牛A-FABP与SREBP1基因的组织表达规律研究

A-FABP(脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白)和SREBP1(固醇调节元件结合蛋白)是动物体内参与脂肪沉积和脂质合成的重要基因。为了研究这两种基因在牛组织中的表达规律,研究利用qRT-PCR技术检测A-FABP和SREBP1在荷斯坦牛13种组织中表达水平,并进一步比较了这两个基因在秦川牛和雪龙黑牛脂肪、肌肉和肝脏的组织中表达差异。研究结果表明A-FABP基因在脂肪组织中的表达水平远远高于其他组织,SREBP1基因在各组织中均有表达,脂肪组织的相对表达量最高。A-FABP基因在雪龙黑牛肌肉和肝脏组织中的表达量显著高于秦川牛的肌肉和肝脏(P<0.05),而在脂肪组织中,秦川牛和雪龙黑牛该基因表达量无显著差异(P>0.05)。SREBP1基因在雪龙黑牛肌肉和肝脏组织中的表达量显著高于秦川牛的肌肉和肝脏(P<0.05),而在脂肪组织中,秦川牛表达量显著高于雪龙黑牛(P<0.05)。由于A-FABP和SREBP1在脂肪中表达量最高,且它们的表达量在脂肪沉积能力不同的秦川牛和雪龙黑牛肌肉和肝脏组织中存在显著差异,故推断这两种基因在牛脂肪组织的脂质代谢过程中发挥重要作用,对脂肪的沉积和大理石花纹牛肉的形成起到一定的调控作用。

延边黄牛SREBP1基因多态性与肌内脂肪酸组成的相关性研究

为探讨SREBP1基因多态性及其与肌内脂肪酸的相关性,选取30月龄,健康无病,体重相近的延边黄牛29头,屠宰后采集肉样与血样,进行DNA提取与脂肪酸含量测定,利用PCR方法检测固醇调节元件结合蛋白(Slerol regulatory element binding factor 1,SREBP1)基因第5内含子的多态性,并与肌内脂肪沉积性状进行相关性分析。结果表明:在延边黄牛SREBP1基因第5内含子发现84bp插入缺失突变,且与肌内脂肪酸组成显著相关。AB型个体的月桂酸(C12∶0)、棕榈油酸(C16∶1)、硬脂酸(C18∶0)、亚油酸(C18∶2)含量显著高于AA型个体(P<0.05)。说明延边黄牛SREBP基因第5内含子存在84bp插入缺失突变,且这一位点的多态性影响肌肉脂肪酸组成。

奶牛SREBP1蛋白在乳腺上皮细胞的表达定位及对SCD1基因启动子的转录调控

【目的】固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)作为核转录因子,对于细胞脂肪合成酶基因的表达发挥着重要的调控作用。论文旨在奶牛乳腺上皮细胞中研究SREBP1对于SCD1基因启动子的转录调控作用,为进一步明确SREBP1对于靶基因的转录调控机制提供理论基础。【方法】以荷斯坦奶牛乳腺组织的c DNA为模板,采用分段克隆的方法获得SREBP1基因的编码序列,通过重组酶与pc DNA3.1载体进行重组环化构建pc DNA3.1-SREBP1表达载体,将构建的载体测序验证后提取质粒,转染奶牛乳腺上皮细胞。以EIF3K基因为内参基因,采用荧光定量PCR检测SREBP1基因m RNA的表达差异;采用免疫荧光的方法对SREBP1进行标记,以DAPI复染细胞核,激光共聚焦观察SREBP1蛋白的亚细胞定位;转染含有不同调控元件的SCD基因启动子,同时转染1.0μg pc DNA3.1-SREBP1作为处理,荧光素酶报告基因系统分析启动子活性;分别转染0.25、0.5和1μg的pc DNA3.1-SREBP1载体,分析p GL3-SCD 2和p GL3-SCD3启动子活性与SREBP1之间的量效关系。【结果】分段克隆得到的PCR产物分别为1 170、1 116、363和900 bp的片段,经过与pc DNA3.1载体重组后获得pc DNA3.1-SREBP1表达载体,经酶切和测序验证,发现除1个无义突变外,与标准序列完全相同,整个序列长度达到3 510bp;将pc DNA3.1-SREBP1载体转染乳腺上皮细胞后,Real-time PCR检测发现与转染空载体的对照组相比,SREBP1基因的m RNA表达倍数增强130.4倍(P<0.001);激光共聚焦观察发现,DAPI染色的细胞核呈蓝色,免疫荧光标记的SREBP1呈绿色,二者融合后呈现青色,共定位在乳腺上皮细胞核中;启动子活性检测发现,与p GL3-SCD1、p GL3SCD 2相比,SREBP1处理能够极显著增加p GL3-SCD3、p GL3-CD4启动子的活性(P<0.001),分别比对照组提高了1.0倍和0.7倍,进一步分析发现,在用0.25—1μg的pc DNA3.1-SREBP1处理后,与p GL3-SCD2的启动子活性持续下降相比,p GL3-SCD3的启动子活性从59.81上升到108.43(P<0.001),二者存在剂量效应关系,结合SCD2和SCD 3启动子上主要的结构差异SRE元件(5′-AGCAGATTGCG-3′),推测此序列可能是SREBP1调控SCD基因启动子转录的结合序列。【结论】克隆构建奶牛SREBP1基因表达载体,亚细胞定位SREBP1蛋白主要在乳腺上皮细胞核中,SREBP1可以与SRE调控元件结合促进SCD1基因启动子的转录。

