视黄酸及干扰素对胃癌细胞系MKN45中p16,p21,c-myc基因表达的影响

目的探讨全反式视黄酸及干扰素两种因子对胃癌MKN45细胞的影响.方法将视黄酸及干扰素同时加入胃癌细胞系MKN45中进行细胞培养,用MTT法测定细胞的生长状况,并通过Northern blot和免疫组化测定p16,p21及c-myc的表达情况.结果干扰素（IFN）协同全反式视黄酸（ATRA）可有效地抑制MKN45细胞生长,癌细胞经联合用药诱导后p16和p21基因的表达水平提高,c-myc基因表达水平下降.视黄酸受体RARα基因在MKN45细胞中呈低水平表达,经ATRA和IFN诱导后表达水平提高.结论 ATRA联合IFN诱导可调节p16和p21基因的表达水平,抑制胃癌MKN45细胞生长,这可能与细胞中RARα基因高水平表达有一定关系.

脑瘤克含药血清对胃癌细胞MKN45抗增殖作用的实验研究

目的:观察脑瘤克含药血清对胃癌细胞MKN45的抑制增殖的作用。方法:体外培养人胃癌细胞MKN45,观察不同浓度、不同时间的脑瘤克含药血清对胃癌细胞MKN45的影响,采用MTT法检测脑瘤克含药血清对胃癌细胞MKN45的抑制作用,并观察细胞形态学改变。结果:共培养24 h后,脑瘤克浓度在0.97 g/kg以上,20%的含药血清对胃癌细胞MKN45有明显的抑制增值的作用。共培养48 h后,脑瘤克浓度在0.97 g/kg以上,10%和20%的含药血清对MKN45的增值有明显的抑制作用(P<0.05,P<0.01)。结论:脑瘤克含药血清对胃癌细胞MKN45具有抗增殖作用,且随药物浓度的增加和共培养时间的延长,抑制作用增强。

人端粒酶逆转录酶下调p53促进胃癌细胞抵抗氧化应激下的死亡

目的:利用慢病毒包装技术构建人端粒酶逆转录酶(h TERT)过表达载体lenti-h TERT,在胃癌细胞MKN45细胞中探讨过表达h TERT对氧化应激下细胞死亡的影响及其相关机制。方法:在低表达h TERT的MKN45胃癌细胞中转染lentih TERT和空载体lenti-NC,嘌呤霉素筛选建立稳定的细胞株,采用Western blot进行鉴定;采用叔丁基过氧化氢(TBH)氧化刺激,倒置显微镜下观察记录细胞死亡情况,台盼蓝染色检测细胞死亡比例,2’7’-二乙酰二氯荧光素检测细胞ROS含量;采用western blot和RT-PCR技术检测细胞在氧化应激条件下p53的表达。结果 :h TERT慢病毒过表达载体系统lenti-h TERT成功转染胃癌细胞株MKN45并建立稳定转染细胞株,过表达h TERT的MKN45胃癌细胞在氧化应激下可抑制细胞死亡,降低细胞内ROS水平;降低了p53蛋白表达水平,而不影响p53 m RNA表达水平。结论:胃癌细胞MKN45中h TERT过表达可通过下调p53蛋白水平抵抗氧化应激下的细胞死亡。

槲皮素对人胃癌MKN45细胞的抑制作用研究

目的探讨槲皮素对人胃癌MKN45细胞凋亡的影响及其作用机制。方法取对数生长期的MKN45细胞分为对照组和20、40、80μmol/L槲皮素组。应用MTT比色法测定细胞活性,Hoechst染色、流式细胞技术检测细胞凋亡,比色法检测凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9表达。结果槲皮素能显著抑制MKN45细胞增殖,促进细胞凋亡,升高Caspase-3、Caspase-9基因表达水平。结论槲皮素可通过增强Caspase-3、Caspase-9基因表达诱导人胃癌MKN45细胞凋亡。

