IL-18和HIV-1gag-gp120嵌合基因DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答

目的 :探讨IL 18和HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答。方法 :构建含IL 18的真核表达质粒pVAXIL18,将他与表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒pVAXGE共同肌注免疫BALB/c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果 :联合免疫组小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平均显著高于单独免疫组 (P <0 .0 5 ) ,空白质粒对照组 (P <0 .0 1)和PBS对照组 (P <0 .0 1)。结论 :IL 18和HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗联合免疫可诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫 ,且IL 18发挥了免疫佐剂的作用。

中国流行株HIV-1gag-gp120与IL-2/IL-6共表达核酸疫苗质粒的构建和实验免疫研究

以pcDNA3.1(+ )为载体 ,构建了含中国流行株HIV_1gag_gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒 ;并以pIRES 1neo为载体 ,构建了gag_gp12 0与IL_2 /IL_6共表达的 2种核酸疫苗质粒。将核酸疫苗质粒在体外转染BHK_2 1细胞 ,ELISA方法检测到 3种核酸疫苗质粒均表达了目的HIV_1结构蛋白。将核酸疫苗质粒免疫小鼠 ,免疫学指标检测结果表明 ,在本实验条件下 ,未能检测到含有gag_gp12 0的核酸疫苗质粒免疫鼠的细胞免疫和体液免疫功能的明显改变 ;而与IL_2 /IL_6共表达的 2种核酸疫苗质粒使免疫鼠CD4 +、CD8+T细胞数量明显升高 ,ConA和LPS诱导的细胞增殖能力显著增强 ,CTL活性明显提高 。

Ⅰ型人免疫缺陷病毒gag-gp120嵌合基因核酸疫苗的构建与鉴定

目的 :构建含Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1) gag gp12 0嵌合基因核酸疫苗的表达质粒。方法 :将gag和 gp12 0连接后的嵌合基因插入到真核表达载体 pVAX1中 ,构建真核表达质粒pVAXGE。用脂质体法将构建的重组质粒转染Hela细胞 72h后 ,取转染的Hela细胞进行RT PCR检测和和Dot ELISA分析。结果 :重组质粒转染细胞的总RNA中 ,可扩增出目的基因的转录产物。Dot ELISA的结果显示 ,目的基因在Hela细胞内得到表达。结论 :成功地构建了表达gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒 ,为HIV

含中国流行株HIV-1Gag-gp120融合蛋白的重组鸡痘病毒的构建

目的 :用重组鸡痘病毒表达中国流行株HIV 1Gag gp12 0融合蛋白。方法 :在以鸡痘病毒 2 82E4株为基础构建的重组表达质粒pUTAL的ATI P7 5复合启动子下游 ,插入编码中国流行株HIV 1Gag gp12 0嵌合基因 ,构建了重组表达质粒pUTALGP。重组质粒与FPV共转染CEF细胞 ,进行了同源重组。通过PUdR加压筛选 ,X gal染色 ,获得重组鸡痘病毒vUTAL GP。结果 :经Westernblot检测表明 ,重组病毒表达了Gap gp12 0融合蛋白 ,其分子量分别为 110× 10 3、6 9× 10 3、48× 10 3、2 4×10 3。电镜观察可见Gag蛋白在CEF细胞中形成的反转录病毒样粒子。重组病毒免疫小鼠 ,能够诱导HIV 1特异的血清抗体反应。结论 :重组鸡痘病毒成功的表达了Gag gp12 0融合蛋白 ,并进行了正确的加工。

表达HIV-1 gag-gp120嵌合基因的DNA疫苗在小鼠体内的免疫应答

目的 :检测表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗在小鼠体内的免疫应答效果。方法 :将真核表达质粒pVAXGE肌肉注射BALB C小鼠 ,观察免疫小鼠脾T淋巴细胞亚群的数量、特异性CTL杀伤率及小鼠免疫后不同时间点血清中IgG抗体滴度。结果 :重组质粒pVAXGE免疫组小鼠脾淋巴细胞进行了增殖 ,脾特异性CTL杀伤率显著高于对照组 (P <0 0 1) ;小鼠免疫后于第 8周血清抗体达到最高。结论 :表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗质粒可诱导BALB

