膈下逐瘀汤逆转裸鼠移植瘤MDR-1表达的实验

目的探讨膈下逐瘀汤对HCT-8/5-Fu裸鼠移植瘤多药耐药基因MDR-1表达的影响。方法 MTT法确认人结肠腺癌细胞HCT-8/5-Fu的耐药性及对其他化疗药VCR、VP-16、DDP的交叉耐药性后,将耐药细胞HCT-8/5-Fu接种于BABL/c无胸腺裸鼠右腋下,建立耐药性稳定的裸鼠移植瘤模型。移植瘤裸鼠模型随机分为四组:空白对照组(对照组)、5-Fu组、膈下逐瘀汤组(DSED组)、膈下逐瘀汤+5-Fu组(DSED+5-Fu组)。其中对照组予0.9%氯化钠溶液灌胃给药,其余组予腹腔注射5-Fu和(或)中药灌胃。连续给药14天后颈椎脱臼处死裸鼠。观察各组裸鼠移植瘤生长情况;RT-PCR法检测各瘤组织MDR-1 mRNA表达。结果膈下逐瘀汤+5-Fu组、膈下逐瘀汤组、5-Fu组对裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为54.9%、32.4%和7.0%(P<0.01)。RT-PCR结果显示膈下逐瘀汤+5-Fu组及膈下逐瘀汤组MDR-1 mRNA的表达量与对照组相比明显下降(P<0.01),5-Fu组与对照组相比MDR-1 mRNA表达量略有升高,但差异无统计学意义。结论膈下逐瘀汤对大肠癌多药耐药裸鼠移植瘤生长具有抑制作用,其机制可能与膈下逐瘀汤通过逆转耐药移植瘤多药耐药基因表达,增强肿瘤细胞对药物的敏感度。

开窍通腑汤对MCAO大鼠内皮素-1和降钙素基因相关肽含量的影响

目的:通过CGRP和ET-1探讨开窍通腑汤的活血及神经元的保护作用。方法:采用栓线法复制大鼠大脑中动脉缺血3h再灌注模型,放射免疫法观察MCAO后不同时间点各组大鼠血清ET-1与CGRP的变化。结果:开窍通腑汤有提高CGRP水平以及拮抗ET-1的作用,促使ET-1/CGRP的调节平衡,能使ET-1水平下降,CGRP释放增多,能减少脑动脉痉挛,改善脑组织缺血缺氧,保护脑细胞及血管内皮细胞,从而达到防治脑缺血再灌注损伤的目的。

通腑理肺汤结肠透析联合纤维支气管镜肺泡灌洗对肺炎合并脓毒症患者HMGB-1、IL-10水平影响

目的探讨通腑理肺汤结肠透析联合纤维支气管镜肺泡灌洗对肺炎合并脓毒症患者高迁移率蛋白(HMGB-1)、白细胞介素(IL)-10水平的影响。方法将90例患者分为治疗组A、治疗组B、对照组,每组30例。治疗组A在常规治疗基础上给予通腑理肺汤结肠透析联合纤维支气管镜肺泡灌洗治疗,治疗组B在常规治疗基础上给予温水结肠透析联合纤维支气管镜肺泡灌洗治疗,对照组在常规治疗基础上给予温水结肠透析治疗。于治疗前,治疗后1周末、2周末留取肺泡灌洗液检测HMGB-1、IL-10水平。结果 HMGB-1水平:3组患者治疗前差异无统计学意义(P>0.05);治疗后1周末,治疗组A明显低于治疗组B及对照组;治疗后2周末,治疗组A、治疗组B水平均低于对照组,且治疗组A降低最为明显,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-10水平:3组患者治疗前差异无统计学意义(P>0.05);治疗后1周末、2周末3组患者均有不同程度升高,治疗组A、治疗组B均高于对照组,且治疗组A水平升高最为明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通腑理肺汤结肠透析联合纤维支气管镜肺泡灌洗能显著降低患者HMGB-1水平,提高IL-10水平,调节患者促炎/抗炎因子的平衡,减轻炎症反应和组织损伤,改善患者预后。

