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Genomic location of Gb1, a unique gene conferring wheat resistance to greenbug biotype F
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作者 Xiangyang Xu Genqiao Li +4 位作者 Guihua Bai Brett FCarver Ruolin Bian Amy Bernardo JScott Armstrong 《The Crop Journal》 SCIE CSCD 2023年第5期1595-1599,共5页
Greenbug(Schizaphis graminum, Rondani) is a serious insect pest in many wheat growing regions and has been infesting cereal crops in the USA for over a century. Continuous occurrence of new greenbug biotypes makes it ... Greenbug(Schizaphis graminum, Rondani) is a serious insect pest in many wheat growing regions and has been infesting cereal crops in the USA for over a century. Continuous occurrence of new greenbug biotypes makes it essential to explore all greenbug resistant sources available to manage this pest. Gb1, a recessive greenbug resistance gene in DS28A, confers resistance to several economically important greenbug biotypes and is the only gene found to be resistant to greenbug biotype F. A set of 174 F_(2:3)lines from the cross DS28A × Custer was evaluated for resistance to greenbug biotype F in 2020 and 2022. Selective genotyping of the corresponding F_(2) population using single nucleotide polymorphism(SNP) markers generated by genotyping-by-sequencing(GBS) led to the identification of a candidate genomic region for Gb1. Thus, SSR markers previously mapped in this region were used to genotype the entire F2population,and kompetitive allele specific PCR(KASP) markers were also developed from SNPs in the target region.Gb1 was placed in the terminal region of the short arm of chromosome 1A, and its location was confirmed in a second population derived from the cross DS28A × PI 697274. The combined data analysis from the two mapping populations delimited Gb1 to a < 1 Mb interval between 13,328,200 and 14,241,426 bp on1AS. 展开更多
关键词 Wheat Greenbug resistance gene gb1 KASP markers Linkage analysis Genotyping-by-sequencing
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基于GBS技术开展柚类资源群体遗传评价并发掘酸含量相关基因 被引量:1
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作者 江东 王旭 +3 位作者 李仁静 赵晓东 戴祥生 柳正葳 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1547-1560,共14页