2种多不饱和脂肪酸对樱桃谷鸭脂质和SREBP1基因表达的效应

多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFAs)主要通过调控脂肪生成基因和脂肪分解基因的表达来实现畜禽机体脂质的动态平衡。为了探明亚油酸和二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)对肉鸭脂质和固醇调节元件结合1(sterol regulatory elemement binding protein 1,SREBP1)基因表达的影响,设置基础饲粮组、基础饲粮+4%亚油酸组、基础饲粮+4%EPA 3个处理饲喂樱桃谷母鸭,4、6、8和10周龄检测SREBP1mRNA表达丰度和脂质含量,分析其表达与脂质指标的相关性。结果表明:饲粮中添加亚油酸和EPA可引起胸肌中饱和脂肪酸(saturated fatty acids,SFA)、多不饱和脂肪酸(PUFA)、必需脂肪酸(essential fatty acids,EFA)和血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TCHO)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)的明显升高,说明2种脂肪酸对脂肪酸组成和脂质有影响,且亚油酸的影响效果强于二十碳五烯酸;引起SREBP1基因mRNA表达量下降,表明2种脂肪酸对SREBP1基因的转录具有抑制作用;SREBP1基因表达与腹脂、肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)、不饱和脂肪酸(unsaturated acids,UFA)、多不饱和脂肪酸(PUFA)、必需脂肪酸(EFA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCHO)呈显著正相关(P<0.05),表明SREBP1表达对脂质沉积有正向效应。综合结果揭示亚油酸和二十碳五烯酸与SREBP1基因互作调控肉鸭脂肪沉积。

奶牛乳腺上皮细胞中SCAP和SREBP1蛋白调控SCD基因表达的作用研究

旨在研究奶牛乳腺上皮细胞中固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)对固醇调节元件结合蛋白(SREBP1)调控的硬脂酰辅酶A去饱和酶基因(SCD)表达的影响。培养奶牛乳腺上皮细胞,在细胞中转染奶牛SCD基因启动子载体,同时转染SREBP1和SCAP真核表达载体作为处理,采用双荧光素酶报告基因系统检测转染SREBP1和SCAP对SCD基因启动子活性的影响;采用免疫荧光技术观察SREBP1在细胞核的表达,采用荧光定量PCR检测SCD基因mRNA的表达。结果表明,与转染pcDNA3.1载体的对照组相比,转染SCAP对SCD启动子活性无显著影响;转染SREBP1和共转染SCAP/SREBP1极显著增加SCD基因启动子活性值(P<0.01),并且SCAP的转染剂量与SCD的启动子活性值之间具有极显著的量效关系(P<0.01);在乳腺上皮细胞中转染SCAP后,能够增强SREBP1在细胞核的表达;细胞转染SREBP1和共转染SCAP/SREBP1后,SCD基因mRNA的表达分别显著上调1.23倍和1.54倍(P<0.05)。本研究表明,奶牛SCAP可以增加SREBP1蛋白在细胞核中的表达,促进对SCD基因的转录激活作用。

