产低酰基结冷胶重组菌株的构建及发酵培养基优化

为获得产低酰基结冷胶的少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas paucimobilis)重组菌株,该研究以少动鞘氨醇单胞菌ATCC31461为出发菌株,采用RedET同源重组技术构建乙酰基转移酶缺失重组菌株,并以产胶率为响应值,采用单因素试验及响应面法对其发酵培养基进行优化。结果表明,成功获得乙酰基转移酶缺失重组菌株LY126,与出发菌株相比,其合成的结冷胶中乙酰基含量(1.66%)降低32.79%,产胶率(1.53%)提高8.65%。重组菌株LY126产低酰基结冷胶的最优培养基组成为葡萄糖50.0 g/L、豆粕8.0 g/L、K2HPO45.0 g/L、KH2PO45.0 g/L、MgSO40.9 g/L,在此条件下,低酰基结冷胶产率可达2.38%,比优化前提高55.40%。

基于结冷胶培养基的乌梁素海水体中可培养细菌的多样性研究

分别采用琼脂和结冷胶作为培养基的固体支撑物,用培养和分子相结合的方法研究乌梁素海水体中可培养细菌的多样性。对比发现在以结冷胶作为固体支撑物的培养基上生长的细菌总数约为传统琼脂培养基的3倍,此外菌落的形态、颜色等,也有很明显的不同。在结冷胶培养基上共分离得到41株纯培养物,测定其16S rDNA部分序列并据此进行分析,表明这些菌株分别属于β-Proteobacteria(48.8%)、Actinobacteria(19.5%)、γ-Proteobacteria(9.8%)、α-Proteobacteria(7.3%)、Deinococcus-Thermus(7.3%)以及Firmicutes(7.3%)。其中,与嗜氢菌属(Hydrogenophaga)发育系统关系密切的细菌为优势属。

结冷胶研究进展

结冷胶是一种微生物胞外多糖。由于其高效,无毒,耐高温等特点被广泛用于食品,医药,化工等行业。着重介绍其结构,物理化学性质,发酵培养基成分,发酵工艺条件,提纯方法和生产现状。培养基成分中介绍碳源,氮源,无机盐对发酵的影响。发酵工艺中介绍了温度,pH,接种时间,接种量,搅拌速度和通气量对发酵的影响。

结冷胶发酵培养基优化研究

结冷胶是一种微生物胞外多糖,通过药瓶发酵实验得出结冷胶培养基的最佳培养成分:实验以葡萄糖,麦芽糖,蔗糖,可溶性淀粉,乳糖分别为碳源,其他成分不变,得出最佳碳源为蔗糖,然后通过单因素实验确定最佳用量为3%;以牛肉膏,蛋白胨,酵母膏,豆饼粉,硝酸铵分别为氮源,其他成分不变,得出最佳氮源为豆饼粉,然后通过单因素实验确定最佳用量为0.5%;以MgSO4,KH2PO4,NaCl,KCl,MnCl2,FeSO4分别为无机盐,其他成分不变,得出添加MgSO4和KH2PO4的产量都很高,再通过单因素实验得出最佳用量;最后通过正交实验确定培养基最佳成分:蔗糖为3%,豆饼粉为0.6%,MgSO4为0.06%,KH2PO4为0.14%。

Gellan Gum在酸性培养基中溶解性及凝固性相关研究

对Gellan Gum(结冷胶)在嗜酸热微生物固体培养基中的应用方法及用量进行了研究,结果表明培养基的酸度、温度及用量对Gellan Gum的溶解性及凝固性产生影响,另外,培养基的冷却速度同样影响培养基的凝固效果.

