全人源抗Trop-2 IgG的制备及对卵巢癌细胞生物特性的影响

目的 :构建全人源抗人滋养层细胞表面抗原2(human trophoblast cell surface antigen 2,Trop-2)抗体Ig G真核表达系统,表达并纯化该抗体,并检测其对卵巢癌细胞生物特性的影响。方法:构建全人源抗Trop-2抗体Ig G的重组表达载体;在293Free Style(293F)真核表达体系中表达并纯化该抗体。使用SDS-PAGE、ELISA、亲和力测定、免疫荧光等方法鉴定该抗体并分析其免疫学活性;使用cell counting kit-8(CCK-8)法、划痕实验、Transwell实验和细胞凋亡实验分析其对卵巢癌细胞特性的影响。结果:成功制备出全人源抗Trop-2 Ig G;经多种方法检测,该抗体能与Trop-2蛋白特异性结合;对表达Trop-2的卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡有明显影响。当抗体浓度为400μg/m L时,卵巢癌细胞HO8910的生存率仅为55.95%(P<0.01),划痕愈合率仅为24.71%(对照组为70.80%,P<0.01),侵袭细胞数是对照组的32.11%(P<0.05),细胞凋亡率是对照组的2倍(P<0.05)。结论 :全人源抗Trop-2 Ig G可特异性识别卵巢癌细胞表面的Trop-2蛋白,对卵巢癌细胞的恶性行为具有明显的抑制作用。因此,全人源抗Trop-2 Ig G在卵巢癌的靶向治疗中有潜在应用价值。

人源抗TLR4抗体IgG的制备及其中和特性分析

目的 :构建全人源抗人Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)抗体轻、重链表达载体,在293Free style细胞中表达并纯化,分析该重组全分子抗体的生物学活性。方法:设计引物扩增全人源抗人TLR4抗体可变区编码序列,将其分别克隆到真核表达载体p FUSE-CHIg-h G1和p FUSE-CLIg-hl中,共转染至293Free style细胞,表达产物用protein A亲和层析柱纯化。应用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、Western blot、免疫共沉淀、质谱分析及蛋白芯片检测抗体的免疫学特性,并检测该抗体对人单核细胞淋巴瘤THP1细胞肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α表达的影响。结果:成功构建全人源抗人TLR4抗体真核表达载体,获得的全分子抗TLR4抗体保持了与抗原的结合活性,对THP-1细胞TNF-α表达的抑制率可达85.7%。结论:重组全人源抗TLR4 Ig G保持了与TLR4的结合特异性,并具有明显的中和作用,对炎症治疗具有潜在的应用价值。