逆转录病毒介导Fcy∷Fur/5-FC基因治疗对脑胶质瘤杀伤作用的研究

目的:研究融合型自杀基因Fcy∷Fur联合5-FC对胶质瘤细胞株C6的杀伤效果。方法:扩增Fcy∷Fur基因并构建Fcy∷Fur基因重组逆转录病毒载体PLXSN-Fcy∷Fur;载体转染包装细胞PT67获得高滴度病毒再转染鼠胶质瘤细胞C6,筛选并鉴定阳性转基因克隆;以MTT法和FCM法检测5-FC对Fcy∷Fur转基因细胞的杀伤效应。结果:PCR法扩增出全长Fcy∷Fur基因,经测序证实序列正确;PLXSN-Fcy∷Fur滴度为3×106CFU/ml;RT-PCR检测显示Fcy∷Fur转基因阳性克隆的C6细胞有效表达目的基因的mRNA;应用5-FC后FCM法检测到显著的凋亡峰,MTT法检测细胞有明显的杀伤效应。结论:融合型自杀基因Fcy∷Fur联合5-FC可对胶质瘤细胞C6产生明显的杀伤作用。

分布式中小规模天然气制氢的工业研发进展

针对燃料电池行业发展所带来的分布式中小规模供氢的需求,列举了北美几家公司在分布式制氢方面的新技术研发情况,介绍了相关的分布式制氢新技术:流化床反应器、微通道反应器、钯膜分离、PSA小型化等。

表皮生长因子影响肿瘤患者舌苔变化的分子机制研究

目的 研究表皮生长因子 (EGF)对食管癌细胞Eca 10 9细胞周期及表皮生长因子受体 (EGF R)表达的影响 ,探讨EGF促进肿瘤患者舌苔增厚的分子机制。方法 应用流式细胞术 ,检测EGF R的表达和细胞周期。结果 EGF能明显促进Eca 10 9细胞膜上EGF R的表达 ,使细胞增殖活性大大增强。结论 EGF有可能是通过促进EGF

贵德黑裘皮羊耳成纤维细胞系的建立和生物学特性的研究

以贵德黑裘皮羊耳缘组织为材料，采用组织块贴壁培养法和细胞冷冻技术成功构建了成纤维细胞系，并对培养细胞进行了形态学、生长动力学观察、细胞活力测定、核型分析和微生物检测。结果表明：细胞群体倍增时间（PDT）约为36h，冻存前细胞活力为96．2％，以DMEM／F-12＋20％FBS中添加10％DMSO冻存成纤维细胞，解冻后细胞活力为93．6％，24h后的贴壁率为85％。在传代10次之前，细胞染色体中二倍体（2n=54）占主体，约为82％～90％，细菌、真菌、病毒、支原体检测为阴性。该细胞系的建立，使贵德黑裘皮羊这一国家重要种质资源在细胞水平上保存下来，也为体细胞克隆等研究提供了理想的生物材料。

毛皮动物自咬症与大脑神经细胞脂质过氧化关系初步分析

分析了当前一些解释肉食性毛皮动物自咬症产生原因的假说,指出了其中存在的矛盾和问题。并根据水貂等肉食性毛皮动物食物的结构,结合目前人类自咬症模型的产生机理等相关研究结果,认为水貂自咬症的产生可能与动物性食物脂肪氧化导致的大脑神经细胞脂质过氧化及动物机体的抗氧化能力有关。

