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基于FRET构建A型肉毒毒素活性检测的高通量方法 被引量:1
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作者 罗森 郭丽娜 +2 位作者 李涛 王琴 王慧 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第1期15-21,共7页
目的利用荧光共振能量转移(FRET)构建针对A型肉毒毒素酶活性检测的高通量体外方法。方法构建只识别A型肉毒毒素的基于双荧光标记底物的重组表达质粒,将其构建的质粒转入大肠杆菌表达系统进行表达,对表达后的荧光标记底物重组蛋白进行纯... 目的利用荧光共振能量转移(FRET)构建针对A型肉毒毒素酶活性检测的高通量体外方法。方法构建只识别A型肉毒毒素的基于双荧光标记底物的重组表达质粒,将其构建的质粒转入大肠杆菌表达系统进行表达,对表达后的荧光标记底物重组蛋白进行纯化和透析并保存备用;利用A型肉毒毒素轻链(ALc)对重组蛋白进行酶切检测活性;对本检测方法的条件进行优化;ALc切割荧光标记底物测定其酶动力学参数K_(m)与K_(cat)值。结果重组表达质粒构建成功,通过大肠杆菌表达系统表达后检测明显出现目的条带,对其纯化后获得的重组蛋白纯度在90%左右,命名重组蛋白为CYA。对CYA通过酶ALc、B型肉毒毒素轻链(BLc)进行酶切鉴定,结果显示CYA只能被ALc酶切产生与预期相符的两个蛋白片段,不能被BLc酶切。对基于FRET底物的条件优化得到:设定滤光片灵敏度在65~110之间;实时动态检测间隔为2 min/次,动态检测时间为30~120 min,底物CYA合适的浓度范围0.5~32μmol/L。CYA在ALc酶作用下随时时间的变化与荧光值528与485的比值作图最小在0.5左右,最大时约为0.9。酶动力学参数测定ALc切割CYA的值K_(cat)值为(5±0.4)s^(-1)和K_(m)为(2.33±0.21)μmol/L。结论成功构建了基于FRET技术的A型肉毒毒素活性检测的高通量体外分析方法。 展开更多
关键词 fret 肉毒毒素 高通量检测
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基于FRET成像探究棕榈酰化修饰调节Fyn激酶活性 被引量:1
2
作者 张鑫 郭佳 +2 位作者 姚辉 邓林红 欧阳明星 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期228-235,共8页
目的探讨棕榈酰化修饰调节非受体酪氨酸激酶Fyn活性的分子机制。方法利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术实时检测细胞中的Fyn活性,并结合棕榈酰化位点缺失和共转染蛋白质酪氨酸激酶(C-terminal Src... 目的探讨棕榈酰化修饰调节非受体酪氨酸激酶Fyn活性的分子机制。方法利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术实时检测细胞中的Fyn活性,并结合棕榈酰化位点缺失和共转染蛋白质酪氨酸激酶(C-terminal Src kinase,CSK)表达质粒研究其分子机制。结果实验发现,(C3,C6)任一位点的棕榈酰化缺失能引起Fyn的高活性表达,且C6位点影响更显著。已知CSK激活后发生膜转移,FRET检测证实其对细胞中的Fyn活性有下调作用,但不能有效调控(C3,C6)棕榈酰化位点缺失的Fyn(GSS)活性。结论本文结果初步支持了Fyn活性受细胞内的物理空间定位分布的一种调控机制假设,即棕榈酰化缺失的Fyn(GSS)受细胞膜上CSK抑制性的调节作用被减弱,从而促进了组成性的高活性表达。 展开更多
关键词 Fyn激酶 棕榈酰化修饰 荧光共振能量转移 CSK激酶
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用于血清胰岛素测定的荧光共振能量传递(FRET)免疫检测法的建立
3
作者 南杰 夏缓 +3 位作者 张楠 赵洪伟 徐蓓 赛娜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期898-903,共6页
目的研究探讨新型荧光染料Dylight(DL)和金纳米颗粒(AuNP)间荧光共振能量转移(FRET)效应,并将其与免疫竞争法结合构建一种新型胰岛素荧光免疫检测方法。方法分别将胰岛素抗原(Ag)和胰岛素抗体(Ab)与DL和AuNP进行偶联,形成DL-Ag偶联物和A... 目的研究探讨新型荧光染料Dylight(DL)和金纳米颗粒(AuNP)间荧光共振能量转移(FRET)效应,并将其与免疫竞争法结合构建一种新型胰岛素荧光免疫检测方法。方法分别将胰岛素抗原(Ag)和胰岛素抗体(Ab)与DL和AuNP进行偶联,形成DL-Ag偶联物和AuNP-Ab偶联物。利用它们间产生的FRET效应以及免疫竞争反应,建立针对胰岛素的新型荧光免疫检测方法。然后对该检测方法的检测性能进行评估和实际样品的应用研究。结果该荧光免疫检测方法不仅表现出较高的检测灵敏度(0.015 ng/mL),较快的检测时间(4 min)以及较好的检测特异性,而且成功地用于血清胰岛素的检测,回收率在96.9%~121.1%之间。结论新型荧光染料DL和AuNP间FRET效应可应用于血清胰岛素的荧光免疫检测。 展开更多
关键词 免疫学检验 荧光共振能量传递(fret) 胰岛素
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Fretting Wear Characteristics of Nuclear Fuel Cladding in High-Temperature Pressurized Water
4
作者 Jun Wang Haojie Li +4 位作者 Zhengyang Li Yujie Lei Quanyao Ren Yongjun Jiao Zhenbing Cai 《Chinese Journal of Mechanical Engineering》 SCIE EI CAS CSCD 2023年第4期326-338,共13页
