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Construction of chimeric inducible promoters by elicitors of rice fungal blast pathogen and their expression in transgenic rice 被引量:5
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作者 LU Huafei MING Xiaotian +4 位作者 QU Lijia LIU Meihua LI Jing GU Hongya CHEN Zhangliang 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2000年第3期242-246,共5页
The promoter fragments of wheat GstA1 and potato Gst1 have been amplified by PCR, cloned and fused respectively to the minimal promoter sequence of rice actin gene (Act1)) and its 5’ untranslated leader sequence toge... The promoter fragments of wheat GstA1 and potato Gst1 have been amplified by PCR, cloned and fused respectively to the minimal promoter sequence of rice actin gene (Act1)) and its 5’ untranslated leader sequence together with GUS. The constructs with 2 chimeric promoters (WGA and PGA) have been transferred into rice in order to analyze their inducibility patterns in transgenic rice plants. The results show that: WGA and PGA are both inducible by elicitors of Pyricularia oryzae in transgenic rice cells; the intron I of rice Act1 gene is important for the heterogenic expression of monocot and dicot promoter elements in rice; and the Act1 minimal promoter and its 5’untranslated leader sequence produced low level background expression in rice. 展开更多
关键词 pathogen-inducible CHIMERIC promoter gene EXPRESSION and regulation transgenic RICE RICE fungal blast disease.
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Obtaining transgenic rice resistant to rice fungal blast disease by controlled cell death strategy 被引量:2
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作者 MAO Shengji, GU Hongya, QU Lijia & CHEN Zhangliang National Key Laboratory of Protein Engineering and Plant Genetic En-gineering, College of Life Sciences, Peking University, Beijing 100871, China Correspondence should be addressed to Qu Lijia (e-mail: qulj@plum. lsc.pku.edu.cn) 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2003年第16期1753-1759,共7页
The strategy of the two-component system, composed of Barnase and Barstar which encode RNase and a specific inhibitor to the RNase respectively, is adopted to obtain transgenic rice resistant to rice fungal blast dise... The strategy of the two-component system, composed of Barnase and Barstar which encode RNase and a specific inhibitor to the RNase respectively, is adopted to obtain transgenic rice resistant to rice fungal blast disease. In this study, two chimeric promoters, induced