用质粒Gap-LCR-ELISA法检测孕妇尿中沙眼衣原体

目的:研究孕妇尿液中对质粒缺口-连接酶链反应(Gap-LCR)-ELISA法检测沙眼衣原体(CT)产生抑制作用的物质及其去除方法,以提高该方法检测无症状孕妇CT感染的灵敏度。方法:对181份孕妇首段尿(FVU)进行全面尿化学分析后,采用CT标准株“Spike”法(铆钉法),对出现Gap—LCR—ELISA抑制的标本用多因素非条件Logistic回归分析与抑制作用相关的成分,在进行一系列去抑制处理后比较各方法的转阳率。结果:孕妇FVU对质粒Gap-LCR-ELISA检测CT的抑制率为6.08％(11/181),其中白细胞和磷酸盐结晶与抑制作用相关;对FVU作-70℃～37℃快速冻融2次的预处理可使90.91％的假阴性转为阳性,并对模板无明显降解作用。结论:孕妇尿液中确有对Gap—LCR—ELISA产生抑制作用的物质存在,可通过改良标本预处理的方法降低其所致的假阴性。

Gap-LCR-ELISA法与PCR-反向杂交法对沙眼衣原体检测的对比研究

目的比较质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附试验测定(Gap-LCR-ELISA)法及聚合酶链式反应(PCR)-反向杂交法对沙眼衣原体(CT)的检测效果。方法对我院眼科送检临床标本167份进行CT检测,其中采用Gap-LCR-ELISA法检测80份,采用PCR-反向杂交法检测87份。并对2种方法检出阳性率及其敏感度与特异度进行比较。结果Gap-LCR-ELISA法检出阳性率为26.2%,PCR-反向杂交法检出率为34.5%,差异无统计学意义(P>0.05);两法的敏感度和特异度均为100.0%和98.0%。结论Gap-LCR-ELISA法和PCR-反向杂交法均可作为CT的检测方法,值得临床推广应用。

质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法检测沙眼衣原体

目的:建立高度灵敏特异的质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法(Gap-LCR-ELISA)检测沙眼衣原体(Chlamy-diatrachomatisCT)。方法:根据CT共有隐蔽性质粒设计并标记4条寡核苷酸探针,对6型CT标准株和鹦鹉热衣原体及其他常见泌尿生殖道病原菌行Gap-LCR-ELISA。结果:质粒Gap-LCR-ELISA可检测出6型CT,并与其他病原体无交叉反应,其最低检测限为2.5个原体(elementarybodiesEB)比PCR敏感10倍。结论:质粒Gap-LCR-ELISA对检测CT感染具有极高的灵敏度和特异度,适宜于我国进行大规模CT流行病学调查。

缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法检测孕妇沙眼衣原体感染

目的:用缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附(Gap-LCR-ELISA)法检测重庆地区孕妇沙眼衣原体感染,以了解围生期沙眼衣原体(CT)的感染现状。方法:以512名孕妇首段尿(FVU)及配对宫颈刮片为研究对象,按照扩大金标准,采用质粒探针和外膜蛋白探针Gap-LCR-ELISA法用于不同类型临床标本检测CT感染。结果:①孕妇的CT感染呈很强的隐匿性,由扩大金标准所确证的CT真阳性共42例,所检重庆地区孕妇的CT感染率为8.2%(42/512),其中88.1%(37/42)可同时从尿道和生殖道检出CT,而另9.5%(4/42)和2.4%(1/42)仅能单独分别从生殖道或尿道检出。②Gap-LCR-ELISA用质粒与外膜蛋白作为探针检测FVU中CT的敏感性分别为90.48%和71.43%(P<0.05),质粒Gap-LCR-ELISA用于宫颈刮片和FVU两种标本的敏感性分别为97.62%和90.48%(P>0.05),特异性均为100%。结论:质粒Gap-LCR-ELISA法用于孕妇FVU以检测围生期无症状CT感染患者,是一种非侵袭性的、高度敏感特异的、适合于发展中国家和地区进行大规模流行病学调查的方法。

质粒缺口-连接酶链反应-ELISA法检测重庆地区围生期孕妇沙眼衣原体感染及基因分型

目的:用质粒缺口-连接酶链反应(Gap-LCR)-ELISA法研究重庆地区围生期孕妇沙眼衣原体(CT)感染的现状及流行的主要基因型别,为其疫苗的研制提供分子流行病学依据。方法:以512例孕妇的首段尿(FVU)及其配对新生儿的鼻咽拭子为标本,用质粒Gap-LCR-ELISA法检测CT感染者,对阳性母、婴配对标本DNA行omp1-VS4-PCR扩增,产物行双链DNA直接测序并作基因分型。结果:所检重庆地区孕妇CT感染率为7.42%,母婴垂直传播率为15.79%,以阴道分娩为主要传播途径。6对阳性母婴配对标本的CT基因序列一致,其中5对为E型,1对为H型,再次证实了CT的垂直传播途径。结论:质粒Gap-LCR-ELISA法可用于围生期无症状CT感染孕妇的大规模流行病学调查。重庆地区围生期CT流行型别仍以E型为主。

应用连接酶链反应检测沙眼衣原体DNA

目的 建立检测沙眼衣原体感染的具有高度敏感性和特异性的缺口 连接酶链反应 酶联免疫吸附测定法。方法 根据CT主要外膜蛋白稳定区设计 2对互补探针并分别对其两端标记生物素和地高辛 ,对 6种CT标准株、鹦鹉热衣原体标准株和其他细菌进行Gap LCR反应并以ELISA和EB染色电泳检测扩增产物以比较两者的检测限度。 结果 Gap LCR可检出 6种CT标准株并不与其他细菌发生交叉反应 ,ELISA可检出 1 0fgDNA模板的扩增产物 ,较EB电泳法敏感 1 0倍。结论 Gap LCR ELISA是一高度敏感特异的检测CT感染的核酸扩增技术 。

混合尿液质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法检测孕妇沙眼衣原体感染

目的建立高效的围生期沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)流行病学调查批处理方法--混合尿液(pooling urine)质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法(gap-ligase chain reaction-en-zyme linked immunoabsorbent assay,gap-LCR-ELISA)。方法比较质粒gap-LCR-ELISA对不同体积孕妇尿液混合库(4×,6×,8×,10×)及单份样本(1×)检出CT感染的灵敏度和特异度。结果质粒gap-LCR-ELISA检测4,6,8,10人份混合尿样中的CT感染均可达到100%的特异度,灵敏度分别为95%,85%,70%和65%,各组实验成本下降的比例均超过40%。结论4人份孕妇混合尿液质粒gap-LCR-ELISA的检测效能,等同于对单份标本的独立检测,为该法最适宜的标本混合策略,在大规模流行病学调查中具有应用价值。