In pressurized water reactor(PWR),fretting wear is one of the main causes of fuel assembly failure.Moreover,the operation condition of cladding is complex and harsh.A unique fretting damage test equipment was develope... In pressurized water reactor(PWR),fretting wear is one of the main causes of fuel assembly failure.Moreover,the operation condition of cladding is complex and harsh.A unique fretting damage test equipment was developed and tested to simulate the fretting damage evolution process of cladding in the PWR environment.It can simulate the fretting wear experiment of PWR under different temperatures(maximum temperature is 350℃),displacement amplitude,vibration frequency,and normal force.The fretting wear behavior of Zr-4 alloy under different temperature environments was tested.In addition,the evolution of wear scar morphology,profile,and wear volume was studied using an optical microscope(OM),scanning electron microscopy(SEM),and a 3D white light interferometer.Results show that higher water temperature evidently decreased the cladding wear volume,the wear mechanism of Zr-4 cladding changed from abrasive wear to adhesive wear and the formation of an oxide layer on the wear scar reduced the wear volume and maximum wear depth. 展开更多
关键词 fretting wear CLADDING High temperature and high pressure Zirconium alloy
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Numerical Simulation of Fretting Fatigue Damage Evolution of Cable Wires Considering Corrosion and Wear Effects
5
作者 Ying Wang Zheng Yan Yangyang 《Computer Modeling in Engineering & Sciences》 SCIE EI 2023年第8期1339-1370,共32页
In this paper,a numerical model of fretting fatigue analysis of cablewire and the fretting fatigue damage constitutive model considering the multi-axis effect were established,and the user material subroutine UMAT was... In this paper,a numerical model of fretting fatigue analysis of cablewire and the fretting fatigue damage constitutive model considering the multi-axis effect were established,and the user material subroutine UMAT was written.Then,the constitutive model of wear morphology evolution of cable wire and the constitutive model of pitting evolution considering the mechanical-electrochemical effect were established,respectively.The corresponding subroutines UMESHMOTION_Wear and UMESHMOTION_Wear_Corrosion were written,and the fretting fatigue lifewas further predicted.The results showthat the numerical simulation life obtained by the programin this paper has the same trend as the tested one;the error is only about 0.7%in the medium life area;When the normal contact force increases from 120 to 240 N,the fretting life of cable wire decreases by 25%;When the evolution of wear morphology and corrosion effect are considered simultaneously,the depth of the wear zone exceeds 0.08mm after 600,000 loads,which ismuch larger than 0.04 