不同培养基凝固剂对水体沉积物中可培养细菌多样性的影响

【目的】研究琼脂和结冷胶两种培养基凝固剂对水体沉积物中可培养细菌多样性的影响,为挖掘环境微生物资源提供科学依据。【方法】以LB为基础培养基,分别以琼脂和结冷胶为凝固剂,利用纯培养法对江苏省太湖水体沉积物中的细菌进行分离培养,结合16S rRNA序列分析法对分离细菌进行多样性分析。【结果】以琼脂和结冷胶为凝固剂,分离获得的细菌总量分别为2.4×10~5和2.1×10~5CFU/g沉积物;16S r RNA序列分析剔除重复菌株后,对应得到20和21株细菌,分别隶属于11和17个细菌属,均归属于厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteria)和变形菌门(Proteobacteria)三大类群。两种不同凝固剂培养基分离获得的细菌属组成差异明显,在LB琼脂培养基分离获得的20株细菌属为芽孢杆菌属(Bacillus,9株)、动性杆菌属(Planomicrobium,2株)、房间芽孢杆菌属(Domibacillus,1株)、类芽孢八叠球菌属(Paenisporosarcina,1株)、土壤芽孢杆菌属(Solibacillus,1株)、红球菌属(Rhodococcus,1株)、棒状杆菌属(Corynebacterium,1株)、微杆菌属(Microbacterium,1株)、无色杆菌属(Leucobacter,1株)、柠檬球菌属(Citricoccus,1株)和不动杆菌属(Acinetobacter,1株);在LB结冷胶培养基上分离获得的21株细菌属为芽孢杆菌属(4株)、赖氨酸芽孢杆菌属(Lysinibacillus,2株)、微小杆菌属(Exiguobacterium,1株)、鸟氨酸芽孢杆菌属(Ornithinibacillus,1株)、葡萄球菌属(Staphylococcus,1株)、虚构芽孢杆菌属(Fictibacillus,1株)、红球菌属(1株)、迪茨氏菌属(Dietzia,1株)、微杆菌属(1株)、考克氏菌属(Kocuria,1株)、四球菌属(Tessaracoccus,1株)、短杆菌属(Brevibacterium,1株)、两面神菌属(Janibacter,1株)、肠杆菌属(Enterobacter,1株)、依格纳季氏菌属(Ignatzschineria,1株)、副球菌属(Paracoccus,1株)和普罗维登斯菌属(Providencia,1株)。【结论】结冷胶作为凝固剂在一定程度上提高了可培养细菌的种类数,结冷胶和琼脂两种凝固剂联合使用可获得更多的细菌种类。

响应面分析结冷胶发酵培养基优化研究

结冷胶是由假单胞菌发酵产生的多糖,可广泛用于食品、药品辅料中,起到凝胶、增稠等作用。通过单因素试验和响应面优化试验得到发酵培养基的最佳成分。首先,通过对结冷胶培养基中碳源、氮源和无机盐进行单因素优化,最终确定最佳碳源为葡萄糖、氮源为蛋白胨、无机盐为硫酸镁和磷酸氢二钾。采用响应面Box-BehnkenDesign中心组合设计优化试验,确定了葡萄糖添加量3.2%,蛋白胨添加量0.52%,硫酸镁添加量0.064%和磷酸二氢钾添加量0.15%的最优培养基成分,并建立了结冷胶发酵培养基模型。最后,对模型进行了验证,获得产胶率为1.74%。

高酰基结冷胶发酵生产工艺优化研究

通过单因素及正交试验对高酰基结冷胶的摇瓶发酵培养基进行了优化,得到了高酰基结冷胶生产工艺中的最佳发酵培养基配方。结果表明:优化后的高酰基结冷胶发酵配方为:蔗糖2.75%,鱼蛋白胨0.25%,KH2PO40.10%,CaCO30.12%。50 L罐发酵试验结果表明,发酵液粘度为20 000 cp,纯胶收率达1.55%以上。该结果可为提高高酰基结冷胶的产胶率提供参考。

少动鞘脂单胞菌产结冷胶发酵培养基的响应面法优化

通过单因素试验分析不同碳源、氮源、无机盐对（Sphingomonas paucimobilisFJAT-5627）产胶量的影响,确定最适碳源、氮源、无机盐,并在单因素筛选试验的基础上,利用Box-Benhnken设计和响应面分析法对碳源、氮源和无机盐进行优化,得到少动鞘脂单胞菌产生结冷肢发酵培养基最佳优化组合.实验结果表明,少动鞘脂单胞菌产胶量发酵最适碳源、氮源和无机盐分别为淀粉、豆饼粉和KH_2PO_4.响应面法得到产胶量（Y）与碳源淀粉（x_1）、氮源豆饼粉（x_2）和无机盐KH_2PO_4（x_3）的回归方程为：Y=13.87＋0.54x_1＋0.22x_2-0.42x_3-3.26x_1~2-1.85x_2~2-1.51x_3~2＋0.053x_1x_2＋0.067x_1x_3＋0.4x_2x_3.优化培养基组合为：淀粉浓度为30g/L,豆饼粉浓度为5 g/L,KH_2PO_4的浓度为0.7g/L,且此组合下少动鞘脂假单胞发酵得到结冷胶可达23.87g/L.

结冷胶发酵培养基优化及生产工艺改进

利用廉价的原料优化结冷胶发酵培养基的碳源和氮源,将两孔的罐底进气空气分布圈加工成六孔的空气分布圈以改善发酵液溶氧,以结冷胶产量为指标改进发酵工艺,获得具有生产优势的发酵工艺.结果表明:在50 L罐发酵试验中,初始还原糖浓度为4.0 g/100 mL即可满足发酵周期45 h生产菌对碳源的需求,最佳发酵温度28℃,发酵过程控制溶解氧不低于30%.在优化的工艺条件下,发酵过程不需要补加碳源,整个发酵过程转速下降了50 r/min,结冷胶产量为25 g/L.