期刊文献+
共找到39篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3反式激活SV40病毒早期启动子的研究 被引量:15
1
作者 刘妍 成军 +5 位作者 牟劲松 陆荫英 王建军 李克 王琳 张玲霞 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期44-46,共3页
聚合酶链反应(PCR)扩增丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3基因 ,克隆至真核表达载体pcDNA3 1(- )中 ,构建HCV NS3基因真核表达载体 pcDNA3 1(- ) NS3;以该质粒转染肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞 ,免疫印迹方法 (Westernblotting)检测转染... 聚合酶链反应(PCR)扩增丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3基因 ,克隆至真核表达载体pcDNA3 1(- )中 ,构建HCV NS3基因真核表达载体 pcDNA3 1(- ) NS3;以该质粒转染肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞 ,免疫印迹方法 (Westernblotting)检测转染细胞中HCVNS3蛋白的瞬时表达 ;与报告质粒pCAT3 promoter共转染HepG2细胞 ,用酶联免疫吸附方法 (ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶 (CAT)的表达活性。结果显示 ,质粒pcDNA3 1(- ) NS3在HepG2细胞瞬时表达HCVNS3蛋白 ,共转染实验中pcDNA3 1(- ) NS3组的CAT表达活性是空质粒对照组的 4 6倍。表明构建的表达载体能在哺乳动物细胞中表达出相应蛋白 ,并能够反式激活SV4 0病毒早期启动子。本研究为进一步克隆HCVNS3蛋白反式激活的靶基因 。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白ns3 反式激活 SV40病毒 早期启动子
下载PDF
抗猪瘟病毒NS3(p80)蛋白单克隆抗体的制备及其特性鉴定 被引量:15
2
作者 鲁絮 张彦明 +5 位作者 郑增忍 穆杨 龚振华 李葳 徐浩 余欣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期464-468,共5页
在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达猪瘟病毒石门株NS3基因部分功能片段,以纯化的重组NS3(p80)蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA筛选及3次连续克隆化获得了4株可分泌抗NS3单抗的杂交瘤细胞(2G7,2F11,5D2... 在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达猪瘟病毒石门株NS3基因部分功能片段,以纯化的重组NS3(p80)蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA筛选及3次连续克隆化获得了4株可分泌抗NS3单抗的杂交瘤细胞(2G7,2F11,5D2和6F11),通过小鼠体内诱生法制备腹水,并对杂交瘤细胞和单克隆抗体的特性进行鉴定。结果表明,杂交瘤细胞染色体正常,抗体分泌稳定,单抗效价高,亲和力各不相同,Ig亚类鉴定均为IgG1。Westernblot分析证明4株单抗均能与原核表达的NS3蛋白特异性结合,6F11株与真核表达的NS3蛋白有较强的特异性反应。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 ns3基因 表达 蛋白纯化 单克隆抗体
下载PDF
HCVNS3基因片段酵母展示文库的构建和鉴定 被引量:8
3
作者 贾帅争 孙红琰 +4 位作者 刘晓达 杜芝燕 杜勇 王全立 章扬培 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期56-60,共5页
HCV NS3特异的 CD4+T细胞反应与 HCV感染的良性转归相关 .为了筛选其 CD4+T细胞表位 ,构建了 HCV NS3基因片段酵母展示文库 .首先 DNase 不完全酶切 HCV NS3基因产生长度为 1 0 0~ 30 0 bp的随机片段 ,然后在它们两端加上含限制性内切... HCV NS3特异的 CD4+T细胞反应与 HCV感染的良性转归相关 .为了筛选其 CD4+T细胞表位 ,构建了 HCV NS3基因片段酵母展示文库 .首先 DNase 不完全酶切 HCV NS3基因产生长度为 1 0 0~ 30 0 bp的随机片段 ,然后在它们两端加上含限制性内切酶 Bam H 作用位点的接头 ,再以接头序列作引物进行 PCR扩增 .