旋毛虫新生幼虫期特异性基因N10的表达及鉴定

根据旋毛虫新生幼虫期特异性基因pBK-CMV-N10序列设计引物,利用PCR技术将基因N10的信号肽去除后,用T/A法克隆到pMD-18T载体,转化至大肠杆菌NovaBlue,经鉴定及序列测定,结果显示成功克隆到N10基因。将重组质粒pMD-18T-N10进行酶切后连接到原核表达载体pET-28a中,重组质粒经鉴定后转化大肠杆菌BL21star(DE3),用IPTG诱导表达出与理论相符的融合蛋白,相对分子质量为38700,诱导4h的表达量占菌体总蛋白量的15%。从N10重组蛋白提取可溶性融合蛋白,对其生物学特性初步鉴定结果表明,具有类似脱氧核糖核酸酶的活性。

输血相关急性肺损伤SD大鼠血管生成素2和白介素10的变化

目的分析患输血相关急性肺损伤(TRALI)的SD大鼠肺组织中血管生成素2(Ang-2)和白介素10(IL-10)基因相对表达量与血浆、肺组织Ang-2、IL-10浓度变化。方法 SD大鼠20只,随机分为TRALI组(n=10):腹腔注射脂多糖(LPS)(2 mg/kg)2 h后静脉输注人血浆(约1 mL/只);正常对照组(n=5):采用假手术处理;阳性对照组(n=5):静脉输注LPS(5 mg/kg)诱导急性肺损伤。应用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠肺组织Ang-2、IL-10基因相对表达量,以管家基因b-actin为对照,2-(△△Ct)法计算目的基因相对表达情况;应用ELISA法检测大鼠血浆、肺组织中Ang-2和IL-10浓度。结果与正常对照组肺组织Ang-2、L-10基因相对表达量相比,TRALI组肺组织Ang-2基因相对表达量下调(0.28±0.06),IL-10基因相对表达量上调(22.40±1.19)。TRALI组血液、肺组织中Ang-2和IL-10浓度分别为(133.83±0.81)、(22.81±0.40)和(106.54±1.92)、(33.35±6.84)(mg/L),较正常对照组上升(P<0.05)。结论 TRALI SD大鼠血浆、肺组织中Ang-2、IL-10浓度明显高于正常对照SD大鼠,随TRA-LI病程发展,IL-10逐渐发挥其拮抗炎症作用,对Ang-2基因表达可能有反馈抑制作用。

mthfr基因第1298位核苷酸多态性与酶活性的关系

探讨mthfr基因第 12 98位核苷酸的多态性对酶活性及热稳定性的影响。方法 :用PCR RFLP方法检测 6 4例中国女性mthfr基因第 12 98位核苷酸 ,并检测外周血淋巴细胞MTHFR酶活性和 46℃灭活 5min后的残余酶活性 ,比较不同基因型其酶活性和热稳定性的差别。结果 :第 6 77位核苷酸基因型为 6 77CC时 ,正常型12 98AA平均酶活性最高 ,为每毫克蛋白每小时 12 .2 6 3nmolCH2 O ,杂合型 12 98AC平均酶活性为每毫克蛋白每小时 9.5 2 4nmolCH2 O ,纯合突变型 12 98CC酶活性最低 ,仅为每毫克蛋白每小时 7.830nmolCH2 O ;第 12 98位核苷酸不同基因型的残余酶活性无明显差别。结论 :mthfr基因第 12 98位核苷酸由A→C的变异可引起酶活性降低 ,但与热稳定性无关。

