鉴别猪伪狂犬病病毒gI/gE基因部分缺失疫苗株和野毒株的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种鉴别猪伪狂犬病病毒(PRV)gI/gE基因部分缺失疫苗株和野毒株的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,本试验依据PRV HB-98株和HB2000株的gE和gI基因缺失片段设计特异性引物和探针,优化反应体系,绘制标准曲线,进行特异性试验和敏感性试验,对临床样本和疫苗样本进行检测,并与商品化试剂盒的检测结果进行对比。结果显示,本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的标准曲线R^(2)为0.9971;该方法特异性强,能区分PRV与其他常见的猪病原体;敏感性高,最低检测限为10 copies/μL;对临床样本的检测结果与商品化试剂盒的检测结果一致;能够区分PRV gI/gE基因部分缺失的疫苗株和野毒株。结果表明,本试验建立了一种特异性强、灵敏度高、适用范围广的鉴别诊断PRV gI/gE基因部分缺失疫苗株和野毒株的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。

马立克氏病病毒广西株G2囊膜糖蛋白gI基因的克隆和表达

根据马立克氏病病毒 ( MDV)强毒株 GA的基因序列 ,设计并合成了 1对引物 ,以强毒株 G2基因组DNA为模板 ,通过 PCR技术 ,扩增其囊膜糖蛋白 g I基因阅读框 ( ORF)中 ,除去其 N-端编码疏水区 1 6 5个碱基对 ( bps)以外的部分 ;将 PCR产物按正确的阅读框架定向克隆到表性载体 p GEX-6 P-1中谷胱甘肽转移酶( GST)基因的下游 ;将重组质粒转化入大肠杆菌 BL2 1 株 ,在 1 .0 mmol/L IPTG浓度和 30℃的条件下诱导 ,g I-GST基因融合蛋白获了理想的表达 ;经聚丙烯酰胺凝胶电泳和 Western-blotting试验 ,验证其表达的融合蛋白产物大小为预期的 6 30 0 0。将表达产物回收后免疫小鼠 ,所得抗血清可与 MDV感染的鸡胚成纤维细胞 ( CEF)在免疫荧光试验 ( FA)中 ,呈细胞膜阳性染色。试验结果表明 ,在大肠杆菌中表达的 G2株 MDV g

马立克氏病病毒648株囊膜糖蛋白gI基因的克隆和表达的研究

根据马立克氏病病毒 (MDV)强毒株GA的基因序列 ,设计和合成一对引物 ,以特超强毒 6 48株基因组DNA为模板 ,通过PCR技术 ,扩增其囊膜糖蛋白gI基因阅读框 (ORF)中 ,除去其N_端编码疏水区的 16 5个碱基对 (bp)以外的其余部分 ;将PCR产物按正确的阅读框架定向克隆到表性载体pGEX_6P_1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游 ;将重组质粒转化进大肠杆菌BL2 1株 ,在 1.0mMIPTG浓度和 30℃的条件下诱导 ,gI_GST基因融合蛋白获得了理想的表达 ;经聚丙烯酰胺凝脉电泳 ,West ern_blot试验 ,验证其表达的融合蛋白产物大小为预期的 6 3kD。将表达产物回收后免疫小鼠 ,所得抗血清可与MDV感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)在免疫荧光试验 (FA)中呈细胞膜阳性染色。试验结果表明 ,在大肠杆菌中表达的 6

猪伪狂犬病病毒NP株gE、gI基因的克隆及序列分析

根据GenBank中已发表的猪伪狂犬病病毒（PRV）gE、gI基因的序列设计了2对引物,对PRV NP株的gE、gI基因进行了PCR扩增、回收、克隆、测序,测序结果与预期的PRVgE、gI基因片段相符。同源性比对分析结果显示,PRV NP株gE、gI基因推导的氨基酸序列与国内分离的PRV毒株的同源性分别为95.7%~99.8%、89.9%~99.5%。遗传进化树分析和氨基酸序列比对结果发现PRV NP株的gE氨基酸序列发生变化的位点与2012年国内分离到的PRV流行株相同,从而推测NP株为PRV变异毒株,本研究为PRV的流行病学调查分析奠定了基础,也为开发科学、有效的新型猪伪狂犬病（PR）疫苗提供科学依据。