中国株HIV-1融合基因gag-gp120在大肠杆菌中的表达

艾滋病是目前人类最难控制、耗资最大的一类病毒性疾病,引起艾滋病的主要病原为HIV-1.Gap蛋白是HIV-1的主要结构蛋白之一,它在病毒的复制、成熟、感染和形态维持等方面均起着重要的作用,并能诱导机体产生体液免疫和细胞免疫.由于它在不同毒株间相对保守,因此,其诱导的抗体水平在临床上成为HIV感染的主要检测指标.Gp120蛋白是由HIV-1 Env蛋白经剪切而形成的,在gp120上的C2区及其羧基末端等都与中和抗体的产生有关,因此,它已作为首选的HIV-1亚单位疫苗和重要的诊断试剂.在大肠杆菌中表达外源基因具有操作简便,成本低廉等优点.尽管有些表达的产物不能被忠实地翻译后加工,但可作为检测和诊断方面的研究.

共表达HIV-1的gag-gp120与IL-2的pGPIL-2诱导小鼠产生细胞毒性T细胞的研究

目的 研究HIV-1CN融合基因与IL-2基因共表达基因质粒pGPIL-2诱导产生细胞毒性T细胞（CTL）。方法 脂质体介导共表达中国流行株HIV-1gag-gp120基因与IL-2基因的基因疫苗质粒pGPIL-2转染BHK-21细胞,以间接免疫荧光法鉴定其表达。取pGPIL-2免疫鼠脾细胞,检测pGPIL-2诱导的细胞毒性T细胞杀伤活性。结果 杀伤实验结果证明,经基因免疫获得的 CTL效应细胞,可杀伤 HIV-1CN 融合基因转染的靶细胞。结论 pGPIL-2可有效地诱导 CTL的产生,该研究结果为进一步设计中国流行株HIV-1基因疫苗提供了重要实验依据。

HIV-1结构蛋白gag-gp120与白细胞介素2联合基因免疫

在真核表达载体pVAX1中的CMV启动子下游插入IL-2基因,构建真核表达质粒pVAXIL2。将它与表达I型人免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirus1,HIV-1)gag-gp120的核酸疫苗质粒pVAXGE共同肌肉注射BALB/c小鼠,免疫3次后,以ELISA法检测免疫小鼠血清中抗HIV-1抗体水平,结果显示联合免疫组小鼠在免疫2周后已有抗体产生,6周后进入高峰。乳酸脱氢酶释放法检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性,结果显示联合免疫组小鼠脾特异性CTL杀伤活性显著高于pVAXGE单独免疫组(P<0.05)和载体质粒pVAX1对照组(P<0.01)。以上结果表明:HIV-1核酸疫苗质粒pVAXGE与真核表达质粒pVAXIL2联合免疫可诱导特异性体液免疫和细胞免疫应答,且免疫应答水平高于pVAXGE单独免疫组,IL-2发挥了免疫佐剂的作用,增强了核酸疫苗的免疫原性。

表达HIV-1 gag-gp120嵌合基因酵母工程菌的构建及表达条件的优化

目的 构建表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的酵母工程菌 ,并优化表达条件。方法 将gag gp12 0嵌合基因插入到酵母表达载体pHILS1中 ,构建了表达质粒pHILGP。线性化质粒电转化毕赤酵母菌GS115后进行整合 ,通过PCR及表达产物的SDS PAGE和ELISA等方法筛选阳性酵母工程菌 ,并优化表达条件。结果 成功构建表达融合蛋白的酵母工程菌 ,表达量为 13%左右。表达蛋白能与HIV 1阳性血清发生反应 ,但其相对分子质量 (Mr)比预计计算的值要小。最佳表达条件为 :BMMY培养基 ,85 %溶解氧 ,培养时间 3d ,1%甲醇诱导浓度。结论 表达的融合蛋白具有很好的抗原特异性 ,存在于上清中 ,这有利于目的蛋白的分离纯化。