最后扩增产物用 Bam H 酶切后与 Bam H 线性化的穿梭载体 p YD1连接 ,转化大肠杆菌 (E.coli) DH5α,共得到 2× 1 0 6个转化子 .转化菌落的 PCR扩增结果表明 ,约 50 %转化子含插入片段 .随机选择 5个插入片段测序 ,然后与 DNA序列数据库中的序列比较 .结果显示它们分别与 HCV NS3序列有 96%~ 99%的同源性 .用从转化菌落中提取的质粒转化酵母 (S.cerevisiae)菌株 EBY1 0 0 ,得到含 2× 1 0 5个插入片段的 HCV NS3基因片段酵母展示文库 .半乳糖诱导的酵母细胞通过和 FITC标记的抗体结合 ,用 FACS可以在 2 0 %的细胞表面检测到融合蛋白的表达 . 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白3 酵母展示 基因片段随机文库
下载PDF
ULBP1启动子报告质粒的构建及NS3/4A蛋白对ULBP1基因转录的作用 被引量:3
4
作者 马红芳 何湘 +5 位作者 王可 王芳 焦新安 张艳红 章金刚 钟辉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期483-485,489,共4页
目的:构建含有ULBP1基因启动子的报告质粒,并初步研究NS3/4A对ULBP1转录的影响。方法:将ULBP1启动子核心区序列连接在pGL3-enhance载体上构建ULBP1报告质粒pGL3-ULBP1质粒;将HCV的蛋白酶NS3/4A基因亚克隆到pcDNA3-Flag载体上(pcDNA3-Fla... 目的:构建含有ULBP1基因启动子的报告质粒,并初步研究NS3/4A对ULBP1转录的影响。方法:将ULBP1启动子核心区序列连接在pGL3-enhance载体上构建ULBP1报告质粒pGL3-ULBP1质粒;将HCV的蛋白酶NS3/4A基因亚克隆到pcDNA3-Flag载体上(pcDNA3-Flag-NS3/4A),Western blot检测其表达。用荧光分度计检测NS3/4A对ULBP1转录水平的影响。结果:成功构建了含有ULBP1启动子的报告质粒pGL3-ULBP1和FLAG-NS3/4A真核表达质粒,并检测到NS3/4A可以抑制ULBP1的转录。结论:HCV的蛋白酶NS3/4A可以抑制ULBP1的转录。 展开更多
关键词 丙肝病毒 ns3/4A基因 ULBP1 报告基因
下载PDF
丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3反式激活基因1的克隆化研究 被引量:8
5
作者 纪冬 成军 +4 位作者 王建军 刘妍 杨倩 王春花 党晓燕 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2003年第3期237-240,共4页
目的 应用抑制性消减杂交技术 (SSH )及生物信息学技术 (bioinformatics)筛选并克隆丙型肝炎病毒非结构蛋白 3(NS3 )反式激活新型靶基因 ,进一步阐明HCV感染相关疾病的发病机制。方法 以HCVNS3蛋白表达质粒pcDNA3 1(-) NS3转染HepG... 目的 应用抑制性消减杂交技术 (SSH )及生物信息学技术 (bioinformatics)筛选并克隆丙型肝炎病毒非结构蛋白 3(NS3 )反式激活新型靶基因 ,进一步阐明HCV感染相关疾病的发病机制。方法 以HCVNS3蛋白表达质粒pcDNA3 1(-) NS3转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1(-)为平行对照 ,提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析。并应用分子生物学技术 ,结合生物信息学技术 ,克隆HCVNS3反式激活作用的新的靶基因。结果 对于所获基因片段序列分析表明 ,其中之一为新型基因片段。从HepG2细胞提取总RNA ,以逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列 ,并测序证实 ,因其可以被NS3蛋白反式激活 ,故命名为NS3TP1,已在GenBank中注册 ,注册号为AY116969。NS3TP1基因的编码序列全长为 193 2个核苷酸 (nt) ,编码产物由 64 2个氨基酸残基 (aa)组成。结论 HCVNS3是一种典型的病毒基因组编码的具有反式激活作用的蛋白 ,HCVNS3反式激活作用的新靶基因的发现 。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白ns3 反式激活 基因克隆化 抑制性消减杂交技术 生物信息学技术
下载PDF
猪瘟病毒石门株NS3基因在大肠杆菌中的表达 被引量:4
6
作者 鲁絮 张彦明 许信刚 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第2期15-18,共4页
