直接竞争化学发光酶免疫法检测呋喃妥因代谢物

建立检测动物组织中呋喃妥因代谢物的直接竞争化学发光酶免疫法。采用棋盘法确定抗体和酶标抗原的最佳稀释度,通过单因素试验优化包被条件、封闭液种类和竞争反应时间,建立直接竞争抑制曲线,并对方法的灵敏度、特异性、准确度和精密度进行方法学评价。结果表明,经优化,最佳反应条件为抗体稀释度1∶4 000,酶标抗原稀释度1∶80,包被条件为37℃2h后4℃过夜,封闭液为1%牛血清白蛋白,竞争反应1h。该方法的线性检测范围为0.030~10.595 ng/m L,IC_（50）为0.559 ng/m L;加标回收率为84.9%~103.4%,批内变异系数为3.4%~7.8%,批间变异系数为4.7%~11.8%;除与呋喃妥因原药交叉反应率为36.2%,与其他结构类似物及衍生化试剂交叉反应率均小于0.1%。该方法灵敏、准确,可用于动物组织中呋喃妥因代谢物的快速筛查。

超高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中的硝基呋喃代谢物

建立超高效液相色谱–串联质谱法同时测定水产品中的呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因和呋喃西林4种硝基呋喃代谢物的方法。样品经甲醇、乙醇、乙醚洗涤除杂后,进行衍生,再用Oasis HLB型固相萃取柱净化,在正离子模式下,采用MRM模式同时测定水产品中的呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因和呋喃西林。在优化后的仪器工作条件下进行测定,4种代谢物的质量浓度在0.1～10 ng/mL的范围内线性关系良好,相关系数在0.999 6～0.999 9之间,检出限均为0.05μg/kg。测定结果的相对标准偏差为1.5%～4.2%(n=5),加标回收率为87.3%～94.5%。该方法具有良好的精密度与准确度,可用于同时测定水产品中的呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因和呋喃西林4种硝基呋喃代谢物。

呋喃妥因代谢物海特因单克隆抗体的制备

通过制备单克隆抗体能够高效准确的检测呋喃妥因代谢物海因特。把间羧基苯甲醛跟海特因的衍生物接到牛血清白蛋白上作为免疫原,接到卵清蛋白上作为检测抗原,制备了特异的单克隆抗体。利用7号细胞株产生的抗体,Elisa检测海特因的邻硝基苯甲醛衍生物,灵敏度达到0.1 ng/m L,对呋喃唑酮的代谢物AOZ、呋喃它酮的代谢物AMOZ、呋喃西林的代谢物SEM的邻硝基苯甲醛衍生物交叉反应性<0.1%。

住院患者常见病原菌的构成及葡萄球菌耐药性变迁

目的:分析我院3年来细菌感染的分布及葡萄球菌的耐药性变迁,为临床治疗提供依据。方法:采用V ITEK-32型全自动细菌分析系统、AP I鉴定系统及血清学方法进行鉴定,药敏试验采用K-B纸片扩散法。结果:凝固酶阴性葡萄球菌检出率逐年下降,而金黄色葡萄球菌则逐年上升,2005年金黄色葡萄球菌跃升为第一位。耐甲氧西林葡萄球菌对多种抗生素呈耐药趋势,仅对少数抗生素敏感,如万古霉素、呋喃妥因、利福平。结论:应及时了解医院葡萄球菌感染的变迁及耐药性变化,为葡萄球菌感染的预防和治疗提供依据。

利用单克隆抗体检测呋喃妥因代谢物海特因方法的研究

[目的]建立敏感、快速、特异的呋喃妥因代谢物海特因的检测方法。[方法]通过将间羧基苯甲醛和海特因的衍生物接种到牛血清白蛋白上免疫Balb/C小鼠,应用杂交瘤技术制备单克隆抗体,采用ELISA检测海特因的邻硝基苯甲醛衍生物。[结果]采用ELISA检测海特因的邻硝基苯甲醛衍生物,灵敏度达到0.1 ng/ml。制备的单克隆抗体具有特异性高、灵敏的优点。[结论]该研究可为酶联免疫试剂盒的研制奠定基础。

动物组织中呋喃妥因代谢物残留酶联免疫试剂盒的研制

通过对呋喃妥因代谢物分子结构进行改造,制备了半抗原及人工抗原,免疫动物,制备特异性强的单克隆抗体。在筛选呋喃妥因代谢物单克隆抗体的基础上,建立酶联免疫检测方法,并研制出检测动物组织中呋喃妥因代谢物残留的试剂盒。该试剂盒的IC50值为0.094μg/L,最低检测限为0.1μg/kg,样本添加回收率为78.2%～102.7%,变异系数为5.1%～11.4%;与呋喃妥因的交叉反应率为13%,与其他药物的交叉反应率均小于1%;对实际样本的检测结果与液相色谱-串联质谱法基本一致。该方法快速、灵敏、可靠,为动物组织中呋喃妥因代谢物的残留检测提供了便捷、准确的分析检测手段。

呋喃妥因代谢物CLIA试剂盒对畜禽及水产品的验证研究

目的验证呋喃妥因代谢物CLIA检测试剂盒的检测效果。方法用化学发光微粒子免疫法和高效液相色谱-串联质谱法分别对市售猪肉、鸡肉、鱼肉、虾肉4种样品中呋喃妥因代谢物残留量进行检测,比对两种方法试验结果间的差异。结果该试剂盒对4种样品的最低检测限分别为69.37、67.86、67.52、69.09 ng/kg,试剂盒板内板间变异系数均小于10%;对4种样品做加标回收试验,其回收率均在90%~105%之间,变异系数均小于10%;该方法与高效液相色谱法检测实际样品的阴、阳性判断结果一致。结论该方法稳定、可靠,可满足食品中呋喃妥因代谢物残留快速检测的需要。

呋喃妥因代谢物胶体碳免疫试纸条制备与应用

以呋喃妥因代谢物AHD作为检测目标物,选择SB4型炭黑作为抗体标记物,使用BB缓冲液分散炭黑颗粒,制得胶体碳溶液并优化胶体碳标记抗体条件。选择Millipore135s膜作为载体膜,将包被原和羊抗兔二抗适当分散后分别喷涂在该膜上,干燥后组装试纸条,建立免疫层析分析方法;确定方法检出限,考查试纸条的灵敏度和稳定性并应用于水产品(鱼类)的检测。最优条件下组装试纸条的方法检出限为1.0μg/L,实际样品选择4种常见鱼类检测,向其中添加AHD标准品,样品经过处理后,使用该试纸条进行检测,检出限为0.2μg/kg。目测即可得出结果,无需借助仪器,检测时间不超过15 min。

高效液相色谱法测定甲硝唑的血药浓度

用高效液相色谱法，采用乙腈：水（１８：８２）为流动相，呋喃妥因为内标，检测波长为３４０ｎｍ，建立了甲硝唑血药浓度测定方法，并做了线性关系、精密度和回收率试验。应用本法测定了家兔口服甲硝唑的血药浓度，并得到了平均药—时曲线。