有氧运动和白藜芦醇对II型糖尿病大鼠肝脏氧化应激及NF-κBp65的影响

为探讨有氧运动和白藜芦醇(Res)对II型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏氧化应激及NF-κBp65的影响,采用5周高糖高脂饮食加小剂量注射链脲佐菌素(STZ)(35 mg/kg)构建T2DM大鼠模型。将40只SPF级雄性SD大鼠随机分为5组,分别为正常对照组(C组)、T2DM模型组(D组)、"T2DM+运动"组(DE组)、"T2DM+Res"组(DR组)、"T2DM+运动+Res"组(DER组),每组8只。运动为不负重游泳训练,每周6 d,Res采用灌胃方法按照45 mg/(kg·d)进行,每周7d,7周后检测大鼠空腹血糖(FBG)、空腹血胰岛素(FINS)和肝脏TG、TC、SOD、MDA、TNF-a以及SREBP1、SREBP2和NF-κBp65核蛋白的表达。结果发现,1)与D组比较,DE组、DR组和DER组大鼠FINS、HOMA-IR均显著下降(P<0.05),FBG呈降低趋势(P>0.05),DER组与DE组、DR组比较,FBG、FINS和HOMA-IR均进一步降低(P>0.05);2)与D组比较,DE组、DR组和DER组大鼠肝脏SOD活性显著升高(P<0.05),而MDA含量,肝指数,肝脏TG、TC、nSREBP1、TNF-a、NF-κBp65核蛋白均显著性降低(P<0.05或P<0.01),而nSREBP2呈降低趋势(P>0.05),DER组较DE组、DR组比较,上述指标均进一步降低。结果说明,7周有氧运动和Res均能改善T2DM大鼠肝脏氧化应激和炎症反应,两者联合干预较单一效果更为显著,其机制可能通过抑制肝脏nSREBPs从而减少肝脏的脂质沉积引起的氧化应激,最终抑制NF-κBp65诱导的TNF-a的激活而实现。

晋南牛固醇结合原件蛋白1基因在不同组织中表达规律及其与肌内脂肪含量的相关性研究

为了研究固醇结合原件蛋白1(SREBP1)基因的表达及其参与脂肪酸代谢的调控机制,以及其与肌内脂肪(IMF)含量的关系,本试验选用相同饲养条件下晋南牛12头,屠宰后测定屠宰性状、背最长肌IMF含量、脂肪酸和氨基酸组分及心脏、脾脏、肾脏、肝脏、背最长肌(LP)、皮下脂肪(SF)、腹腔脂肪(AF)、胸腔脂肪(CF)中SREBP1基因相对表达量。根据IMF含量分为高肌内脂肪组(HIF组)和低肌内脂肪组(LIF组),比较2组LP、SF、AF、CF中SREBP1基因相对表达量的差异,并分析其与IMF含量的相关性。结果表明:LIF组胴体重、屠宰率均显著高于HIF组(P<0.05);HIF组IMF含量为12.30%,显著高于LIF组(P<0.05);LIF组的LP剪切力显著高于HIF组(P<0.05)。HIF组的LP中总脂肪酸(TFA)含量为9.698%,显著高于LIF组(P<0.05)。SREBP1基因在所测组织中均有表达,其中在LP中的相对表达量最高(P<0.05),在肾脏、肝脏和脂肪组织中次之;HIF组SREBP1基因在LP中的相对表达量极显著高于LIF组(P<0.01),在AF和CF中的相对表达量极显著低于LIF组(P<0.01);LP中SREBP1基因相对表达量与IMF含量呈极显著正相关(R^(2)=0.987,P<0.01),AF、CF中SREBP1基因相对表达量与IMF含量则呈极显著负相关(AF:R^(2)=-0.713、P<0.01,CF:R^(2)=-0.946、P<0.01)。综上所述,晋南牛SREBP1基因在不同组织中表达量不同,以LP中相对表达量最高;不同IMF含量晋南牛SREBP1基因表达模式不同,且SREBP1基因正向调控LP中IMF沉积,可作为影响晋南牛IMF含量的候选基因。