PRV FB株gE/gI基因缺失株的构建及其灭活疫苗免疫保护效力评价

自2011年以来,新型伪狂犬病病毒(PRV)变异株在我国免疫猪场不断出现,导致目前商品化疫苗免疫效果不佳。为研究PRV FB株gE/gI基因缺失株疫苗防控新型PRV变异株感染的效果,本研究以PRV自然弱毒FB株作为亲本株,通过同源重组的方法构建了PRV g E/gI基因缺失株,将不同代次PRV FBΔgE/gI株与亲本PRV FB株分别接种BHK-21细胞,观察CPE和测定TCID50效价,分析缺失株的遗传稳定性,结果显示FBΔgE/gI株感染BHK-21细胞后产生与亲本株FB相似的CPE,且不同代FBΔgE/gI株的TCID50与亲本株相比均无明显变化。将FB株、FBΔgE/gI株、Bartha-K61株分别接种健康新西兰兔,比较三者的安全性,结果显示,接种BarthaK61株的家兔全部死亡(5/5),接种FB株的家兔死亡2只(2/5),而接种FBΔgE/gI株的家兔全部(5/5)健活,表明FBΔgE/gI株对新西兰兔的致病力较低,安全性更高。将FBΔgE/gI株分别与水相佐剂GEL02和两性佐剂ISA 206制成灭活疫苗免疫绵羊28 d后,采用ELISA法检测各组绵羊的gB和gE抗体,并且以PRV变异株FJ-2012攻毒,评估FBΔgE/gI株灭活疫苗对绵羊的保护效力,结果显示,接种GEL02和ISA 206为佐剂的FBΔgE/gI灭活疫苗绵羊在免疫后28 d,抗体均全部转阳;对照组绵羊在攻毒后6 d内全部死亡(5/5),以GEL02作为佐剂的灭活疫苗组绵羊死亡2只(2/5),而以ISA 206为佐剂的绵羊全部存活(5/5),保护率达到100%,表明以ISA 206作为佐剂的FBΔgE/gI株灭活疫苗能够完全保护绵羊抵御PRV变异株的攻击。本研究首次基于PRV自然弱毒FB株构建的FBΔgE/gI株,与Bartha-K61株相比具有更高的安全性,与佐剂ISA 206制成灭活疫苗免疫绵羊后能够完全抵抗新发变异PRV的攻击,具有完全保护作用。本研究为我国新发变异PRV疫苗的研发提供了新的参考依据。

电针对高血压性脑出血大鼠海马Gi_2α、Gi_3α基因转录的影响

目的:从基因转录水平研究电针对高血压性脑出血的治疗作用及其可能作用机制。方法:双肾双夹法复制易卒中型肾血管性高血压模型,以胶原酶加肝素脑内注射诱发脑出血,建立高血压性脑出血大鼠模型。运用Northernblotting分子杂交技术动态检测电针治疗后不同时相点脑出血大鼠海马Gi蛋白α亚基基因转录水平。结果:模型组大鼠海马Gi2αmRNA、Gi3αmRNA表达明显减弱,其中以Gi2αmRNA表达下降更为明显。电针治疗后,大鼠海马Gi2αmRNA、Gi3αmRNA表达均呈现不同程度的增强,并随着时间的推移而逐渐趋于恢复。结论:电针水沟、内关、足三里穴治疗脑出血的作用机制可能与上调脑组织Giα基因转录水平,使Giα蛋白合成增加,进而减轻了紊乱的信号转导系统对脑组织引起的损害等作用有关。

IBRV DQ分离株gI基因的克隆与序列分析

通过PCR扩增得到牛传染性鼻气管炎病毒大庆分离株（IBRV-DQ）gI基因上一个398 bp的片段.扩增产物经克隆、测序,所得到的核苷酸序列与GenBank上已发表的此病毒其他分离株的核甘酸序列相比,其同源性在95.5%～99.3%,表明IBRV gI基因非常保守.在系统进化树中IBRV-DQ株与U14106.1、U14107.1株亲缘关系较近,属于同一个分支.

pGEX载体表达马立克氏病病毒囊膜糖蛋白gI基因的最佳条件

通过聚合酶链式反应 (PCR) ,扩增出马立克氏病病毒特超强毒 (vv +MDV) 648株囊膜糖蛋白gI基因 ,并将该基因按正确的阅读框 (ORF)克隆到表达性载体质粒pGEX 6P 1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游。重组质粒 (pGEX gI)经氯化钙转化宿主菌BL2 1 ;通过建立重组菌生长时间与OD60 0 值间的关系曲线 ,以及对诱导时间、诱导温度、IPTG浓度等条件的摸索 ,根据聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)判定GST gI融合蛋白的最佳表达条件 ,并经蛋白质印迹试验 (WesternBlotting)对表达产物进行了验证。将表达产物免疫小鼠 ,所得抗血清能与MDV感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)在间接免疫荧光试验 (IFA)中 ,呈较强的细胞膜荧光着色。实验结果表明 :IPTG的最佳浓度为 0 2～ 0 5mmol L ;最适的诱导时期为重组菌生长对数中期 ;温度对表达几乎没有影响。

