牛冷冻精液精子形态活力变化研究与分析

为探讨牛常规冷冻精液解冻后不同时间内精子的形态结构及活力的变化规律,利用河南某种公牛站同一牛号、同一生产批次的300剂常规冷冻精液进行解冻,检测其解冻后不同时间内精子活力、畸形率、顶体完整率及前进运动精子数。结果表明:刚解冻时、解冻后1h精子顶体完整率下降,但差异不显著(P>0.05),解冻后3h、6h、9h的精子顶体完整率显著低于刚解冻时和解冻后1h(P<0.05)。精子畸形率在精液解冻后随着时间延长而逐渐升高,刚解冻时与解冻后1h差异不显著(P>0.05),但显著低于解冻后3h、6h(P<0.05),且解冻后3h的精子畸形率显著低于解冻后6h的畸形率(P<0.05)。精子活力在精液解冻后随着时间延长而逐渐降低,刚解冻时的精子活力最高,与解冻后1h、3h、6h、9h差异显著(P<0.05),解冻后1h精子活力显著高于6h(P<0.05),解冻后9h精子活力低于任何一个阶段的活力,且差异显著(P<0.05)。可见,人工授精时,刚解冻精液与解冻1h内精液的顶体完整率较好、精子畸形率较低,此时输精效果为佳。

不同品种绵羊的细管冻精解冻质量检测分析

选取8个不同品种羊(引进品种2个,本地品种4个,培育品种2个)的细管冻精,进行外观、剂量、精子活力、前向运动精子数和精子顶体完整率指标的检测分析。结果显示,各细管冻精外观均完好,符合生产标准;剂量检测值为(0.21±0.01) mL,均符合国家标准(≥0.18 mL);精子活力为(37.50%±1.70%)~(51.0%±3.70%),其中,陶赛特羊精子活力值最高,黑裘皮藏羊精子活力值最低;前进运动精子数为≥3×10^(7)个,符合国标;精子顶体完整率为(71.90%±1.13%)~(81.23%±1.0%),其中,西藏(草地型)羊精子顶体完整率最高,陶赛特羊精子顶体完整率最低。8个品种的羊冻精在解冻复苏后各项指标均达到配种生产要求。引进品种的精子活力比本地品种高,前进运动精子数和顶体完整率等其他指标有高有低。

猪冷冻精液在人工授精中的研究进展

猪冷冻精液在传播优良品种、提高优秀公畜利用率和降低生产成本方面具有重要作用。随着集约化养猪模式的不断发展和人工授精技术普及率的提高,以及地方猪种质资源保存和利用的持续加强,猪冷冻精液将会得到更多应用。然而,猪精子容易受冷休克的影响,且常规人工输精模式不适用于冷冻精液,导致猪冷冻精液在生产中使用率很低。文章通过介绍目前国内外猪冷冻精液在人工授精中的应用现状,分析影响猪冷冻精液应用效果的主要因素,并提出了提高猪冷冻精液在人工授精中应用效果的相关措施,以期为猪冷冻精液生产技术进步及在人工授精中的应用提供参考。

岔口驿马细管冻精制作与人工授精推广方案初探

为了进一步保护、发展和利用岔口驿马种质资源,扩大岔口驿马种群数量,有关研究人员制定适合岔口驿马种属区域的细管冻精制作和人工授精技术示范及推广方案,以期为实现岔口驿马产业的高质量发展和岔口驿马品种改良应用提供参考依据。

牛细管冻精有效精子数技术应用

目的:肉牛顶级种公牛基因是数百年物种进化的成果,是国内一流育种科技的载体,是一种不可或缺的种质资源,对于一个国家更是战略资源。在不影响母牛受胎率的情况下,通过降低牛细管有效精子数,提高种公牛的冻精产量,提升优质种公牛的利用率。方法:研究种公牛饲草料的最佳营养配方,提高原精密度和活力;研究生产牛冻精有效精子数400万、500万、600万、700万、800万的冻精,开展受胎率差异性试验研究,确定0.25μL牛细管冻精不影响牛受胎率的最低有效精子数。结果:通过调整种公牛的饲料配方能有效提高鲜精活力、冻后活力;配种试验表明牛冻精有效精子数可降低到600万,可参与黄牛冷配工作,能有效提高优质种公牛的利用率,其经济效益和社会效益显著。结论:改进饲料中的营养成分有效提高原精密度和活力,降低有效精子数能够更好地提高优秀种公牛的遗传利用率。

