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猪繁殖与呼吸综合征病毒Taq Man-MGB荧光定量RT-PCR方法的建立和应用 被引量:29
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作者 韦天超 田志军 +8 位作者 安同庆 周艳君 肖燕 姜一峰 郝晓芳 张善瑞 彭金美 仇华吉 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期944-948,991,共6页
本研究设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的特异性引物和Taq Man荧光探针,建立了一种检测PRRSV的快速、敏感、特异和重复性好的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。该方法在检测101拷贝/μL~107拷贝/μL模板范围内具有良好的线... 本研究设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的特异性引物和Taq Man荧光探针,建立了一种检测PRRSV的快速、敏感、特异和重复性好的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。该方法在检测101拷贝/μL~107拷贝/μL模板范围内具有良好的线性关系,比常规RT-PCR更敏感,可分别检测? 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 荧光定量rt-pcr 病毒含量
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猪瘟病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立和初步应用 被引量:8
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作者 李军 潘艳 +7 位作者 禤雄标 胡帅 马春霞 谢宇舟 陈泽祥 许力干 谢永平 杨威 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第3期116-119,共4页
根据GenBank公布的猪瘟病毒基因组5′非编码区基因序列进行同源性比较分析,选择保守序列区作为扩增区域,设计1对特异性扩增引物,通过优化反应条件,建立了一个用于猪瘟病毒快速定量检测的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法。试验结果表明... 根据GenBank公布的猪瘟病毒基因组5′非编码区基因序列进行同源性比较分析,选择保守序列区作为扩增区域,设计1对特异性扩增引物,通过优化反应条件,建立了一个用于猪瘟病毒快速定量检测的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法。试验结果表明该方法重复性好,反应批内循环阈值差异不显著。与猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型等猪源病毒无交叉反应,具有高度的特异性,而且灵敏度高,最小检出量为2×102病毒基因组拷贝数。利用此方法对15例临床样本进行检测,其结果与兔体交叉免疫试验一致,表明此方法可作为猪瘟实验室快速诊断和疫情监测的一种快速、准确、简便的检测工具。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 实时荧光定量rt-pcr
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H5N1虎源流感病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及临床应用 被引量:7
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作者 侯小强 夏咸柱 +2 位作者 高玉伟 薛琳 王铁成 《畜牧与兽医》 北大核心 2006年第9期1-4,共4页
根据本室分离获得的虎源H5N1流感病毒的HA基因序列测定结果。结合GenBank中报道的H5亚型禽流感病毒HA基因序列进行同源性比较分析。选择保守序列区作为扩增区域,利用Primer5.0引物设计软件和BLAST软件程序设计出特异性扩增引物。采用... 根据本室分离获得的虎源H5N1流感病毒的HA基因序列测定结果。结合GenBank中报道的H5亚型禽流感病毒HA基因序列进行同源性比较分析。选择保守序列区作为扩增区域,利用Primer5.0引物设计软件和BLAST软件程序设计出特异性扩增引物。采用成本较低、不需要特异探针引物、优化周期短。能区分病毒变异株的SYBR GreenⅠ随机掺入法建立定量PCR反应体系,并对反应条件进行优化。试验结果表明应用该方法对虎源H5流感病毒的检测具有高度的特异性,检测的灵敏度为10^1-10^2拷贝数。对20份病死老虎临床病料和24份人工感染的小鼠脏器病料用荧光定量RT-PCR方法、常规RT-PCR方法和病毒分离方法进行检测。荧光定量RT-PCR方法检测结果略高于常规RT-PCR方法,但与病毒分离方法结果相一致。这说明荧光定量RT—PCR方法可以对临床上H5N1虎源流感病毒检测提供参考。 展开更多
关键词 HSN1虎源流感病毒 荧光定量rt-pcr 检测方法
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猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞受体Sn和CD163 TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立
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作者 韩梓峰 刘永刚 +7 位作者 石文达 王刚 何玉利 王淑杰 刘鹤 董建国 武嘉男 蔡雪辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期297-300,共4页