小儿哮喘患者花剥苔与免疫的关系及血细胞变化

目的:采用免疫组织化学、细胞化学的方法,检测小儿哮喘花剥苔及对照组小儿血清免疫指标和血液细胞指标,以探讨小儿哮喘患者花剥苔形成的免疫机制。方法:采用临床流行病学方法,共调查562人,收回登记表352份。依据病例的诊断标准,根据哮喘以及花剥苔的有无分为哮喘花剥苔组、哮喘非花剥苔组和非哮喘花剥苔组,分三次分别检测其血清IgE、血清中CD4、CD8、CD28的含量。结果:在哮喘患儿中,花剥苔的发生率占33%。在花剥苔患儿中,哮喘的发生率占48%。IgE:哮喘花剥苔组明显高于正常人对照组,P<0.05;哮喘花剥苔组低于哮喘非花剥苔组,P<0.05;哮喘花剥苔组明显高于非哮喘花剥苔组,P<0.05;哮喘非花剥苔组小于非哮喘花剥苔组,P<0.05;哮喘非花剥苔组高于正常人对照组。以上各组比较均有显著性差异。CD4:哮喘花剥苔组小于非哮喘花剥苔组,更小于正常人对照组,均P<0.05,均有显著性差异。CD8:哮喘非花剥苔组高于正常人对照组,P<0.05,有显著性差异。CD28:哮喘花剥苔组、哮喘非花剥苔组和非哮喘花剥苔组都高于正常人对照组,P<0.05,有显著性差异。RBC:哮喘花剥苔组明显低于正常人对照组,P<0.05;哮喘非花剥苔组明显低于正常人对照组,P<0.05;非哮喘花剥苔组明显低于正常人对照组,P<0.05。结论:小儿花剥苔的出现可以为追踪小儿哮喘找到线索,其病理本质和小儿免疫力低下有一定联系,如IgE、CD8、CD28水平异常升高,CD4水平降低,血中红细胞数异常等,都可以作为中医治疗小儿哮喘的观察指标之一。

岷县黑裘皮羊肾组织成纤维细胞系的建立及其生物学特性研究

采集岷县黑裘皮羊肾组织,用胰蛋白酶热消化法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法进行继代培养和细胞纯化,并对复苏细胞的形态、活力、生长曲线、荧光蛋白质粒转染表达、核型以及乳酸脱氢酶同工酶等生物学特性进行了分析。结果显示:原代和传代细胞生长形态均好,群体倍增时间为28.3 h;染色体2 n=54,二倍体占主体(84%)乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱有明显特征,未见LDH4、LDH5谱带,与其它羊有明显区别;外源性荧光蛋白转染质粒在该细胞中能进行复制和表达;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性。表明该研究已成功建立岷县黑裘皮羊肾组织成纤维细胞系,为在细胞水平上保存岷县黑裘皮羊种质资源以及进行相关研究提供了理想的生物材料。

肺癌中医证型研究概况

肺癌证型脏腑辨证发病率依次为肺阴虚、肺气虚、脾气虚、肾阴虚、肾气虚、瘀阻肺络等;也有报告为气阴两虚、阴虚内热、脾虚痰湿、气滞血瘀、气虚、痰湿蕴肺。舌苔脱落细胞MI、MV改变、肿瘤标志物表达与中医证型有关,可作为证型判断、微观辨证重要指标。肺癌多层螺旋CT表现与中医证型存在一定关系,可作为临床辨证分型客观依据。病理分型与中医证型互参,鳞癌多表现为气血瘀滞,大细胞肺癌多表现为阴虚痰热,未分化癌多表现为痰湿蕴肺,腺癌多表现为阴虚为本,兼有气虚或痰热。气虚、痰凝、血瘀是非小细胞肺癌最常见中医证候;TNM分期Ⅰ、Ⅱ期以实证居多,Ⅲ、Ⅳ期以虚实夹杂、虚证为主,Ⅳ期(M1b)期脾虚痰湿、气滞血瘀、痰热阻肺证肺癌较易出现耐药现象。血管内皮生长因子(VEGF)气血瘀滞高于气虚痰湿、阴虚热毒、气阴两虚;气虚痰湿免疫功能最好CD4+T细胞最高。化疗后1周内气虚痰湿出现最多,化疗后14~30d内气阴两虚最多。痰湿证候要素占多数,是肺癌发生发展证候基础,热毒要素出现在疾病晚期,有一定预后评价作用;对症治疗可提高患者生活质量,对预后有一定影响。目前证型评判没有统一规范标准,缺乏大样本和多中心研究,出现结果多样性和偏差性,结论不能相互得到认可。建立肺癌中医证型标准是当务之急,把舌象和脉象动态变化纳入研究范围,同时还可引入更多现代分子生物及免疫学等相关学科的微观指标和研究方法,期望能够促进肺癌微观辨证的发展。

Research on the Relationship between Thick Greasy Tongue Fur Formation and Vascular Endothelial Cell Permeability with the Protein Expression of Zonula Occludens-1