mmwhen only the evolution of wear morphology is considered.When the evolution of wear morphology and corrosion morphology is considered simultaneously,the damage covers the whole contact surface after 300,000 loads,and the penetrating damage zone forms after 450,000 loads,which is obviously faster than that when only the wearmorphology evolution is considered.Themethod proposed in this paper can provide a feasible numerical simulation scheme for the visualization of the damage process and accurate life prediction of cable-supported bridges. 展开更多
关键词 fretting fatigue multiaxial fatigue electrochemical corrosion damage evolution life prediction
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利用FRET技术检测不同力学条件下T细胞中ERK活性的脉冲现象
6
作者 盛会 李亚芹 +2 位作者 邢雨洁 邓林红 欧阳明星 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期924-930,共7页
目的探索Jurkat T细胞中胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)活性动力学以及基质刚度对ERK活性的影响。方法利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术实时观测Jurkat细胞中ER... 目的探索Jurkat T细胞中胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)活性动力学以及基质刚度对ERK活性的影响。方法利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术实时观测Jurkat细胞中ERK活性的变化,或细胞处于I型胶原基质胶中检测其影响。结果部分Jurkat细胞中存在ERK活性脉冲现象,频率约为3次/h,FRET振幅变化约为20%。在抗体激活T细胞抗原受体(T-cell receptor,TCR)的条件下,ERK脉冲依然存在,频率和振幅无显著变化。当细胞处于I型胶原水凝胶中,随着胶基质刚度增加,脉冲频率有所下调。结论Jurkat T细胞中存在自发的ERK活性脉冲现象,初步实验显示其频率受基质刚度影响。而该信号波动的生理意义和分子机制仍有待探索。 展开更多
关键词 T细胞 细胞外调节蛋白激酶 荧光共振能量转移 信号脉冲 基质刚度
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荧光共振能量转移(FRET)的定量检测及其应用 被引量:6
7
作者 张建伟 陈同生 《华南师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2012年第3期12-17,共6页
荧光共振能量转移(Fluorescence Resonance Energy Transfer,FRET)技术被广泛应用于活细胞中生物大分子构象变化和分子间动态相互作用的实时研究.针对光谱串扰和供体受体间的浓度比等困扰FRET效率定量检测的两大难题,已经发展了多种定... 荧光共振能量转移(Fluorescence Resonance Energy Transfer,FRET)技术被广泛应用于活细胞中生物大分子构象变化和分子间动态相互作用的实时研究.针对光谱串扰和供体受体间的浓度比等困扰FRET效率定量检测的两大难题,已经发展了多种定量检测FRET效率的方法.作者结合自己的研究结果介绍了多种FRET效率定量检测技术在细胞信号转导机制研究中的应用. 展开更多
关键词 荧光共振能量转移(fret) fret效率 定量检测 荧光蛋白
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FRET技术及其在蛋白质-蛋白质分子相互作用研究中的应用 被引量:21
8
作者 王进军 陈小川 邢达 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第6期980-984,共5页
简要综述了FRET方法在活细胞生理条件下研究蛋白质 蛋白质间相互作用方面的最新进展 .蛋白质 蛋白质间相互作用在整个细胞生命过程中占有重要地位 ,由于细胞内各种组分极其复杂 ,因此一些传统研究蛋白质 蛋白质间相互作用的方法 ,例... 简要综述了FRET方法在活细胞生理条件下研究蛋白质 蛋白质间相互作用方面的最新进展 .蛋白质 蛋白质间相互作用在整个细胞生命过程中占有重要地位 ,由于细胞内各种组分极其复杂 ,因此一些传统研究蛋白质 蛋白质间相互作用的方法 ,例如酵母双杂交、免疫沉淀等可能会丢失某些重要的信息 ,无法正确地反映在当时活细胞生理条件下蛋白质 蛋白质间相互作用的动态变化过程 .荧光共振能量转移 (fluorescenceresonanceenergytransfer ,FRET)是近来发展的一项新技术 ,此项技术的应用 ,为在活细胞生理条件下对蛋白质 蛋白质间相互作用进行实时的动态研究 。 展开更多
关键词 荧光共振能量转移 fret 蛋白质 相互作用 活细胞 荧光成像技术
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基于SPHD及FRET技术的蛋白质传感器 被引量:2
9
作者 郭素 廖玮 +2 位作者 魏芳 钱民协 赵新生 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第8期917-920,共4页