【目的】弄清我国柚类种质资源的起源与演化、群体遗传结构和多样性水平,高效利用柚类自然资源群体发掘与果实重要品质性状相关的基因,为柚类种质资源群体的遗传结构研究、起源演化和柚类种质创新提供重要的理论及实践依据。【方法】利... 【目的】弄清我国柚类种质资源的起源与演化、群体遗传结构和多样性水平,高效利用柚类自然资源群体发掘与果实重要品质性状相关的基因,为柚类种质资源群体的遗传结构研究、起源演化和柚类种质创新提供重要的理论及实践依据。【方法】利用国家果树种质重庆柑橘资源圃中保存的具有广泛遗传多样性和不同地理来源的282份柚类资源作为材料,采用EcoR I限制性内切酶消化基因组DNA后构建GBS文库,然后进行Illumina HiSeq PE150二代测序获得短读序列,通过BWA软件将序列映射到柚参考基因组上,利用SAMTOOLS软件鉴定SNP位点。依据SNP的基因分型结果,进行主成分分析和群体结构分析,并采用邻接法构建系统演化树,分析亚群的遗传多样性水平。选择23个低酸种质和32个高酸种质构成两个群体进行Fst、XP-CLR分析,同时利用282个柚类种质的基因型数据与果实可滴定酸含量的表型数据进行GWAS全基因组关联分析。【结果】利用GBS简化基因组测序技术对282份柚类种质进行测序,获得201.66 Gb的原始测序数据,每个样本的平均测序数据量为0.72 Gb,经过测序深度为5×次要等位基因频率>0.01、Miss0.2的筛选条件过滤,最终获得121726个高质量的SNP位点。主成分分析、群体结构分析和聚类分析均表明282份柚类资源可被分为6个亚群,其中柚与‘清见’杂交群体、葡萄柚等橘柚杂种群体可明显区别于其他真正柚类种质。不同地理来源和特定类型的柚类种质在遗传水平上存在明显差异,来源于泰国、越南等东南亚国家的柚类资源形成了较为独特的类群,与国内的沙田柚类、文旦柚类、垫江柚类等群体能够明显区分开。在中国南方的大部分柚类种质中有来自于越南柚的基因渗入,表明越南是柚的原始起源中心。另外,一些来源不清的柚类种质也通过GBS技术得以准确鉴定。Fst、XP-CLR选择性清除分析发现在7号染色体上的强烈选择信号区域中包含有丙酮酸脱氢酶复合物二氢硫辛酰赖氨酸残基乙酰转移酶(PDH-E2)和铝激活苹果酸转运蛋白(ALMT9),涉及柠檬酸的合成和运输。GWAS全基因组关联分析在2号染色体上鉴定了一个与果实酸度高度关联的区域。【结论】GBS技术为研究柚的系统发育和演化提供了一种可靠和高效的方法。本研究表明人工杂交育种、长期人工选择和驯化、地理隔离是形成不同类型柚类种质的驱动力,同时也是导致柚类种质遗传分化和多样性增加的重要原因。通过Fst、XP-CLR选择性清除和全基因组关联分析鉴定了多个与柚类果实柠檬酸含量相关的候选基因,为柚类的遗传改良和育种提供了重要的基因资源。 展开更多
关键词 gbS 柚系统演化 果实酸度调控基因 GWAS
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基于GBS-SNP的武夷茶树(Camellia sinensis,Synonym:Thea bohea L.)遗传分析及标记开发 被引量:3
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作者 李力 罗盛财 +8 位作者 王飞权 黎巷汝 冯花 石玉涛 叶江华 刘菲 赵佳林 李舒莹 张渤 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期310-324,共15页
为深入了解武夷茶树(Camelliasinensis,异名:TheaboheaL.)的遗传多样性与背景关系,收集126个武夷茶树品种/品系与223个来自12个不同地区的优异茶树品种/品系,共349份茶树资源。采用基因分型测序(Genotyping by sequencing,GBS)技术筛选... 为深入了解武夷茶树(Camelliasinensis,异名:TheaboheaL.)的遗传多样性与背景关系,收集126个武夷茶树品种/品系与223个来自12个不同地区的优异茶树品种/品系,共349份茶树资源。采用基因分型测序(Genotyping by sequencing,GBS)技术筛选出973个高质量核心SNP进行茶树遗传多样性及背景关系分析。基于模型的遗传结构(Structure)、系统发育树(NJtree)和主成分分析(PCA)结果表明,349个茶树可分为5个亚群,亚群聚类主要是基于茶树之间的亲缘关系,而不是树型或叶形等形态特征。基因流分析表明,从闽南地区到武夷山地区和武夷山地区到浙江地区存在基因渗入。遗传相似度分析显示,在349个茶树中有136对样本的遗传相似系数大于0.9,其中有26对涉及武夷茶树品种/品系。通过两两比对的辨识度分析,从973个SNP标记中筛选出21个可100%识别349个茶树品种/品系的SNP标记,其中18个SNP标记即可100%识别126个武夷茶树品种/品系,并建立遗传指纹图谱与开发鉴定引物。研究结果为今后武夷茶树种质资源的管理和育种提供有价值的信息。 展开更多
关键词 武夷茶 基因分型测序 遗传相似度 基因流 指纹图谱 鉴定引物
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实时荧光定量PCR技术检测妊娠晚期GBS感染的临床价值分析
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作者 钱云芳 徐敬轩 周文俊 《系统医学》 2023年第1期70-72,85,共4页
