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Expression of Porcine Interleukin-2 and Porcine Interleukin-6 and Their Adjuvant Effects on Gene Deleted Vaccine of Pseudorabies Virus(TK^-/gG^-/LacZ^+)
1
作者 YAN Lin, HE Qi-gai, CHEN Huan-chun, XIAO Shao-bo, WU Mei-zhou,LU Jian-qiang and HAN Li(Laboratory of Virology, College of Animal Science and Veterinary Medicine, Huazhong Agriculture University , Wuhan 430070 , P. R. China) 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2003年第8期924-929,共6页
Porcine interleukin-2 and porcine interleukin-6 cDNA sequences were cloned into the expressing vectors pET-28a and pGEX-KG respectively. They were expressed in E. coli BL21(DE3)with high-level production. The gene del... Porcine interleukin-2 and porcine interleukin-6 cDNA sequences were cloned into the expressing vectors pET-28a and pGEX-KG respectively. They were expressed in E. coli BL21(DE3)with high-level production. The gene deleted vaccine of pseudorabies virus Ea strain(TK-/gG-/LacZ+)was mixed with the two different purified recombinant proteins each, or both, with the doses of 2, 5 or 10 μg ml-1. Ten groups of pseudorabies negative antibody swines were immuned twice with tested vaccines with different doses, or control vaccine, respectively. The antibody liters of the test groups were detected by neutralization test, and the daily weight gains of swines were calculated and analyzed statistically. In the study, all the neutralizing antibody ti-ters in test groups were higher than the control group, and the recombinant proteins appeared a dose dependent adjuvant effect. The tested vaccines with 2 μg ml-1 pIL-2 and with 10 μg ml-1 pIL-2/pIL-6 got significant and extremely significant differences, compared with the vaccines without pILs. The difference of the daily weight gain indicated the potential positive influence of pIL-2 and pIL-6 on immune protection. 展开更多
关键词 Porcine interleukin-2 Porcine interleukin-6 Expression gene deleted vaccine of pseudora-bies virus(TK-/gg-/LacZ+) Adjuvant effect
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伪狂犬病毒gG基因的表达及gG-LAT诊断方法的建立 被引量:11
2
作者 唐勇 陈焕春 +2 位作者 覃雅丽 何启盖 肖少波 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期72-76,共5页