蛋白质传感器作为一种分析蛋白质与其他分子之间作用力的有效手段已经越来越显示出其优点,但是蛋白质在基底表面的变性问题对于研究者来说仍然是一个挑战.作者介绍了一种具有高灵敏度的蛋白质传感器,即利用DNA引导固定(DDI)方法,将DNA-... 蛋白质传感器作为一种分析蛋白质与其他分子之间作用力的有效手段已经越来越显示出其优点,但是蛋白质在基底表面的变性问题对于研究者来说仍然是一个挑战.作者介绍了一种具有高灵敏度的蛋白质传感器,即利用DNA引导固定(DDI)方法,将DNA-蛋白质复合物通过DNA双链特异性杂交固定在硅基底表面,从而有效保持了蛋白质的活性,并且引入荧光共振能量传递(FRET)技术以及电势扫描发卡去杂交(SPHD)技术降低非特异性吸附带来的荧光信号.这种蛋白质传感器在蛋白质识别以及DNA杂交方面具有显著区分不同体系荧光信号的能力. 展开更多
关键词 蛋白质 传感器 fret 电位控制 SPHD 微阵列
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利用FRET技术在活细胞内观察EGF对PKA作用的时空成像 被引量:4
10
作者 王进军 陈小川 邢达 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期109-113,共5页
cAMP依赖的蛋白激酶(protein kinase A, PKA)在细胞生长与分化过程中扮演重要角色,特别是在调节Ras信号通路引起的细胞增殖效应中起着重要作用。为了在活细胞内动态观察表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)对PKA的作用,采用一... cAMP依赖的蛋白激酶(protein kinase A, PKA)在细胞生长与分化过程中扮演重要角色,特别是在调节Ras信号通路引起的细胞增殖效应中起着重要作用。为了在活细胞内动态观察表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)对PKA的作用,采用一种可以检测PKA酶活性的报告蛋白(A-kinase activity reporter, AKAR)——这种报告蛋白是利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)原理设计的,使其在人类肺癌细胞(ASTC-a-1)中稳定表达。加入EGF刺激因子后,随时间变化的成像分析显示出在活细胞生理条件下被EGF作用的PKA酶活性变化的时空信息。这些资料为EGF作用PKA提供了直接的实时证据。 展开更多
关键词 荧光共振能量转移 fret 表皮生长因子 EGF 蛋白激酶A PKA 活细胞 荧光共振能量转移
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基于FRET技术构建破伤风毒素和B型肉毒毒素酶类抑制剂高通量体外筛选方法 被引量:1
11
作者 罗森 丁朋晓 +2 位作者 李涛 王琴 王慧 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第5期739-745,共7页
目的利用FRET技术构建破伤风毒素和B型肉毒毒素酶类抑制剂高通量体外筛选方法。方法构建针对破伤风毒素和B型肉毒毒素的双荧光标记底物的重组表达质粒,表达并纯化荧光标记底物重组蛋白;利用A型肉毒毒素轻链(ALc),B型肉毒毒素轻链(BLc)... 目的利用FRET技术构建破伤风毒素和B型肉毒毒素酶类抑制剂高通量体外筛选方法。方法构建针对破伤风毒素和B型肉毒毒素的双荧光标记底物的重组表达质粒,表达并纯化荧光标记底物重组蛋白;利用A型肉毒毒素轻链(ALc),B型肉毒毒素轻链(BLc)和破伤风毒素轻链(TLc)分别对目的蛋白进行酶切反应。对基于双荧光标记底物高通量体外筛选方法的条件进行优化。酶动力学参数分别测定TLc和BLc切割底物荧光标记底物的Km和Kcat值。结果设计并成功构建荧光标记底物的重组表达质粒。表达并纯化后获得纯度为90%左右的重组蛋白,命名为CYVAMP。利用ALc、BLc和TLc分别对CYVAMP进行酶切,CYVAMP能被BLc和TLc识别切割而不能被ALc切割。对基于双荧光标记底物高通量体外筛选方法的条件优化得到:CYVAMP较适宜的范围为0.2~32μmol/L,酶标仪滤光片灵敏度设定的较合适的设置范围在65~110;(对于96孔板)动态实时检测间隔时间2 min较为合适,检测持续时间从30 min到120 min较合适。CYVAMP在内肽酶BLc作用下随反应时间变化与荧光值528与485比值作图最大时在1.5左右,最小在0.5左右。酶动力学参数测定得到BLc酶切CYVAMP的Km和Kcat值分别为(17.6±2.6)μmol/L和(4.16±0.28)s-1。TLc酶切CYVAMP的Km和Kcat值分别为(40.8±3.5)μmol/L和(2.65±0.32)s-1。结论成功构建基于FRET技术的分析法能满足对破伤风毒素和B型肉毒毒素的检测及抑制剂的高通量体外筛选所需。 展开更多
关键词 fret 肉毒毒素 破伤风毒素 高通量筛选
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Fretting Wear Behavior of Medium Carbon Steel Modified by Low Temperature Gas Multi-component Thermo-chemical Treatment 被引量:3
12
作者 LUO Jun ZHENG Jianfeng PENG Jinfang HE Liping ZHU Minhao 《Chinese Journal of Mechanical Engineering》 SCIE EI CAS CSCD 2010年第3期288-296,共9页