目的探讨实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术对检测妊娠晚期B族链球菌(group B streptococcus,GBS)感染的效果。方法选取2021年1—12月江苏省丹阳市妇幼保健院接收的180例妊娠晚期孕妇,均进行实时荧光定量... 目的探讨实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术对检测妊娠晚期B族链球菌(group B streptococcus,GBS)感染的效果。方法选取2021年1—12月江苏省丹阳市妇幼保健院接收的180例妊娠晚期孕妇,均进行实时荧光定量PCR检测,以基因测序法为金标准,分析该技术对GBS感染的诊断效能,并根据金标准将患者分为阳性组、阴性组,比较两组不良结局情况。结果实时荧光定量PCR技术检查诊断孕晚期GBS感染的准确率为99.44%、灵敏度为92.86%、特异度为100.00%,与金标准比较一致性较好(Kappa=0.96)。阳性组早产、胎膜早破、宫内感染、胎儿窘迫发生率分别为14.29%、14.29%、21.43%、21.43%,均高于阴性组,差异有统计学意义(χ^(2)=12.741、12.741、24.281、24.281,P<0.05)。阳性组新生儿感染、低体重儿发生率分别为14.29%、21.43%,均高于阴性组,差异有统计学意义(χ^(2)=12.741、24.281,P<0.05)。结论对妊娠晚期GBS感染采用实时荧光定量PCR技术检查诊断效能高,有利于预测不良妊娠结局,可指导临床诊疗工作的开展。 展开更多
关键词 妊娠晚期 gbS感染 实时荧光定量PCR 基因测序法 妊娠结局
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猪巨细胞病毒的PCR检测及其gB基因特征分析 被引量:9
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作者 李晶 余兴龙 +5 位作者 李润成 罗维 向卫军 李薇 王亚 葛猛 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期521-525,共5页
根据GenBank登录的猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因序列设计检测引物和全长gB基因引物,对来自湖南浏阳和江西景德镇不同养殖场的猪鼻拭子样品(51份)进行PCR检测,60.78%(31/51)的鼻拭子样品扩增出了260bp的特异性条带.再以阳性样品为模板扩增全... 根据GenBank登录的猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因序列设计检测引物和全长gB基因引物,对来自湖南浏阳和江西景德镇不同养殖场的猪鼻拭子样品(51份)进行PCR检测,60.78%(31/51)的鼻拭子样品扩增出了260bp的特异性条带.再以阳性样品为模板扩增全长gB基因,并将其克隆到pMD18-T载体,核苷酸序列测定和结果分析表明,所获得PCMVgB基因序列全长2580bp,编码860个氨基酸,与国外PCMV分离株的核苷酸同源性为97.6%~98.9%,氨基酸同源性为97.0%~98.6%,且PCMV可分为2个群:一群为中国湖南株、英国株和德国株,命名为A群;另一群为日本株、瑞士株和西班牙株,命名为B群.抗原表位优势、亲水性、表面可及性预测分析表明,PCMVgB蛋白是理想的免疫学抗原候选蛋白. 展开更多
关键词 猪巨细胞病毒 PCR gb基因 序列分析
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江西省猪伪狂犬病原流行病学调查及其gB、gE及TK基因遗传变异分析 被引量:9
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作者 李海琴 康昭风 +2 位作者 谭美芳 曾艳兵 季华员 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期332-339,共8页
为了解江西省猪伪狂犬病原流行情况及遗传变异情况,对2017—2018年收集的疑似伪狂犬样品,以1对针对猪伪狂犬病毒gE基因的检测引物进行病原检测,并随机挑选15株PRV阳性样品,对PRV病毒复制必需的糖蛋白gB基因和主要毒力基因gE与TK基因克... 为了解江西省猪伪狂犬病原流行情况及遗传变异情况,对2017—2018年收集的疑似伪狂犬样品,以1对针对猪伪狂犬病毒gE基因的检测引物进行病原检测,并随机挑选15株PRV阳性样品,对PRV病毒复制必需的糖蛋白gB基因和主要毒力基因gE与TK基因克隆测序及遗传进化分析,用以探究其遗传变异关系。临床结果显示:猪伪狂犬病毒检出率由2017年的4.76%PRV gB/gE/TK全基因序列遗传进化分析结果表明:调查的15株伪狂犬病毒毒株与中国株处于同一分支,与美国株Bartha差异较大。核苷酸同源性分析结果表明:15株PRV gB基因相互间同源性为98.9%~100%;与参考毒株的gB基因的同源性96.7%~100%;gE基因相互间同源性为99.1%~100%;与参考毒株的gE基因的同源性98.1%~100%;TK基因变异相对较小,相互间同源性为100%,与参考PRV毒株的gE基因的同源性99.1%~100%。研究结果表明,gB基因和gE基因存在较多的变异,可能是当前流行毒株抗原变异及毒力增强从而使现有疫苗免疫保护力不佳的主要原因。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 gb基因 GE基因 TK基因 遗传进化