滋养外胚层细胞活检对冻胚移植新生儿出生体质量的影响

目的:探讨胚胎植入前遗传学检测(PGT)中滋养外胚层细胞活检对新生儿出生体质量及围产期结局的影响。方法:回顾分析2017年1月至2021年12月在郑州大学第三附属医院生殖医学中心行冻胚移植(FET)并获得单胎活产患者的临床资料。纳入行胚胎植入前行遗传学检测的患者221例(PGT组)和同期行卵胞质内单精子注射(ICSI)的患者756例(ICSI组),利用倾向性评分匹配(PSM)进行1:2匹配后得到PGT组191例和ICSI组363例,比较匹配前后两组患者基线数据及新生儿出生体质量等围产期及新生儿结局的差异,采用多因素线性回归分析单胎活产新生儿出生体质量的影响因素。结果:匹配前两组患者的孕产次、不孕年限及移植日内膜厚度比较,差异有统计学意义(P<0.05),匹配后两组患者基线数据差异均无统计学意义(P均>0.05)。匹配前后,两组的妊娠期高血压疾病、妊娠期糖尿病、胎膜早破、前置胎盘、剖宫产率、分娩孕周、新生儿出生体质量及新生儿身长比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。多因素线性回归分析结果显示,滋养外胚层细胞活检与新生儿出生体质量无关,女方BMI、移植日子宫内膜厚度、分娩孕周和新生儿性别显著影响新生儿出生体质量(P均<0.05)。结论:PGT中滋养外胚层活检可能不会影响新生儿出生体质量,也不增加母婴不良并发症发生风险。

509例自精保存者冷冻精液去向分析

目的分析自精保存者首个保存周期后冷冻精液的去向,为提升冷冻精液的保存价值提供依据。方法回顾性分析浙江省人类精子库2007年1月至2021年12月509例自精保存者的基本资料、精液保存情况和冷冻精液的去向等信息。自精保存者按照精液保存原因分为四组:疾病治疗组、单纯生殖保险组、高危职业组、不育症组;冷冻精液的去向分为五种情况:续费保存、使用、销毁、失访、无效保存。结果509例自精保存者平均保存(10.7±6.6)份冷冻精液,冷冻精液去向分别为:失访占48.5%,续费保存占44.4%,精液已使用占4.7%,精液销毁占1.6%,无效保存占0.8%;四组自精保存者中,不育症组的冷冻精液使用率(15.4%)显著高于其他组(P<0.01);冷冻精液的续费保存率和销毁率各组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论精液冷冻保存是一种保护男性生育力切实可行的方法,但冷冻精液使用率极低、失访率过高,因此人类精子库需要优化自精保存流程和方案,加强自精保存者的随访,提高自精保存者冷冻精液使用率、降低其失访率,以提升冷冻精液的保存价值。

不同浓度大豆卵磷脂替代蛋黄对东佛里生奶绵羊精液冷冻保存效果的影响

本试验皆在研究添加不同浓度大豆卵磷脂(SL)冷冻保存东佛里生奶绵羊精液的效果。我们在Tris基础稀释液中,添加18%蛋黄为对照组,添加0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%SL设为试验组,检测冷冻精液解冻后的精子活率和顶体完整率。结果显示,添加0.5%、2.5%SL冷冻稀释液稀释的精液,解冻后精子活率和顶体完整率与其他组之间存在显著差异(P<0.05);添加18%蛋黄和1%~2%SL冷冻稀释液稀释的精液,冷冻解冻后精子活率和顶体完整率之间无显著差异(P>0.05);添加18%蛋黄和1.0%~1.5%SL冷冻稀释液稀释后的精液,进行人工授精后母羊的妊娠率与对照组无显著差异(P>0.05)。因此,大豆卵磷脂可以作为冷冻保护剂用于东佛里生奶绵羊精液的冷冻保存,其最佳添加浓度为1~2%(g/L)。

微量冷冻睾丸精子复苏后行卵胞浆内单精子显微注射的临床结局

目的探讨微量冷冻睾丸精子复苏后行卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)的临床结局。方法选取2017年1月至2021年12月于赣州市妇幼保健院接受睾丸组织活检且证实存在存活精子的无精症患者的113个周期资料,依据精子保存方式不同分为A组(61个周期)和B组(52个周期)。A组采用微量冷冻睾丸精子,B组采用新鲜精子。比较两组患者的妊娠结局以及新生儿情况。结果两组患者的获卵数、正常卵成熟率、正常受精率、优质胚胎率、囊胚形成率、妊娠率以及流产率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。两组新生儿的性别、体重、身长及畸形情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论微量冷冻睾丸精子复苏后行卵胞浆内单精子显微注射在保证临床结局良好同时减少反复、不必要的对卵巢与睾丸的刺激。