The introduction of surface engineering is expected to be an effective strategy against fretting damage. A large number of studies show that the low gas multi-component (such as carbon, nitrogen, sulphur and oxygen, ... The introduction of surface engineering is expected to be an effective strategy against fretting damage. A large number of studies show that the low gas multi-component (such as carbon, nitrogen, sulphur and oxygen, etc) thermo-chemical treatment(LTGMTT) can overcome the brittleness of nitriding process, and upgrade the surface hardness and improve the wear resistance and fatigue properties of the work-pieces significantly. However, there are few reports on the anti-fretting properties of the LTGMTT modified layer up to now, which limits the applications of fretting. So this paper discusses the fretting wear behavior of modified layer on the surface of LZ50 (0.48%C) steel prepared by low temperature gas multi-component thermo-chemical treatment (LTGMTT) technology. The fretting wear tests of the modified layer flat specimens and its substrate (LZ50 steel) against 52100 steel balls with diameter of 40 mm are carried out under normal load of 150 N and displacement amplitudes varied from 2 μm to 40 μm. Characterization of the modified layer and dynamic analyses in combination with microscopic examinations were performed through the means of scanning electron microscope(SEM), optical microscope(OM), X-ray diffraction(XRD) and surface profilometer. The experimental results showed that the modified layer with a total thickness of 60 μm was consisted of three parts, i.e., loose layer, compound layer and diffusion layer. Compared with the substrate, the range of the mixed fretting regime(MFR) of the LTGMTT modified layer diminished, and the slip regime(SR) of the modified layer shifted to the direction of smaller displacement amplitude. The coefficient of friction(COF) of the modified layer was lower than that of the substrate in the initial stage. For the modified layer, the damage in partial slip regime(PSR) was very slight. The fretting wear mechanism of the modified layer both in MFR and SR was abrasive wear and delamination. The modified layer presented better wear resistance than the substrate in PSR and MFR; however, in SR, the wear resistance of the modified layer decreased with the increase of the displacement amplitudes. The experimental results can provide some experimental bases for promoting industrial application of LTGMTT modified layer in anti-fretting wear. 展开更多
关键词 fretting wear fretting regimes low temperature gas multi-component thermo-chemical treatment(LTGMTT) modified layer medium carbon steel
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Experimental and numerical study on fretting wear and fatigue of full-scale railway axles 被引量:9
13
作者 Lang Zou Dongfang Zeng +3 位作者 Yabo Li Kai Yang Liantao Lu Caiqin Yuan 《Railway Engineering Science》 2020年第4期365-381,共17页