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猪伪狂犬病病毒福建新分离株gB基因的变异研究 被引量:5
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作者 吴学敏 陈秋勇 +7 位作者 陈如敬 修金生 车勇良 王隆柏 严山 刘玉涛 王晨燕 周伦江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期767-770,共4页
为探究2013年-2014年福建省新流行的猪伪狂犬病病毒(PRV)gB基因的遗传进化情况,根据Gen Bank已公布的PRV gB基因序列设计了2对特异性扩增引物,对4株新分离的PRV的gB基因进行克隆、测序及拼接,与国内外已发表的14个毒株进行同源性比对... 为探究2013年-2014年福建省新流行的猪伪狂犬病病毒(PRV)gB基因的遗传进化情况,根据Gen Bank已公布的PRV gB基因序列设计了2对特异性扩增引物,对4株新分离的PRV的gB基因进行克隆、测序及拼接,与国内外已发表的14个毒株进行同源性比对分析,并构建遗传进化树。结果表明:福建省新流行毒株gB基因序列全长2 742 bp,编码913个氨基酸,与其它参考毒株的核苷酸序列的同源性为98.3%-99.2%;在aa75-aa77处存在连续的3个氨基酸缺失;遗传进化树表明,4株新流行毒株与国外分离毒株同属一分群,分属两个分支,而与国内分离毒株亲缘关系较远。本研究为丰富福建省猪群PRV的分子流行病学和掌握PRV的分子遗传进化规律奠定基础。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 gb基因 克隆 序列分析
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鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的克隆及其原核表达 被引量:4
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作者 郑海洲 柏佳宁 +1 位作者 边艳青 赵宝华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期343-345,共3页
根据鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因序列和表达载体pBV221的多克隆位点,设计了1对引物。以ILTV疫苗株基因组为模板,应用PCR扩增出gB基因片段,然后将其定向克隆于原核表达载体pBV221中,构建了重组质粒pBV-gB。重组质粒转化到受体菌... 根据鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因序列和表达载体pBV221的多克隆位点,设计了1对引物。以ILTV疫苗株基因组为模板,应用PCR扩增出gB基因片段,然后将其定向克隆于原核表达载体pBV221中,构建了重组质粒pBV-gB。重组质粒转化到受体菌DH5α中,得到阳性重组菌株DH5α(pBV-gB)。该菌株在温控诱导下,SDS-PAGE电泳可见表达的特异蛋白。ELISA检测证明,表达的蛋白具有较好的反应原性。 展开更多
关键词 鸡传染性喉气管炎病毒 原核表达 gb基因 SDS-PAGE电泳 ELISA检测 多克隆位点 B基因序列 PCR扩增 ILTV 基因片段 表达载体 定向克隆 重组质粒 质粒转化 重组菌株 特异蛋白 反应原性 基因组 疫苗株 受体菌
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牛传染性鼻气管炎病毒gB和gE基因双重荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:5
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作者 徐娜 杨帆 +2 位作者 雷宇 李平安 关平原 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期556-559,共4页
为建立牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的双重荧光定量PCR检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的IBRV g E和g B基因序列,设计2对特异性引物及Taq Man探针。结果显示,以含有gB、gE基因的重组质粒为模板绘制标准曲线,其相关系数(R^2)均为0.999... 为建立牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的双重荧光定量PCR检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的IBRV g E和g B基因序列,设计2对特异性引物及Taq Man探针。结果显示,以含有gB、gE基因的重组质粒为模板绘制标准曲线,其相关系数(R^2)均为0.999,有良好的线性关系。该方法仅对IBRV检测为阳性,而对牛支原体、牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒、巴氏杆菌、牛、羊布鲁氏菌检测结果均为阴性,表明其特异性强。该方法的敏感度约为2拷贝/μL,重复性试验表明该方法的组内和组间变异系数均小于2%。根据被OIE采纳的作为国际贸易规定的检测该病毒的荧光定量PCR方法与本实验建立的方法分别对30份牛肺样品进行检测,符合率可达81.8%。研究表明所建立的荧光定量PCR检测方法具有快速、敏感、准确等优点,可以用于IBRV的检测。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎 gE gb基因 荧光定量PCR