by rice blast fungus pathogen (Magnaporthe grisea), are fused with Barnase respectively to construct two plant expression vec-tors, pWBNBS and pPBNBS together with the Barstar driven by CaMV 35S promoter. The resistance of the transgenic rice lines to rice blast fungus disease and rice blight disease are evaluated. The results show that (1) the expression of Barnase is induced in rice leaves when inoculated with the spores of Magnaporthe grisea; (2) the induced expression level of Barnase surpasses the level of Barstar, which elicits a similar hypersensitive response (HR) in the leaves, and the transgenic plant shows high resistance to the rice fungal blast disease; and (3) transgenic rice plants also show obvious re-sistance to rice bacterial blight disease. Taken together, these results suggest that the transgenic rice plants harboring this two-component system acquire relatively broad spectrum resistance against pathogens, especially high resistance to rice fungal pathogen. 展开更多
关键词 转基因水稻 水稻病害 抗病性 受控细胞死亡 致病病原体 基因工程 核糖核酸酶
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构巢曲霉与30种丝状子囊菌的基因组比较 被引量:3
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作者 曾昭清 赵福永 +1 位作者 Tom Hsiang 余知和 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1195-1202,共8页
为探讨丝状子囊菌的序列同源性,文章利用公开发表的真菌基因组序列构建本地基因组数据库,设置E值统计阈值为0.1,将构巢曲霉(Aspergillus nidulans)基因组的10560个注释基因分别与30种丝状子囊菌基因组比较。结果表明,同源匹配基因数量... 为探讨丝状子囊菌的序列同源性,文章利用公开发表的真菌基因组序列构建本地基因组数据库,设置E值统计阈值为0.1,将构巢曲霉(Aspergillus nidulans)基因组的10560个注释基因分别与30种丝状子囊菌基因组比较。结果表明,同源匹配基因数量的多少可反映子囊菌之间的进化关系。构巢曲霉基因组的924个基因与这30种子囊菌基因组同时存在匹配序列,其中E值在10-5~0.1、10-30~10-5、10-100~10-30、0~10-100范围内都存在匹配序列的基因分别为6个、3个、6个和6个。ClustalX多序列比对分析显示,E值10-5~0.1的6组序列和E值10-30~10-5的3组序列均显示变异性过大而E值0~10-100的6组序列过于保守,E值介于10-100~10-30之间的6组同源序列可用于本研究的31种子囊菌系统学分析。 展开更多
关键词 Standalone blast E值 真菌基因组:同源性
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水稻抗病相关基因的分离克隆和功能鉴定 被引量:4
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作者 丁新华 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期121-123,共3页
水稻白叶枯病和稻瘟病分别是由白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)和稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)引起,是世界水稻生产中的两大重要病害,造成的损失巨大。通过改良水稻自身防御体系来控制病害,是一种既经济又绿色的... 水稻白叶枯病和稻瘟病分别是由白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)和稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)引起,是世界水稻生产中的两大重要病害,造成的损失巨大。通过改良水稻自身防御体系来控制病害,是一种既经济又绿色的方法。鉴定水稻抗病相关基因,研究水稻抗病机理对改良水稻有着重要的理论意义和应用前景。植物激素生长素诱导的信号通常被认为能调节植物的生长和发育。本研究报道的水稻基因GH3-8是1个生长素反应基因,在依赖于生长素的发育中发挥功能,同时也调节不依赖于水杨酸和茉莉酸的信号路径的抗病反应。