醋酸阿比特龙联合多西他赛与泼尼松在转移性去势抵抗性前列腺癌患者中的应用及Naa10与治疗敏感性的关系

目的 探讨醋酸阿比特龙联合多西他赛与泼尼松在转移性去势抵抗性前列腺癌(mCRPC)患者中的应用及N-末端α位乙酰基转移酶基因10(acetyltransferase gene 10,Naa10)与治疗敏感性的关系。方法 回顾性选择2017年10月—2019年12月邢台医学高等专科学校第二附属医院收治的122例mCRPC患者为研究对象,入选患者均经过雄激素剥夺治疗。根据治疗方案不同将患者分为对照组和试验组,对照组患者静脉滴注多西他赛注射液,剂量75 mg·m-2,每3周1次;口服醋酸泼尼松片,1次1片,每天2次;在注射多西他赛注射液化疗前1天、当天和后1天均口服醋酸地塞米松片,1日2次,总剂量7.5 mg。试验组患者在对照组的基础上空腹口服醋酸阿比特龙片,每次1 g,每日1次,治疗4个周期(12周)。比较两组患者近期临床疗效、不良反应及远期生存率等情况,随访3年,计算患者的中位生存期。免疫组化法检测mCRPC癌组织中Naa10蛋白表达,将患者分成Naa10阳性表达组和阴性表达组,分析其临床病理参数,单因素和Cox回归分析确定影响mCRPC预后的因素,分析Naa10蛋白阳性表达与治疗敏感性的关系。结果 治疗4个周期后,试验组患者9例完全缓解、40例部分缓解、8例疾病稳定及4例疾病进展,治疗总有效率为80.33%;对照组患者2例完全缓解、34例部分缓解、20例疾病稳定及5例疾病进展,治疗总有效率为59.02%,两组间比较差异显著(χ^(2)=6.556,P=0.011)。试验组和对照组患者均出现骨髓抑制(χ^(2)=0.209,P=0.648)、肝功能损伤(χ^(2)=0.830,P=0.362)、胃肠道反应(χ^(2)=0.370,P=0.543)、水钠潴留(χ^(2)=0.209,P=0.648)及心脏毒性(χ^(2)=0.899,P=0.343)等3级以上不良反应,但两组间差异未见显著性。mCRPC癌组织中Naa10蛋白阳性表达与治疗周期(χ^(2)=9.106,P=0.003)、淋巴结转移(χ^(2)=5.055,P=0.025)、T分期(χ^(2)=4.391,P=0.036)、骨转移病灶数(χ^(2)=19.863,P=0.000)、内脏转移(χ^(2)=5.009,P=0.025)等具有显著相关性,但与年龄(χ^(2)=3.059,P=0.080)、化疗方案(χ^(2)=0.880,P=0.348)、EOCG评分(χ^(2)=3.453,P=0.178)、民族(χ^(2)=0.135,P=0.713)及Gleason评分(χ^(2)=0.837,P=0.360)等没有显著相关性。单因素分析结果显示,mCRPC患者中位生存期与EOCG评分(χ^(2)=7.464,P=0.006)、淋巴结转移(χ^(2)=6.114,P=0.013)、化疗方案(χ^(2)=7.049,P=0.030)、治疗周期(χ^(2)=5.051,P=0.038)、T分期(χ^(2)=1.196,P=0.035)、骨转移病灶数(χ^(2)=9.611,P=0.008)、内脏转移(χ^(2)=1.085,P=0.048)及Naa10蛋白阳性表达(χ^(2)=15.600,P=0.000)等指标具有显著相关性。Cox回归分析结果显示,骨转移病灶数(>10个)(OR=2.404,95%CI:1.424~4.056)、治疗周期(>8个疗程)(OR=0.458,95%CI:0.253~0.832)、化疗方案(试验组)(OR=0.360,95%CI:0.160~0.801)和Naa10蛋白阳性表达(OR=2.563,95%CI:2.106~3.117)是mCRPC患者预后生存的独立影响因素(P<0.05)。结论 醋酸阿比特龙联合多西他赛与泼尼松应用于mCRPC治疗,可有效提高近期临床疗效,延长生存期,且不增加不良反应,同时Naa10蛋白高表达是mCRPC患者预后不良的危险因素,临床宜监测指标,及时调整和评估临床治疗效果。

冷冻复苏过程对人精子印记基因SNRPN和GRB10DNA甲基化及表达的影响

目的探讨精液冷冻复苏过程对人精子印记基因SNRPN、GRB10甲基化状态和mRNA表达的影响。方法将20份人精液标本平行分为2组:新鲜组(n=20)和冷冻组(n=20)。采用计算机辅助精子分析(CASA)进行两组精液的常规参数检测;Percoll密度梯度离心法纯化精子,SNRPN、GRB10基因的甲基化率采用Sequenom DNA测序分析;SNRPN、GRB10基因的mRNA表达采用qRT-PCR定量分析。结果冷冻组精子浓度、精子活力、前向运动精子百分比均低于新鲜组(P<0.05),冷冻组不活动精子百分比显著高于新鲜组(P<0.05);冷冻组精子SNRPN mRNA表达显著低于新鲜组(P<0.05);冷冻组精子GRB10启动子区亚片段检测的-902Cp G位点(即转录起始点上游989 bp处)的甲基化率显著下降(P<0.05);GRB10 mRNA表达较新鲜组显著升高(P<0.05)。结论冷冻复苏过程影响人精子GRB10、SNRPN基因的DNA甲基化和mRNA表达,提示精子库常规使用的精液冻储技术可能改变配子的表观遗传信息,进而调控基因的表达。

乳腺癌中N-α-乙酰转移酶10的表达及预后意义

目的探讨蛋白质N-α-乙酰转移酶基因10(NAA10)作为乳腺癌治疗靶点的可能性。方法通过METABRIC数据库分析33个乙酰转移酶基因与乳腺癌预后的关系,并分析NAA10基因表达与乳腺癌临床病理参数之间的关系;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)实验检测NAA10基因mRNA和蛋白水平表达,应用NAA10小干扰RNA(siRNA)处理NAA10高表达的乳腺癌细胞株,选取乳腺癌国际联盟分子分类(METABRIC)数据库1974例乳腺癌患者,其中腺腔A型(Luminal A)718例,腺腔B型(Luminal B)占488例,人表皮生长因子受体2(Her-2)过表达型占240例,基底样型(Basal-like)占329例,正常乳腺样型(Normal-like)199例。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆形成实验检测NAA10基因沉默后对乳腺癌细胞增殖的影响。计数资料比较采用t检验、χ^2检验,相关性检验采用Spearman等级相关分析,。结果NAA10的mRNA表达与乳腺癌的无病生存率(DFS)及总生存率(OS)差异有统计学意义(P<0.05),其相对风险比分别为1.31(1.14~1.51),1.13(1.01~1.25);NAA10基因的表达与乳腺癌组织学分级、淋巴结状态、诺丁汉指数(NPI)明显正相关(P<0.01);NAA10的mRNA和蛋白水平在Basal-like型乳腺癌表达最高;与对照组比较,NAA10基因沉默可以抑制乳腺癌细胞增殖50%左右(P<0.05),差异有统计学意义。结论NAA10基因与乳腺癌细胞增殖密切相关且其表达水平与乳腺癌预后关系密切。