Objective：To determine the relationship of thick greasy tongue fur formation and permeability of vascular endothelial cells（ECs）with the protein expression of zonula occludens-1（ZO-1）.Methods：Sprague Dawley rats were randomly divided into a model group of severe acute pancreatitis（SAP）and a sham-operated （SO）group.The SAP rats were further divided into two subgroups on the basis of tongue-coating status：a thick greasy tongue fur group（SAP-TGF）and a normal tongue fur group（SAP-NF）.Six rats were chosen randomly from every group mentioned above for an Evans blue assay 5 days after model establishment.For the histomorphology analysis,the expressions of ZO-1 protein and mRNA were studied by hematoxylin-eosin （HE）staining,transmission electron microscope,Western blot,and Q-PCR using blood and tongue tissues, which were collected from 8 rats randomly chosen from each group.Results：The papillae density of the rat tongue surface and the caryocinesis frequency of the basal layer were significantly increased in the SAP-TGF group compared with the SO group（P0.05）.Evans blue levels in the tongue tissue of the SAP-TGF group were significantly higher than that of the SO and SAP-NF groups（P0.05）.Vascular ECs were wider and obviously fissured in the SAP-TGF group under transmission electron microscope observation.The protein and mRNA expression of ZO-1 in the SAP-TGF group were lower than those in the SAP-NF（P0.05）.Conclusions： Reproductive activity enhancement of glossal epithelial cells was one of the main characteristics of thick greasy tongue fur formation.An increase in vasopermeability was closely associated with thick greasy tongue fur formation.Tight junction structural variation of vascular ECs might play an important role in the pathological and physiological process of thick greasy tongue fur formation.

黄腻苔舌脱落上皮细胞的形态计量分析

采集 2 0例黄腻、2 1例正常舌脱落上皮细胞 ,涂片后经巴氏染色 ,应用MIPS— 1显微图像分析系统检测脱落细胞的形态计量学参数。发现黄腻苔脱落细胞的面积、周长、等效直径及最大直径与正常舌脱落细胞有统计学上的差异 ( p <0 .0 5) ,但两组间形状因子无差异 ( p >0 .0 5) ;两组总体细胞间面积及最大直径的频率分布也有部分差异 ( p <0 .0 5)。由此得出结论 :黄腻苔脱落细胞的平均面积、周长、等效直径及最大直径均小于正常舌脱落细胞 。

慢性浅表性胃炎脾胃湿热证患者舌苔脱落细胞活动周期的研究

目的 :探讨脾胃湿热证慢性浅表性胃炎患者舌苔脱落细胞与细胞周期活动的关系。方法 :实验分成 4组 :正常对照组、脾气虚组、脾胃湿热组和脾胃湿热治疗组 ,用流式细胞仪检测各组舌苔脱落细胞内 DNA含量。结果 :脾胃湿热组患者 S期细胞高于正常对照组和脾气虚组 ,差异均有显著性意义 (P <0 .0 1,<0 .0 5 ) ;经过清化饮治疗 1个月后 ,脾胃湿热组患者 S期细胞数目下降 ,而 G1 和 G2 加 M期细胞增加 (P <0 .0 5 )。凋亡细胞不论脾胃湿热组还是脾气虚组均高于正常对照组 ,经过治疗后的脾胃湿热组患者 ,虽然细胞周期有改变 ,但凋亡细胞无明显变化。结论 :脾胃湿热证慢性浅表性胃炎患者的舌苔脱落细胞周期中 ,S期细胞最多 ,治疗后 S期细胞减少 ,G1 期、G2 加 M期细胞增加 ;凋亡细胞脾胃湿热组和脾气虚组均高于正常对照组。

脾胃湿热证胃炎患者舌苔脱落细胞中微核细胞及P53表达

[目的]探讨脾胃湿热证和脾气虚证慢性浅表性胃炎患者舌苔脱落细胞微核细胞和P53表达的意义。[方法]用eulgen法和免疫细胞化学法显示正常对照者及脾胃湿热和脾气虚患者舌苔脱落细胞中微核细胞、P53表达。[结果]脾胃湿热组和脾气虚组微核细胞的反应强度及出现频率均高于正常对照组(均P<0.05);脾气虚组的P53阳性反应高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]微核细胞在两患者组的舌苔脱落细胞内反应强度及出现频率较高,提示有较多的分裂畸变细胞;而P53的表达与微核细胞的出现有关,两者可能代表了证候发展不同的过程。