白叶枯病菌诱导水稻至少在被侵染部位合成生长素,而生长素继而诱导水稻大量合成松弛细胞壁的蛋白质——伸展蛋白(α-和β-expansins),破坏细胞壁对病原菌的先天屏障作用,以利病原菌在水稻中生长繁殖。在携带有抗病基因Xa21或Xa26抗病水稻品种中,病原菌引起的水稻感染部位生长素的合成可诱导水稻快速合成IAA酰胺合成酶GH3-8。GH3-8通过催化IAA-氨基酸的合成抑制生长素的作用,从而阻止细胞壁的松弛,增强植物对病原菌的自身免疫功能。超量表达GH3-8基因增强水稻对白叶枯菌的抗性,同时也延缓了植株的生长和发育,至少部分抑制了生长素信号,从而抑制了α-和β-expansins的合成。本研究结果揭示了病原菌利用生长素作为毒性因子侵染水稻的机理以及水稻应对这一毒性因子的调控途径,同时也从一个方面解释了植物在抗病反应中通常要付出生长被抑制的代价的原因。超量表达GH3-8导致植株不育。通过正反交试验显示GH3-8超量表达植株是雄性和雌性都不育。通过形态学观察发现,GH3-8超量表达植株的雌蕊柱头发育不正常;通过激光共聚焦显微镜对雌蕊胚囊观察发现,GH3-超量表达植株的成熟胚囊发育不正常,这可能是GH3-8超量表达植株雌性不育的原因。通过形态学观察发现,GH3-8超量表达植株的雄蕊和野生型无异,但花粉碘染显示,GH3-8超量表达植株大部分花粉都败育,这可能是GH3-8超量表达植株雄性不育的原因。通过分析GH3-8基因表达模式,显示GH3-8基因特异在雄蕊高表达,并随着花的发育表达强弱也不断变化,而在雌蕊基本检测不出表达。组织和时间的特异表达也印证了GH3-8在调控花的发育中起作用。利用酵母单杂交技术,筛选得到和GH3-8基因启动子互作的几个生长素反应因子。其中OsARF8超量表达激活GH3-8基因的表达,证明OsARF8是调控GH3-8基因表达的转录因子。通过分析OsARF8基因表达模式,显示OsARF8基因特异地在雌蕊高表达,而在雄蕊表达很低。OsARF8基因超量表达植株和野生型植株相比育性下降。花粉碘染显示OsARF8基因超量表达植株大部分花粉败育;检测雌蕊没有发现和野生型有显著差异。花粉的育性下降可能是OsARF8超量表达植株育性下降的原因。生长素信号路径中的基因(OsARF8和GH3-8)的不正常表达影响了水稻育性,说明生长素信号可能在调控水稻育性中有重要作用。检测水稻穗发育中生长素分布,也显示生长素和穗的发育密切相关。在水稻品种明恢63中抑制1个维生素B1合成基因OsDR8的表达,显著提高了转基因植株对白叶枯病和稻瘟病的敏感。外源应用维生素B1可以互补抑制OsDR8基因对水稻植株抗病的影响。几个防御反应基因包括防御信号路径的早期功能基因OsPOX和OsPAL基因以及路径下游基因OsPR1a、 OsPR1b、OsPR4、OsPR5 和OsPR10的表达在OsDR8抑制表达的植株中下降。这些结果说明OsDR8影响植株的抗性可能是通过影响防御反应基因的表达,OsDR8的功能在信号路径的上游。另外,维生素B1的积累可能是水稻植株对白叶枯病和稻瘟病的抗性所必需的。通过筛选水稻T-DNA插入突变体库,发现1个类病斑突变体。侧翼序列分析显示T-DNA插在1个基因(命名为OsDR9)的开放读码框。预测OsDR9基因编码由180个氨基酸组成的功能未知蛋白。OsDR9基因在茎和幼穗中表达很低,而在幼苗、剑叶、叶鞘和愈伤表达较高,在根中没有检测到表达。另外OsDR9基因在老叶中比新叶表达更高。突变体对稻瘟病和胡麻叶斑病表现高抗。对有类病斑的叶片进行组织化学检测和DNA断裂分析显示细胞死亡具有凋亡特征。病程相关蛋白PR4和PR8以及稻瘟病相关基因AOS2在突变体中上升表达。突变体植株也积累了自发荧光物质、SA、JA和植保素(momilactone A 和 sakuranetin)。突变体提高了超氧化物和H2O2的水平。将1个来源于水稻品种日本晴的包含有OsDR9基因的10.5 kb片段转入突变体02Z15AM37,转基因植株类病斑表型消失,说明由于T-DNA插入导致的OsDR9突变是引起类病斑表型的原因。这些结果说明,OsDR9是水稻抗病和细胞凋亡的1个负调节子。 展开更多
关键词 水稻 白叶枯病 稻瘟病 抗病相关基因 生长素 水杨酸 茉莉酸 基础抗性 伸展蛋白 GH3—8 维生系B1 类病斑突变体 凋亡
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基于衍射重构技术的作物真菌病害孢子微型检测装置 被引量:2
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作者 杨宁 陈驰原 +3 位作者 李国晓 王爱英 张荣标 唐健 《农业机械学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第4期42-48,共7页
为了解决现有孢子检测系统体积大、成本高等问题,提出了一种基于衍射重构技术的作物真菌病害孢子检测方法。根据惠更斯-菲涅尔原理、角谱理论,利用衍射成像复合重构计算设计了一种包含富集、进样机构的真菌病害孢子检测系统。该系统可... 为了解决现有孢子检测系统体积大、成本高等问题,提出了一种基于衍射重构技术的作物真菌病害孢子检测方法。根据惠更斯-菲涅尔原理、角谱理论,利用衍射成像复合重构计算设计了一种包含富集、进样机构的真菌病害孢子检测系统。该系统可以定时完成富集、进样、拍摄、重构和检测等操作,并通过重构算法实现对真菌病害孢子原像的重建,根据重构后的图像提取面积(Area)、细度(Thinness ratio)两个重要形态学特征,对稻瘟病孢子进行检测识别。实验结果表明,所设计装置对稻瘟病孢子的检测结果与人工显微镜识别结果高度线性相关,决定系数为0. 99,平均检测误差为5. 91%,具有较好的准确性。 展开更多
关键词 衍射 角谱理论 稻瘟病 图像处理 真菌病害孢子
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