伪狂犬病病毒上海株的gI基因的克隆和序列分析

参考 Genebank发表的伪狂犬病病毒( Pseudorabies Virus,PRV)的 g I糖蛋白基因序列 ,自行设计合成一对引物 ,对 PRV上海株( PRV-SH)进行 PCR扩增 ,产物经琼脂糖电泳分析 ,呈现一条约 960 bp的条带 ,将其克隆入p GEM-T-easy载体中 ,并进行序列测定 ,与PRV Rice株 g I基因比较发现 ,核苷酸的同源性为 94.7% ,氨基酸的同源性为 91 .3 % ,证实为g

伪狂犬病病毒上海株gE和gI基因的克隆及序列分析

参考Genebank发表的伪狂犬病病毒 (PseudorabiesVirus,PRV)的gI和gE基因序列 ,自行设计并合成了两对引物 ,对PRV上海株 (PRV_SH)进行PCR扩增 ,产物经琼脂糖电泳分析 ,均呈现一条约 96 0bp和 174 0bp的条带 ,将其克隆入pGEM_T_easy载体中 ,进行了序列测定。将PRV_SH株的gI基因与Rice株gI基因比较发现 ,核苷酸的同源性为 94 .7% ,氨基酸的同源性为91.3% ,证实为gI基因。将PRV_SHgE基因序列与Ea株、Ruce株gE基因序列进行比较 ,结果显示 ,该序列与PRVEa株、Rice株gE基因的同源性分别为 98.5 %、97.5 % ;推导的氨基酸序列与Ea株 ,Rice株和I型单纯疱疹病毒 (HSV_1) 17株gE的同源性分别为 97.2 %、94 .8%和 15 .6 %。

基于遗传算法和GIS的作物空间布局优化

作物空间布局是耕作制度中的一个重要内容,它是一种具有自然、社会、耕作制度等多方面影响因素及空间特征的组合优化问题。传统的优化算法解决具有空间特征的组合优化问题的效率很低,或者难以解决。遗传算法是一种新的智能优化算法,它通过模拟自然进化过程,利用简单的编码技术和遗传操作来高效的解决复杂的组合优化问题。本文提出了一种以地理信息系统(GIS)为平台,遗传算法为空间布局优化模型的作物空间布局优化方法。

伪狂犬病病毒上海株gE^-/gI^-/GFP^+缺失株的生物学特性初步研究

在构建了伪狂犬病病毒上海株的缺失载体 pgEI-GFP 基础上,将 pgEI-GFP 转染感染了 PRV-SH 株的 BHK-21细胞,待出现 80%以上的细胞病变时收获病毒,并以绿色荧光蛋白为标志,通过蚀斑法得到纯化重组病毒gE-/gI-/GFP+ 缺失株。研究了该缺失株的的安全性、在细胞上的生长特性以及对断奶仔猪的安全性、免疫原性等生物学特性。试验结果显示,缺失了 gE-和 gI-后,不影响其在 RK 细胞上的生长状况和病毒的滴度。该疫苗株对小鼠的半数致死量比亲本毒低且对家兔的致死性的时间延长了,这表明该疫苗的毒力比亲本毒有所下降。该缺失株对断奶仔猪安全,无不良接种反应,接种断奶仔猪能抵御高剂量 PRV-SH 株强毒的感染,攻毒后试验猪的发热期、散毒天数均低于对照组。该缺失株接种仔猪后在试验期间一直维持较高水平的中和抗体。

基于遗传算法和GIS的县域水田种植制度空间布局优化

采用种植模式对县级尺度的作物进行空间配置,能够较好地解决作物空间布局中熟制比例不当、茬口不适宜等问题。种植制度空间布局优化的目的在于通过合理配置种植模式的空间位置,以充分利用并保护当地的自然资源和社会资源。其本质是一种具有自然、社会、耕作制度等多方面影响因素及空间特征的组合优化问题。传统的优化算法解决具有空间特征的组合优化问题效率很低,或者难以解决该类问题。遗传算法是一种新的智能优化算法,通过模拟自然进化过程,利用简单的编码技术和遗传操作高效地解决复杂的组合优化问题。提出了一种以GIS为平台,遗传算法为优化模型的县域种植制度空间布局优化方法。