采用PCR技术,扩增了猪瘟病毒石门株NS3基因的丝氨酸蛋白酶、NTPase、RNA解螺旋酶活性功能区长度为2 000 bp的片段,将其克隆到pET-32a中,构建了原核表达载体pET-NS3,并将其在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行了表达,同时对表达产物进行了SDS-P... 采用PCR技术,扩增了猪瘟病毒石门株NS3基因的丝氨酸蛋白酶、NTPase、RNA解螺旋酶活性功能区长度为2 000 bp的片段,将其克隆到pET-32a中,构建了原核表达载体pET-NS3,并将其在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行了表达,同时对表达产物进行了SDS-PAGE和Western blotting检测。结果表明,IPTG诱导表达得到的pET-NS3融合蛋白的相对分子质量约为97 ku,与预期结果一致,且该重组蛋白能被CSFV阳性血清所识别。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 ns3基因 大肠杆菌
下载PDF
丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3反式激活基因2的克隆化研究 被引量:7
7
作者 党晓燕 成军 +5 位作者 刘妍 邓红 杨倩 王建军 纪冬 王春花 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2003年第3期241-244,共4页
目的 应用抑制性消减杂交技术 (SSH)及生物信息学技术 (bioinformatics)筛选并克隆丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白3 (NS3 )反式激活新型靶基因 ,进一步阐明HCV感染相关疾病的发病机制。方法 以HCVNS3蛋白表达质粒pcDNA3 1(-) NS3转染... 目的 应用抑制性消减杂交技术 (SSH)及生物信息学技术 (bioinformatics)筛选并克隆丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白3 (NS3 )反式激活新型靶基因 ,进一步阐明HCV感染相关疾病的发病机制。方法 以HCVNS3蛋白表达质粒pcDNA3 1(-) NS3转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1(-)为平行对照 ,提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析。并应用分子生物学技术 ,结合生物信息学技术 ,克隆HCVNS3反式激活作用的新的靶基因。结果 对于所获基因片段序列分析表明 ,其中之一为新型基因片段 ,从HepG2细胞提取总RNA ,以逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列 ,并测序证实 ,因其可以被NS3蛋白反式激活 ,故命名为NS3TP2 ,在GenBank中注册 ,注册号为AY116970。NS3TP2基因的编码序列全长为 12 99个核苷酸 (nt) ,编码产物由43 2个氨基酸残基 (aa)组成。结论 HCVNS3是一种典型的病毒基因组编码的具有反式激活作用的蛋白 ,而抑制性消减杂交 (SSH)是一种鉴定、分离组织细胞中选择性表达基因的技术。通过这种技术 ,发现了HCVNS3反式激活作用的新的靶基因 ,这一发现 ,为进一步研究HCVNS3蛋白反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白ns3 反式激活 基因克隆化 抑制性消减杂交技术 发病机制 生物信息学技术
下载PDF
中国人丙型肝炎病毒全长NS3基因的克隆、序列分析及表达 被引量:1
8
作者 王尊文 祁自柏 +4 位作者 谷金莲 于洋 杨振 张华远 李河民 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期65-67,共3页
目的 为改进HCV试剂的质量克隆 1b型丙型肝炎病毒 (HCV)全长NS3基因并在原核细胞中表达。方法 用RT PCR方法从中国人血清中扩增全长NS3片段 ,进行序列分析 ,并克隆到pET3 0a(+)原核表达载体中 ,构建的原核表达载体pET NS3 180 0在大... 目的 为改进HCV试剂的质量克隆 1b型丙型肝炎病毒 (HCV)全长NS3基因并在原核细胞中表达。方法 用RT PCR方法从中国人血清中扩增全长NS3片段 ,进行序列分析 ,并克隆到pET3 0a(+)原核表达载体中 ,构建的原核表达载体pET NS3 180 0在大肠杆菌BL2 1(DE3 )中表达 ,用Westernblot方法进行验证。结果 扩增到 1b型HCV全长NS3片段 ,经Westernblot实验表明该片段具有抗原活性。 展开更多
关键词 中国人 丙型肝炎病毒 ns3基因 克隆 序列分析 表达
下载PDF
靶向猪瘟病毒NS3基因shRNA干扰载体的构建与鉴定 被引量:3
9
作者 冶贵生 张彦明 +1 位作者 徐浩 郭抗抗 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第3期7-10,共4页
