芸豆和玉米总DNA导入大豆及后代同工酶酶谱分析

本文报道了利用花粉管通道技术 ,将芸豆、玉米的总 DNA导入大豆的实验结果及采用不连续双垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳法 ,对其导入后代进行过氧化物酶及多酚氧化酶的酶谱分析。结果表明 :远缘材料的外源总 DNA导入大豆 ,其后代发生明显变异 ,过氧化物酶和多酚氧化酶酶谱发生了变化 ,说明了外源遗传物质已转移到大豆基因组中 。

不同处理对山羊精子转染外源DNA效率的影响

将采集的山羊精液去除精清,分为鲜精组、冻精组、反复冻融致死组3组进行处理后,与地高辛标记的线性化PCS2EGFP质粒共育转染,用免疫组化的方法检测精子转染外源DNA的效率.结果显示鲜精、冻精和反复冻融致死3种处理组的阳性转染效率分别为(36.61±7.91)%,(32.68±3.38)%,(69.36±4.79)%.反复冻融致死组转染率极显著高于鲜精组和冻精组(p<0.01),鲜精组和冻精组转染效率差异不显著(p>0.05).

辐照外源DNA直接导入大豆诱变效果的研究

提取农作物总DNA ,采用软x射线 ,剂量为 2Gy、2 0Gy、2 0 0Gy和 60C0γ射线 ,剂量为 1Gy、3Gy和 5Gy进行照射 ,利用花粉管通道技术将其直接导入大豆。以导入不经照射的DNA为对照 ,实验结果表明 :导入受照射的DNA明显的降低了D0 代的结实率和D1代的成苗率 ,但后代材料的变异率明显提高 。

外源DNA导入大豆后代种皮颜色变异的过氧化物酶分析

本实验用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,对外源DNA导入大豆引起种皮颜色变异的后代进行了过氧化物酶同工酶的酶谱分析.结果表明:不同种皮颜色的后代含有供体的谱带.这说明了外源DNA片断已整合到受体基因组中并得到表达.

一种PCR快速鉴定重组体DNA阳性克隆及插入方向的方法

当外源DNA以非定向的方式插入克隆载体时,需用测序或酶切的方法确定插入方向,上述两种方法或昂贵或费力。描述了一种快速、简便的PCR法,即利用载体的通用引物和目的片段的两个特异性引物直接扩增重组菌落,从而达到鉴别DNA插入方向的目的。

氯化钠密度梯度离心法制备用于显微注射的外源DNA片段

DNA显微注射是生产转基因动物最可靠和最常使用的一种方法,外源DNA的纯度对显微注射的成功起着至关重要的作用。本文介绍用氯化钠密度梯度离心的方法制备用于显微注射的外源DNA片段。与传统的琼脂糖凝胶回收的方法相比较,用此方法制备的外源DNA片段对小鼠受精卵进行显微注射后,受卵体母鼠的胚胎存活率,以及子代小鼠的外源基因整合率均有明显的提高。这一方法可为进一步提高转基因动物的成功率,提供方法学上的参考。

不同山羊个体的精子结合和内化外源DNA能力的差异性研究

目的探讨不同山羊个体的精子结合和内化外源DNA能力差异性,以及精子内化能力对制备转基因山羊胚胎阳性率的影响.方法用地高辛标记与检测试剂盒检测12只山羊的精子分别结合、内化质粒DNApEGFP-N1的效率;体外受精实验检测胚胎阳性率与精子内化pEGFP-N1能力的关系.结果不同山羊个体的精子结合和内化pEGFP-N1的效率存在差异,内化效率最高为53.7%,最低为3.1%;3号公羊的精子体外转染外源基因后行体外受精,所得的2～8细胞胚胎表达外源基因pEGFP-N1的阳性率最高,7、8、10、11号公羊的精子体外转染外源基因后行体外受精,所得的2～8细胞胚胎均未表达GFP蛋白.结论不同山羊个体的精子自发结合、内化外源DNA的能力存在差异;不同山羊个体的精子体外转染外源基因后行体外受精,所得的2～8细胞胚胎表达外源基因的比例不同.