为建立检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)允许细胞表面的Sn和CD163受体的方法,本研究设计针对Sn和CD163基因的特异性引物和荧光探针,建立了检测PRRSV Sn和CD163受体的荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法在检测101copies/μL~108copi... 为建立检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)允许细胞表面的Sn和CD163受体的方法,本研究设计针对Sn和CD163基因的特异性引物和荧光探针,建立了检测PRRSV Sn和CD163受体的荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法在检测101copies/μL~108copies/μL模板范围内具有良好的线性关系。标准曲线的相关系数r值均大于0.996,扩增效率分别为100%和107%;该检测方法对Sn和CD163的检测下限均为10拷贝,敏感性高;批内重复试验和批间重复试验的变异系数均小于5%,具有良好的重复性。利用该方法对PRRSV感染肺泡巨噬细胞(PAM)72 h后Sn和CD163受体mRNA的转录水平进行了检测,结果表明Sn和CD163受体的转录水平显著上调。本研究为PRRSV病毒感染后两种主要受体变化趋势的研究提供了有效的检测方法。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 Sn受体 CD163受体 荧光定量rt-pcr
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呼吸道合胞病毒实时荧光定量PCR检测 被引量:8
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作者 张其威 游上游 +3 位作者 孙继民 吴旗 余春华 张楚瑜 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第7期847-852,共6页
目的建立一种快速、准确诊断人呼吸道合胞病毒(hRSV)早期感染的实时荧光定量PCR检测方法。方法以hRSV最保守的N基因序列为参考,设计两对特异的引物和一条TaqMan荧光探针,在LightCycler定量PCR检测仪上对93例下呼吸道感染患儿进行hRSVRN... 目的建立一种快速、准确诊断人呼吸道合胞病毒(hRSV)早期感染的实时荧光定量PCR检测方法。方法以hRSV最保守的N基因序列为参考,设计两对特异的引物和一条TaqMan荧光探针,在LightCycler定量PCR检测仪上对93例下呼吸道感染患儿进行hRSVRNA检测,并与病毒分离培养、常规PCR、巢式PCR方法和ELISA法相比较。结果以PCR模板浓度来定义,该方法线形范围为1×102 ̄1×107cDNAcopies/μl,灵敏度达1×102cDNAcopies/μl,和巢式PCR相同,比常规PCR高10倍。用人脊髓灰质炎病毒Ⅰ型、柯萨奇病毒2型、甲型、乙型流感病毒、腺病毒7型作对照,均无预期扩增产物和荧光的产生;该方法在LightCycler和Rotor-Gene两种仪器上的定量结果具有一致性;采用该法对93例患儿行FQ-PCR检测出阳性44例(43.9%),ELISA方法检测阳性4例(4.3%),两者相关性不高。hRSV浓度的高低与患儿临床症状之间的关系不是很明显。结论该方法可快速、灵敏、特异、定量检测hRSV,在hRSV感染的早期诊断和疗效监测方面具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 实时监测 灾光定量pcr TAQMAN
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筋脉通对糖尿病大鼠周围神经组织神经生长因子表达的影响 被引量:28
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作者 屈岭 梁晓春 +4 位作者 吴群励 孙连庆 赵丽 陈锡萍 钟定荣 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第21期2539-2544,共6页
目的:观察中药复方筋脉通对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠坐骨神经神经生长因子(nerve growthfactor,NGF)mRNA和蛋白表达的影响。方法:采用链脲佐菌素一次性腹腔内注射大鼠的方法造模,简单随机分为模型对照组、筋脉通小剂量、中剂量和大... 目的:观察中药复方筋脉通对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠坐骨神经神经生长因子(nerve growthfactor,NGF)mRNA和蛋白表达的影响。方法:采用链脲佐菌素一次性腹腔内注射大鼠的方法造模,简单随机分为模型对照组、筋脉通小剂量、中剂量和大剂量组、神经妥乐平组及正常对照组。成模后即开始灌胃给药,筋脉通低、中、高组分别按成人剂量的5,10,20倍给药;神经妥乐平组按成人剂量的10倍给药。模型组和正常组予灌服蒸馏水。所有实验大鼠于灌胃16周后处死。检测各组治疗前及治疗后4,8,12,16周的体重和血糖变化,并进行热水甩尾试验和机械痛阈检测,采用实时荧光定量PCR法检测坐骨神经NGF mRNA的表达,免疫组化染色法测定坐骨神经NGF蛋白的表达。结果:糖尿病大鼠血糖值均显著高于正常组(P<0.01);各治疗组血糖在各时间点与模型组相比无明显差异。造模及灌胃前后,各组大鼠之间的体重无明显差异。模型组和各治疗组较正常组甩尾潜伏期延长、机械痛阈下降,坐骨神经NGF mRNA和蛋白表达减少(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比,筋脉通中剂量组与神经妥乐平组的甩尾潜伏期显著缩短、痛阈值显著升高,坐骨神经NGF mRNA和蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01)。筋脉通中剂量组与神经妥乐平组相比无显著差异。结论:筋脉通能够增加糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经NGF mRNA的转录和蛋白的表达。 展开更多
关键词 糖尿病周围神经病变 神经生长因子 热水甩尾试验 机械痛阈 实时荧光定量pcr 筋脉通
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羟基喜树碱耐药结肠癌细胞株SW1116/HCPT肿瘤耐药相关基因的表达 被引量:3
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作者 黄美兰 冉志华 +1 位作者 邹健 萧树东 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期96-100,共5页