利用RNA干扰在线生物学软件分析猪瘟病毒NS3基因,设计针对NS3基因不同位置的小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰序列(其结构特征为正链(19nt)-环(9nt)-负链(19nt))。化学合成这些序列,并退火连接为双链干扰片段,将双链干扰片段定... 利用RNA干扰在线生物学软件分析猪瘟病毒NS3基因,设计针对NS3基因不同位置的小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰序列(其结构特征为正链(19nt)-环(9nt)-负链(19nt))。化学合成这些序列,并退火连接为双链干扰片段,将双链干扰片段定向克隆到干扰载体中,构建重组载体pGene-NS3-1,pGene-NS3-2和pGene-NS3-3,转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,对转化产物进行kan+筛选,碱裂解法提取重组质粒,将酶切鉴定为阳性的质粒测序。结果显示,双链干扰片段克隆方向正确,序列中未出现核苷酸的插入,缺失等突变现象。表明靶向猪瘟病毒NS3基因shRNA干扰载体构建成功。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 ns3基因 RNA干扰 小发卡RNA
下载PDF
登革2型病毒NS3基因的酵母表达及其免疫反应性的测定 被引量:2
10
作者 晏辉钧 江丽芳 +2 位作者 方丹云 周经姣 郭辉玉 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期482-484,488,共4页
目的克隆登革2型病毒(DEN2)NS3基因并用酵母真核表达,获得全长的重组NS3蛋白质,为其结构与功能的研究提供条件。方法从感染DEN2(NGC株)后病变的C6/36细胞上清液中提取RNA,通过RTPCR扩增NS3基因片段,与载体pPICZαB连接筛选得到重组质粒... 目的克隆登革2型病毒(DEN2)NS3基因并用酵母真核表达,获得全长的重组NS3蛋白质,为其结构与功能的研究提供条件。方法从感染DEN2(NGC株)后病变的C6/36细胞上清液中提取RNA,通过RTPCR扩增NS3基因片段,与载体pPICZαB连接筛选得到重组质粒,电穿孔法将重组体整合入酵母菌P.pastoris,经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定,取Mut+菌诱导表达,SDSPAGE检测表达产物。结果RTPCR得到1.85kb的NS3基因片段,酶切鉴定与测序显示重组质粒含DEN2全长NS3基因;Mut+酵母转化菌可分泌表达Mr约78000的蛋白质,与DEN2多抗和登革2型病毒患者恢复期血清的免疫印迹证实它为型特异的重组NS3蛋白质。结论成功将克隆的全长DEN2NS3基因在酵母菌中表达,获得的重组NS3蛋白质具有免疫反应性。 展开更多
关键词 登革2型病毒 ns3基因 巴氏毕赤酵母 基因表达 抗体
下载PDF
灰飞虱携带的水稻条纹病毒NS2和NS3基因的分子变异 被引量:2
11
作者 任春梅 程兆榜 +2 位作者 杨柳 缪倩 周益军 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第8期1854-1863,共10页
为揭示灰飞虱携带水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)的NS2和NS3基因分子变异特征,采用单雌产卵法从江苏、云南、山东、河北等地获得20个灰飞虱携带的RSV分离物,RT-PCR扩增出NS2和NS3基因特异片段,并对扩增产物进行克隆测序,... 为揭示灰飞虱携带水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)的NS2和NS3基因分子变异特征,采用单雌产卵法从江苏、云南、山东、河北等地获得20个灰飞虱携带的RSV分离物,RT-PCR扩增出NS2和NS3基因特异片段,并对扩增产物进行克隆测序,再结合Genbank中已报道的其他分离物序列,利用生物信息学软件分析不同寄主、地区分离物的分子变异特点及系统发育关系。序列测定表明,20个分离物NS2和NS32个基因核苷酸序列同源性分别为96.5%~100%(NS2)和95.4%~100%(NS3),推导编码的蛋白氨基酸序列同源性为97.0%-100%(NS2)和96.2%-100%(NS3)。基于核苷酸序列构建的系统进化树分析表明2个基因均可以明显分为2组,其中一组均为中国云南水稻上的分离物,2组间遗传距离分别为0.05711(NS2)和0.06081(NS3),2基因的Z—test的检测结果表明都处于强烈的负选择压下。从2基因氨基酸构建的系统发育树和变异热点上分析,其氨基酸序列的分子变异首先与地缘相关,2基因均可以分成中国云南及云南以外的2个地理亚群;其次与寄主相关,可以划分为灰飞虱和水稻2个寄主群。 展开更多
关键词 水稻条纹病毒 NS2和ns3基因 分子变异 寄主群 地理亚群
下载PDF
猪瘟病毒NS3蛋白ATPase/RNA解旋酶功能区的表达与纯化 被引量:3
12
