Ⅱ型单纯疱疹病毒培养及gG-2基因特异片段的克隆

目的:通过培养和扩增Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)并提取其全基因组,从而克隆包膜糖蛋白gG-2全长基因及其保守性较高、抗原性较强的特异片段。方法:将HSV-2病毒感染Hela细胞获得大量病毒液,用酚-氯仿法提取病毒全长基因组,并以此为模板扩增编码gG-2的US4基因,再根据氨基酸序列比对结果,选取其特异片段,设计带酶切位点的引物克隆gG-2基因特异片段。结果:成功地获得了大量HSV-2病毒液并提取了病毒基因组,克隆了gG-2全长基因以及特异片段,测序证实,两者均与GenBank中报道的序列相一致。结论:对于遗传特性相对稳定的HSV-2来说,通过病毒感染细胞的方法短时期内获得大量病毒液,并从病毒全基因组中克隆gG-2特异基因片段的方法是可行的,从而为进一步构建gG-2特异片段相关载体、表达相应蛋白奠定了基础。

单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)包膜糖蛋白gG-2相关研究进展

本文综述了单纯疱疹Ⅱ型的包膜糖蛋白 gG 2作为抗原在HSV 2血清学诊断分型脐包膜糖白 gG

单纯疱疹病毒2型gG-2“独特区”基因的原核表达及其血清学诊断价值

目的在大肠杆菌中表达HSV-2的gG-2"独特区"基因(gG-2T)并对其免疫学特性进行初步研究。方法克隆HSV-2的gG-2T,并在大肠杆菌中表达gG-2T融合蛋白。通过Western blot和间接ELISA鉴定融合蛋白的活性。结果通过原核系统表达的gG-2T融合蛋白可以与GST多克隆抗体结合并在46 ku附近出现特异性结合条带。并且能够与确诊的HSV-2患者血清反应,而不与HSV-1患者血清和正常人血清反应。结论获得了HSV-2 gG-2T融合蛋白,它可以与GST多克隆抗体特异性结合并且可以同HSV-2型患者血清特异性反应;获得的gG-2T蛋白为研究以gG-2蛋白作为靶区域的诊断试剂盒和疫苗研发打下实验基础。

GG-2型车辆滚动轴承微机检测系统

ＧＧ—２型车辆滚动轴承微机检测系统王立业（哈尔滨铁路局车辆处１５０００１哈尔滨）董克宁（哈尔滨车辆段１５００１６哈尔滨）为了准确获得滚动轴承各项测量数据，我们采用传感器，测微仪和计算机等高精仪器组成了ＧＧ—２型滚动轴承的智能检测系统。使用该系统避免了...

单纯疱疹病毒-2型抗原gG-2在大肠埃希菌中的表达及纯化

目的用基因工程方法表达单纯疱疹病毒-2型(HSV-2型)血清型特异性抗原,代替传统的病毒检测抗原。方法采取PCR和蛋白质原核细胞表达方法。结果成功地克隆出了HSV-2型特异性基因,采用该抗原包被试剂盒,能检测出生殖器疱疹感染者血清中的IgM抗体。结论HSV-2型特异性抗原基因的成功表达,为HSV-2型感染者的特异性诊断和HSV-2型疫苗的研究打下基础。

表达猪2型圆环病毒ORF2基因的重组伪狂犬病病毒的构建及鉴定

目的以伪狂犬病病毒为载体,构建表达猪2型圆环病毒ORF2基因的重组病毒,并研究其生物学特性。方法将猪2型圆环病毒ORF2基因插入到伪狂犬病病毒gG缺失通用转移载体中,构建猪2型圆环病毒-伪狂犬病病毒重组中间转移质粒,然后将该质粒与伪狂犬病病毒TK-/gG-/LacZ+基因组共转染IBRS-2细胞,待发生细胞病变后收集病毒液进行重组病毒的筛选及生物学特性测定。结果利用检测PCV2ORF2基因和LacZ基因的PCR方法筛选到重组病毒TK-/gG-/ORF2+,同时用Southernblotting证实外源基因PCV2ORF2已成功插入到TK-/gG-/LacZ+亲本株的基因组中。间接免疫荧光试验(IFA)和Westernblotting结果显示重组病毒中PCV2ORF2基因获得了成功表达。对重组病毒的生物学特性研究表明,重组病毒与其亲本株在不同细胞上的增殖滴度相当,且重组病毒对小鼠无致病性,免疫小鼠后可诱导机体产生抗ORF2蛋白的特异性抗体。结论重组伪狂犬病毒构建成功,且表达的ORF2蛋白具有免疫原性。

新生MnO_2对水中酸性媒介深黄GG的吸附脱色作用

以化学法合成的新生 Mn O2 作吸附剂 ,对水中酸性媒介深黄 GG进行吸附脱色研究 ,探讨了影响吸附的因素。结果表明 ,该吸附剂在 p H1.5以下、投加量为 0 .3 mg/L、温度为 15℃条件下 ,饱和吸附量达 13 2 0 mg/g,脱色率达 96%以上 ,具有很高的吸附脱色能力。 p H值是影响吸附能力的关键因素 ,温度、染料浓度和 Mn O2 投加量影响程度较小。