云南大理地区牛细管冻精生产不同冷冻方法比较

为制定简单易行的牛冻精生产技术路线,实现地方牛品种遗传资源保存,用不同的冷冻方法(液氮熏蒸法和程控冷冻法)对西门塔尔牛和短角牛两个品种牛的冻精生产进行了试验比较。结果显示:对于西门塔尔牛,程控冷冻法的冻后合格率、冻后活力和前进运动精子数均显著高于液氮熏蒸法(P<0.05);对于短角牛,冻后合格率程控冷冻法和液氮熏蒸法之间无显著差异(P>0.05),程控冷冻法的冻后活力和前进运动精子数均显著高于液氮熏蒸法(P<0.05)。牛细管冻精冷冻方法采用程控冷冻法优于液氮熏蒸法。在常规生产中,程控冷冻法基本已经代替液氮熏蒸法,但在一些地方牛品种遗传资源采集中,液氮熏蒸法依然适用。

牛冷冻精液不同有效精子数输精效果的研究

[目的]肉牛种业为肉牛生产发展的基础和前提,种公牛是肉牛业发展的“芯片”,直接关系到生产的质量和效率。为提高优秀种公牛的利用率和区域覆盖率,适当降低每剂量冷冻精液的有效精子数量,同时能够确保其输精受胎率不受影响而进行该研究。[方法]制作含有效精子数分别为8×10^(+6)、4×10^(+6)、2×10^(+6),三组牛冷冻精液,用上述冷冻精液进行输精试验,比较输精效果。[结果]有效精子数为8×10^(+6)、有效精子数为4×10^(+6)、有效精子数为2×10^(+6),三个试验组间其人工输精后受胎率进行了比较。研究结果表明,输精总受胎率差异不显著,降低有效精子数,其输精受胎率未受影响。[结论]降低每剂冷冻精液的有效精子数量(2~8×10^(+6))在适当范围内,其输精受胎率差异不显著。

不同平衡方法对牛细管冻精活力的影响

为制定简单易行的地方牛冻精生产技术路线,实现地方牛品种遗传资源的进一步保护和利用,用不同的降温平衡方法对5头短角牛进行试验比较。试验分为3组,对照组在4℃的低温平衡柜中平衡3~4 h,试验1组预先室温平衡一段时间,再在4℃的低温环境中继续平衡1.5~2 h,试验2组预先4℃低温平衡一段时间,同样于4℃的低温环境中继续平衡1.5~2 h。稀释结束、平衡完成和冷冻保存48 h后测定精子活力。结果显示:①与对照组相比,预先平衡2、3、4、5 h和6 h,试验1组和试验2组平衡后活力和冻后活力无显著变化(P>0.05),试验1组和试验2组相同预平衡时间比较,平衡后活力和冻后活力无显著差异(P>0.05);②试验1组预先室温平衡不同时间比较,平衡后活力和冻后活力无显著性差异(P>0.05),试验2组预先4℃低温平衡不同时间比较,平衡后活力和冻后活力无显著性差异(P>0.05)。由此可见,牛精液异地冷冻保存在环境温度不高于25℃、运输时间不超过6 h的情况下,可以将稀释后精液置于常温环境里进行运输。

体外受精-胚胎移植术中受精方式对新生儿出生缺陷影响的回顾性分析

目的比较不同受精方式是否对新生儿出生缺陷存在影响。方法回顾性分析2010年7月—2020年12月接受体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)治疗并进行了胚胎移植的周期数据,共7372个胚胎移植周期,出生婴儿3265名。按照受精方式分为常规体外受精(in vitro fertilization,IVF)组和卵胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)组,补救ICSI(rescue intracytoplasmic sperm injection,R-ICSI)纳入ICSI组。每组又进一步分为鲜胚移植亚组和复苏移植亚组。比较各组及各亚组间患者平均年龄、体质量指数(BMI)、平均胚胎移植数、临床妊娠率、双胎率、剖宫产率、出生体质量、男女性别比及出生缺陷发生率。结果与IVF组比较,ICSI组的患者平均年龄、BMI和临床妊娠率均低于IVF组,平均胚胎移植数高于IVF组,差异有统计学意义(P<0.05);双胎率、剖宫产率、出生体质量以及男女性别比差异无统计学意义。IVF组内复苏移植亚组患者平均年龄、平均胚胎移植数、双胎率及剖宫产率均低于鲜胚移植亚组,临床妊娠率和出生体质量均高于鲜胚移植亚组,差异有统计学意义(P<0.05);BMI及男女性别比较差异无统计学意义。ICSI组内复苏移植亚组患者平均年龄、平均胚胎移植数低于鲜胚移植亚组,临床妊娠率和出生体质量均高于鲜胚移植亚组,差异有统计学意义(P<0.05);BMI、双胎率、剖宫产率及男女性别比较差异无统计学意义。在3265名新生儿中,共有出生缺陷儿27例,出生缺陷率为0.83%。IVF组与ICSI组、鲜胚移植亚组与复苏移植亚组、男婴与女婴之间出生缺陷率均差异无统计学意义(P>0.05)。出生缺陷与母亲年龄、胚胎移植时期比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论ICSI周期临床妊娠率低于IVF周期,复苏移植周期临床妊娠率及新生儿出生体质量明显高于鲜胚移植周期,ICSI受精方式没有增加新生儿出生缺陷率。