应用浸种法导入外源DNA转化烤烟D_1代遗传性状变异的研究

针对严重威胁烤烟大田生产的赤星病病害,培育抗病品种。以烤烟品种NC89为受体,具有选择标记性状的CV87为供体,采用浸种法将供体总DNA导入受体,获得具有目的性状的Do代变异株收种并种植后得到D1代,对其D1代进行实验检测结果表明浸种法直接导入外源DNA在D1代,仍可有效转移株高,株型,叶色,叶面积,生育期及抗病性等性状,并获得较高转化率D1代为15％。导入后D1代成熟烟叶总糖与蛋白质含量变异株与对照基本一致,说明变异株基本保持了受体原有的优良品质。蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,表明导入D1代变异株出现了受体没有的而供体所特有的两条谱带,Rr0.19和Rr0.63。具有供体特有的两条谱带的D1代变异株有A14B6.C5C10D3等5个优良株系。经过D1代一系列检测和筛选,选出5株早熟,优质,抗病变异株有A14.B6.C5.C10.D3。为今后进行D2代筛选,通过分子验证,为烟草育种创造新种质,开创新途径。

应用浸种法导入外源DNA转化烤烟变异株D_2代的氨基酸含量分析

本文对应用浸种法将烤烟CV87总DNA导入受体烤烟NC89产生的抗赤星病变异株D2代的水 解氨基酸含量进行了分析。结果表明,变异株D2代4个抗病株系的17种氨基酸总量均比受体低。通过 与受体和供体各种氨基酸成分的相对含量比较表明,这4个变异株系中的天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、 甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、精氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨 酸、胱氨酸含量的改变与供体烤烟CV87的DNA导入有关。

应用浸种法导入外源DNA转化烤烟遗传性状变异株D_2代研究(Ⅱ)

采用浸种法导入外源 DNA后变异株 D2 代 ,对其进行盆栽生长性状调查 ,活体接种赤星病菌 ,检测其抗病性及同工酶电泳酶谱分析。结果表明 ,浸种法直接导入外源 DNA,在变异株 D2 代仍可有效转移供体表型性状如株高、株型、叶型、叶面积、生育期、抗病性及同工酶酶谱等性状 ,并获得较高的转化率 D2 代为 12 .5 0 % ,其中具有多种优良性状抗病株系有 C1 0 ,B6 ;具有供体株高、株型、抗病性及同工酶酶谱的优良株系有 A9。

应用浸种法导入外源DNA转化烤烟遗传性状变异D_2代研究(Ⅰ)

提取抗赤星病烤烟 CV 87的总 DNA,采用浸种法导入感赤星病烤烟 NC89。 D_1 代筛选出的优良变异株收种并种植后得到 D_2代 ,对其活体接种赤星病菌 ,检测其抗病性 ,并于接菌前后测定叶片过氧化物酶活性。对其田间生长性状调查 ,对其成熟期烟叶总糖、蛋白质及烟碱分析。结果表明 ,浸种法直接导入外源 DNA ,在变异株 D_2代仍可有效转移株高、株型、叶型、叶面积及抗病性等性状 ,并获得较高的转化率 ,D_2代为 8.10 %。高抗赤星病 ,过氧化物酶活性高 ,总糖、蛋白质及烟碱含量基本保持了受体原有的优良品质 ,其变异株 D_2代有 C_10,A_9,B_6,D_3,A_13。

外源质粒DNA对小鼠脾脏物质能量代谢的影响

研究外源质粒DNA经胃肠道途径对免疫激活状态下小鼠脾脏代谢的影响。给Balb/c小鼠灌喂质粒pcDNA3200μg,分别在灌喂后4h和18h分离脾脏,提取脾脏总RNA。利用Affymetrix基因表达谱芯片对灌喂质粒pcDNA3后的Balb/c小鼠脾脏进行基因表达谱研究。采用Genmmapp和MAPPFinder软件进行功能聚类分析。对上调倍数两倍及两倍以上的基因进行功能聚类发现,灌喂后4h,外源质粒刺激小鼠脾脏产生免疫应答的同时,脾脏中嘌呤代谢及蛋白质合成,胆固醇合成、脂肪酸合成、糖酵解、三羧酸循环及线粒体氧化磷酸化途径等大量代谢过程受到诱导。在灌喂后18h也得到类似的结果。结果表明外源质粒DNA可通过胃肠道途径吸收影响小鼠脾脏物质能量代谢过程。结果有助于在分子水平上深入了解外源质粒DNA经胃肠道吸收后的作用机制。

接合转移技术将外源DNA大片段引入变铅青链霉菌中的研究

为了发展一种将150 kb及以上的外源DNA片段引入变铅青链霉菌（Streptomyces lividans）中的有效方法,以大肠杆菌-变铅青链霉菌穿梭细菌人工染色体为载体,将携带完整格尔德霉素生物合成基因簇的3个150-180 kb的外源DNA片段期望以接合转移的方式从大肠杆菌宿主菌（Escherichia coli ET12567/p UZ8002）中横向转移入变铅青链霉菌（Streptomyces lividans）TK23菌株中。结果表明,接合转移技术能够有效地将携带完整格尔德霉素生物合成基因簇的3个外源DNA大片段引入到变铅青链霉菌基因组中并稳定传代。