依据伪狂犬病病毒(PseudorabiesVirusPRV)Rice株序列合成针对gG基因的特异性引物,从PRV鄂A株中扩增出gG基因,并将其克隆到pBluescriptⅡSK+质粒中并测序,用SacⅠ和HindⅢ酶切,将gG基因融合到pET 28a质粒中T7启动子下游,构建成原核表达质... 依据伪狂犬病病毒(PseudorabiesVirusPRV)Rice株序列合成针对gG基因的特异性引物,从PRV鄂A株中扩增出gG基因,并将其克隆到pBluescriptⅡSK+质粒中并测序,用SacⅠ和HindⅢ酶切,将gG基因融合到pET 28a质粒中T7启动子下游,构建成原核表达质粒pET 28a gG1,结果并未获得表达。再用NotⅠ切除gG基因后小半部分片段,构建成原核表达质粒pET 28a gG2,使其在E.coliBL21(DE3)中以IPTG诱导表达,经SDS PAGE分析,表达特异带为47KDa,斑点杂交证实表达产物具有抗原性。表达产物主要以可溶性蛋白的形式存在于细菌裂解液的上清之中,上清经饱和硫酸铵溶液沉淀,透析,PEG20000浓缩,ELISA分析表明,经初步纯化的表达产物可与抗PRV猪血清发生特异性免疫反应。用该产物致敏空白乳胶建立gG 乳胶凝集试验(gG LAT),检测340份血清,结果表明gG LAT能区分gG基因缺失疫苗活苗免疫猪与自然感染野毒的血清学阳性猪,且特异性强、敏感性高。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 gg基因 基因表达 gg-LAT 诊断方法
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伪狂犬病病毒gG基因缺失通用转移载体的构建 被引量:8
3
作者 方六荣 陈焕春 +2 位作者 肖少波 王革非 马相如 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期306-309,共4页
对克隆有伪狂犬病病毒Ea株基因组DNASphI 15kb片段的质粒pBSA用SphI和KpnI消化 ,将含gG全基因及其上游PK基因、下游gD基因部分编码区约 2 .6kb的片段亚克隆到消除了EcoRI位点的载体pUC19中 ,获得重组质粒pUSK(E)。以pEGFP N1为模板 ,通... 对克隆有伪狂犬病病毒Ea株基因组DNASphI 15kb片段的质粒pBSA用SphI和KpnI消化 ,将含gG全基因及其上游PK基因、下游gD基因部分编码区约 2 .6kb的片段亚克隆到消除了EcoRI位点的载体pUC19中 ,获得重组质粒pUSK(E)。以pEGFP N1为模板 ,通过PCR扩增约 0 .3kb的SV40Poly(A)片段 ,并将其克隆到杆状病毒转座载体pFastBac1的NotI和PstI位点 ,利用pFastBac1的BamHI和PstI将含有 9个酶切位点以及SV40Poly(A)的片段亚克隆到pUSK(E)的相应位点 ,在插入的同时导致gG基因 5’端编码区约 40 0bp的缺失 ,构建了由gG启动子驱动gG部分编码区缺失的通用转移载体pgG Uni。序列分析进一步证实 :有 7个单一酶切位点可供外源基因直接插入。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 gg基因 gg启动子 通用转移载体 克隆 序列分析 真核表达系统 多价基因工程疫苗 疱疹病毒科 分子生物学
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牛传染性鼻气管炎病毒gG蛋白的表达及gG-ELISA的建立 被引量:12
4
作者 颜邦芬 陈锃 +7 位作者 张书环 林祥梅 陈颖钰 晁彦杰 李德学 宋念华 陈焕春 郭爱珍 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期806-811,共6页
以牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)基因组DNA为模板,PCR扩增gG基因,克隆到T载体pMD18-T,经限制性酶切分析及序列测定鉴定正确后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG。SDS-PAGE和Western blot分析表明,该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中呈可... 以牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)基因组DNA为模板,PCR扩增gG基因,克隆到T载体pMD18-T,经限制性酶切分析及序列测定鉴定正确后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG。SDS-PAGE和Western blot分析表明,该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中呈可溶性及包涵体两种形式表达,重组蛋白质具有免疫学活性。包涵体蛋白经提纯、变性、复性后,作为包被抗原建立了gG-ELISA诊断方法。应用该方法与进口试剂盒(IDEXX)平行检测380份血清样品,两种方法的符合率为92%(351/380)。对6份病毒分离阳性血清的检测均为阳性,对非相关病原的阳性血清及中监所的阴性血清检测均为阴性,表明所建立的IBRVgG抗体的ELISA检测具有良好的灵敏度与特异性。对1248份奶牛血清样本进行了检测,进口牛群的IBRV抗体阳性率平均为21.7%,湖北本地中国黑白花奶牛的抗体阳性率在不同牧场之间变化很大,范围为0.0%-41.5%。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gg基因 ELISA 原核表达