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表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性及生物安全性评价 被引量:4
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作者 卢军 胡传伟 +5 位作者 金乔 彭大新 刘文博 高崧 张如宽 刘秀梵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期327-331,共5页
为了评价表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)的遗传稳定性,我们将纯化后的重组病毒在CEF单层上连续传30代,引起细胞病变的速度和形态均未发生明显变化;覆盖含X-Gal的琼脂引起的空斑均为蓝色;间接免疫荧光实验证明rFPV-g... 为了评价表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)的遗传稳定性,我们将纯化后的重组病毒在CEF单层上连续传30代,引起细胞病变的速度和形态均未发生明显变化;覆盖含X-Gal的琼脂引起的空斑均为蓝色;间接免疫荧光实验证明rFPV-gB/R中的gB基因始终能稳定表达;序列测定结果表明,重组病毒在细胞上连续传30代、在SPF鸡上连续传5代后,gB基因序列没有发生任何变化;以0、10、20、30代重组病毒制成冻干疫苗进行的实验室免疫效力实验表明,细胞连续传代后rFPV-gB/R仍然保持了原有的免疫原性。可见重组鸡痘病毒gB基因的结构和免疫原性都是高度稳定的。为了评价rFPV-gB/R的生物安全性,我们将rFPV-gB/R通过SPF鸡连续传5代,检测病毒在鸡体的存在部位及其消长、生长繁殖性能和毒力变化;将rFPV-gB/R免疫鸡与未免疫鸡同笼饲养,攻击FPV-102E6强毒,以检测rFPV-gB/R感染鸡的接触传染性。结果显示,rFPV-gB/R在鸡体的存在时间大约为7d,在体内仅存在于接种部位;鸡体传代后痘病毒毒力有一定程度下降,gB基因核苷酸序列未发生任何变化;同居未免疫SPF鸡在痘病毒强毒攻击后全部发痘,可见重组病毒免疫鸡没有接触传染性,能在鸡体内稳定地传代,rFPV-gB/R具有高度的生物安全性。 展开更多
关键词 鸡马立克氏病 重组鸡痘病毒 gb基因 遗传稳定性 生物安全性
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伪狂犬病病毒gB基因的原核表达及间接ELISA方法的建立 被引量:7
11
作者 王雨 吉艺宽 +3 位作者 程艺 张宝石 向柯宇 琚春梅 《动物医学进展》 北大核心 2015年第6期19-23,共5页
为了建立评价伪狂犬病疫苗免疫效果的方法,应用PCR方法扩增gB基因的主要抗原表位区序列,大小为768bp,用BamHⅠ和HindⅢ双酶切后克隆至pET-32a(+)载体,构建重组表达质粒pETgB768,转化大肠埃希菌BL21(DE3)后,通过IPTG进行诱导表达,经SDS-P... 为了建立评价伪狂犬病疫苗免疫效果的方法,应用PCR方法扩增gB基因的主要抗原表位区序列,大小为768bp,用BamHⅠ和HindⅢ双酶切后克隆至pET-32a(+)载体,构建重组表达质粒pETgB768,转化大肠埃希菌BL21(DE3)后,通过IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot检测融合蛋白的表达情况及其反应原性。用纯化的gB768蛋白作为包被抗原建立间接gB768-ELISA检测方法,试验结果表明,该方法具有良好的敏感性、特异性、重复性。用该方法检测128份临床送检猪血清样本,并与商品化ELISA试剂盒检测结果进行比较,符合率为93.8%。该方法的建立为猪伪狂犬病疫苗免疫效果的评估奠定了基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 gb基因 主要抗原表位区 gb768-ELISA
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猪巨细胞病毒GX株gB基因的克隆与序列分析 被引量:5
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作者 熊毅 王常伟 +3 位作者 陈磊 颜健华 朱伟 刘棋 《动物医学进展》 CSCD 2008年第5期21-24,共4页