鞘氨醇激酶1抑制剂联合5-FU对胃癌MGC-803细胞的作用及其机制

目的探讨鞘氨醇激酶1(SphK1)抑制剂二甲基鞘氨醇(DMS)与5-FU联用对胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法体外常规培养胃癌MGC-803细胞,采用MTT法检测不同浓度DMS和5-FU单药及两药联合对MGC-803细胞增殖的抑制情况;流式细胞术检测其细胞周期分布和凋亡率;Western blot法检测药物作用后MGC-803细胞中SphK1、TS、DPD、NF-κB p65和bcl-2蛋白表达的变化。结果不同浓度DMS和5-FU单药对MGC-803细胞的增殖均有抑制作用(P<0.05),且呈浓度和时间依赖性;两药联合对MGC-803细胞的增殖抑制作用显著高于DMS和5-FU单药组,差异具有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,DMS单药作用MGC-803细胞后其细胞周期的各期比例无明显变化(P>0.05);而不同浓度DMS和5-FU单药作用后MGC-803细胞的凋亡率显著增加(P<0.05),且两药联合凋亡率明显高于DMS和5-FU单药组(P<0.05)。DMS单药组和联合组SphK1、NF-κB p65和Bcl-2蛋白表达量均明显下调,而TS和DPD蛋白表达量无明显变化。结论 DMS能够抑制胃癌MGC-803细胞的增殖并诱导凋亡,与5-FU联用表现出良好的协同作用,其机制可能与SphK1、NF-κB p65、bcl-2蛋白表达下调相关。

斑贞1号、川芎嗪和5-氟尿嘧啶联合对人胃癌细胞肺耐药蛋白基因表达影响

目的探讨斑贞1号、川芎嗪(TMP)和5-氟尿嘧啶(5-FU)联合逆转人胃癌细胞系SGC-7901/ADR与LRP表达的相关性。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)比较人胃癌细胞SGC-7901/ADR细胞在单纯5-FU和5-FU联合斑贞1号及TMP处理组肺耐药蛋白(LRP)mRNA的表达情况。结果 5-FU组与阴性对照组比较,LRPmRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);而5-FU联合斑贞1号及TMP处理组LRP mRNA表达量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论斑贞1号、TMP和5-FU联合逆转SGC-7901/ADR细胞耐药性可能与LRP基因相关,为当前胃癌的治疗提供了新的理论依据。

FUS1基因原核表达质粒构建与诱导表达

目的构建FUS1基因原核表达质粒,在大肠杆菌[Rosetta(DE3)2plys]中高效表达重组蛋白。方法采用PCR技术从人脐带来源的间充质干细胞中扩增出FUS1基因,并将其接入pET-32a(+),经PCR、测序鉴定后,转化Rosetta(DE3)2plys细菌,并用IPTG诱导表达。结果经过PCR、测序鉴定,克隆了pET32a(+)-FUS1重组子;在低浓度IPTG(25μmol/L)诱导3h,RosettaDE3可以高效地表达重组蛋白,约占细菌总蛋白的40%。结论成功地克隆到FUS1基因,并使其在原核系统中高效表达。