异源精子诱导条斑星鲽雌核发育

用冷冻保存的花鲈精子作为异源精子，采用紫外线（UV）对精子进行照射使其遗传物质失活，然后与卵子进行授精，可以刺激条斑星鲽鱼卵进行雌核发育，在受精后一定时间采用冷休克处理“受精”卵，抑制第二极体排出成功获得了条斑星鲽雌核发育二倍体鱼苗。实验表明，花鲈精子只有经过紫外线照射遗传失活后，才能诱导产生条斑星鲽雌核发育二倍体鱼苗。经过大量实验筛选出诱导条斑星鲽雌核发育的最佳条件为花鲈冷冻精子采用80 MJ/cm2 的紫外线照射，然后与条斑星鲽卵子进行授精，在受精后7~9 min，将受精卵放在-1.0~1.5 ℃海水中进行冷休克处理，持续时间为60~90 min，在此条件下，获得的雌核发育二倍体的相对诱导率达40.68%±7.24%。由于不失活精子与条斑星鲽卵形成的杂交胚只能存活到原肠期，而染色体未被成功加倍的胚胎会由于单倍体的致死效应在孵化前后死亡，所以存活的仔鱼全部为条斑星鲽雌核发育二倍体。采用微卫星标记技术对雌核发育鱼苗进行了分析，证明了雌核发育鱼苗为雌核发育二倍体。首次报道了采用异源冷冻精子诱导条斑星鲽鱼卵进行雌核发育的技术方法，为条斑星鲽性别控制和遗传改良提供了技术手段。

奶牛性控冻精人工授精效果的研究

为研究奶牛性控冻精人工授精效果并合理制定人工授精方案,采用流式细胞仪制备性控冻精,对3 947头健康荷斯坦牛进行人工授精。结果表明：①性控冻精和常规冻精的受胎率、产犊率差异不显著（P〉0.05）,但性控冻精的雌犊率和繁殖率分别达到92.01%和50.03%,对照组仅为51.13%和34.97%,差异极显著（P〈0.01）。②青年牛的情期受胎率达到55.25%,极显著高于经产牛（P〈0.01）;青年牛的产犊率达到98.31%,显著高于经产牛（P〈0.05）;青年牛的繁殖率为51.84%,经产牛为42.12%,存在极显著差异（P〈0.01）。③采用第1次人工授精后10-11 h重复授精1次,每次1支性控冻精的授精方案,其情期受胎率为55.17%,繁殖率达到55.81%,同其他方案相比,差异极显著（P〈0.01）。应用性控冻精进行人工授精可以显著提高母牛的繁殖效率。

鲈鱼冷冻精子诱导半滑舌鳎胚胎发育

半滑舌鳎是分布在我国黄、渤海的特有鱼类，雌鱼明显具有较雄鱼生长快的特点，利用雌核发育方法诱导产生半滑舌鳎超雌鱼，通过与正常雄鱼交配，最终可培育生长速度快、个体大的全雌性后代，对于提高养殖效益具有重要的意义。为此利用冷冻保存的异源鲈鱼精子诱导半滑舌鳎卵产生雌核发育二倍体、单倍体、杂交胚胎，利用同源精子受精产生普通二倍体，在Olympus显微镜下对它们的胚胎发育进行了观察比较。冷冻解冻的鲈鱼精子，在1000μj／cm^2紫外线下照射0．2～1min，诱导半滑舌鳎卵受精，在受精后2～5min将卵置于2～5℃的水浴冷休克20min，获得了雌核发育的胚胎和鱼苗，在21．7～23．6℃水温中，雌核发育胚胎经过2781min孵化出膜。普通胚胎在21．7～23．6℃水温下，经2621min孵化出膜。经紫外线灭活处理的鲈鱼精子诱导半滑舌鳎卵，但不经过冷休克获得的单倍体胚胎，具有明显的单倍体综合症，发育至1949min陆续死亡。鲈鱼精子与半滑舌鳎卵杂交受精，胚胎不能正常发育，相当于胚孔封闭期后全部死亡。实验证明，鲈鱼冷冻精子可刺激半滑舌鳎卵雌核发育。