从广西病猪的肺组织中分离到猪巨细胞病毒GX株,通过PCR扩增得到猪巨细胞病毒GX株gB基因的一个1736bp片段,扩增产物经克隆、测序,得到的核苷酸序列与GenBank上已发表的猪巨细胞病毒其他分离株的核苷酸序列相比,其同源性在97.8%~98.9%,... 从广西病猪的肺组织中分离到猪巨细胞病毒GX株,通过PCR扩增得到猪巨细胞病毒GX株gB基因的一个1736bp片段,扩增产物经克隆、测序,得到的核苷酸序列与GenBank上已发表的猪巨细胞病毒其他分离株的核苷酸序列相比,其同源性在97.8%~98.9%,与人巨细胞病毒分离株的同源性在32.0%~43.6%,表明gB基因在同种动物间比较保守。在系统进化树中,GX株与其他猪巨化细胞病毒株亲缘关系较近,属于同一个分支,而与人巨化细胞病毒差异较大。 展开更多
关键词 猪巨细胞病毒 gb基因 克隆 序列分析
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猪伪狂犬病毒gB基因序列分析 被引量:4
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作者 陈如敬 周伦江 +7 位作者 吴学敏 黄晓凤 车勇良 严山 王晨燕 王隆柏 刘玉涛 魏宏 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2016年第11期1139-1144,共6页
2011年以来我国多省免疫猪伪狂犬病毒gE基因缺失苗猪场出现变异型猪伪狂犬病毒(PRV)感染,经典猪伪狂犬病毒疫苗(Bartha-k61)对该病无法提供100%有效保护,已有研究发现变异型PRV和经典PRV gE基因存在特征性变异。为明确变异型PRVgB... 2011年以来我国多省免疫猪伪狂犬病毒gE基因缺失苗猪场出现变异型猪伪狂犬病毒(PRV)感染,经典猪伪狂犬病毒疫苗(Bartha-k61)对该病无法提供100%有效保护,已有研究发现变异型PRV和经典PRV gE基因存在特征性变异。为明确变异型PRVgB基因特征,本研究对GenBank中登录的部分PRV代表株gB基因进行分析比较。结果表明,我国经典型和变异型PRV在gB蛋白氨基酸编码区第395位、453位、562位和739位存在特征性差异,但不同来源PRVgB基因的核苷酸和氨基酸同源性分别在98.1%-100%和96.1%-100%。从相互之间的遗传进化关系可以看出,PRV遗传进化出现两个大的遗传分支,呈现明显的地域性。新发变异型和经典型PRV在中国PRV遗传进化分支上呈现各自独立进化小分支;我国近年分离的貉源和约克夏梗犬源与新发变异型PRV则处于同一进化小分支。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 gb基因 序列分析
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鸭肠炎病毒囊膜蛋白gB和gC主要抗原域的原核表达与鉴定 被引量:7
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作者 张小荣 董广阔 +2 位作者 成大荣 朱善元 吴艳涛 《中国家禽》 北大核心 2011年第2期22-25,28,共5页
根据GenBank中已经发表的鸭肠炎病毒(DEV)基因组序列,在抗原性分析的基础上,设计5对引物,以DEV标准强毒株DPV-F37基因组DNA作为模板分别扩增DEVgB基因主要抗原域编码区(328~552nt、667~1164nt和1519~1797nt)和gC基因主要抗原域编码区... 根据GenBank中已经发表的鸭肠炎病毒(DEV)基因组序列,在抗原性分析的基础上,设计5对引物,以DEV标准强毒株DPV-F37基因组DNA作为模板分别扩增DEVgB基因主要抗原域编码区(328~552nt、667~1164nt和1519~1797nt)和gC基因主要抗原域编码区(67~402nt和472~837nt)。将目的片段克隆入原核表达载体pGEX-6P1中获得重组表达载体pGEX-6P1-gB1、pGEX-6P1-gB2、pGEX-6P1-gB3、pGEX-6P1-gC1和pGEX-6P1-gC2。将重组表达载体转化至BL21宿主菌,经IPTG诱导,外源基因获得了良好表达,融合蛋白大小分别为35、45、37、38和40ku左右。以兔抗DEV多抗血清进行Western blot分析,抗血清与表达的5种融合蛋白均能发生特异性反应。结果提示所有表达出的目的蛋白均具有与天然蛋白相似的反应原性。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 gb基因 GC基因 原核表达
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传染性喉气管炎病毒河南株gB基因的克隆与序列分析 被引量:3
15
作者 陈红英 崔保安 +3 位作者 李新生 赵丽 郑兰兰 管倩 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期99-102,共4页