外源质粒DNA对小鼠肝脏基因表达谱的影响

研究了外源质粒DNA经胃肠道吸收可能对肝脏产生的作用机制。给Balb/c小鼠灌胃质粒pcDNA3 200μg,在灌胃后4 h分离肝脏,提取肝脏的总RNA。利用寡核苷酸芯片对灌胃质粒pcDNA3后的Balb/c小鼠肝脏进行基因表达谱研究。结果发现17 664个基因中,表达上调100条,表达下调41条。按基因功能分类,表达上调的基因可分为免疫应答基因、转录因子基因、信号转导基因、转运相关基因及代谢相关基因等;表达下调的基因主要为脂质代谢基因。灌胃外源质粒DNA后,肝脏组织主要表现为急性时相反应的加强、免疫反应的活化、细胞信号通路的活化以及脂质代谢途径的抑制。表明外源质粒DNA通过胃肠道途径可广泛调控肝脏的基因表达。

外源质粒DNA对小鼠肠道基因表达谱的影响

目的:研究外源质粒通过胃肠道途径吸收对小鼠肠道基因表达谱的影响.方法:给Balb/c小鼠灌胃质粒pcDNA3200μg,在灌胃后4h后分离空肠一段,提取肠组织的总RNA.利用寡核苷酸芯片对灌胃质粒pcDNA3后的Balb/c小鼠肠道进行基因表达谱研究.结果:灌胃外源质粒DNA后,所检测的17667基因中有61条基因产生差异表达,其中36条基因表达上调,25条基因表达下调.这些差异表达的基因主要涉及免疫应答、抗氧化及解毒功能、脂质代谢、阴离子转运蛋白、细胞凋亡及信号转导等过程.结论:外源质粒DNA通过胃肠道途径可广泛调控肠道多种基因表达.

水稻浸穗法直接导入外源DNA

以５种外源ＤＮＡ作供体，首次用浸穗法直接导入水稻，设置３种处理时间，研究了处理后第１代和第２代．结果表明：浸穗法向水稻导入外源ＤＮＡ能引起广泛的性状变异，变异率达１．８１％；外源ＤＮＡ供体与受体间亲缘关系的远近影响变异率的高低；所试验的３种处理时间对变异率的影响不太明显．文中设计了水稻浸穗法导入ＤＮＡ的操作技术。

应用浸种法导入CV85DNA转化烤烟遗传性状变异D_2代研究

提取抗赤星病烤烟CV85的总DNA,采用浸种法导入感赤星病烤烟NC89。D1代筛选出的优良变异株收种并种植后得到D2代植株,对其活动体接种赤星病菌,检测其抗病性,并于接曲前后测定叶片过氧化物酶活性:田间生长性状调查,对其成熟烟叶总糖、蛋白质及总氮含量进行分析,并进行蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。结果表明:浸种法直接导入外源DNA,在变异株D2代仍可有效转移株高、株型、叶型、叶面积及抗病性等性状;赤星病菌人工接种检抗病性和过氧化物酶活性测定,筛选出高抗赤星病株系Jz9802;经蛋白质SDS-PAGE谱带分析表明,变异株D2代Jz9802出现了受体没有的而供体特有的4条谱带,RrA10.07、A20.1 5、B50.59、C40.87:变异株Jz9802的总糖、蛋白质和总氮与受体基本一致,保持了受体原有的优良品质。

转基因食品中外源DNA降解和代谢的研究进展

综述了转基因食品中外源DNA在加工过程、生物体胃肠道中的代谢降解等方面的研究进展。食品加工过程中的热、压力和酸碱等物理和/或化学因素都能使DNA产生一定的降解,不同加工方式对DNA的降解程度不同;大部分DNA在动物胃肠道中被消化降解,有一些DNA片段可能在胃肠道、血液及其他组织和器官中残留;外源基因能否向胃肠道微生物、口腔微生物或体细胞转移尚缺少确凿证据,争论激烈。

外源DNA导入烤烟后变异株D_1代茎尖染色体核型分析

以抗赤星病烤烟CV87为供体,感病烤烟NC89为受体,采用浸种法将总DNA导入受体。收 获的变异株Jz96027种子发芽,得到的D1代个体,对其茎尖受体(亲本)的茎尖进染色体核型分析。 结果表明:烤烟NC89(受体)和变异株JZ97027染色体体数目2n=48,2个染色体组均为基本对称核 型。其中14对染色体为M型,9对为SM型,1对为ST型。变异株D1代Jz9702与受体NC89核型相 比较有第1、2、4、6、15、16、17、22共8对染色体有明显变异。变异株D1代Jz97027尚有染色体落 后畸变现象发生。