作者 郑杰 宁宜宝 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第10期43-46,共4页
采用RT-PCR技术扩增出猪瘟病毒石门株和C株NS3基因的ATPase/RNA解旋酶功能区,将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,获得重组质粒pET-NS3SM和pET-NS3C;PCR、酶切鉴定和序列分析结果表明目的基因插入位置、方向和读码框完全正确;0.8 mmol/L I... 采用RT-PCR技术扩增出猪瘟病毒石门株和C株NS3基因的ATPase/RNA解旋酶功能区,将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,获得重组质粒pET-NS3SM和pET-NS3C;PCR、酶切鉴定和序列分析结果表明目的基因插入位置、方向和读码框完全正确;0.8 mmol/L IPTG诱导得到分子量为54kD的目的蛋白,Western blotting结果表明,表达的目的蛋白与猪瘟高免血清没有出现肉眼可见的反应;通过ELISA试验结果表明,重组蛋白能被CSFV阳性血清识别。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 ns3基因 ATPase/RNA解旋酶 克隆 表达
下载PDF
HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶在大肠杆菌中表达、纯化 被引量:2
13
作者 雷迎峰 尹文 +4 位作者 杨敬 吕欣 韦三华 安群星 徐志凯 《科学技术与工程》 2008年第5期1151-1155,共5页
在大肠杆菌中HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶获得表达并进行纯化。根据NS3与NS4A两者形成异源二聚体的结构要求,并参照文献,通过基因拼接的方法设计了单链NS3/4A丝氨酸蛋白酶的基因。合成相应引物,利用反转录PCR从HCV患者血液中扩增出该蛋白酶... 在大肠杆菌中HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶获得表达并进行纯化。根据NS3与NS4A两者形成异源二聚体的结构要求,并参照文献,通过基因拼接的方法设计了单链NS3/4A丝氨酸蛋白酶的基因。合成相应引物,利用反转录PCR从HCV患者血液中扩增出该蛋白酶的编码基因,克隆入原核表达载体pRSET-A,将重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a转化BL211(DE3)大肠杆菌,并诱导表达与纯化。成功地构建了重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a;重组质粒转化的BL21工程菌经IPTG诱导表达后,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot证实为NS3/4A丝氨酸蛋白酶,并用镍离子亲和层析方法获得纯化蛋白酶。获得的纯化NS3/4A丝氨酸蛋白酶为建立其酶活性测定系统奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ns3/4A丝氨酸蛋白酶 大肠杆菌 蛋白表达
下载PDF
水稻条纹病毒安徽分离物NS3基因的克隆及其RNA沉默抑制子功能的初步鉴定
14
作者 邓竹根 丁菲 +2 位作者 贾琳 宋培培 江彤 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期636-641,共6页
采集安徽马鞍山水稻条纹叶枯病感病稻株,TRIzol法提取样本总RNA,设计特异性引物进行RT-PCR扩增,获得水稻条纹病毒(RSV)安徽分离物的RNA3部分片段,克隆并测序。序列分析表明,该片段全长874 nts,含有完整的NS3基因,NS3基因序列长度为636 n... 采集安徽马鞍山水稻条纹叶枯病感病稻株,TRIzol法提取样本总RNA,设计特异性引物进行RT-PCR扩增,获得水稻条纹病毒(RSV)安徽分离物的RNA3部分片段,克隆并测序。序列分析表明,该片段全长874 nts,含有完整的NS3基因,NS3基因序列长度为636 nts,编码211个氨基酸。序列比对发现,RSV安徽分离物NS3基因与来源于华东各省市RSV分离物NS3基因间的序列相似性高达97.6%~99.4%,而与RSV云南分离物NS3基因间的序列相似性相对较低,为93.4%~95.4%。构建RSV NS3基因系统关系树,发现RSV安徽分离物NS3基因与来源于华东各省市8个RSV分离物NS3基因聚成一个单独的分支,说明华东各省市各个RSV分离物亲缘关系最近。将RSV安徽分离物NS3基因插入植物表达载体pBIN438,构建重组植物表达载体pBIN-NS3并转化农杆菌。将含pBIN-NS3的农杆菌和含pBIN-GFP的农杆菌共浸润16c本氏烟叶片,6天后紫外灯下观察发现,共浸润区表现出强烈的绿色荧光,说明16c本氏烟GFP基因局部沉默被抑制,可以初步证明RSV安徽分离物编码的NS3蛋白是一个RNA沉默抑制子。 展开更多