围绝经期气郁质性激素与舌苔脱落细胞成熟指数、成熟价值的相关性

目的探讨围绝经期气郁质性激素及舌苔脱落细胞特点,以期为围绝经期气郁质的早期辨识提供帮助。方法选取围绝经期平和质、气郁质妇女180例,根据月经情况分为绝经前期、绝经过渡期早期、绝经过渡期晚期,每种体质每期各30例,观察两组各期卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、泌乳素(PRL)、抑制素B(InhB)、抗苗勒管激素(AMH)、舌苔脱落细胞成熟指数(MI)和成熟价值(MV),并分析各指标与气郁质的相关性。结果两组同期间FSH、LH、E2、PRL水平差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),气郁质组各指标的变化均较平和体质明显;两组FSH、LH、MV均随着围绝经期的进程而明显升高(P<0.01),E2、PRL、AMH、InhB则均明显下降(P<0.01)。结论围绝经期气郁质妇女围绝经期进程较平和质快,且性激素、MI、MV改变与气郁质有明显相关性,可作为围绝经期气郁质早期判定的参考指标。

高剂量脂多糖影响舌苔形成机制初探

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)影响舌苔形成的信号通路。方法将0.1、1、5、105、0、100 mg/L LPS作用于体外培养的舌鳞癌TCA-8113细胞163、2、48 h,MTT法检测细胞增殖活性。10、501、00 mg/L LPS作用TCA-8113细胞16、324、8 h,细胞流式细胞仪检测细胞周期分布。10、501、00 mg/L LPS作用TCA-8113细胞8 h,细胞免疫组化法研究p38-MAP kinasec、-myc、c-fos和NF-κB在TCA-8113细胞中的表达水平。结果与对照组相比,LPS作用TCA-8113细胞16 h,对细胞增殖活性影响不明显(P>0.05);作用32 h5,0、100 mg/L组明显促进细胞增殖活性(P<0.05),而0.1、15、、10 mg/L组效应不明显(P>0.05);作用48 h0,.11、、5、10 mg/L组抑制细胞增殖活性(P<0.05),而50、100 mg/L组效应不明显(P>0.05)。10、501、00 mg/L LPS对TCA-8113细胞周期分布和凋亡影响不明显1,6 h G1/G0期细胞比例下降,32 h促进S期细胞比例下降4,8 h细胞周期分布无明显变化(P>0.05)。10、50、100 mg/L LPS作用舌鳞癌细胞8 h,明显下调p38-MAPkinase、c-myc、c-fos和NF-κB p50表达水平,而上调NF-κB p65表达水平,统计学差异显著(P<0.05)。结论高剂量LPS可以影响TCA-8113的增殖活性,是参与舌苔形成的重要外源性因素,对NF-κB信号通路具有重要作用。

肺癌患者舌苔脱落细胞形态变化与证型的相关性

目的探讨不同证型中晚期原发性支气管肺癌患者舌苔脱落细胞形态变化规律,为中医辨证提供客观依据。方法选择TNM分期为Ⅱ～Ⅳ期的肺癌患者140例,分为气虚痰湿、气血瘀滞、阴虚热毒、气阴两虚4个证型,探讨不同TNM分期患者的中医证型分布特点。检测各证型患者舌苔脱落细胞的成熟指数(MI)、成熟价值(MV),将结果进行比较,并与30例正常人相对照。结果中晚期原发性肺癌不同TNM分期的中医证型分布有显著性差异(P<0.01),ⅡB期患者多见气虚痰湿型,占72.42%,ⅢA期则以气血瘀滞证为主,占52.17%,ⅢB期多表现为阴虚热毒证型,占66.67%,IV期多集中在气阴两虚证,占90.00%。中晚期肺癌各证型中层细胞数所占比例高于正常人,表层细胞数所占比例低于正常人,各组舌苔脱落细胞的MV均小于正常组(P<0.01)。各证型的MI、MV改变以气血瘀滞组最为明显(P<0.01),以阴虚毒热组改变最轻(P<0.01)。MV的趋势是:气血瘀滞<气阴两虚<气虚痰湿<阴虚毒热<正常组,气阴两虚组与气虚痰湿组之间无显著差异性,其他各组间均有差异(P<0.05或P<0.01)。结论不同TNM期的肺癌患者中医证型分布有差别,舌苔脱落细胞MI、MV的改变与肺癌所表现的中医证型有关。