目的分析结肠癌耐药株SW1116/HCPT(羟基喜树碱)肿瘤耐药相关基因的表达情况。方法对本所新近构建的结肠癌耐药株SW1116/HCPT的肿瘤药物耐受功能分类基因芯片的检测结果进行验证;以实时荧光定量-PCR法检测基因芯片中部分表达有改变的基因... 目的分析结肠癌耐药株SW1116/HCPT(羟基喜树碱)肿瘤耐药相关基因的表达情况。方法对本所新近构建的结肠癌耐药株SW1116/HCPT的肿瘤药物耐受功能分类基因芯片的检测结果进行验证;以实时荧光定量-PCR法检测基因芯片中部分表达有改变的基因;以western blot法分析SW1116/HCPT耐药细胞株与原代细胞株间在p21和MRP2蛋白表达水平上的变化。结果p21WAF1/CIP1、MRP2(ABCC2)、BRCA2、CYP3A5等部分表达有改变基因的实时荧光定量-PCR鉴定结果与基因芯片结果基本一致;Western blot检测的p21WAF1/CIP1和MRP2(ABCC2)蛋白表达水平与其转录水平表达相吻合。结论基因芯片技术是一种大规模检测多种基因表达的有效方法,新建的结肠癌细胞耐药模型SW1116/HCPT中存在多类肿瘤耐药相关基因在转录水平和翻译水平的表达差异。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 多药抗药相关蛋白质 细胞株 SW1116/HCPT 实时荧光定量-pcr 蛋白质印迹
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胰腺癌组织中CDC25B表达及临床意义的初步探讨
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作者 石欣 卫文俊 +2 位作者 高乃荣 程张军 汤永辉 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期112-114,共3页
目的研究CDC25B基因在胰腺癌组织中的表达,探讨其在胰腺癌发病机制中的作用。方法利用实时荧光定量-PCR技术检测24例胰腺癌组织和4例正常胰腺组织中CDC25B基因的表达,PCR产物的定量方法采用比较Ct法,应用western blot检测其蛋白的表达... 目的研究CDC25B基因在胰腺癌组织中的表达,探讨其在胰腺癌发病机制中的作用。方法利用实时荧光定量-PCR技术检测24例胰腺癌组织和4例正常胰腺组织中CDC25B基因的表达,PCR产物的定量方法采用比较Ct法,应用western blot检测其蛋白的表达水平。用Kaplan-Meier生存率曲线分析CDC25BmRNA与预后的关系。结果实时荧光定量-PCR发现CDC25B基因平均模板量在正常胰腺组织中为0.000635±0.000210,胰腺癌组织中为0.001988±0.000650;与正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中CDC25B mRNA表达上调3.13倍(P<0.05),CDC25B mRNA升高5倍以上者生存时间缩短。胰腺癌组织中CDC25B蛋白也过度表达,正常胰腺组织CDC25B蛋白表达为1.22±0.33,胰腺癌组织为5.56±1.57,上调4.56倍(P<0.01)。结论CDC25B在胰腺癌组织中表达明显上调,CDC25B mRNA升高者预后差。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 基因表达 印迹法 蛋白质 实时荧光定量-pcr 基因 CD25 B
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STUDY ON PERSISTENT INFECTION OF COXSACKIEVIRUSGROUP B IN MURINE MODEL OF CHRONICVIRAL MYOCARDITIS
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作者 陈忠明 刘晶星 +3 位作者 陆德源 朱莉 王灵枢 姚季生 《Medical Bulletin of Shanghai Jiaotong University》 CAS 1999年第1期11-15,共5页
Objective To investigate the dynamic change of coxsackievirus B3 (CVB3) in murine model ofchronic myocarditis and revel the molecular mechanism of the persistent infection of the tirus.Methods Strand - specific RT- PC... Objective To investigate the dynamic change of coxsackievirus B3 (CVB3) in murine model ofchronic myocarditis and revel the molecular mechanism of the persistent infection of the tirus.Methods Strand - specific RT- PCR(ssRT- PCR), quantitative RT- PCR (qRT - PCR) and multiplexRT- PCR(mRT- PCR). Results The positive strand of CVB3 RNA existed in heart tissue up to 3 monthsalthough its amount decreased by 103~4 folds from acute to chronic phase. The negative strand RNA for virusreplication kept its amount on la moleculars per gram heart tissue. Some conserved areas of virus RNA 5’NTRand 3’NTR were lost in chronic phase. Conclusion The virus kept replication during the whole phase ofmyocarditis and speeded down on chronic period in the status of persistent infection. That may be due to theterminal lose of CVB RNA. 展开更多
关键词 coxsackievirus B group CHRONIC VIRAL MYOCARDITIS PERSISTENT infectionstrand - specific rt- pcr quantitative RT - pcr multiplex RT - pcr
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