This study investigated the fretting wear and fatigue of full-scale railway axles.Fatigue tests were conducted on full-scale railway axles,and the fretting wear and fretting fatigue in the fretted zone of the railway ... This study investigated the fretting wear and fatigue of full-scale railway axles.Fatigue tests were conducted on full-scale railway axles,and the fretting wear and fretting fatigue in the fretted zone of the railway axles were analysed.Three-dimensional finite element models were established based on the experimental results.Then,multi-axial fatigue parameters and a linear elastic fracture mechanics-based approach were used to investigate the fretting fatigue crack initiation and propagation,respectively,in which the role of the fretting wear was taken into account.The experimental and simulated results showed that the fretted zone could be divided into zones I-III according to the surface damage morphologies.Fretting wear alleviated the stress concentration near the wheel seat edge and resulted in a new stress concentration near the worn/unworn boundary in zone II,which greatly promoted the fretting crack initiation at the inner side of the fretted zone.Meanwhile,the stress concentration also increased the equivalent stress intensity factor range DKeq below the mating surface,and thus promoted the propagation of fretting fatigue crack.Based on these findings,the effect of the stress redistribution resulting from fretting wear is suggested to be taken into account when evaluating the fretting fatigue in railway axles. 展开更多
关键词 Railway axle fretting wear fretting fatigue Crack initiation Crack propagation Finite element
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FRET检测tk基因诱导ACC-M细胞凋亡
14
作者 熊涛 陈延平 《长江大学学报(自科版)(中旬)》 CAS 2007年第4期54-57,61,共5页
研究肿瘤细胞凋亡是进行其药物筛选的重要方法之一。利用已构建的基于Caspase酶的指示剂CD3质粒与HSV-tk/ACV系统结合,通过荧光能量共振转移(FRET)技术研究了细胞凋亡,并采用ACV药物诱导表达了TK-GFP-CD3的ACC-M肿瘤细胞和CD3的ACC-M肿... 研究肿瘤细胞凋亡是进行其药物筛选的重要方法之一。利用已构建的基于Caspase酶的指示剂CD3质粒与HSV-tk/ACV系统结合,通过荧光能量共振转移(FRET)技术研究了细胞凋亡,并采用ACV药物诱导表达了TK-GFP-CD3的ACC-M肿瘤细胞和CD3的ACC-M肿瘤细胞。结果表明,FRET成像检测分析出ACV药物能够诱导转有TK基因的人涎腺癌(ACC-M)肿瘤细胞凋亡,通过对仅转有CD3质粒的ACC-M肿瘤细胞没有影响。这种技术的结合可以用于细胞的凋亡药物的筛选。 展开更多
关键词 荧光能量共振转移(fret) HSV-tk/ACV 细胞凋亡
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利用FRET技术实时检测Bid蛋白在TNF-α诱导PC12细胞凋亡过程中的作用
15
作者 张岚 朱德斌 《国际医药卫生导报》 2012年第11期1545-1547,共3页
】目的在活细胞中实时检测TNF-α诱导PCI2细胞凋亡过程中Bid蛋白的作用并探讨PCI2细胞凋亡的信号通路。方法利用基于荧光共振能量转移(nuoreseence resonance energyt ransfer,FRET)原理设计的荧光探针pFRET-Bid(YFP-Bid-CFP)转染P... 】目的在活细胞中实时检测TNF-α诱导PCI2细胞凋亡过程中Bid蛋白的作用并探讨PCI2细胞凋亡的信号通路。方法利用基于荧光共振能量转移(nuoreseence resonance energyt ransfer,FRET)原理设计的荧光探针pFRET-Bid(YFP-Bid-CFP)转染PC12细胞后,在激光共聚焦显微镜下实时检测Bid蛋白的切割情况,并采用专用软件进行数据分析。结果TNF-α诱导细胞凋亡的过程中,在短时间内(3h)就凋亡的细胞中观测不到bid的切割,而在8h后凋亡的细胞中却观测到了bid的切割。结论通过分析实验结果推测不同时间凋亡的细胞经过的信号通路是不同的,一个是不通过线粒体的较快途径,一个是需要通过线粒体的较慢途径。 展开更多
关键词 TNF-Α fret Bid蛋白
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基于FRET机理的荧光探针的合成及其对汞离子的识别 被引量:6