SREBP1基因多态性与西门塔尔牛肌内脂肪含量相关性分析

选取165头西门塔尔育肥牛为研究对象,利用PCR方法检测固醇调节元件结合蛋白(Sterol regulatory ele-ment binding factor 1,SREBP1)基因第5内含子内84bp插入缺失突变的多态性,并与肌内脂肪含量进行相关性分析。结果显示,SREBP1基因第5内含内84bp插入缺失突变与棕榈油酸(C16:1)、硬脂酸(C18:0)、SFA和甘油三酯及C16脂肪酸不饱和指数显著相关(P<0.05),LL型个体棕榈油酸、甘油三酯和16碳脂肪酸不饱和指数均高于LS型个体,而硬脂酸和SFA低于LS个体。

前列腺癌PC3细胞表达鸭SREBP1基因的分析

为了探讨鸭SREBP1基因对前列腺癌PC3细胞增殖的影响,通过构建携带His标签鸭SREBP1基因第310位至403位氨基酸序列的真核表达载体p EGFP-N3+SREBP1+His,转染前列腺癌PC3细胞,空载体p EGFP-N3为对照,结果表明:p EGFP-N3+SREBP1+His和空载体均成功转染前列腺癌PC3细胞,p EGFP-N3+SREBP1+His转染效率高于空载体,通过检测转染48 h的细胞数量和SREBP1表达量,p EGFP-N3+SREBP1+His组细胞数为0.82×10~6个,SREBP1基因表达量为124.128 pg/m L;空载体组细胞数为0.74×10~6个,没有检测到His标签表达量。研究结果揭示,鸭SREBP1基因第310位至403位氨基酸序列对前列腺癌PC3细胞的增殖有促进作用。

樱桃谷鸭SREBP1基因变异对脂肪含量及血清生化指标的关联性研究

SREBP1基因在畜禽脂肪沉积过程中起着重要的调控作用,为探究SREBP1基因变异对鸭脂肪含量及血清生化指标的遗传效应,本研究选取10周龄的樱桃谷鸭100只(♂58,♀42)为研究对象,利用DNA直接测序法检测基因的SNP_S位点,一般线性模型分析基因变异与脂肪含量及血清生化指标的关联性。结果表明:在樱桃谷鸭SREBP1基因CDS区第999位碱基发生C/G突变,导致第333个密码子CTC转变成CTG,编码的亮氨酸(L)没有发生改变;第1 124位碱基发生A/G突变,导致第375个密码子GAC转变成GGC,编码的天冬氨酸(D)改变成甘氨酸(G);2个SNPs位点共产生6种基因型:AA、AB、BB、BC、CC、AC,3个等位基因A、B、C,等位基因A为优势等位基因,其频率为0.42,杂合度和多态信息含量分别为0.66和0.58,属于高度多态,χ~2检验表明,樱桃谷鸭群体中该多态座位基因型分布处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。关联分析显示, BB基因型的甘油三酯和肌内脂肪含量最高,显著高于其他5种基因型(P<0.05)。结果揭示BB基因型是脂肪沉积的有利基因型,等位基因B是有利等位基因,可用于选择高脂的樱桃谷鸭品系。

苓桂术甘汤通过Thrsp-Srebp1通路改善高脂饮食诱导的大鼠脂肪变性

目的:探讨苓桂术甘汤对高脂饮食诱导的脂肪肝大鼠脂质代谢相关基因表达的影响,阐释苓桂术甘汤改善高脂饮食诱导的脂肪变性的作用机制。方法:24只大鼠随机分成3组,每组8只。正常组予正常饮食喂养8周;模型组高脂饮食饲养8周;苓桂术甘汤组高脂饮食饲养8周,第5周起同时予苓桂术甘汤(3.6g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃。8周后,取各组大鼠肝脏组织标本,通过RNA测序筛选差异表达基因,并用RT-PCR及Western Blot对差异基因进行验证。结果:模型组Srebp1、Thrsp、Socs2蛋白水平较正常组显著增加(P<0.01,P<0.05),而苓桂术甘汤可以显著降低Srebp1、Thrsp、Socs2的蛋白水平(P<0.01,P<0.05)。结论:苓桂术甘汤可以通过Thrsp-Srebp1通路改善高脂饮食诱导的脂肪变性,而Socs2也是苓桂术甘汤的作用靶点之一。