大西洋牙鲆冷冻精子×褐牙鲆卵杂交胚胎的发育及胚后发育

利用大西洋牙鲆冷冻精子与褐牙鲆卵授精，培育出了生长健康的杂交鱼苗。并对杂交后代的胚胎发育、胚后发育和不同温度下的生长特征进行了研究。利用OLIMPUS显微镜连续观察和描述了冷冻精子受精杂交胚胎的发育，在水温15～17．1℃，其受精卵经过卵裂、囊胚、原肠胚、胚孔封闭、肌节胚、尾芽胚、心跳胚、出膜胚等时期的发育，经历65h57min完成胚胎发育进入胚后发育，发现胚胎搐动15min后心脏开始跳动。利用OLIMPUS解剖镜每天观察和记录一次鱼苗的生长形态，并测定其体全长；将杂交鱼苗的胚后发育划分为卵黄囊吸收期（出膜后1-6d）、变态前期（出膜后7～25d）、变态期（出膜后25～30d）和变态后生长期（出膜30d以后）4个时期。对16～17℃、18～19℃、20℃和22～23℃4个温度环境下胚胎发育的研究结果显示，杂交胚胎宜于在16～20℃的水温下发育，鱼苗在22～23℃孵化出膜后2～3d大量死亡。对18—19℃、20℃、22℃和24℃4个温度下稚鱼的生长研究结果显示，变态期稚鱼在22—24℃水温下饲养时变态和生长速度较18-20℃快。

不同浓度乙二醇和甘油对犬精液冷冻效果的影响

研究在常规冷冻稀释液中分别添加不同浓度的乙二醇作为保护剂,并与甘油作为冷冻保护剂进行对比,以优化犬精液冷冻方案,提高解冻后精子质量。在犬的常规精液冷冻稀释液中分别添加不同浓度的乙二醇(2%,4%,6%,8%,10%),经细管冷冻、解冻后通过分别评价其精子的活率、顶体完整率、畸形率等来筛选其最佳添加浓度。结果表明:添加浓度为6%的乙二醇时,冷冻后精子活力为0.37,顶体完整率为43%,显著好于其他处理组(P<0.05);添加浓度为4%的乙二醇时,冷冻后精子畸形率为15%,略优于其他处理组。6%浓度的乙二醇可代替甘油作为冷冻保护剂,且对犬的冷冻效果有显著的促进作用。

人体精子冷冻前后超微结构的变化

将１０例正常生育男性的精液标本进行冷冻保存、复温后电镜观察。结果，冷冻精子复温后精子超微结构发生了不同程度的改变，其主要改变为精子顶体肿胀，顶体内、外膜分离，外膜形成波浪状皱褶，有的核局部出现凹陷，线粒体改变呈基质密度降低，结构模糊等。但是，精子基本结构保持完整。研究结果表明：冷冻精子超微结构改变的主要原因是在冷冻过程中，由于冰晶形成的影响，水分内移，细胞肿胀，因而造成其活动率的明显下降。但并不影响授精能力。

稀释液中分别添加不同浓度咖啡因或谷胱甘肽对犬精液冷冻效果的影响

研究在冷冻稀释液中分别添加不同浓度咖啡因或谷胱甘肽对犬精液冷冻效果的影响,以优化犬精液冷冻方案,提高解冻后精子质量。在犬的常规精液冷冻稀释液中分别添加不同浓度咖啡因和谷胱甘肽,经细管冷冻,解冻后通过分别评价其精子的活率、形态(包括顶体完整率和畸形率等)等来筛选其最佳添加浓度。经解冻后的精液质量评价如下:(1)向稀释液中添加5mmol/L咖啡因对解冻后精子活率明显改善,为0.33±0.04(P<0.01),显著高于其他组;当添加浓度为12.5mmol/L时,活率仅为0.230±0.04(P<0.01),显著低于对照组;添加浓度为5mmol/L时精子畸形率最低,为0.174±0.036(P<0.01),较其他组差异显著。(2)向稀释液中添加谷胱甘肽5mmol/L,精子活率为0.31±0.054,顶体完整率为0.438±0.022,畸形率仅为0.162±0.025,均优于其他浓度组,差异显著(P<0.01)。在犬的精液冷冻液中分别添加适量浓度的咖啡因或谷胱甘肽均对冷冻效果有显著的促进作用。