胃癌患者舌苔及血清表皮生长因子与实验室指标的关系

目的研究胃癌患者的舌苔变化与血清表皮生长因子(EGF)水平及临床实验室指标的关系。方法通过检测266例胃癌患者(胃癌组)和246例正常对照人群(对照组)血清EGF水平,记录舌象表现及实验室检测结果(包括白细胞计数、中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、总蛋白、门冬氨酸氨基转移酶、血糖),分析舌苔、血清EGF水平及实验室指标的关系。结果胃癌组厚苔比例最高(51.5%),而对照组薄苔比例最高(64.6%)。胃癌组白细胞计数、淋巴细胞、总蛋白异常者,其薄苔比例下降,厚苔比例增高(P<0.01)。胃癌组血清EGF水平比对照组明显升高(P<0.01)。胃癌组和对照组总蛋白降低时血清EGF均明显高于正常者(P<0.01);相关分析表明,两组受试者总蛋白与血清EGF水平均呈负相关(P<0.01)。结论白细胞、淋巴细胞、总蛋白等临床检验的异常与胃癌患者舌苔薄厚及血清EGF水平具有密切关系。

舌鳞癌患者舌苔形成与CD29和E-cad表达的相关性研究

目的:探讨舌鳞癌患者舌苔形成与CD29和E-cad表达的关系。方法:选择口腔舌鳞癌切除术患者,根据不同舌苔分为白薄苔组、白厚苔组、黄薄苔组、黄厚苔组及剥苔组;并将胎儿正常白薄苔设为对照组。采用免疫组化S-P法检测不同舌苔黏膜组织中CD29和E-cad表达的情况。结果:CD29在白厚苔中表达最高,在黄薄苔中表达最低。E-cad在白薄苔中表达最高,在剥苔中表达最低。按舌苔厚薄来比较,CD29在厚苔中的高表达;而E-cad在薄苔中高表达。按苔色来比较,两者在白苔中的表达均高于黄苔。结论:舌鳞癌患者舌苔形成与CD29和E-cad表达水平的变化密切相关。

舌苔脱落细胞理化指标与慢性胃炎患者中医证型相关性分析

目的探讨舌苔脱落细胞理化指标与慢性胃炎患者中医辨证分型的相关性。方法选择2017年3月-2018年5月本院慢性胃炎患者148例,经辨证分为脾胃虚弱证36例、肝胃不和证39例、胃阴不足证32例、脾胃湿热证41例,分别入组相应的中医证型组;再选择无寒热虚实证候的50位健康志愿者作为健康对照组。于高倍镜下观察各组受试者舌苔脱落细胞,分别行表、中、底层细胞计数,并计算成熟指数(maturity index,MI)及成熟价值(mature value,MV),检测舌苔脱落细胞中酸性磷酸酶(acid phosphatases,ACP)、LDH、琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)及巯基含量,采用流式细胞术检测舌苔脱落细胞的细胞周期;采用Spearman等级相关法分析舌苔脱落细胞理化指标与中医证型分布的相关性。结果与健康对照组比较,脾胃虚弱证组、肝胃不和证组、胃阴不足证组、脾胃湿热证组受试者中层细胞百分比[(26.47±3.94)%、(22.32±5.41)%、(31.47±3.28)%、(35.62±3.96)%比(14.85±4.03)%]升高(P<0.05),表层细胞百分比[(73.53±6.47)%、(77.68±5.38)%、(68.53±4.20)%、(64.38±4.39)%比(85.15±5.33)%]降低(P<0.05),MV值[(83.52±3.10)%、(87.64±2.95)%、(79.38±3.21)%、(75.63±2.83)%比(92.61±3.74)%]降低(P<0.05)。与健康对照组比较,脾胃虚弱证组、肝胃不和证组、胃阴不足证组受试者舌苔脱落细胞中ACP、LDH、SDH、巯基均降低(P<0.05),脾胃湿热证组受试者ACP、LDH、SDH、巯基均升高(P<0.05);胃阴不足证组、脾胃湿热证组受试者G1期细胞百分降低(P<0.05),S期细胞百分升高(P<0.05)。Spearman等级相关法分析,脾胃虚弱证组、肝胃不和证组、胃阴不足证组、脾胃湿热证组与ACP、LDH、SDH、巯基均有相关性(r值分别为0.608、0.712、0.704、0.631,P值均<0.05)。结论慢性胃炎不同中医证型患者可出现不同的舌苔脱落细胞形态学变化、细胞周期差异较大且细胞生化指标水平不同。