共表达HIV-1 gag-gp120与IL-6重组鸡痘病毒和核酸疫苗的联合免疫研究

目的 探讨共表达HIV 1gag gp12 0与IL 6重组鸡痘病毒和核酸疫苗联合免疫小鼠的免疫应答。方法 以重组鸡痘病毒首免 ,以表达相同抗原的核酸疫苗质粒追加免疫 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平。结果 联合免疫组脾特异性CTL杀伤活性比重组鸡痘病毒单独免疫组、核酸疫苗单独免疫组、鸡痘病毒疫苗株对照组和空白质粒对照组高 ,血清抗体水平显著高于空白质粒对照组和鸡痘病毒疫苗株对照组 ,但与重组鸡痘病毒单独免疫组、核酸疫苗单独免疫组之间差异无显著性。

HIV-1 gag基因和gp120基因转化番茄及转基因植株再生

构建了HIV 1的gag基因、gp1 2 0基因及gag gp1 2 0嵌合基因的植物双元表达载体。通过农杆菌介导法将HIV 1的gag基因、gp1 2 0基因和gag gp1 2 0嵌合基因导入番茄 ,获得抗性转化再生植株。PCR检测和Southern杂交鉴定目的基因已整合到再生植株基因组中 ,获得了转基因植株。GUS染色及Northern杂交结果表明目的基因已得到表达。本实验首次进行了HIV 1抗原基因转化番茄的研究 ,为利用番茄生产艾滋病新型口服疫苗打下了良好的基础。

重组HIV-1 Gag/Env融合抗原在大肠杆菌中的表达及免疫学分析

在大肠杆菌中， 利用ｐＤＯＧ 载体来源的表达载体ｐＤＧａｇＥｎｖ ， 高效表达了相对分子质量（ Ｍｒ） 为４６ ５００（ｐ４６） 的重组ＨＩＶ１Ｇａｇ／ Ｅｎｖ 融合抗原（Ｇａｇ２０９ ～４３７ ＋ Ｅｎｖ４７４ ～５１８ ＋ Ｅｎｖ５４８ ～６７５） 。表达产物同时还包括：Ｍｒ ～２８ ５００ ， Ｍｒ ～２２ ０００ 与 Ｍｒ ～１９ ０００ ３ 种（ｐ２８ ，ｐ２２ 和ｐ１９） 蛋白。此４ 种表达产物均存在于包涵体中，不能被８ ｍ ｏｌ／Ｌ 尿素溶解。Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹分析表明，４ 种重组蛋白均能与ＨＩＶ１ 阳性血清发生特异反应；其中ｐ４６ 与ｐ２８ 蛋白能与抗ＨＩＶ１ｐ２４ 反应，而ｐ２２ 与ｐ１９ 蛋白则不与其起反应。其中ｐ１９ 蛋白对应于Ｅｎｖ４８２ ～５１８ ＋ Ｅｎｖ５４５ ～６７５ ，ｐ２２ 蛋白可能是从Ｇａｇ／ Ｅｎｖ 表达质粒的ｇａｇ 基因内部的甲硫氨酸（ＡＴＧ４２３） 起始的翻译产物。将包涵体充分洗涤后，利用制备电泳方法纯化了ｐ４６ ，ｐ２２／ｐ１９ 及ｐ１９ 蛋白。将后两种纯化蛋白质以２ ｍ ｇ／Ｌ 的浓度包被ＥＬＩＳＡ 板，检测了国家卫生部药品生物制品检定所提供的ＨＩＶ１／ ＨＩＶ２ 质检血清。结果可检出其中包含的所有１８ 份ＨＩＶ?

生菜农杆菌遗传转化系统的建立及HIV蛋白基因的导入

通过根癌农杆菌介导,将gag-gp120基因导入到苗龄为5 d的北京生菜无菌苗的子叶片中,同时针对影响农杆菌遗传转化的几个关键因素进行研究试验。结果表明,北京生菜适合的卡那霉素筛选的浓度是7．5 mg／L,添加乙酰丁香酮对农杆菌的浸染影响不大,农杆菌的浸染时间以30 min为宜,农杆菌适宜的浸染浓度为OD600值在0．4～0．8之间,培养时间以3 d效果较好。通过PCR和PCR-Southern分析证明,gag-gp120嵌合基因已经整合到生菜基因组中。