回医扎里奴思方对痰热腑实证脑缺血再灌注大鼠脑内细胞间黏附分子1和血管间黏附分子1表达的影响

目的探讨扎里奴思方对痰热腑实证脑缺血再灌注大鼠脑内细胞间黏附分子(ICAM)-1和血管间黏附分子(VCAM)-1表达的影响。方法将60只雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、扎里奴思方组,每组15只;除假手术组外,其余各组均给予高脂喂养4 w后,予10%的自体粪便1 ml/100 g灌胃,1次/d,连续3 d,造成痰热腑实证模型,再采用线栓法制备大脑中动脉阻塞(MCAO)模型;大鼠给药剂量尼莫地平组10.8 mg/kg、扎里奴思方组1.54 g/ml,制备MCAO模型前3 d灌胃给药。大鼠分别于缺血再灌注后1、3、7 d取脑,取材前进行脑组织含水量测定,采用免疫组化法检测缺血侧海马区ICAM-1、VCAM-1的表达,RT-PCR检测ICAM-1 mRNA和VCAM-1 mRNA的表达。结果与假手术组比较,模型组脑组织含水量增高(P<0.01);ICAM-1、VCAM-1阳性细胞,ICAM-1 mRNA、VCAM-1 mRNA表达明显增高(P<0.01)。与模型组比较,尼莫地平组和扎里奴思方组脑组织含水量降低;ICAM-1、VCAM-1阳性细胞数减少,ICAM-1 mRNA、VCAM-1 mRNA表达降低(P<0.01)。与尼莫地平组比较,扎里奴思方7 d组脑组织含水量降低,ICAM-1、VCAM-1阳性细胞数减少,ICAM-1 mRNA、VCAM-1 mRNA表达降低(P<0.05)。结论扎里奴思方对痰热腑实证脑缺血再灌注大鼠脑神经元起保护作用,其机制可能与抑制大鼠脑内ICAM-1和VCAM-1的表达有关。

班贞1号和TMP逆转胃癌细胞SGC-7901/ADR对5-FU耐药性机制研究

目的:探讨班贞1号和川芎嗪(TMP)联合逆转人胃癌细胞系SGC-7901/ADR对5-FU耐药性与bcl-2表达的相关性。方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)比较SGC-7901/ADR细胞在单纯5-FU和5-FU联合中药班贞1号及TMP处理组bcl-2 mRNA的表达情况。结果:5-FU组与阴性对照组相比,bcl-2 mRNA表达无显著性差异(P>0.05),而5-FU联合中药班贞1号及TMP处理组bcl-2 mRNA表达量明显降低(P<0.05)。结论:班贞1号和TMP联合逆转人胃癌细胞对5-FU耐药性可能与抗调亡分子bcl-2相关,为中西药联合治疗胃癌奠定一定的理论基础。

S-1联合顺铂不能提高晚期胃癌的生存率

1文献来源 Ajani JA,Rodriguez W,Bodoky G,et al.Multicenter phase Ⅲ comparison of Cisplatin/S-1 with Cisplatin/Infusional Fluorouracil in advanced gastric or gastroesophageal adenocarcinoma study：The FLAGS trial[J].J Clin Oncol,2010,28（9）：1547-1553.

survivin反义核酸增强PANC-1细胞对5-Fu敏感性的研究

目的研究survivin反义核酸诱导胰腺癌细胞株PANC1的凋亡和增强对5Fu敏感性的影响。方法我们应用构建的survivin反义核酸真核表达载体电转染PANC1细胞,RTPCR检测survivinmRNA表达,细胞计数和MTT实验测定转染后细胞对5Fu敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果survivin反义核酸可抑制PANC1细胞中survivinmRNA的表达,并能抑制PANC1细胞生长,提高PANC1对5Fu敏感性,流式细胞仪检测凋亡率明显增加。结论survivin反义核酸能增强5Fu诱导的PANC1细胞凋亡,联合survivin反义核酸和5Fu可以改善胰腺癌的治疗效果。

千金藤碱对结肠癌细胞5-氟尿嘧啶耐药性的逆转作用和对HO-1和NQO1表达的影响

目的:探讨千金藤碱(Cepharanthine,CEP)逆转人结肠癌耐药细胞株Lovo/5-FU对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的耐药性以及对HO-1和NQO1表达的影响。方法:采用药物浓度梯度递增法诱导建立结肠癌耐药细胞亚系LoVo/5-FU;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测千金藤碱和化疗药物对结肠癌细胞的细胞毒性;RT-PCR和Western blot技术检测NQO1和HO-1基因的mRNA和蛋白表达水平。结果:LoVo/5-FU细胞对包括5-FU在内的4种化疗药物产生耐药性,其中对5-FU耐药性最高,是LoVo细胞的18.82倍;千金藤碱对LoVo和LoVo/5-FU细胞增殖均有抑制作用,其浓度超过20-25μg mL-1时最为明显,但是对2种细胞的抑制效果无明显差别(P>0.05);千金藤碱(2.5-10.0μg mL-1)可降低LoVo/5-FU细胞5-FU的IC50值(P<0.05-0.01),在此浓度范围内,IC50值降低的程度与剂量成正相关;LoVo/5-FU细胞中HO-1和NQO1的mRNA和蛋白表达水平明显高于LoVo细胞(P<0.05-0.01),10.0μg mL-1千金藤碱与5-FU联合处理后,LoVo/5-FU细胞中两个基因的表达水平明显降低(P<0.05-0.01)。结论:千金藤碱可抑制结肠癌细胞增殖,增加结肠癌耐药细胞株Lovo/5-FU对5-FU的敏感性,原因可能与其抑制结肠癌细胞中HO-1和NQO1的表达水平有关。

