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花生fw2.2基因的克隆及遗传转化 被引量:8
1
作者 刘强 王晶珊 +2 位作者 乔利仙 赵春梅 隋炯明 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1123-1128,1210,共7页
fw2.2基因是影响番茄果重的一个重要数量性状基因,在心皮的细胞分裂中起负调控作用。本研究以番茄fw2.2基因的序列为探针,从花生EST数据库中筛选同源序列。根据花生的EST拼接序列设计引物对花生进行扩增,目标产物测序后,将推测的氨基酸... fw2.2基因是影响番茄果重的一个重要数量性状基因,在心皮的细胞分裂中起负调控作用。本研究以番茄fw2.2基因的序列为探针,从花生EST数据库中筛选同源序列。根据花生的EST拼接序列设计引物对花生进行扩增,目标产物测序后,将推测的氨基酸序列与其他植物fw2.2基因编码的氨基酸序列进行比对,同源性为34.78%~66.85%。半定量RT-PCR结果表明,该基因在野生种和栽培种中的表达存在差异。将fw2.2基因连接到植物表达载体,通过农杆菌介导法转化花生品种花育23号,获得了12个PCR阳性的独立转化子。 展开更多
关键词 花生 fw2.2基因 克隆 转化
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根癌农杆菌介导fw2.2和PL基因对Micro-Tom番茄的遗传转化研究 被引量:3
2
作者 孙瑶 田嘉 +1 位作者 林静 李疆 《新疆农业大学学报》 CAS 北大核心 2015年第3期187-192,共6页
为了快速验证与梨果实大小、硬度相关基因fw2.2、PL是否能够通过转基因植株顺利表达。本研究利用根癌农杆菌介导Micro-Tom番茄技术,以子叶为外植体,分析不同预培养时间、菌液浓度、浸染时间、共培养时间、延迟筛选对抗性芽诱导的影响,... 为了快速验证与梨果实大小、硬度相关基因fw2.2、PL是否能够通过转基因植株顺利表达。本研究利用根癌农杆菌介导Micro-Tom番茄技术,以子叶为外植体,分析不同预培养时间、菌液浓度、浸染时间、共培养时间、延迟筛选对抗性芽诱导的影响,得出最优转化体系为:子叶预培养36h,在OD600nm值为0.4菌液中浸染6min,共培养60h,在300mg/L头孢霉素(Cef)、25mg/L卡那霉素(Kan)延迟筛选14d,转入300mg/L Cef、40mg/L Kan分化培养。分别得到转基因阳性株为42株、38株,转化率为14.9%,13.1%。初步验证了fw2.2、PL基因已经整合到Micro-Tom番茄中。 展开更多
关键词 fw2.2基因 PL基因 Micro-Tom番茄 遗传转化
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龙眼胚性愈伤组织fw2.2家族2个基因的克隆与分析 被引量:2
3
作者 陈裕坤 林玉玲 赖钟雄 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2012年第9期1608-1613,共6页
fruit weight 2.2(fw2.2)是植物中控制果实重量的重要数量性状的主效基因。以龙眼转录组数据库为基础,采用同源克隆法及RACE技术,从龙眼的胚性愈伤组织中获得fw2.2家族的2个cDNA全长序列,命名为Dlfw2.2-1与Dlfw2.2-1,并对其核甘酸序列... fruit weight 2.2(fw2.2)是植物中控制果实重量的重要数量性状的主效基因。以龙眼转录组数据库为基础,采用同源克隆法及RACE技术,从龙眼的胚性愈伤组织中获得fw2.2家族的2个cDNA全长序列,命名为Dlfw2.2-1与Dlfw2.2-1,并对其核甘酸序列及推导的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果表明:Dlfw2.2-1基因的cDNA全长为970 bp,编码184个氨基酸;Dlfw2.2-2基因的cDNA全长为941 bp,编码175个氨基酸。Dlfw2.2-1与Dlfw2.2-2的核甘酸序列及其推导的氨基酸序列与其它植物的fw2.2具有较高的同源性,亚细胞定位于细胞质膜,不含信号肽,具有跨膜结构与典型的与PLAC8同源的富半胱氨酸蛋白(Cysteine-rich Protein)的保守结构域。植物中fw2.2系统进化树分析结果表明,Dlfw2.2-1和Dlfw2.2-2为同一分枝,与番茄和油梨的fw2.2的距离最近。因此,推测Dlfw2.2-1与Dlfw2.2-2属于fw2.2基因家族的2个成员。 展开更多
关键词 龙眼 胚性愈伤组织 fw2 2 果实重量 基因克隆 生物信息学分析
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Cloning,localization and expression analysis of two fw2.2-like genes in small-and large-fruited pear species 被引量:8
4
作者 TIAN Jia ZENG Bin +3 位作者 LUO Shu-ping LI Xiu-gen WU Bin LI Jiang 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2016年第2期282-294,共13页