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伪狂犬病毒上海株糖蛋白G (gG)基因的克隆及序列分析 被引量:7
5
作者 黄伟坚 姜焱 +3 位作者 陈德胜 芦银华 张雪莲 陈溥言 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期107-110,共4页
应用PCR方法从PRVSH (上海株 )病毒培养物扩增了gG基因 ,克隆入 pcDNA3质粒 ,并进行了序列测定。结果表明 ,扩增的 gG基因片段长 1719bp ,包含一个 14 91bp的开放阅读框 (ORF) ,在起始密码子上游有TATAAAA盒 ,在终止密码子下游有AATAAA... 应用PCR方法从PRVSH (上海株 )病毒培养物扩增了gG基因 ,克隆入 pcDNA3质粒 ,并进行了序列测定。结果表明 ,扩增的 gG基因片段长 1719bp ,包含一个 14 91bp的开放阅读框 (ORF) ,在起始密码子上游有TATAAAA盒 ,在终止密码子下游有AATAAA的 poly (A)尾 ,编码由 4 96个氨基酸组成的蛋白质。与Rice株相应的gG片段相比 ,核苷酸序列同源性达 97 1%。但推导的氨基酸序列同源性仅有 87 6 % ,主要是在编码区内插入和缺失核苷酸 ,出现了突变和移码 ,导致氨基酸序列同源性降低。gG具有膜蛋白的结构特点。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 上海株 糖蛋白G 序列分析 gg基因 PCR扩增 核苷酸序列 氨基酸序列 基因克隆
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奶牛传染性鼻气管炎病毒gG基因PCR检测方法的建立 被引量:9
6
作者 王冰 张敏敏 +1 位作者 邹新峰 郭爱珍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第10期94-98,共5页
本试验旨在建立一种PCR技术,既能快速检测牛传染性鼻气管炎病毒,又能区分同属病毒牛疱疹病毒5型和伪狂犬病病毒。根据基因库中牛传染性鼻气管炎病毒gG基因的特异性引物,建立PCR方法,对牛传染性鼻气管炎病毒参考毒株和阳性样本进行扩增,... 本试验旨在建立一种PCR技术,既能快速检测牛传染性鼻气管炎病毒,又能区分同属病毒牛疱疹病毒5型和伪狂犬病病毒。根据基因库中牛传染性鼻气管炎病毒gG基因的特异性引物,建立PCR方法,对牛传染性鼻气管炎病毒参考毒株和阳性样本进行扩增,结果均能扩增出一条463bp的特异性条带;对同属的牛疱疹病毒5型进行扩增,获得651bp和431bp两条带;对同属伪狂犬病病毒进行扩增,获得493bp的条带;而非相关病毒(如猪呼吸与繁殖综合征病毒等),不能扩增出条带。对牛传染性鼻气管炎病毒的检测灵敏度为2×10-3 PFU/mL。鉴于该方法具有良好的灵敏度和特异性,将在牛疱疹病毒感染诊断和标记疫苗免疫后的鉴别诊断方面具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 PCR 牛疱疹病毒 gg基因
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鸭瘟病毒河南株gG基因的克隆、测序 被引量:1
7
作者 王岩 曹素芳 崔保安 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期94-96,共3页
鸭瘟是鸭的一种急性传染和高致死的病毒性疾病。根据GenBank收录中鸭瘟病毒gG基因序列设计并合成1对引物,以鸭瘟病毒河南分离株DNA为模板,PCR扩增出1条约1 600 bp的含gG基因特异性片段,并将其克隆至PMD19-T载体上。经酶切鉴定,得到含gG... 鸭瘟是鸭的一种急性传染和高致死的病毒性疾病。根据GenBank收录中鸭瘟病毒gG基因序列设计并合成1对引物,以鸭瘟病毒河南分离株DNA为模板,PCR扩增出1条约1 600 bp的含gG基因特异性片段,并将其克隆至PMD19-T载体上。经酶切鉴定,得到含gG基因重组质粒,并对重组阳性质粒进行序列测定。结果表明,gG基因长1 380 bp,该基因编码459个氨基酸,预测分子量为50.5 kDa。gG基因的克隆为进一步研究其生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 gg基因 克隆 测序