GIS技术在果树适宜种植区域选择中的应用

以永泰县枇杷果树适宜种植区域选择为例,通过对数字高程模型进行地形分析,提取坡度、坡向、坡位信息,以及计算出避冻因子,采用GIS技术进行空间叠置分析,筛选出适宜种植枇杷的生态区域,研究GIS在果树种植中的应用,指导农业生产。

鸭瘟病毒河南株gI基因的克隆与测序

参考GenBank中鸭瘟病毒gI基因序列设计并合成引物,以鸭瘟病毒河南分离株DNA为模板进行PCR扩增,将扩增片段克隆至PGEM-T载体上,得到含gI基因重组质粒。经酶切鉴定,并对重组阳性质粒进行序列测定。结果表明,获得的片段含鸭瘟病毒gI基因,全长1 089 bp,与已报道的其他疱疹病毒gI基因具有较高的同源性,编码432个氨基酸,蛋白分子质量为39.7ku、等电点(PI)为6.06。

早搏灵对肾上腺素诱导心律失常家兔Gi基因表达的影响

目的:观察早搏灵对快速性心律失常家兔Gi基因表达以及心律失常持续的时间,进一步探讨早搏灵的抗心律失常的作用机理。方法:选取清洁级新西兰家兔32只,雌雄各半,采用随机分组的方法将其分为4组,分别标注为空白组、模型组、实验组(早搏灵组)、对照组(普奈洛尔组),观察各组家兔Gi基因和心律失常持续的时间。结果:早搏灵组、普萘洛尔组心肌组织Gi基因表达明显高于模型组(P<0.05),具有统计学意义,早搏灵组与普萘洛尔组相比,无明显差异(P>0.05)。早搏灵组、普萘洛尔组与模型组相比,心律失常持续的时间缩短(P<0.05),具有统计学意义。早搏灵组与普萘洛尔组相比较,无明显差异(P>0.05)。结论:早搏灵能够使肾上腺素诱导的心律失常家兔心肌组织中的Gi基因的表达上调,证明早搏灵抗心律失常的机理之一可能是通过调控心肌组织Gi基因的表达,达到抗心律失常的作用,其疗效与普萘洛尔相当。

基于GIS的黑龙江省洪水灾害的空间地域组合分析

本文利用地理信息系统(GIS)技术的空间定位功能和属性分析功能,将洪灾的主要孕灾因子复合叠加,结果表示.黑龙江省洪水灾害的空间地域组合的基本特征是森林覆盖率<20％;地貌形态多为平原、沼泽地或平原沼泽地;夏季降水>400mm;暴雨日>0.5日;夏季气温>17C.

伪狂犬病病毒上海株gE和gI基因的克隆及缺失转移载体的构建

根据已发表的伪狂犬病病毒 (PseudorabiesVirus,PRV)的 gI和 gE 基因序列 ,设计两对引物用PCR方法扩增出PRV SH gI和 gE 基因 ,将其克隆入 pUC18载体中 ,获得了缺失部分gI基因的转移载体质粒 ,命名为 pgEI。

基于GIS的非物质文化遗产景观基因识别与表达——以湖南省为例

湖南省是中国非物质文化遗产保存较为丰富与完整的重要省区。结合前期非物质文化遗产景观基因的定性研究,以湖南省20项典型的国家级非物质文化遗产为例,探讨非物质文化遗产景观基因的GIS技术内涵、技术流程和技术编码,建立了其景观基因的GIS识别与数字表达技术。在此基础上,运用Arc GIS软件平台,通过属性编码识别与空间编码表达了该省非物质文化遗产景观基因的空间特征。研究结果表明:(1)运用已有成熟的GIS技术平台,可有效可视化与分析出该省非物质文化遗产在各个方面、尺度与角度等的景观基因信息的空间分布、属性及其表达的特征;(2)无论从该省非物质文化遗产景观基因的总体分布还是单项分布的角度,都能显示有着明显的湘西、湘东北、湘东、湘中南等地域分异。

基于GIS的非物质文化遗产景观基因保护价值——以湖南省为例

借鉴文化地理学领域的传统聚落景观文化基因识别理论,对全国非物质文化遗产名录中收录的20项湖南省非物质文化遗产进行景观基因GIS识别研究。在此基础上,通过对其文化特质、外在表征的把握,提出湖南省非物质文化遗产的保护价值。研究结果表明:生产生活习俗方面,具有宜居宜业的保护价值;文化艺术方面,具有科技游艺的保护价值;民俗信仰方面,具有美好生活愿望的保护价值;文化的迁移与交融方面,具有人文风情的保护价值;地理环境方面,具有生态经济文明的保护价值。