关键词 水稻条纹病毒 ns3基因 克隆 序列分析 RNA沉默抑制子
下载PDF
农杆菌介导获得转水稻草矮病毒NS3基因水稻植株
15
作者 林丽明 吴祖建 +1 位作者 林奇英 谢联辉 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2004年第1期60-63,共4页
构建了包含水稻草矮病毒(Ricegrassystuntvirus,RGSV)NS3基因的植物表达载体pCBTNSv3,应用农杆菌介导法,将NS3基因导入水稻愈伤组织中,获得了转RGSVNS3的水稻转基因植株,总DNA经PCR、Southern点杂交鉴定,初步证实NS3基因已整合到水稻基... 构建了包含水稻草矮病毒(Ricegrassystuntvirus,RGSV)NS3基因的植物表达载体pCBTNSv3,应用农杆菌介导法,将NS3基因导入水稻愈伤组织中,获得了转RGSVNS3的水稻转基因植株,总DNA经PCR、Southern点杂交鉴定,初步证实NS3基因已整合到水稻基因组中. 展开更多
关键词 水稻 草矮病毒 转基因植株 农杆菌介导法 稻草 愈伤组织 总DNA ns3基因 PCR 鉴定
下载PDF
登革病毒NS3全基因的扩增与克隆
16
作者 江丽芳 晏辉钧 +2 位作者 潘文彤 方丹云 郭辉玉 《中国病毒学》 CSCD 2000年第2期193-196,共4页
The RNA of dengue 2 virus (New Guinea C strain, NGC) was extracted from small amount of dengue 2 virus culture supernatant. The large NS3 gene fragment was amplified from RNA of dengue 2 virus with RT PCR method. The ... The RNA of dengue 2 virus (New Guinea C strain, NGC) was extracted from small amount of dengue 2 virus culture supernatant. The large NS3 gene fragment was amplified from RNA of dengue 2 virus with RT PCR method. The amplified NS3 gene fragment was cloned directly into the pUC18 plasmid vector. The recombinant plasmid was identified by agarose gel electrophoresis analysis after digestion with restriction endonuclease and nested PCR method. The results showed that the amplified NS3 gene fragment was about 1978 bp in length; the recombinant plasmid contained NS3 gene of dengue 2 virus. The method of amplified large fragment of dengue virus from small amount of dengue virus culture supernatant was established. 展开更多
关键词 登革病毒 ns3基因 RT-PCR 基因克隆
下载PDF
庚型肝炎病毒——中国河北分离株部分NS3区基因序列分析
17
作者 徐东刚 逯好英 +2 位作者 牛建章 韩风连 高新 《中国病毒学》 CSCD 1998年第2期166-169,共4页
在急慢性输血后肝炎、散发性肝炎及爆发型肝炎中,大约10~20%的病人不属于已发现的A~E型肝炎,提示存在新型肝炎病毒。在美国1995年第46届医学年会上,已有了一些有关庚型肝炎病毒(HGV)分子生物学及庚型肝炎血清学... 在急慢性输血后肝炎、散发性肝炎及爆发型肝炎中,大约10~20%的病人不属于已发现的A~E型肝炎,提示存在新型肝炎病毒。在美国1995年第46届医学年会上,已有了一些有关庚型肝炎病毒(HGV)分子生物学及庚型肝炎血清学方面的摘要报道。1996年初Lin... 展开更多
关键词 庚型肝炎病毒 ns3基因 序列分析
下载PDF
丙型肝炎病毒NS3基因真核表达载体的构建及表达
18
作者 孙菊 楚雍烈 +4 位作者 安润 付慧 姜凤良 柴长斌 胡志芳 《陕西医学杂志》 CAS 2009年第7期799-801,共3页