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牛传染性鼻气管炎病毒内蒙古分离株gG基因的PCR扩增 被引量:4
8
作者 刘威 云涛 《畜牧与饲料科学》 2011年第6期8-10,12,共4页
参考牛传染性鼻气管炎病毒全基因序列(GenBank)设计1对特异性引物,以牛传染性鼻气管炎病毒内蒙古分离株提取的总DNA为模板,运用PCR方法成功地扩增出牛传染性鼻气管炎病毒内蒙古分离株gG基因,并用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gg基因 PCR扩增
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单纯疱疹病毒2型gG-2“独特区”基因的原核表达及其血清学诊断价值
9
作者 孙乐栋 曾抗 +2 位作者 王茜 周再高 刘凤岩 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期372-375,共4页
目的在大肠杆菌中表达HSV-2的gG-2"独特区"基因(gG-2T)并对其免疫学特性进行初步研究。方法克隆HSV-2的gG-2T,并在大肠杆菌中表达gG-2T融合蛋白。通过Western blot和间接ELISA鉴定融合蛋白的活性。结果通过原核系统表达的gG-2... 目的在大肠杆菌中表达HSV-2的gG-2"独特区"基因(gG-2T)并对其免疫学特性进行初步研究。方法克隆HSV-2的gG-2T,并在大肠杆菌中表达gG-2T融合蛋白。通过Western blot和间接ELISA鉴定融合蛋白的活性。结果通过原核系统表达的gG-2T融合蛋白可以与GST多克隆抗体结合并在46 ku附近出现特异性结合条带。并且能够与确诊的HSV-2患者血清反应,而不与HSV-1患者血清和正常人血清反应。结论获得了HSV-2 gG-2T融合蛋白,它可以与GST多克隆抗体特异性结合并且可以同HSV-2型患者血清特异性反应;获得的gG-2T蛋白为研究以gG-2蛋白作为靶区域的诊断试剂盒和疫苗研发打下实验基础。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 糖蛋白G-2 独特区基因 融合蛋白 表达
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2017-2019年广西猪伪狂犬病病毒的分离鉴定及其gC、gG毒力基因分析 被引量:6
10
作者 党佳佳 卢丽飞 +3 位作者 赵硕 许力士 吴青萍 黄伟坚 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第3期56-63,共8页
为了解2017-2019年广西猪伪狂犬病病毒(PRV)的流行和遗传变异情况,对2017年1月至2019年8月于广西各地区采集的284份疑似伪狂犬病发病猪临床样品进行检测和病毒分离,对分离毒株的gC、gG基因进行克隆、测序、遗传变异分析。被测样品中有8... 为了解2017-2019年广西猪伪狂犬病病毒(PRV)的流行和遗传变异情况,对2017年1月至2019年8月于广西各地区采集的284份疑似伪狂犬病发病猪临床样品进行检测和病毒分离,对分离毒株的gC、gG基因进行克隆、测序、遗传变异分析。被测样品中有85份阳性,阳性率为29.9%,从中共分离到10株PRV毒株,其中9株为国内变异毒株,1株为国内经典毒株。结果显示:广西地区流行的不同亚型PRV毒株在gC、gG基因上均存在相似的核苷酸和氨基酸变异特点,主要与国内变异株亲缘关系较近;广西地区PRV流行毒株主要为国内变异株。本研究结果丰富了广西PRV检测数据资料,为深入评估和预测广西PRV疫病的流行情况提供了可靠的数据基础。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 GC基因 gg基因 遗传变异分析
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pGEX-4T-1/HSV2-gG重组质粒的构建及表达
11
作者 戍桂明 杨慧兰 成桂明 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1342-1345,共4页
目的通过基因工程技术,构建含有目的基因的重组质粒(pGEX-4T-1/HSV2-gG)。方法用PCR技术扩增HSV2-gG基因的免疫优势表位片断;将PCR产物与质粒表达载体pGEX-4T-1连接;然后鉴定含有目的基因的重组表达载体;并转化大肠杆菌DH5α,诱导表达... 目的通过基因工程技术,构建含有目的基因的重组质粒(pGEX-4T-1/HSV2-gG)。方法用PCR技术扩增HSV2-gG基因的免疫优势表位片断;将PCR产物与质粒表达载体pGEX-4T-1连接;然后鉴定含有目的基因的重组表达载体;并转化大肠杆菌DH5α,诱导表达目的蛋白;以免疫印迹法检测表达的目的蛋白。结果PCR法扩增出1242bp的DNA片断;通过PCR法及测序法证实重组质粒中含有1242bp的DNA片断。SDS-PAGE和免疫印迹法证实重组蛋白在大肠杆菌中的表达。结论重组质粒HSV2-gG-pGEX-4T-1的成功构建及表达,为制备HSV-2血清诊断试剂奠定了基础。 展开更多