Fruit size is one of the most important agronomic characters,which is mainly determined by cell number and cell size.However,our current knowledge about pear is largely unknown.Through counting of pear mesocarp cells ... Fruit size is one of the most important agronomic characters,which is mainly determined by cell number and cell size.However,our current knowledge about pear is largely unknown.Through counting of pear mesocarp cells at different stages,we found that the cell number,rather than the cell size,is responsible for the differences between small- and large-fruited cultivars.Fruit weight-2.2(fw2.2) is an important quantitative trait locus(QTL) affecting fruit weight in tomato and functions as a negative regulator in carpel cell division.To get more insights into this QTL in pear fruit development,we isolated two putative homologous fw2.2 genes,which were designated as fw2.2-like(PbFWL) genes.PbFWLs encode Cys-rich proteins with the CCXXXXCPC motif and belong to the PLAC8 superfamily.In addition,results from the subcellular localization indicated that PbFWLs were localized in the plasma membrane.The expression profile of the PbFWL genes by qRT-PCR showed they expressed higher in small-sized fruit cultivar than that in large-sized fruit cultivar during the cell division period.In summary,our data suggest that these two PbFWLs might be negatively related to the cell division in pear fruit. 展开更多
关键词 pear fruit size fw2.2 subcellular localization gene expression cell division
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梨幼果FWL1膜系统酵母双杂交三框cDNA文库构建及互作蛋白的筛选 被引量:1
5
作者 赛静忆 温玥 +1 位作者 郝志超 田嘉 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1877-1888,共12页
【目的】筛选与FWL1互作的蛋白,为研究FWL1基因调节果实大小机理提供依据。【方法】以杜梨、库尔勒香梨、鸭梨、早美香为材料,提取4个梨品种果实细胞分裂关键时期的果肉组织混样RNA。构建梨幼果FWL1膜系统酵母双杂交三框cDNA文库,并鉴... 【目的】筛选与FWL1互作的蛋白,为研究FWL1基因调节果实大小机理提供依据。【方法】以杜梨、库尔勒香梨、鸭梨、早美香为材料,提取4个梨品种果实细胞分裂关键时期的果肉组织混样RNA。构建梨幼果FWL1膜系统酵母双杂交三框cDNA文库,并鉴定文库质量。构建诱饵载体并转化酵母菌,筛选与FWL1互作的蛋白,对初步筛选出的阳性酵母克隆进行测序并在NCBI中进行Blast比对,确定候选互作蛋白。【结果】文库库容约为3×10^(7) CFU,大于1×10^(7) CFU,平均插入片段大于1000 bp,阳性率为≥98%。诱饵载体无自激活功能,利用共转化方法,筛选出272个与FWL1互作的蛋白质。【结论】梨幼果膜系统酵母双杂交三框cDNA文库符合酵母双杂文库的基本条件,适用于后期筛选相互作用的蛋白。筛选出的272个互作蛋白在果实发育过程中表达不同,其中collagen and calcium-binding EGF domain-containing protein 1和metallothionein-like protein可能与梨果实大小发育有关。 展开更多
关键词 果实大小 fw2.2 三框cDNA文库 互作蛋白筛选
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