根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因的核苷酸序列,设计、合成1对引物,应用PCR扩增鸡ILTV河南株(ILTV—CG)gB基因,将扩增片段克隆人pGEM—T Easy载体后,经蓝白斑筛选,菌液PCR和酶切鉴定为阳性的重组菌进行测序.结果表明克隆到... 根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因的核苷酸序列,设计、合成1对引物,应用PCR扩增鸡ILTV河南株(ILTV—CG)gB基因,将扩增片段克隆人pGEM—T Easy载体后,经蓝白斑筛选,菌液PCR和酶切鉴定为阳性的重组菌进行测序.结果表明克隆到ILTV—CG株gB基因,全长为2629bp,包含一个完整的开放阅读框,共编码873个氨基酸的多肽,推导氨基酸序列有8个潜在的N-糖基化位点,有12个与二硫键形成有关的半胱氨酸.序列分析表明,ILTV—CG株gB基因与GenBank中读取的澳大利亚SA2疫苗株、辽宁疫苗株、烟台株、美国632强毒株、英国Throne强毒株gB基因核苷酸序列同源性为99%以上,与ILTV—SA2株gB基因比较发现,ILTV—CG株gB基因核苷酸序列在第89位均缺失1个碱基G,而在第102位又插入1个碱基A,从而引起该毒株舻基因推导的氨基酸序列中第28~32位5个氨基酸的移码突变. 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 gb基因 聚合酶链反应 序列分析
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携带DEV-gB/NP28重组减毒沙门氏菌诱导鸭的免疫应答研究 被引量:3
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作者 鲜思美 李婷 +4 位作者 冯将 李鹏飞 包细明 张益 文明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期330-335,共6页
为探究表达鸭肠炎病毒(DEV)gB/NP28双基因重组减毒沙门菌口服疫苗在鸭体内诱导免疫应答能力,本研究将构建的重组菌(pcDNA3.1-DEV-gB/NP28)/SL7207、DVE弱毒疫苗、重组质粒pcDNA3.1-DEV-gB/NP28及PBS分别免疫雏鸭,通过间接免疫荧光法检... 为探究表达鸭肠炎病毒(DEV)gB/NP28双基因重组减毒沙门菌口服疫苗在鸭体内诱导免疫应答能力,本研究将构建的重组菌(pcDNA3.1-DEV-gB/NP28)/SL7207、DVE弱毒疫苗、重组质粒pcDNA3.1-DEV-gB/NP28及PBS分别免疫雏鸭,通过间接免疫荧光法检测免疫鸭脾脏、胸腺、法氏囊、哈德氏腺组织中的抗原表达;双抗体夹心ELISA方法检测肠道黏膜sIgA;间接ELISA方法监测血清中DEV特异性抗体、外周血T淋巴细胞增殖及IFN-γ、IL-4细胞因子含量,对该口服疫苗进行免疫学评价。结果表明,重组菌能够诱导鸭产生良好的黏膜免疫、体液免疫和细胞免疫应答;攻毒试验显示,在DVE强毒攻击下重组菌免疫可提供75%以上的保护,表明重组菌免疫对DEV攻击具有一定的免疫保护作用。 展开更多
关键词 鸭病毒性肠炎病毒 gb基因 NP28基因 减毒沙门氏菌 免疫应答
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鸭肠炎病毒gB基因的分子特征 被引量:3
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作者 马波 刘峰源 +3 位作者 张扬 乌伊罕 刘晓玫 王君伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期101-106,共6页
鸭肠炎病毒是鸭病毒性肠炎的病原,被划分为疱疹病毒科成员。gB是疱疹病毒感染和复制所必需的糖蛋白,能刺激机体产生中和抗体和细胞免疫应答,在疱疹病毒家族中高度保守。通过PCR技术获得了DEV C-KCE株gB基因的核苷酸序列,首次对DEVgB基... 鸭肠炎病毒是鸭病毒性肠炎的病原,被划分为疱疹病毒科成员。gB是疱疹病毒感染和复制所必需的糖蛋白,能刺激机体产生中和抗体和细胞免疫应答,在疱疹病毒家族中高度保守。通过PCR技术获得了DEV C-KCE株gB基因的核苷酸序列,首次对DEVgB基因及编码氨基酸进行了较为详尽的生物信息学分析。结果表明,DEVgB基因与α-疱疹病毒的马立克氏病毒属亲缘关系最近;DEV gB蛋白具有与其他疱疹病毒gB相同或相似的结构、N糖基化位点、半胱氨酸残基、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPGs)结合位点、弗林蛋白酶水解位点和胞浆区PACS-1识别位点。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 鸭瘟 gb基因 糖蛋白 分析
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表达鸡新城疫病毒F、HN基因和传染性喉气管炎病毒gB基因的重组鸡痘病毒的构建及其特性研究 被引量:3
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作者 孙惠玲 王云峰 +6 位作者 苗得园 张培君 智海东 徐灵龙 王玫 童光志 汪明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期931-939,共9页