关键词 HSV-2-gg 重组质粒 基因表达
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伪狂犬病毒重组gG抗原片段的原核表达及其间接酶联免疫吸附测定方法的建立
12
作者 李琪 郭娇娇 阮文科 《北京农学院学报》 2021年第1期112-116,共5页
【目的】建立方便可行的伪狂犬病毒血清抗体的酶联免疫吸附测定方法,并可特异性鉴别伪狂犬病毒TK-/gG-基因缺失疫苗免疫株和野毒株。【方法】利用原核表达系统表达伪狂犬病毒gG抗原片段,蛋白纯化后包被,优化反应条件,建立一种用于检测... 【目的】建立方便可行的伪狂犬病毒血清抗体的酶联免疫吸附测定方法,并可特异性鉴别伪狂犬病毒TK-/gG-基因缺失疫苗免疫株和野毒株。【方法】利用原核表达系统表达伪狂犬病毒gG抗原片段,蛋白纯化后包被,优化反应条件,建立一种用于检测伪狂犬病毒gG抗体的间接酶联免疫吸附测定方法。【结果】通过不同血清样品的检测试验,该酶联免疫吸附测定方法可以鉴别伪狂犬病毒TK-/gG-基因缺失疫苗免疫猪和感染野毒的血清学阳性猪。【结论】成功建立了检测伪狂犬病毒gG抗体的酶联免疫吸附测定方法,并可特异鉴别伪狂犬病毒TK-/gG-基因缺失疫苗免疫株和野毒株,此方法敏感性强,特异性高,操作简便,适合于临床大量检测。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 gg基因 原核表达 间接酶联免疫吸附测定
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伪狂犬病病毒FJSW的分离鉴定及gG基因序列分析 被引量:1
13
作者 傅星源 《福建畜牧兽医》 2021年第1期17-19,共3页
从福建省某规模化猪场的患猪中分离到一株疑似猪伪狂犬病病毒,命名为FJSW株,对其进行PCR鉴定、gG基因测序等鉴定,并与GenBank上发表的国内外毒株进行序列分析和遗传进化分析。结果显示,病毒经Vero细胞培养可产生典型细胞病变。该毒株gG... 从福建省某规模化猪场的患猪中分离到一株疑似猪伪狂犬病病毒,命名为FJSW株,对其进行PCR鉴定、gG基因测序等鉴定,并与GenBank上发表的国内外毒株进行序列分析和遗传进化分析。结果显示,病毒经Vero细胞培养可产生典型细胞病变。该毒株gG基因核苷酸序列与国内分离毒株的同源性为99.7%~100.0%,与国外分离毒株核苷酸同源性为98.9%~99.1%。遗传进化分析表明,FJSW株与国内2012年以来新分离的流行毒株属于同一分支,与国外分离的毒株亲缘关系较远。鉴定结果表明,分离株FJSW是一株伪狂犬病变异毒株。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 分离鉴定 gg基因 序列分析
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表达猪细小病毒VP_2基因的重组伪狂犬病毒的构建及其生物学特征研究 被引量:21
14
作者 吕建强 陈焕春 +3 位作者 赵俊龙 方六荣 何启盖 熊符 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期133-137,共5页
根据Bergeron等报道的猪细小病毒(PPV)基因组,设计一对包含VP2全基因的PCR引物,上下游均引入一个BamHⅠ位点,扩增得到VP2基因后,将其插入到pUSK载体中,构建了转移载体pUSK VP2。采用脂质体介导的转染方法,将伪狂犬病毒TK-/gG-/LacZ+株... 根据Bergeron等报道的猪细小病毒(PPV)基因组,设计一对包含VP2全基因的PCR引物,上下游均引入一个BamHⅠ位点,扩增得到VP2基因后,将其插入到pUSK载体中,构建了转移载体pUSK VP2。采用脂质体介导的转染方法,将伪狂犬病毒TK-/gG-/LacZ+株的基因组DNA与pUSK VP2共转染PK 15细胞,待细胞病变后收集病毒液,在空斑纯化的同时,利用检测PPVVP2基因和LacZ基因的PCR方法筛选重组病毒TK-/gG-/VP+2株,Southernblotting、SDS PAGE、Westernblotting和电镜观察鉴定重组病毒,并在不同细胞上测定重组病毒的增殖滴度,接种小鼠进行安全性试验。结果发现,外源基因VP2已成功地插入到TK-/gG-/LacZ+亲本株的基因组中,并获得了表达。表达的VP2蛋白可以与猪细小病毒阳性血清反应,而且可以自行装配成病毒样颗粒。同时发现,VP2基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,其毒力与亲本株相当。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 猪细小病毒 VP2基因 猪繁殖障碍 表达
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表达绿色荧光蛋白的伪狂犬基因缺失病毒的构建 被引量:3
15