大蒜3个有效部位联合应用对人胃癌MKN45细胞的杀伤作用

目的:观察大蒜有效部位及其组合物对人胃癌MKN45细胞杀伤的作用。方法:采用体外大鼠脾淋巴细胞增殖实验和MTT法测定细胞杀伤作用,筛选出具有免疫增强作用和细胞毒作用的大蒜有效部位进行组合,并对大蒜有效部位及其组合物对肿瘤细胞杀伤作用进行对比,运用正交试验筛选出大蒜3个有效部位联合应用对人胃癌MKN45细胞杀伤作用的最佳配比。结果:大蒜总多糖+大蒜总皂苷(2#+5#)对大鼠淋巴细胞增殖具有明显的促进作用,大蒜油、大蒜总多糖、大蒜总皂苷(1∶1∶1)的联合应用,其杀伤肿瘤细胞的作用(IC50 13.3μg.mL-1)明显优于同等剂量的2个有效部位组合及大蒜油的单独用药(IC50 35μg.mL-1)。对MKN45细胞杀伤作用的顺序为大蒜油>大蒜多糖>大蒜总皂苷,3个有效部位组合最佳配比为大蒜油∶大蒜多糖∶大蒜总皂苷1∶2∶1。结论:3个部位联合应用对肿瘤细胞的杀伤作用最强,并且组合物最大优势是在扶正、祛邪的同时,可能减少大蒜油的刺激性。

高压氧联合多柔比星处理对人低分化胃癌MKN45细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨高压氧(HBO)联合多柔比星(DOX)对人低分化胃癌MKN45细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:体外培养人胃癌MKN45细胞完成后,按照实验设计将细胞分为4组:对照组、DOX组、HBO组和HBO+DOX组。对照组加入DMSO培养基,DOX组加入终质量浓度为2 mg/L DOX溶液;HBO组则在高压氧舱(0.25 MPa)中暴露培养90 min,HBO+DOX组先在高压氧舱暴露培养90 min后再用2 mg/L DOX溶液处理。利用CCK-8法检测HBO+DOX处理对胃癌MKN45细胞的增殖抑制作用,利用流式细胞术检测胃癌MKN45细胞的凋亡率,Western blotting实验检测胃癌MKN45细胞内凋亡蛋白及JNK/STAT3信号通路相关蛋白的表达水平。结果:HBO+DOX组MKN45细胞存活率明显低于对照组和HBO组(P<0.01),也低于PTX组(P<0.05)。HBO+DOX组MKN45细胞凋亡率明显高于对照组和HBO组(P<0.01),也高于PTX组(P<0.05)。与对照组和HBO组比较,DOX组和HBO+DOX组MKN45细胞内Bad、caspase-3、PARP蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.01);DOX组PARP蛋白表达明显低于HBO+DOX组(P<0.05)。与对照组和HBO组比较,DOX组和HBO+DOX组MKN45细胞内p-JNK蛋白表达明显降低,且HBO+DOX组低于DOX组(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,DOX组和HBO+DOX组MKN45细胞内p-STAT3蛋白表达明显升高(P<0.05)。与对照组、HBO组和DOX组比较,HBO+DOX组MKN45细胞内耐药性相关蛋白P-gp明显降低(P<0.01)。结论:HBO处理能够增强DOX对人胃癌MKN45细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用,其作用机制可能是通过调节MKN45细胞中的JNK/STAT3信号通路来实现的。

地高辛通过下调AEG-1表达抑制人胃癌MKN45细胞迁移和侵袭

本研究旨在观察地高辛对人胃癌MKN45细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。取人胃癌MKN45细胞作为研究对象,采用Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,通过脂质体转染法将星形细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)sh RNA干扰质粒转染MKN45细胞以构建低表达AEG-1的细胞株,利用Western blot法检测基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和AEG-1等蛋白的表达变化。结果显示,地高辛可使MKN45细胞迁移率和侵袭率均显著下降(P<0.05),下调MMP-9和AEG-1蛋白表达水平(P<0.05)以及上调E-cadherin蛋白表达水平(P<0.05),上述作用均具有剂量依赖性。经sh RNA干扰AEG-1基因表达后,MKN45细胞中AEG-1蛋白表达水平显著下降(P<0.05);同时AEG-1干扰组MKN45细胞中E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞迁移率、侵袭率和MMP-9蛋白表达水平均显著下降(P<0.05)。上述结果提示,地高辛可在体外剂量依赖性地抑制人胃癌MKN45细胞迁移和侵袭,这可能与地高辛抑制AEG-1蛋白表达,继而下调MMP-9蛋白表达和上调E-cadherin蛋白表达有关。