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作者 王海菊 张文珠 +1 位作者 何成 周硼 《发光学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1030-1036,共7页
基于FRET机理设计合成了一个包含罗丹明6G及香豆素的汞离子荧光探针Rh-6G-coumarin(RC),研究了它的光谱性能及对汞离子的识别作用。在V(C2H5OH)∶V(H2O)=9∶1溶液中加入汞离子后,575 nm处荧光强度迅速增大,荧光由蓝色变为明亮的红色,同... 基于FRET机理设计合成了一个包含罗丹明6G及香豆素的汞离子荧光探针Rh-6G-coumarin(RC),研究了它的光谱性能及对汞离子的识别作用。在V(C2H5OH)∶V(H2O)=9∶1溶液中加入汞离子后,575 nm处荧光强度迅速增大,荧光由蓝色变为明亮的红色,同时溶液的颜色由黄色变为红色。溶液中其他金属离子,如Na+、K+、Mg2+、Fe2+、Co2+、Pb2+、Zn2+、Cd2+和Cr3+对汞离子的荧光识别没有太大影响。该探针可在较宽的pH(4~10)范围内识别汞离子。光谱滴定实验表明,汞离子与RC以2∶1的计量比形成了配合物。 展开更多
关键词 荧光探针 汞离子 fret 罗丹明6G 香豆素
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绿色荧光蛋白为传能对的供体光漂白法测定FRET效率的探讨 被引量:2
17
作者 周晓娟 郭慧芳 +1 位作者 刘德龙 孙大业 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期127-130,共4页
探讨以两种新荧光蛋白MiCy,mKo为传能对并应用供体光漂白法测量荧光共振能量转移(FRET)效率。首先通过基因工程方法表达纯化了这两种蛋白,并测量了荧光光谱及光漂白性质,表明MiCy极易光漂白而mKo抗光漂白。进一步以Ni-NTA-agarose为FRE... 探讨以两种新荧光蛋白MiCy,mKo为传能对并应用供体光漂白法测量荧光共振能量转移(FRET)效率。首先通过基因工程方法表达纯化了这两种蛋白,并测量了荧光光谱及光漂白性质,表明MiCy极易光漂白而mKo抗光漂白。进一步以Ni-NTA-agarose为FRET模型,在Confocal上对MiCy进行光漂白时间常数的测量,并计算了FRET效率。结果表明MiCy-mKo传能对适合用供体光漂白法测量FRET效率,此传能对将在蛋白质相互作用研究中有广泛应用。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 荧光共振能量转移 fret效率 光漂白
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基于GFP的FRET应用 被引量:2
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作者 周炜 曾绍群 +2 位作者 张智红 陈同生 骆清铭 《生命科学》 CSCD 2002年第1期56-58,共3页
绿色荧光蛋白(GFP)是一种活体荧光标记,已被用来研究基因表达、分子定位、蛋白质折叠和转运;荧光共振能量转移(FRET)是一种无损伤的光学检测方法,能检测到小干纳米的距离变化。将GFP的活体定位标记功能与FRET的高... 绿色荧光蛋白(GFP)是一种活体荧光标记,已被用来研究基因表达、分子定位、蛋白质折叠和转运;荧光共振能量转移(FRET)是一种无损伤的光学检测方法,能检测到小干纳米的距离变化。将GFP的活体定位标记功能与FRET的高分辨率相结合,为活体研究生物分子的功能和命运开创了新的篇章。作者在介绍 GFP和 FRET原理的基础上;综述了基于 GFP的 FRET在蛋白酶活性、蛋白质间相互作用和构象改变研究中的应用。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 荧光共振能量转移 构象 蛋白质相互作用 GFP fret 应用
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基于单波长激发的定量FRET成像
19
作者 魏丽春 苏文华 陈同生 《激光生物学报》 CAS 2018年第4期326-331,共6页
本文发展了一种针对于固定FRET质粒的单波长激发的E-FRET方法(SDW-E-FRET)。相比于EFRET方法,SDW-E-FRET只需要测量供体激发时供体通道的荧光强度(IDD)和FRET通道的荧光强度(IDA),因此该方法可以实现活细胞的快速定量FRET成像。结合双... 本文发展了一种针对于固定FRET质粒的单波长激发的E-FRET方法(SDW-E-FRET)。相比于EFRET方法,SDW-E-FRET只需要测量供体激发时供体通道的荧光强度(IDD)和FRET通道的荧光强度(IDA),因此该方法可以实现活细胞的快速定量FRET成像。结合双通道荧光显微成像系统,该方法无需任何机械切换,定量FRET成像的速度只取决于CCD相机的成像速度,因而特别适合活细胞实时动态定量FRET成像。在本研究小组发展的双通道荧光显微镜平台上,应用SDW-E-FRET方法测量了C5V和C17V的FRET效率,得到了与其它方法测量的一致的结果。 展开更多
关键词 定量fret成像 fret探针 单波长激发 实时测量 活细胞
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基于1,8-萘酰亚胺-罗丹明的FRET机理阳离子探针研究进展 被引量:1
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作者 田娟 陈彪 +1 位作者 吕浩 吴志兵 《应用化工》 CAS CSCD 2014年第2期346-352,共7页
综述了近年来以1,8-萘酰亚胺-罗丹明为母体的FRET机理阳离子探针的研究进展。介绍了Hg2+,Al3+,Fe3+,Sn4+,Cr3+和H+荧光探针的设计合成、性质及其应用,并对今后的研究方向作简要的展望。
关键词 荧光分子探针 1 8-萘酰亚胺 罗丹明 fret机理
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