作者 王鑫 李文刚 +3 位作者 吴凤笋 魏娟 耿红娟 靳永健 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第1期41-44,共4页
通过酶切、补平、连接的方法对PUSK载体质粒进行改造,消除了该载体上的BamHⅠ和HindⅢ两酶切位点。根据pAcGFP1-C1基因序列设计1对引物,分别在上、下游引物的5′端引入了NotⅠ酶切位点,通过PCR扩增将目的基因AcGFP(包括GFP、CMV、MCS、S... 通过酶切、补平、连接的方法对PUSK载体质粒进行改造,消除了该载体上的BamHⅠ和HindⅢ两酶切位点。根据pAcGFP1-C1基因序列设计1对引物,分别在上、下游引物的5′端引入了NotⅠ酶切位点,通过PCR扩增将目的基因AcGFP(包括GFP、CMV、MCS、SV40 Poly(A))克隆入经改造的PUSK载体内,构建了转移载体质粒PUSG。利用脂质体介导的方法,将转移载体质粒PUSG与伪狂犬病病毒基因组DNA共转染PK-15细胞。于荧光显微镜下48 h便能观察到绿色荧光,用吸管将有荧光的病变细胞吸出,经连续传代3次得到了纯化病毒。重组病毒的获得为下一步研制二价或多价疫苗的筛选提供了方便。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 PUSK gg基因 pAcGFP1-C1 转移载体 表达
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表达猪2型圆环病毒ORF2基因的重组伪狂犬病病毒的构建及鉴定 被引量:7
16
作者 琚春梅 陈焕春 +2 位作者 郗鑫 刘正飞 曹胜波 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1716-1722,共7页
目的以伪狂犬病病毒为载体,构建表达猪2型圆环病毒ORF2基因的重组病毒,并研究其生物学特性。方法将猪2型圆环病毒ORF2基因插入到伪狂犬病病毒gG缺失通用转移载体中,构建猪2型圆环病毒-伪狂犬病病毒重组中间转移质粒,然后将该质粒与伪狂... 目的以伪狂犬病病毒为载体,构建表达猪2型圆环病毒ORF2基因的重组病毒,并研究其生物学特性。方法将猪2型圆环病毒ORF2基因插入到伪狂犬病病毒gG缺失通用转移载体中,构建猪2型圆环病毒-伪狂犬病病毒重组中间转移质粒,然后将该质粒与伪狂犬病病毒TK-/gG-/LacZ+基因组共转染IBRS-2细胞,待发生细胞病变后收集病毒液进行重组病毒的筛选及生物学特性测定。结果利用检测PCV2ORF2基因和LacZ基因的PCR方法筛选到重组病毒TK-/gG-/ORF2+,同时用Southernblotting证实外源基因PCV2ORF2已成功插入到TK-/gG-/LacZ+亲本株的基因组中。间接免疫荧光试验(IFA)和Westernblotting结果显示重组病毒中PCV2ORF2基因获得了成功表达。对重组病毒的生物学特性研究表明,重组病毒与其亲本株在不同细胞上的增殖滴度相当,且重组病毒对小鼠无致病性,免疫小鼠后可诱导机体产生抗ORF2蛋白的特异性抗体。结论重组伪狂犬病毒构建成功,且表达的ORF2蛋白具有免疫原性。 展开更多
关键词 猪2型圆环病毒 ORF2基因 伪狂犬病毒 TK^-/gg^-/ORF2^+ 鉴定
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伪狂犬病毒表达载体的构建 被引量:5
17
作者 丁建华 付烈振 +3 位作者 王家富 罗满林 谢小虎 张楚瑜 《武汉大学学报(自然科学版)》 CSCD 1997年第6期797-801,共5页
利用伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)湖北地方株胸腺核苷激酶(TK)基因和gG糖蛋白基因启动子(PgG),构建了PRV基因转移载体.通过β-半乳糖苷酶基因确定PgG控制下外源基因的表达并筛选出表... 利用伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)湖北地方株胸腺核苷激酶(TK)基因和gG糖蛋白基因启动子(PgG),构建了PRV基因转移载体.通过β-半乳糖苷酶基因确定PgG控制下外源基因的表达并筛选出表达β-半乳糖苷酶的PRV重组病毒.采用PCR对重组病毒进行了初步鉴定,证实外源基因可由构建的转移载体导入病毒tk基因中,重组的PRV湖北地方株可用于表达外源基因. 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 糖蛋白基因 启动子 基因载体 家畜
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猪IL-2与IL-6的原核表达及其对伪狂犬病基因缺失疫苗的佐剂效应研究 被引量:14
18
作者 严琳 何启盖 +4 位作者 陈焕春 肖少波 吴美洲 吕建强 韩丽 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期1213-1218,共6页