斑贞1号联合TMP、5-FU对人胃癌细胞CDX2基因表达影响

目的探讨斑贞1号联合TMP、5-FU逆转人胃癌细胞系SGC-7901/ADR与CDX2相关性。方法从2015年6—12月在包头医学院第一附属医院中心实验室进行SGC7-901/ADR细胞培养,设1空白对照组、25-FU组、3斑贞1号组、45-FU+斑贞1号组、55-FU+斑贞1号+TMP组观察细胞毒性,选取各个药物组作用浓度分别提取总m RNA,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)监测人胃癌细胞SGC-7901/ADR细胞在不同药物组的尾型同源基因2(caudal-re lated hom e-odom aintranscription factor 2,Cd X2)m RNA的表达情况。结果对照组CDX2 m RNA表达量为(2.01±0.26),5-FU组CDX2m RNA表达量为(1.94±0.24),5-FU组与阴性对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),而5-FU联合斑贞1号及TMP处理组CDX2 m RNA表达量为(0.44±0.07),与其他组明显降低比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论斑贞1号联合TMP及5-FU逆转人胃癌SGC-7901/ADR细胞耐药性可能与CDX2基因相关。

通腑理肺汤对脓毒症肠屏障损伤肠组织Claudin-1 mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨通腑理肺汤(TFL)对脓毒症大鼠肠组织Claudin-1 mRNA及蛋白表达的影响。方法 SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、3.6g/kg TFL治疗组、7.2g/kg TFL治疗组,除假手术组只暴露盲肠外,其余各组采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制作脓毒症大鼠模型。3.6g/kg TFL治疗组、7.2g/kg TFL治疗组通过灌服接受通腑理肺汤煎剂,剂量分别为3.6及7.2g/kg体重,假手术组和模型组每天通过灌服给予蒸馏水(10ml/kg),7天后处死大鼠,剥离其肠组织,采用实时定量PCR(RT-qPCR)法检测肠组织紧密连接Claudin-1 mRNA基因,Western Blot检测Claudin-1蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠肠组织中Claudin-1 mRNA基因及蛋白表达均显著下降(P<0.05)。与模型组相比,给药组大鼠肠组织中Claudin-1 mRNA、蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。结论通腑理肺汤可通过上调脓毒症模型大鼠肠组织紧密连接蛋白Claudin-1 mRNA及蛋白的表达,改善肠上皮细胞间的紧密连接作用,修复脓毒症造成的肠屏障损伤。

沉默MALAT1上调miR-1表达增加胆囊癌对5-FU的敏感性

目的:明确MALAT1调控miR-1影响胆囊癌(gallbladder carcinoma,GBC)细胞对5-FU敏感性的机制。方法:qRT-PCR检测MALAT1和miR-1在GBC细胞GBC-SD、NOZ和SGC-996中的表达;MTT法和流式细胞术检测正常和5-FU处理的GBC细胞的增殖和凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测MALAT1和miR-1的靶向关系。结果:qRT-PCR检测结果显示,与人正常胆囊上皮细胞H69相比,MALAT1在GBC细胞GBC-SD、NOZ和SGC-996中表达上调;双荧光素酶报告基因实验结果显示,MALAT1可靶向调控miR-1,负性调节miR-1的表达;MTT法和流式细胞术检测结果显示,敲低MALAT1抑制GBC细胞的增殖和诱导凋亡,增加GBC细胞对5-FU的敏感性,过表达miR-1结果与敲低MALAT1一致;沉默MALAT1可部分逆转敲低miR-1 inhibitor对GBC细胞活力、凋亡以及对5-FU药物敏感性的影响。结论:沉默MALAT1上调miR-1表达,增加GBC细胞对5-FU的敏感性。