利用同源重组将新城疫病毒(NDV)的F和HN基因、传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因以及报告基因LacZ插入鸡痘病毒(FPV)的017株的复制非必需区,其中NDV的F、HN基因、ILTV的gB基因以及报告基因LacZ是在早晚期启动子LP2EP2的控制下,大肠杆菌... 利用同源重组将新城疫病毒(NDV)的F和HN基因、传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因以及报告基因LacZ插入鸡痘病毒(FPV)的017株的复制非必需区,其中NDV的F、HN基因、ILTV的gB基因以及报告基因LacZ是在早晚期启动子LP2EP2的控制下,大肠杆菌报告基因LacZ在晚期启动子P11的控制下。经过10轮蓝斑纯化获得了包含了NDV的F和HN基因、ILTV的gB基因以及报告基因LacZ的重组鸡痘病毒,称为rFPV-F/HN/gB/LacZ。经PCR方法证明rFPV-F/HN/gB/LacZ基因组中含有NDV的F基因、HN基因和ILTVgB基因;间接免疫荧光试验和Western-blot试验表明NDV的F、HN蛋白和ILTVgB蛋白在rFPV-F/HN/gB/LacZ感染的CEF细胞中获得表达。与亲本毒相比,重组病毒在病毒的复制和致鸡胚成纤维细胞的病变方面无显著不同。这证明了在鸡痘病毒载体的一个复制非必需区可以同时插入多个禽类病原的多个外源基因,为制备多价基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 重组鸡痘病毒 新城疫病毒 传染性喉气管炎病毒 F基因 HN基因 gb基因
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伪狂犬病毒Fa株gB、gC、gD基因的克隆与序列分析 被引量:4
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作者 陈振海 林天龙 +1 位作者 陈少莺 宋铁英 《福建农业学报》 CAS 2007年第2期120-125,共6页
对猪伪狂犬病病毒闽A株(Fa株)gB、gC、gD基因进行了克隆和序列测定,结果表明:gB、gC、gD基因序列全长分别为2745bp、1464bp、1215bp,编码914、487、404个氨基酸残基组成的多肽。序列分析结果显示:Fa株与其他毒株gB、gC、gD基因核... 对猪伪狂犬病病毒闽A株(Fa株)gB、gC、gD基因进行了克隆和序列测定,结果表明:gB、gC、gD基因序列全长分别为2745bp、1464bp、1215bp,编码914、487、404个氨基酸残基组成的多肽。序列分析结果显示:Fa株与其他毒株gB、gC、gD基因核苷酸序列的同源性为94.9%-99.9%,氨基酸序列的同源性为91.4%-99.9%。不同PRV毒株gB、gC、gD基因在核苷酸和氨基酸水平上高度保守。基于gB、gC、gD基因的进化树分析表明,中国分离毒株与韩国分离毒株可归为一个进化分支,而日本分离株与欧美分离株归为另一个分支。在前一个分支里,闽A株与鄂A株的亲缘关系特别近,3个基因的同源率均在99.5%以上。在gB蛋白氨基酸序列全长上中国分离株(Ea株、Fa株)比欧美分离株多了1个氨基酸,氨基酸残基的突变主要集中在第50-100氨基酸。在gC基因序列第186-211bp,Ea株、Fa株比欧美分离株多插入了21个碱基。在gD蛋白氨基酸序列全长上,Ea株、Fa株比其他分离株多了2-6个氨基酸。在gD基因序列第803-837bp,Fa株核苷酸AGGCCC串联重复最多,达到7个。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 gb基因 GC基因 GD基因 序列分析
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人巨细胞病毒糖蛋白gB基因重组腺病毒载体的构建及包装 被引量:2
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作者 马超 陈勇 +3 位作者 巩莉 郭敏 李萍 蒋琳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第7期575-578,共4页
目的构建携带有人巨细胞病毒(HCMV)糖蛋白gB基因的重组腺病毒载体,并在HEK293细胞中进行包装。方法将gB基因克隆至穿梭质粒Track-CMV,构建重组质粒Track-CMV/gB,亚克隆至转移载体pAD-Easy-1,构建重组质粒pAD-Easy-1/gB,将该重组骨架质... 目的构建携带有人巨细胞病毒(HCMV)糖蛋白gB基因的重组腺病毒载体,并在HEK293细胞中进行包装。方法将gB基因克隆至穿梭质粒Track-CMV,构建重组质粒Track-CMV/gB,亚克隆至转移载体pAD-Easy-1,构建重组质粒pAD-Easy-1/gB,将该重组骨架质粒转染HEK293细胞,利用HEK293细胞产生重组腺病毒。空斑法及PCR法挑选重组病毒,荧光显微镜观察标志蛋白(绿色荧光蛋白)的表达,利用噬斑法检测病毒滴度。结果重组腺病毒载体经酶切鉴定证明构建正确,转染重组腺病毒载体的HEK293细胞经PCR扩增,可见约700bp的目的基因片段,荧光显微镜观察可见绿色荧光蛋白表达,空斑试验检测病毒滴度为2×106PFU/ml。结论已成功构建了含有gB基因的重组腺病毒载体,为进一步研制重组腺病毒载体HCMV疫苗提供了条件。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 糖蛋白gb基因 腺病毒载体 构建 包装
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