将猪白细胞介素2(pIL-2)与猪白细胞介素6(pIL-6)的cDNA序列克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a及pGEX-KG上,转化BL21(DE3)表达菌,经IPTG诱导产生重组蛋白pIL-2与pIL-6,表达量分别占菌株总蛋白的43.45%和28.37%,经提纯后含量可分别达到97.0... 将猪白细胞介素2(pIL-2)与猪白细胞介素6(pIL-6)的cDNA序列克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a及pGEX-KG上,转化BL21(DE3)表达菌,经IPTG诱导产生重组蛋白pIL-2与pIL-6,表达量分别占菌株总蛋白的43.45%和28.37%,经提纯后含量可分别达到97.06%和86.37%。将提纯后不同剂量的两种重组蛋白以单独或组合的方式,加入伪狂犬病(Ea株)TK^-/gG^-双基因缺失疫苗中,使每头份疫苗分别含2、5和10μg·ml^(-1)的pIL-2或(和)pIL-6,用此疫苗免疫伪狂犬病抗体阴性猪。同时设试验对照组。初次免疫30d后加强免疫,测定中和抗体,观察试验猪的日增重情况,进行统计分析。发现各试验组的抗体水平均高于不含重组蛋白的基因缺失疫苗组;其中,含2μg·ml^(-1)pIL-2试验组与含10μg·ml^(-1)pIL-2/pIL-6试验组抗体水平和基因缺失疫苗对照组之间呈显著差异(P=0.019)与极显著差异(P=0.009)。结果表明,大肠杆菌表达的pIL-2、pIL-6对伪狂犬病鄂A株基因缺失疫苗(TK^-/gG^-/LacZ^+)有较强的佐剂效应,且呈剂量相关性。不同试验组日增重比较结果表明,免疫效果高低与猪的生长速度呈正相关。本试验为重组pIL-2与pIL-6作为新型疫苗佐剂应用提供了重要的试验依据。 展开更多
关键词 IL-2 IL-6 原核表达 伪狂犬病基因 缺失疫苗 佐剂效应 CDNA序列 大肠杆菌
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HSV-2型糖蛋白G基因免疫优势表位片段的克隆和表达
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作者 成桂明 杨慧兰 《中国麻风皮肤病杂志》 2006年第8期627-629,共3页
目的:通过基因工程技术,克隆和表达单纯疱疹病毒2型糖蛋白G(HSV-2 gG)基因的免疫优势表位片段。方法:用PCR技术扩增HSV-2 gG基因的免疫优势表位片段;将PCR产物与质粒表达载体pGEX-4T-1连接;然后鉴定含有目的基因的重组表达载体;并转化... 目的:通过基因工程技术,克隆和表达单纯疱疹病毒2型糖蛋白G(HSV-2 gG)基因的免疫优势表位片段。方法:用PCR技术扩增HSV-2 gG基因的免疫优势表位片段;将PCR产物与质粒表达载体pGEX-4T-1连接;然后鉴定含有目的基因的重组表达载体;并转化大肠杆菌DH5α,诱导表达目的蛋白;以免疫印迹法检测表达的目的蛋白。结果:PCR法扩增出1 242 bp的DNA片段;通过PCR法及测序法证实重组质粒中含有1 242 bp的DNA片段,其中99.5%序列与目的基因序列一致。SDS-PAGE和免疫印迹法证实重组蛋白在大肠杆菌中的表达。结论:HSV-2 gG基因的免疫优势表位片段的成功表达,为制备HSV-2血清诊断试剂奠定了基础。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒2型糖蛋白G 基因克隆 基因表达
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炎症相关基因多态性与子宫颈癌风险及疗效的关系
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作者 姚美珍 《中国医学创新》 CAS 2016年第32期118-120,共3页
目的:探讨炎症相关基因多态性与子宫颈癌风险及疗效的关系。方法:纳入本院妇产科行子宫颈癌手术切除患者的病理样本共计96例,另外纳入正常子宫颈黏膜78例作为对照组,采用基因测序的方法确定单核苷酸多态性的等位基因,分析两组患者的基... 目的:探讨炎症相关基因多态性与子宫颈癌风险及疗效的关系。方法:纳入本院妇产科行子宫颈癌手术切除患者的病理样本共计96例,另外纳入正常子宫颈黏膜78例作为对照组,采用基因测序的方法确定单核苷酸多态性的等位基因,分析两组患者的基因型与临床特点,探讨分析子宫颈癌的淋巴结转移与不同的MMP-2基因型之间的关系。结果:MMP-2基因型在子宫颈癌组织及正常组织中基因型的分布是不相同的,通过多因素的Logistic回归分析显示GC和GG两种基因型是子宫颈癌发病的危险因素;淋巴结转移的患者GG基因型的比例要高于未转移子宫颈癌患者。结论:MMP-2的G等位基因是子宫颈癌的危险因素,GG基因型与子宫颈癌的淋巴结转移及预后有着相关性,可作为子宫颈癌发病及转移的危险因素。 展开更多
关键词 子宫颈癌 MMP-2 gg基因型 GC基因型 基因多态性 炎症相关
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