跨文本阅读:《以赛亚书》2章1-4节与杜甫诗篇

通过对《以赛亚书》2:1-4和杜甫诗篇这两个不同文本的"跨越"解读,探讨了"和平"对于构建"和谐社会"的重要性问题。"和谐"不仅包含了人与人之间、种族与种族之间、国与国之间的"止息战争"的"和平"层面,还包括了人与自然之间敌对状态的结束,个体的心灵、灵魂层面的升华。跨文本阅读《以赛亚书》和杜甫诗篇,会帮助我们更加全面、深刻地理解人类追求和平与"和谐观"的丰富性、复杂性与多层面性。

通腑醒神液不同给药途径对脑出血大鼠脑组织HO-1mRNA、HSP_(70)表达的影响

目的探讨通腑醒神胶囊灌胃与灌肠对脑出血大鼠不同时间脑内血红素加氧酶-1(HO-1)mRNA和热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法用Ⅶ型胶原酶诱导大鼠脑出血模型,采用原位杂交与免疫组化ABC法测定不同部位脑组织HO-1mPLNA与HSP70的表达。结果 在术后第3天、第5天、第7天手术侧及对侧的皮质、纹状体中均有HO-lmRNA、HSP70阳性细胞的表达,以第5天表达最多;而经通腑醒神胶囊灌胃与直肠给药治疗后,各时间点HO-1mRNA、HSP70阳性细胞的表达均较模型组明显增多,以直肠给药组阳性细胞数增多更为显著。结论通腑醒神胶囊灌肠与灌胃治疗脑出血均能增强脑内HO-1mRNA、HSP70的表达,而以灌肠组第5天表达更为显著,可能因为药物经直肠吸收迅速,胃内消化酶、肝脏的首过效应对有效成分破坏减少,从而增加了药物的血药浓度,起效快、疗效高,诱导了脑出血后内源性保护机制的启动,提示通腑醒神胶囊灌肠比口服对脑出血急性期的治疗更为有效,为中药直肠给药的疗效评价提供了实验依据。

血红素氧合酶-1对人胃癌SGC7901细胞5-氟尿嘧啶化疗敏感性的影响

目的:体外观察血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)对人胃癌细胞SGC79015-氟尿嘧啶(5-FU)化疗敏感性的影响及其可能的机制。方法:应用不同浓度锌原卟啉(ZnPP)、氯化血红素(Hemin)单独或联合5-FU作用于人胃癌SGC7901细胞不同时间,四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察药物对细胞生长抑制作用;Western blot分析细胞HO-1蛋白表达变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;活性氧(ROS)检测试剂盒分析其凋亡机制。结果:ZnPP和5-FU均可明显抑制人胃癌SGC7901细胞生长,呈剂量依赖性;5-FU联用ZnPP(10μmol/L)与单用药相比,明显提高了细胞生长抑制率和凋亡率(P<0.05),联用Hemin(10μmol/L)则明显降低细胞生长抑制率和凋亡率(P<0.05);人胃癌SGC7901细胞中可见HO-1表达,单用5-FU或Hemin后均能使其表达增强,联用ZnPP可逆转此现象;单用5-FU与对照组比较,细胞内ROS活性明显增高,联用后ZnPP可进一步提高细胞内ROS活性(P<0.05),而联用Hemin明显降低细胞内ROS活性水平(P<0.05)。结论:ZnPP抑制HO-1表达,能够增强人胃癌SGC7901细胞对5-FU化疗敏感性,这一作用可能与增加细胞内ROS活性有关。