目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因NS3的真核表达载体,并分析其在HeLa细胞中的表达。方法:以HCV全长cDNA质粒为模板进行PCR扩增,获得全长NS3基因,将其插入克隆载体pMD18-T中,鉴定后与真核表达载体pcDNA3.1(+)重组,用脂质体介导法转... 目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因NS3的真核表达载体,并分析其在HeLa细胞中的表达。方法:以HCV全长cDNA质粒为模板进行PCR扩增,获得全长NS3基因,将其插入克隆载体pMD18-T中,鉴定后与真核表达载体pcDNA3.1(+)重组,用脂质体介导法转染HeLa细胞,间接免疫荧光法及Western blot鉴定转染后HCVNS3蛋白的表达。结果:PCR扩增的NS3序列正确,构建的真核表达载体成功转染HeLa细胞,表达的NS3蛋白相对分子量为70kD。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)/NS3,并在HeLa细胞中获得表达。 展开更多
关键词 肝炎病毒/免疫学 @非结构蛋白3 @Hela细胞 基因表达
下载PDF
基因枪法和肌内注射法免疫HCV NS3/4A诱导小鼠免疫应答的比较
19
作者 姚敏 尹文 +4 位作者 雷迎峰 杨敬 黄小军 康健 吕欣 《微生物学免疫学进展》 2012年第4期15-20,共6页
目的比较肌内注射法和基因枪法对免疫效果的影响。方法将携带HCV NS3/4A基因的质粒pcDNA3.1-NS3/4A,分别肌内注射和基因枪免疫BALB/c小鼠。基因枪免疫采用2μg/只和10μg/只两种剂量,肌内注射免疫的剂量为100μg/只,共免疫3次。分别于第... 目的比较肌内注射法和基因枪法对免疫效果的影响。方法将携带HCV NS3/4A基因的质粒pcDNA3.1-NS3/4A,分别肌内注射和基因枪免疫BALB/c小鼠。基因枪免疫采用2μg/只和10μg/只两种剂量,肌内注射免疫的剂量为100μg/只,共免疫3次。分别于第3次免疫后10 d和20 d,收集小鼠血清、分离脾细胞;ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体水平;ELIspot检测小鼠IFN-γI、L-2和IL-4;非放射性细胞毒性试验检测其对肿瘤细胞的杀伤作用,从而比较肌内注射和基因枪法激发小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答的影响。结果免疫后第10 d检测结果表明,2μg/只和10μg/只基因枪法免疫产生的抗体效价分别为1∶500和1∶1 000,100μg/只肌内注射免疫产生的抗体效价为1∶1 000。第20 d再次检测,基因枪法产生的抗体效价仍为1∶500和1∶1 000,肌内注射降低为1∶500。2μg/只和10μg/只基因枪免疫产生的IFN-γ和IL-2均高于100μg/只肌内注射免疫。但这两种免疫方法均未激发IL-4的水平。在不同的效靶比情况下,10μg/只和2μg/只基因枪免疫激发的CTL细胞杀伤活性均高于100μg/只肌内注射免疫。结论基因枪法免疫小鼠诱导的体液免疫和细胞免疫应答均显著高于肌内注射免疫。 展开更多
关键词 基因枪 肌内注射 丙型肝炎病毒 ns3/4A 免疫应答
下载PDF
日本乙型脑炎病毒NS3蛋白的真核表达及鉴定 被引量:1
20
作者 王双双 赵红梅 +2 位作者 周丹娜 蔡行 耿超 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第17期90-92,96,185,共5页
为了探讨日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)的复制机制及其蛋白与宿主蛋白的相互作用关系,试验以GenBank中收录的JEV HW1株NS3基因序列为模板设计引物,经PCR扩增获得NS3基因序列后,采用ClonExpress克隆技术将NS3基因... 为了探讨日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)的复制机制及其蛋白与宿主蛋白的相互作用关系,试验以GenBank中收录的JEV HW1株NS3基因序列为模板设计引物,经PCR扩增获得NS3基因序列后,采用ClonExpress克隆技术将NS3基因连接到真核表达载体p EGFP-C3上,将得到的产物pEGFP-C3-NS3送生工生物工程(上海)股份有限公司测序;使用X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent体外转染幼地鼠肾细胞(BHK21细胞),观察24 h后应用Western-blot和IFA法进行鉴定。结果表明:PCR克隆获得的基因片段大小约为1 370 bp,NS3基因片段与HW1株同源性为100%;BHK21细胞密度在70%~80%时质粒转染效果最佳,质粒质量与转染试剂体积的比例为1∶3;Western-blot鉴定融合蛋白成功表达,分子质量约为79 ku;IFA鉴定融合蛋白成功表达,24 h为转染高峰期,绿色荧光最强,pEGFP-C3-NS3与NS3阳性血清反应显红色荧光。说明在BHK21细胞中成功表达出NS3蛋白。 展开更多
关键词 日本乙型脑炎病毒 ns3基因 克隆 真核表达 转染 BHK21细胞 IFA WESTERN-BLOT
下载PDF
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部