HSV-2型糖蛋白G基因免疫优势表位片段的克隆和表达

目的:通过基因工程技术,克隆和表达单纯疱疹病毒2型糖蛋白G(HSV-2 gG)基因的免疫优势表位片段。方法:用PCR技术扩增HSV-2 gG基因的免疫优势表位片段;将PCR产物与质粒表达载体pGEX-4T-1连接;然后鉴定含有目的基因的重组表达载体;并转化大肠杆菌DH5α,诱导表达目的蛋白;以免疫印迹法检测表达的目的蛋白。结果:PCR法扩增出1 242 bp的DNA片段;通过PCR法及测序法证实重组质粒中含有1 242 bp的DNA片段,其中99.5%序列与目的基因序列一致。SDS-PAGE和免疫印迹法证实重组蛋白在大肠杆菌中的表达。结论:HSV-2 gG基因的免疫优势表位片段的成功表达,为制备HSV-2血清诊断试剂奠定了基础。

pGEX-4T-1/HSV2-gG重组质粒的构建及表达

目的通过基因工程技术,构建含有目的基因的重组质粒(pGEX-4T-1/HSV2-gG)。方法用PCR技术扩增HSV2-gG基因的免疫优势表位片断;将PCR产物与质粒表达载体pGEX-4T-1连接;然后鉴定含有目的基因的重组表达载体;并转化大肠杆菌DH5α,诱导表达目的蛋白;以免疫印迹法检测表达的目的蛋白。结果PCR法扩增出1242bp的DNA片断;通过PCR法及测序法证实重组质粒中含有1242bp的DNA片断。SDS-PAGE和免疫印迹法证实重组蛋白在大肠杆菌中的表达。结论重组质粒HSV2-gG-pGEX-4T-1的成功构建及表达,为制备HSV-2血清诊断试剂奠定了基础。

IL-2基因启动子区域T-384G基因多态性与中国汉族人肠易激综合征的关系

目的探讨IL-2基因启动子区域T-384G基因多态性与肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)及其血清IL-2水平的关系。方法采用病例-对照研究方法纳入IBS患者(IBS组,n=213)及年龄、性别相匹配的健康人群(对照组,n=213)。以聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度(PCR-RFLP)方法分析2组IL-2基因启动子区域T-384G基因多态性。以酶联免疫吸附方法(ELISA)测定2组血清IL-2水平。结果 IBS组及对照组TT、TG及GG基因型分布频数分别为77、100、36及115、86、12。IBS组GG基因分布显著高于对照组(P<0.05)。GG基因型人群血清IL-2水平显著高于TT+TG(P<0.05)。结论 GG基因型是IBS易患基因,可能与其具有较高的IL-2表达水平有关。

炎症相关基因多态性与子宫颈癌风险及疗效的关系

目的:探讨炎症相关基因多态性与子宫颈癌风险及疗效的关系。方法:纳入本院妇产科行子宫颈癌手术切除患者的病理样本共计96例,另外纳入正常子宫颈黏膜78例作为对照组,采用基因测序的方法确定单核苷酸多态性的等位基因,分析两组患者的基因型与临床特点,探讨分析子宫颈癌的淋巴结转移与不同的MMP-2基因型之间的关系。结果:MMP-2基因型在子宫颈癌组织及正常组织中基因型的分布是不相同的,通过多因素的Logistic回归分析显示GC和GG两种基因型是子宫颈癌发病的危险因素;淋巴结转移的患者GG基因型的比例要高于未转移子宫颈癌患者。结论:MMP-2的G等位基因是子宫颈癌的危险因素,GG基因型与子宫颈癌的淋巴结转移及预后有着相关性,可作为子宫颈癌发病及转移的危险因素。

炎症相关基因多态性与心脏瓣膜置换术后华法林治疗疗效的相关性研究

目的探索炎性基因基质金属蛋白酶2(MMP2)的一种G/C多态现象与心脏瓣膜置换术后华法林治疗的关系。方法纳入2010年1月至2015年1月在我院胸心外科行心脏瓣膜置换术后华法林治疗的患者96例作为试验组,另纳入心脏瓣膜置换术后未采用华法林治疗的患者78例作为对照组,采用基因测序的方法确定单核苷酸多态性的等位基因,分析两组患者的基因型与临床特点,探讨心脏瓣膜置换术后华法林治疗与不同的MMP2基因型之间的关系。采用logistic回归分析基因型与心脏瓣膜置换术后危险因素之间的相关性;运用Kaplan-Meier生存曲线对携带MMP2 GC与GG两种基因型患者的生存与疗效情况进行分析。结果 MMP2基因型在术后采用华法林治疗与未采用华法林治疗的基因型分布是不相同的,多因素logistic回归分析显示GC与GG两种基因型是心脏瓣膜置换术后并发症发生的危险因素。术后并发症发生的患者GG基因型的比例要高于未出现并发症患者,治疗疗效及生存分析方面,携带MMP2 GG基因型的患者生存时间要短于携带GC基因型,两组差异有统计学意义,MMP2 GG基因型表达的高低与预后有着一定的相关性。结论 MMP2的G等位基因是心脏瓣膜置换术后并发症发生的危险因素,GG基因型与心脏瓣膜置换治疗及预后有相关性,可作为心脏瓣膜置换术后危险因素。