纳米颗粒改性为水溶性纳米颗粒.在构建水溶性纳米荧光探针的同时,保留了适配体识别黄曲霉毒素B1的能力,结合免疫层析试纸条,采用小分子竞争法快速定量检测黄曲霉毒素B1.该检测方法的线性范围为5~100 ng/mL,检测限为2.4 ng/mL.将该方法用于花生中黄曲霉毒素B1的检测,其加标回收率为93.8%~111.6%.

糖化血红蛋白快速诊断试纸研究

目的:设计并构建两种糖化血红蛋白快速诊断试纸,比较两种不同原理的快速诊断试纸检测糖化血红蛋白(HbA_(1c))的性能。方法:设计并构建了一种侧向亲和层析试纸,根据检测线上HbA_(1c)的颜色实现半定量检测。构建了一种荧光免疫层析试纸(FICTS),利用荧光免疫定量分析仪实现HbA_(1c)定量检测。针对HbA_(1c)临床样本,对两种快速诊断试纸进行相关性能分析。结果:亲和层析试纸检测流程满足床旁诊断(POCT)的需求,但半定量的HbA_(1c)检测结果完全无法实现准确的HbA_(1c)检测。HbA_(1c)荧光免疫层析试纸保证了良好的准确度、线性度(R^2>0.99)、变异系数(CV<10%)和区分度,和临床比对结果十分优异(R^2>0.95),且HbA_(1c)检测结果不受高浓度糖类和表面活性剂的影响。结论:相比于亲和层析试纸,FICTS是一种较为优秀的HbA_(1c)快速诊断试纸,这种试纸操作简便,有良好的线性度、准确度,能良好区分HbA_(1c)阴阳性样本,并且与临床高效液相色谱法(HPLC)的检测结果一致。

席夫碱荧光探针的合成及其对三价金属的识别

Al ^(3+)、Cr ^(3+)、Fe ^(3+)、Ce ^(3+)对环境和生物体有重要影响,能同时检测这4种三价金属离子的荧光探针较为少见。以2-氨基蒽和对苯基苯甲醛制备了一种席夫碱类荧光探针Ⅰ,通过1HNMR、HRMS和元素分析对其结构进行了表征。光谱分析实验结果表明,探针Ⅰ在四氢呋喃/水(V(THF)∶V(水)=1∶1)溶液中对三价金属Al ^(3+)、Cr ^(3+)、Fe ^(3+)和Ce ^(3+)具有较强荧光响应,有较高选择性和快速响应,且不受其他金属离子或阴离子影响,抗干扰能力强,检测的最适pH范围为5~9。结合高分辨质谱检测、紫外测试和理论计算,证实探针与三价金属的作用机理为:探针与三价金属作用后,分解生成2-氨基蒽,发出荧光。进一步将荧光探针负载于试纸条,成功实现对三价金属的试纸检测。

牛布鲁氏菌抗体荧光快速检测试纸卡的研制

为研制一种快速检测牛布鲁氏菌抗体的便捷试纸卡,采用间接荧光免疫层析技术,以荧光微球为标记物,与兔抗牛IgG偶联,以布鲁氏菌脂多糖(LPS)抗原包被硝酸纤维素膜,通过反应条件优化,研制牛布鲁氏菌抗体荧光微球快速检测试纸卡。结果显示:该试纸卡灵敏度可达0.8 IU/mL,与牛口蹄疫病毒O型、牛口蹄疫病毒A型、牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎病毒的抗体阳性血清均无交叉反应;对469份临床牛血清进行检测,同时与荧光偏振方法进行比较,发现两种方法的符合率为100%。结果表明,本次研制的牛布鲁氏菌抗体荧光微球检测试纸卡灵敏度高,特异性好,适用于临床样品的快速检测。本试纸卡的成功研制为牛布鲁氏菌病免疫效果评估和准确诊断提供了一种简便的血清学诊断方法。

玉米赤霉烯酮时间分辨荧光试纸条的制备及特性研究

研究制备一种基于时间分辨荧光免疫层析法的玉米赤霉烯酮(ZEN)快速定量检测试纸条。采用铕纳米微球作为荧光探针,标记抗ZEN的单克隆抗体,应用竞争抑制原理建立免疫层析定量方法并对其进行方法学考核。结果表明:ZEN荧光试纸条的灵敏度为0.1 ng/mL,线性范围为0.1~5.0 ng/mL,玉米、小麦阴性样品的加标回收率在93.45%~112.20%之间,对于同一个样品5次重复测定的变异系数小于15%。ZEN快速定量检测试纸条具有灵敏度高、反应时间短、准确定量、稳定性好等技术特点,适用于谷物及制品中玉米赤霉烯酮的快速定量检测。

基于FRET的B族链球菌新型荧光猝灭试纸条的研发和性能评价

目的:在B族链球菌(GBS)胶体金免疫层析试纸条中引入异硫氰酸荧光素(FITC)和胶体金颗粒(Au NPs)之间的荧光共振能量转移(FRET),从而实现用裸眼观察和荧光读数法检测GBS。方法:基于双抗体夹心法和FRET研制新型荧光猝灭试纸条,对其检测的特异性、灵敏度进行评价,并初步探究GBS浓度与荧光强度值之间的关系。结果:与草绿色链球菌和肺炎链球菌均无交叉反应;肉眼观察的最低检出浓度为10~5CFU/mL;GBS在10~3-10~8CFU/mL浓度范围内与荧光强度值呈现良好的相关性。结论:该方法简单,便捷,不仅能实现快速诊断与筛查,还能够实现定量分析,这种设计思路可用于其它病原微生物的检测研究。

Fluorescence strip sensor for sensitive determination of prometryn in foods

We report the development of a sensitive,fast,and simple method for the detection of prometryn(PRO)in potato and celery using a lateral flow immunochromatographic assay(LFIA).A monoclonal antibody(mAb)against PRO was prepared under optimized conditions,and the 50%inhibition concentration(IC50)for use in ELISA was determined to be 0.6 ng mL−1.Moreover,the cut-off value for use in an LFIA was 50 ng mL−1.To validate the reliability of the developed LFIA strip,real samples were used,and the recovery rate was found to be 99.3-104.3%.The assays were completed within 8 min,demonstrating the suitability of our developed methods for the detection of PRO in potato and celery.