斑贞1号、TMP和5-FU联合对人胃癌细胞ERCC1表达的影响

目的探讨斑贞1号、川芎嗪(TMP)和五氟尿嘧啶(5-FU)联合逆转人胃癌细胞系SGC-7901/ADR与ERCC1表达的影响。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),监测人胃癌细胞SGC-7901/ADR细胞在5-FU组、斑贞1号组、斑贞1号+5-FU组、斑贞1号+5-FU+TMP组切除修复交叉互补基因1(ERCC1)m RNA的表达情况。结果 5-FU组与阴性对照组比较,ERCC1 m RNA表达差异无统计学意义(P>0.05),而5-FU联合中药斑贞1号及TMP处理组ERCC1m RNA表达量明显升高(P<0.05)。结论斑贞1号、TMP和5-FU联合逆转SGC-7901/ADR细胞耐药性可能与ERCC1基因相关,为当前胃癌的治疗提供了新的理论依据。

参附注射液对慢性充血性心力衰竭患者血清CA125及肌钙蛋白I水平影响

目的探讨参附注射液对慢性充血性心力衰竭患者血清CA125及肌钙蛋白I水平影响。方法选取慢性充血性心力衰竭患者61例,随机分为对照组与研究组。对照组29例,采用常规治疗;研究组32例,在常规治疗基础上联合参附注射液治疗,7天为1个疗程,治疗2个疗程。治疗前后检测患者心功能,及血清NT-proBNP、cTnI、CA125水平。结果与治疗前比,2组治疗后LVDD、SV下降,LVEF上升(P<0.05);与对照组相比,研究组LVDD、SV较低,LVEF较高(P<0.05)。与治疗前比,2组治疗后NTproBNP、cTnI及CA125水平均下降;与对照组相比,研究组NT-proBNP和cTnI、CA125水平较低(P<0.05)。结论参附注射液能显著降低慢性充血性心力衰竭患者血清CA125及肌钙蛋白I水平。

Beclin 1蛋白增强三阴性乳腺癌细胞对5-Fu敏感度的研究

目的探讨Beclin 1蛋白与三阴性乳腺癌细胞对5-Fu敏感度的关系。方法应用慢病毒介导p Len O-GTP-BECN1表达载体稳定转染至BT-549细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞,设立对照组。使用不同浓度5-Fu处理各组细胞,MTT法比较细胞对5-Fu的敏感度;流式细胞术和Hoechst33342实验检测细胞凋亡情况;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-8表达情况。结果成功构建稳定表达Beclin 1蛋白的BT-549细胞株。p Len O-GTP-BECN1组对5-Fu敏感度显著高于其他两组;5-Fu作用48 h后,p Len O-GTP-BECN1组的IC50为(3.54±0.20)μg/ml,显著低于空白载体p Len O-GTP组(14.45±1.81)μg/ml和空白组(79.40±8.34)μg/ml(F=207.902;P<0.00)。5-Fu作用前,p Len O-GTP-BECN1组凋亡率为(12.14±0.76)%,同p Len O-GTP组(13.57±1.04)%和空白组(13.75±1.29)%(F=2.096;P=0.204)之间差异并无统计学意义;5-Fu作用48 h后,p Len O-GTP-BECN1组凋亡率为(51.01±3.26)%,显著高于p Len O-GTP组(42.17±4.6)%和空白组(38.42±2.93)%(F=9.32;P<0.01);接受5-Fu处理后,p Len O-GTP-BECN1组细胞核凋亡特征改变较其他两组更明显。5-Fu作用后,p Len O-GTP-BECN1组细胞Caspase-3相对表达量为(0.57±0.0028),显著高于p Len O-GTP组(0.42±0.010)和空白组(0.30±0.046)(F=46.134;P<0.01);p Len O-GTP-BECN1组细胞Caspase-8相对表达量为(0.44±0.0038),显著高于p Len O-GTP组(0.18±0.0095)和空白组(0.27±0.00060)(F=1006.757;P<0.00)。结论Beclin 1显著提高三阴性乳腺癌细胞对5-Fu的敏感度,其中促进凋亡发生可能是重要机制之一。