新型TopoⅠ抑制剂CPUY013对胃腺癌细胞BGC823的体内外作用

探讨CPUY013在体内外对人胃腺癌BGC823细胞的抗肿瘤活性及其机制。采用MTT法、克隆原形成法检测CPUY013对BGC823细胞增殖的抑制作用;体外实验以pBR322DNA为底物,依据质粒的松弛和超螺旋形式在琼脂糖电泳上泳动度对药物抑制解旋的作用进行定性分析。用AO/EB荧光染色技术、DNA凝胶电泳及JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞凋亡。口服给药CPUY013后观察其对裸鼠移植瘤的生长抑制作用;用流式细胞术观察CPUY013对BGC823细胞周期的影响;采用Western blotting分别检测CPUY013处理后的BGC823细胞中TopoⅠ及凋亡相关蛋白表达的改变。结果表明,CPUY013呈明显的剂量依赖性抑制BGC823细胞的增殖。随着剂量的增加,CPUY013对TopoI松弛活性的抑制趋势增强。100μmol·L-1CPUY013和拓扑替康(TPT)对TopoⅠ松弛活性的抑制呈现相似的变化趋势。CPUY013可使大部分BGC823细胞阻滞在S期,并诱导细胞凋亡;出现DNA片段化,亚G1峰显著增加,线粒体膜电位降低,荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变等。同时,CPUY013能明显抑制BGC823裸鼠移植瘤的生长,150mg·kg-1剂量组的瘤重抑制率为62.1%。CPUY013使BGC823细胞内TopoI和bcl-2蛋白表达均有所下调,p53和bax蛋白表达有明显上调趋势,bcl-2/bax比值明显降低,caspase-3蛋白表达增高。新型TopoⅠ抑制剂CPUY013在体内明显抑制移植瘤的生长,体外可诱导细胞凋亡从而抑制BGC823细胞增殖,其机制可能与抑制TopoI,从而下调bcl-2,上调bax和p53蛋白的表达有关。

人胃腺癌BGC823细胞Midkine高表达前后基因表达谱芯片分析

目的:用基因芯片技术分析、筛选Midkine高表达前后胃腺癌相关基因谱的差异表达。方法:建立Midkine高表达BGC823胃腺癌细胞系,提取细胞总RNA,逆转录Cy3、Cy5标记cDNA探针,应用晶芯表达谱芯片,分析差异表达的基因。结果:发现Midkine高表达前后BGC823胃腺癌细胞有显著性表达差异的基因共有550个,其中上调基因407个,下调基因143个。对550条差异表达基因进行初步功能分类分析,结果表明这些基因与Midkine促进胃腺癌发病机制存在相关性。结论:Midkine高表达前后BGC823胃腺癌细胞部分功能基因存在显著的表达差异,多数差异表达的基因参与细胞黏附、细胞骨架形成、细胞周期以及细胞代谢等过程。